專利名稱：：一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，屬于藥品的
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：本發(fā)明是一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，屬于藥品的
技術(shù)領(lǐng)域：
?；ㄜ沃兴幹苿┦且渣S芪、地黃、黃精、五味子、山茱萸等味藥組成，具有益氣養(yǎng)陰、潤燥清熱的功效，用于消渴屬氣陰兩虛兼燥熱證等。本發(fā)明提供了一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，方法的提供直接向有關(guān)的生產(chǎn)、檢測機構(gòu)等提供了花芪制劑的檢測指標、技術(shù)方法等等；以便更好控制該中藥制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性和療效，能夠更好的指導生產(chǎn)，為消費者提供一種品質(zhì)優(yōu)良的產(chǎn)品。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，這種方法向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測機構(gòu)提供了檢測的指標、檢測的手段、技術(shù)方法等等；以便更好的控制該中藥制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產(chǎn)品質(zhì)地。本發(fā)明涉及山茱萸藥材或其提取物、大黃藥材或其提取物、五味子藥材或其提取物、黃芪藥材或其提取物、丹參藥材或其提取物、知母藥材或其提取物等按照一定的比例組方制成的中藥制劑的質(zhì)量控制方法，主要包括鑒別、含量測定等項目，它是將熊果酸、馬錢苷、山茱萸對照藥材、知母對照藥材、知母皂苷、菝葜皂苷元、黃柏對照藥材、鹽酸小檗堿中、大黃對照藥材、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、土大黃苷、五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙、黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖、丹參對照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮I1B、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙、中的全部或部分品種作為該中藥制劑的質(zhì)量控制的檢測指標。上述的一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量檢測的方法作為鑒別項對于松花粉的鑒別技術(shù)取本品粉碎，采用顯微鑒別；對于松花粉的鑒別技術(shù)采用薄層色譜法，使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530iU之間任一體積，以松花粉對照藥材作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于山茱萸的鑒別技術(shù)采用薄層色譜法，使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530之間任一體積，以熊果酸、馬錢苷、山茱萸對照藥材中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于知母的鑒別技術(shù)采用薄層色譜法，使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530iU之間任一體積，以知母對照藥材、知母皂苷、菝葜皂苷元中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于黃柏的鑒別技術(shù)采用薄層色譜法，使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530iil之間任一體積，以黃柏對照藥材、鹽酸小檗堿中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于大黃的鑒別技術(shù)采用薄層色譜法，使用硅膠G或硅膠GF^或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530iU之間任一體積，以大黃對照藥材、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、土大黃苷中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于五味子的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530iU之間任一體積，以五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于黃芪的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530iU之間任一體積，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為乙酸乙酉旨、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、10%硫酸溶液、5%三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色的方法；對于丹參的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530iU之間任一體積，以丹參對照藥材、丹參酮1、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酉旨、石油醚、甲酸乙酉旨、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；上述的一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，采用以下方法鑒別對于松花粉的鑒別取本品內(nèi)容物，置顯微鏡下觀察花粉粒橢圓形，長4555iim，直徑2940iim，表面光滑，兩側(cè)各有1膨大氣囊，氣囊壁有明顯的網(wǎng)狀紋理，網(wǎng)眼多角形。對于山茱萸的鑒別取本品內(nèi)容物10g，加硅藻土5g，混勻，加乙醚100ml，加熱回流1小時，濾過，回收乙醚至干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各4ii1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(9:3:0.3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。對于五味子的鑒別取五味子甲素對照品，加三氯甲烷制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。取本品內(nèi)容物10g，加硅藻土5g，混勻，加乙醚100ml，加熱回流1小時，濾過，回收乙醚至干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10ii1及上述對照品溶液2ii1，分別點于同一硅膠GF^薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯(7:3)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254mm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。對于松花粉的鑒別取松花粉對照藥材3g，加乙醚60ml，加熱回流1小時，濾過，回收乙醚至干，殘渣加2ml三氯甲烷使溶解，作為對照藥材溶液。取本品內(nèi)容物10g，加硅藻土5g，混勻，加乙醚100ml，加熱回流1小時，濾過，回收乙醚至干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液及上述對照品溶液各5ia，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-醋酸乙酯(9:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。對于知母的鑒別取本品內(nèi)容物3g，加乙醇50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液加鹽酸2ml，繼續(xù)回流1小時，用40X氫氧化鈉溶液調(diào)pH至中性，回收乙醇至無醇味，加水20ml，加苯30ml，振搖提取，水液棄去，回收苯至約2ml，置已處理好的中性氧化鋁柱(內(nèi)徑15mm，5g，濕法裝柱)上，以苯-三氯甲烷(4:1)50ml洗脫，收集洗脫液，回收洗脫液至約0.5ml，作為供試品溶液。另取菝葜皂苷元對照品，加苯制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10iU、對照品溶液5iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(3060°C-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以香草醛-無水乙醇-濃硫酸(0.4:8:1.5)溶液，熱風吹至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。對于黃柏的鑒別取本品內(nèi)容物5g，加硅藻土5g，混勻，加無水乙醇80ml，加熱回流1小時，趁熱濾過，濾液濃縮至約10ml，置已處理好的中性氧化鋁柱(內(nèi)徑15mm，10g，濕法裝柱)上，用無水乙醇30ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至約5ml;作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液5ii1、對照品溶液1P1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(io:7:i:i)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的熒光斑點。對于大黃的鑒別取本品內(nèi)容物10g，加硅藻土5g，混勻，加乙醚100ml，加熱回流l小時，濾過，回收乙醚至干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液。取大黃素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10ia、上述對照藥材及對照品溶液各5iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(306(TC)-醋酸乙酯-冰醋酸(15:1.5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的五個橙黃色熒光主斑點，在與對照品色譜相應的位置上顯相同的橙黃色熒光斑點。置氨氣中熏后，日光下檢視，斑點變?yōu)榧t色。上述的一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量檢測的含量測定方法方法1:采用高效液相色譜法測定本品中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酷甲、五味子酷乙中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200600nm范圍內(nèi)；方法2:采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、異鼠李素中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200600nm范圍內(nèi)；方法3:采用薄層色譜法測定本品中黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、異鼠李素中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530ul之10品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為乙酸乙酉旨、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10%硫酸溶液、5%三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色后用薄層掃描儀進行掃描的方法；方法4:采用高效液相色譜法測定本品中丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200600nm范圍內(nèi)；上述的述的一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，采用以下技術(shù)作為含量測定方法對于黃芪的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(32:68)為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器。理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應不低于4000。對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品20粒，精密稱定，傾出內(nèi)容物，混勻，取約6g，精密稱定，加氧化鎂6g，混勻，置索氏提取器中，加三氯甲烷加熱回流提取4小時，棄去三氯甲烷液，殘渣揮盡三氯甲烷，加甲醇100ml，加熱回流提取6小時，提取液回收溶劑至于，殘渣加水40ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次(30ml，30ml，20ml，20ml)，合并正丁醇液，用氨試液振搖洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加無水乙醇57ml使溶解，通過DIOI型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長16cm)，以水80ml洗脫，棄去水液。再用40%乙醇50ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇150ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶內(nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定法精密吸取對照品溶液10iU、20ii1，供試品溶液20ii1，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。對于丹參的含量測定采用高效液相色譜法同時測定丹酚酸B的含量。色譜條件色譜柱為LichrosorbC18。流動相A泵甲醇:乙月青(3:1)B泵含10ml/L甲酸的水。兩泵同時進行梯度洗脫，洗脫時間為60min。流速為lml/min;檢測波長丹參酮IIA為270nm，丹酚酸B為286nm。對照品溶液的制備精密稱取丹酚酸B對照品1.52mg，同時置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，搖勻即得高濃度對照品溶液，根據(jù)以下實驗的需要稀釋成不同濃度的對照品溶液。供試品溶液的制備取丹參粉末(過3號篩)約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加850ml/L甲醇超聲提取15min，超聲頻率為30kHz，功率為30W，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取上述對照液與供試品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，測定，即得。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的質(zhì)量控制方法能更好的控制一種花芪中藥制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，保證用藥的安全性，這樣更有利于指導生產(chǎn)，使工藝控制更加嚴格合理，讓消費者全面認識產(chǎn)品品質(zhì)、放心使用這類藥品。本發(fā)明選取的含量測定指標成分是該產(chǎn)品按照中醫(yī)理論君、臣、佐、使排序的君藥和臣藥的有效活性成分，對控制藥品質(zhì)量是十分必要的，作為含量控制的指標很理想。在研究中發(fā)現(xiàn)本方中的黃精、黃芪、知母含有大量的糖類物質(zhì)，并且五味子、黃芪都含有多糖，由于苷類物質(zhì)為一類極性較大、結(jié)構(gòu)復雜的化合物，它無紫外吸收，無專一顯色劑，再加上皂苷測定經(jīng)常受糖的干擾，采用常規(guī)技術(shù)條件測定時，由于紫外檢測末端吸收時靈敏度低，噪音影響大，且有干擾峰，很難使用，因此，本申請人經(jīng)過流動相等測定條件的一系列考察，本申請人采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器法進行黃芪中黃芪甲苷的含量測定，結(jié)果分離度好、重現(xiàn)性好、回收率高，得到的圖譜能夠很好的檢測產(chǎn)品質(zhì)量。所以本發(fā)明選定了一系列的成分和方法作為控制、檢測產(chǎn)品質(zhì)量的技術(shù)手段，使花芪中藥制劑的生產(chǎn)技術(shù)有了保障，得到的制劑更加可靠，達到了發(fā)明的目的。為證明利用本發(fā)明提供的質(zhì)量控制方法能更好的控制一種花芪中藥制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，得到的藥物具有有效的效果，申請人進行了一系列實驗；實驗例1丹酚酸B含量測定的方法學考察1.1儀器條件島津高效液相色譜儀，LC-2010AHT。1.2試藥甲醇(色譜純、分析純)，乙腈(色譜純)，甲酸(分析純)，水為高純水；丹酚酸B對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用)，樣品益心舒膠囊(貴州信邦制藥有限公司)。1.3色譜條件色譜柱VP-0DS;流動相甲醇_乙腈_0.5%甲酸水溶液(28:8:64)柱溫30。C;檢測波長286nm;流速lml/min;進樣量10ul。1.4系統(tǒng)適應性試驗分別取丹酚酸B對照品，花芪膠囊供試品(批號20081201)溶液缺丹參藥材的陰性空白溶液注入色譜儀，記錄色譜圖，從圖中看，丹酚酸B的保留時間為16.1分鐘，陰性空白色譜圖在丹酚酸B位置處無峰，丹酚酸B與其相近的其他峰分離度完全(分離度>1.5)，即本實驗條件下丹酚酸B與其他組分分離完全。理論塔板數(shù)對照品中為2952;理論塔板數(shù)樣品中丹酚酸B為2965;丹酚酸B與其他組分峰的分離度大于1.5。故理論塔板數(shù)以丹酚酸B峰計算，應不低于2000.1.5線性關(guān)系考察1.5.1標準溶液的制備精密取丹酚酸B對照品適量，加甲醇溶解，制成每lml含丹酚酸B0.1392mg的對照品溶液。1.5.2標準曲線的繪制精密吸取上述對照品溶液lul、2ul、4ul、8ul、12ul、16ul、20ul。分別注入液相色譜儀，記錄色譜結(jié)果見表1，以峰面積A對質(zhì)量數(shù)X(iig)進行線性回歸計算，得線性回歸方程為丹酚酸B:A=1015012X-28940r=0.9995(丹酚酸B在0.1392iig2.784iig范圍內(nèi)線性關(guān)系良好)。表1丹酚酸B線性關(guān)系考察實驗次數(shù)1234567進樣(M)0-13920.27840.55681.11361.67042.22722.784峰面積13219426720553711110844281629014219871928500021.6《埃試品溶液提取時間的選擇提取方法:回流提取(75%甲醇)，》:則定結(jié)果表2。表2不同時間提取考察(樣品花芪膠囊20081201)提取時間(min)20406080100稱樣量g1.12901.12071.15081.13301.1099峰面積492031490495522577514279505094含量(mg/g)2.212,222.312.302.31結(jié)果從表2中可見，提取60分鐘即可將制劑中的丹酚酸B提取完全，故選擇加熱回流提取1小時。1.7精密度試驗取丹酚酸B對照品10ul，重復進樣6次，測定峰面積，求平均峰面積和相對平均標準偏差(RSD)。結(jié)果見表3:表3花芪測定的精密度試驗進樣次數(shù)Ii^iii平均值RSD⑨丹酚酸B峰面積1366776~~1364923~~1375889~1356356~1361092~135963613641120.50%1.8穩(wěn)定性試驗取本品(批號20081201)內(nèi)容物，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，取出放冷，用75%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。分別于0、1、2、4、8、12小時進行測定，結(jié)果列入表4，丹酚酸B平均峰面積為528853，RSD為1.69%，說明供試品溶液在12小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。表4花芪膠囊中丹酚酸B測定穩(wěn)定性試驗13<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>1.9重復性試驗取本品(批號20051201)內(nèi)容物，制備方法同前，平行制備5份供試液，分別進樣10iU，測定峰面積，計算結(jié)果見表5，丹酚酸B的平均含量為2.35mg/g，RSD為1.56%。表5花芪膠囊中丹酚酸B測定重復性試驗進樣次數(shù)12345平均值RSD(%)稱樣量g1.02501.00551.00311.00041.0056"峰面積4273694209194082534017214133212.351.56含量(mg/g)2.382.392.332.302.351.10回收率試驗采用加樣回收法，分別精密稱取6份已測定含量的樣品(丹酚酸的含量為2.35mg/g)約O.5g，精密加入丹酚酸B(0.2304mg/ml)對照液5ml，置具塞錐形瓶中，加入75%甲醇至50ml，稱定重量，加熱回流1小時，取出放冷，用75%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。分別精密吸取上述供試液各10yl，注入色譜儀，測定，即得。結(jié)果見表6。表6花芪膠囊(批號20081201)中丹酚酸B測定回收率試驗試驗樣品量含丹酚酸B加入丹酚酸B率RSD次數(shù)(g)(mg)(mg)(%)10.50011.17521.1522.3588102.720.50091.17711.1522.302897.730.50081.17691.1522.297997.398.92.4340.50031.17571.1522.283196.150.50181.17921.1522.3374100.560.50621.1896_1.152_2.328998.9_1.ll樣品測定按前述方法制備供試液和對照溶液，分別進樣10iU，記錄色譜圖，測定峰面積，按外標法計算含量，10個批樣品中丹酚酸B含量測定結(jié)果見表7。表7IO批樣品中丹酚酸B含量測定結(jié)果14測得量回收率平均回收(mg)(%)(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實驗例2黃芪甲苷含量測定的方法學考察2.1儀器條件島津高效液相色譜儀，LC-2010AHT;蒸發(fā)光散射檢測ELSD20002.2試藥乙腈為色譜純，甲醇、醋酸乙酯、正丁醇、氨水均為分析純，氫氧化鉀為化學純，水為重蒸水；黃芪甲苷(中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用)，樣品花芪膠囊(貴州信邦制藥有限公司)。2.3色譜條件色譜柱美國Phenomenex公司C18柱；流動相乙腈-水(37:63)柱溫25°C;流速0.5ml/min;ELSD漂移管溫度10(TC;載氣流速2.7L/min;進樣量10ul。2.4系統(tǒng)適應性試驗分別取黃芪甲苷對照品，花芪膠囊供試品(批號20081201)溶液缺黃芪藥材的陰性空白溶液注入色譜儀，記錄色譜圖，從圖中看，黃芪甲苷的保留時間為16.1分鐘，陰性空白色譜圖在黃芪甲苷位置處無峰，黃芪甲苷與其相近的其他峰分離度完全(分離度>1.5)，即本實驗條件下丹黃芪甲苷與其他組分分離完全。2.5標準曲線及線性范圍精密稱取黃芪甲苷對照品19.8mg，加50ml甲醇制成0.396mg/ml的對照品溶液，作為對照品貯備液。分別精密吸取上述對照品溶液lml、3ml、5ml、7ml、9ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進樣10(ul)，以進樣量(ug)的常用對數(shù)值為橫坐標，以峰面積的常用對數(shù)值為縱坐標，作標準曲線，得回歸方程為Y=4.9358+1.4956X，r=0.9995，進樣量在0.3963.564ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。因該標準曲線不過原點，樣品測定采用外標兩點法計算。2.6精密度實驗取同一份供試品溶液，連續(xù)重復進樣6次，每次進樣10ul，測定峰面積，RSD為0.48%。2.7穩(wěn)定性試驗取供試品溶液，分別在Oh、2h、4h、6h、8h、24h、進樣，進行穩(wěn)定性試驗，測定結(jié)果表明，在24h之內(nèi)黃芪甲苷色譜峰面積無明顯改變。RSD為1.1%。2.8重現(xiàn)性試驗取同一樣品按供試品溶液的制備方法制備6份供試液，分別進樣，測定黃芪甲苷的峰面積，計算含量，RSD為1.15%。2.9回收率試驗精密稱取18.8mg黃芪甲苷對照品置200ml量瓶中，加2%KOH-甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備溶液。精密稱取樣品O.15g，精密加入對照品貯備溶液5ml，按"l.8"項下的方法制成供試品溶液，每次進樣量為10ul。平均回收率為97.94%，RSD為0.68%。2.10樣品的含量測定取10批樣品，按含量測定項下方法制備供試液，進行測定結(jié)果見表8:表8IO批樣品中黃芪甲苷含量測定結(jié)果批號黃芪甲苷含』tmg/g平均值mg/gRSD%12200803010.12010.12210.12111.17200801020.11980.12040.1201.0.35200812010.12280.12440.12360.91200802010.13110.12910.13011.1020080502-o.12430.12510.12470.45200806010.12510.12570.12540.34200807010.13150.簡0.13090.65200804010.12250.12330.12290.46200808010.13020.12880.12950.76200810010.12840.12760.12800.44具體實施例實施例1一種花芪中藥膠囊劑的質(zhì)量檢測方法，主要包括鑒別、含量測定等項目。1、處方黃芪270g地黃200g太子參60g山藥45g黃精90g山茱萸60g五味子60g松花粉70g知母40g黃柏60g桑白皮150g丹參45g大黃30g荔枝核360g雞內(nèi)金30g玉米須1200g162、制法以上十六味，雞內(nèi)金粉碎成細粉；黃芪、太子參、知母、黃柏、玉米須加水煎煮2次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.301.35(50°C)的稠膏；地黃、山藥、黃精、桑白皮、荔枝核加水煎煮2次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.081.12(50°C)，放冷至室溫，加1.5倍量乙醇使沉淀，靜置，取上清液回收乙醇后，減壓濃縮至相對密度1.301.35(50°C)的稠膏；山茱萸、五味子、丹參、大黃用80%乙醇回流三次，第一次3小時，第二次2小時，第三次1小時，濾過，合并濾液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.301.35(5(TC)的稠膏。合并以上稠膏，與雞內(nèi)金細粉、松花粉混勻，干燥，粉碎，制成IOOO粒膠囊，即得。3、鑒別(1)取本品內(nèi)容物，置顯微鏡下觀察花粉粒橢圓形，長4555iim，直徑2940um，表面光滑，兩側(cè)各有1膨大氣囊，氣囊壁有明顯的網(wǎng)狀紋理，網(wǎng)眼多角形。(2)取本品內(nèi)容物10g，加硅藻土5g，混勻，加乙醚100ml，加熱回流1小時，濾過，回收乙醚至干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各4ia，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(9:3:0.3)為展開齊U，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(3)取五味子甲素對照品，加三氯甲烷制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取[鑒別](2)項下的供試品溶液10y1及上述對照品溶液2ii1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯(7:3)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254mm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(4)取松花粉對照藥材3g，加乙醚60ml，加熱回流1小時，濾過，回收乙醚至干，殘渣加2ml三氯甲烷使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取[鑒別](2)項下的供試品溶液及上述對照品溶液各5iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-醋酸乙酯(9:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(5)取本品內(nèi)容物3g，加乙醇50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液加鹽酸2ml，繼續(xù)回流1小時，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)pH至中性，回收乙醇至無醇味，加水20ml，加苯30ml，振搖提取，水液棄去，回收苯至約2ml，置已處理好的中性氧化鋁柱(內(nèi)徑15mm，5g，濕法裝柱)上，以苯-三氯甲烷(4:1)50ml洗脫，收集洗脫液，回收洗脫液至約0.5ml，作為供試品溶液。另取菝葜皂苷元對照品，加苯制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10iU、對照品溶液5iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(306(TC)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以香草醛-無水乙醇-濃硫酸(0.4:8:1.5)溶液，熱風吹至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(6)取本品內(nèi)容物5g，加硅藻土5g，混勻，加無水乙醇80ml，加熱回流1小時，趁熱濾過，濾液濃縮至約10ml，置已處理好的中性氧化鋁柱(內(nèi)徑15mm，10g，濕法裝柱)上，用1無水乙醇30ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至約5ml;作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液5ia、對照品溶液liU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(io:7:i:i)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的熒光斑點。(7)取大黃對照藥材0.2g，照[鑒別](2)項下供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。再取大黃素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取[鑒別](2)項下的供試品溶液10ia、上述對照藥材及對照品溶液各5iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(306(TC)-醋酸乙酯-冰醋酸(15:1.5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的五個橙黃色熒光主斑點，在與對照品色譜相應的位置上顯相同的橙黃色熒光斑點。置氨氣中熏后，日光下檢視，斑點變?yōu)榧t色。(8)取本品內(nèi)容物3g，加甲醇30ml，加熱回流1小時，放冷，濾過，回收甲醇，殘渣加水25ml使溶解，以水飽和正丁醇提取2次(25、20ml)，合并正丁醇液，用5%碳酸氫鈉溶液25ml洗滌，棄去碳酸氫鈉液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為供試品溶液。另取玉米須對照藥材3g，加甲醇30ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5ii1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(10:2:0.15)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC烘約57分鐘，取出，即刻于紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。4、含量測定黃芪甲苷的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(32:68)為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器。理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應不低于4000。對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品20粒，精密稱定，傾出內(nèi)容物，混勻，取約6g，精密稱定，加氧化鎂6g，混勻，置索氏提取器中，加三氯甲烷加熱回流提取4小時，棄去三氯甲烷液，殘渣揮盡三氯甲烷，加甲醇100ml，加熱回流提取6小時，提取液回收溶劑至干，殘渣加水40ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次(30ml，30ml，20ml，20ml)，合并正丁醇液，用氨試液振搖洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加無水乙醇57ml使溶解，通過DIOI型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長16cm)，以水80ml洗脫，棄去水液。再用40%乙醇50ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇150ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶內(nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定法精密吸取對照品溶液10iil、20ia，供試品溶液20ia，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。本品含黃芪以黃芪甲苷(C41H6504)計，每粒不得少于0.10mg。丹參的含量測定色譜條件色譜柱為LichrosorbC18。流動相A泵甲醇乙腈(3:1);B泵含10ml/L甲酸的水。兩泵同時進行梯度洗脫，洗脫時間為60min。流速為lml/min;檢測波長丹酚酸B為286nm。對照品溶液的制備精密稱取丹酚酸B對照品1.52mg，同時置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，搖勻即得高濃度對照品溶液，根據(jù)以下實驗的需要稀釋成不同濃度的對照品溶液。供試品溶液的制備取丹參粉末(過3號篩)約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加850ml/L甲醇超聲提取15min，超聲頻率為30kHz，功率為30W，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取上述對照液與供試品溶液lOul，注入高效液相色譜儀，測定，即得。本品含丹參以丹酚酸B計，每粒不得少于1.10mg。實施例2—種花芪中藥膠囊劑的質(zhì)量檢測方法，主要包括鑒別、含量測定等項目。1、處方黃芪270g地黃200g太子參60g山藥45g黃精90g山茱萸60g五味子60g松花粉70g知母40g黃柏60g桑白皮150g丹參45g大黃30g荔枝核360g雞內(nèi)金30g玉米須1200g2、制法以上十六味，雞內(nèi)金粉碎成細粉；黃芪、太子參、知母、黃柏、玉米須加水煎煮2次，第一次2小時，第二次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.301.35(50°C)的稠膏；地黃、山藥、黃精、桑白皮、荔枝核加水煎煮2次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.081.12(50°C)，放冷至室溫，加1.5倍量乙醇使沉淀，靜置，取上清液回收乙醇后，減壓濃縮至相對密度1.301.35(50°C)的稠膏；山茱萸、五味子、丹參、大黃用80%乙醇回流三次，第一次3小時，第二次2小時，第三次1小時，濾過，合并濾液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.301.35(50°C)的稠膏。合并以上稠膏，與雞內(nèi)金細粉、松花粉混勻，干燥，粉碎，制成1000粒膠囊，即得。3、鑒別:(1)取本品內(nèi)容物，置顯微鏡下觀察花粉粒橢圓形，長4555iim，直徑2940um，表面光滑，兩側(cè)各有1膨大氣囊，氣囊壁有明顯的網(wǎng)狀紋理，網(wǎng)眼多角形。(2)取本品內(nèi)容物10g，加硅藻土5g，混勻，加乙醚100ml，加熱回流1小時，濾過，回收乙醚至干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各4ia，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(9:3:0.3)為展開齊U，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(3)取五味子甲素對照品，加三氯甲烷制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取[鑒別](2)項下的供試品溶液10y1及上述對照品溶液2ii1，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷_醋酸乙酯(7:3)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254mm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(4)取本品內(nèi)容物3g，加乙醇50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液加鹽酸2ml，繼續(xù)回流1小時，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)pH至中性，回收乙醇至無醇味，加水20ml，加苯30ml，振搖提取，水液棄去，回收苯至約2ml，置已處理好的中性氧化鋁柱(內(nèi)徑15mm，5g，濕法裝柱)上，以苯-三氯甲烷(4:1)50ml洗脫，收集洗脫液，回收洗脫液至約0.5ml，作為供試品溶液。另取菝葜皂苷元對照品，加苯制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10iU、對照品溶液5iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(306(TC)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以香草醛-無水乙醇-濃硫酸(0.4:8:1.5)溶液，熱風吹至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(5)取本品內(nèi)容物5g，加硅藻土5g，混勻，加無水乙醇80ml，加熱回流1小時，趁熱濾過，濾液濃縮至約10ml，置已處理好的中性氧化鋁柱(內(nèi)徑15mm，10g，濕法裝柱)上，用無水乙醇30ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至約5ml;作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液5ia、對照品溶液liU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(io:7:i:i)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的熒光斑點。(6)取大黃對照藥材0.2g，照[鑒別](2)項下供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。再取大黃素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取[鑒別](2)項下的供試品溶液10ia、上述對照藥材及對照品溶液各5iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(306(TC)-醋酸乙酯-冰醋酸(15:1.5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的五個橙黃色熒光主斑點，在與對照品色譜相應的位置上顯相同的橙黃色熒光斑點。置氨氣中熏后，日光下檢視，斑點變?yōu)榧t色。4、含量測定黃芪甲苷的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(32:68)為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器。理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應不低于4000。對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品20粒，精密稱定，傾出內(nèi)容物，混勻，取約6g，精密稱定，加氧化鎂6g，混勻，置索氏提取器中，加三氯甲烷加熱回流提取4小時，棄去三氯甲烷液，殘渣揮盡三氯甲烷，加甲醇100ml，加熱回流提取6小時，提取液回收溶劑至干，殘渣加水40ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次(30ml，30ml，20ml，20ml)，合并正丁醇液，用氨試液振搖洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加無水乙醇57ml使溶解，通過D1Q1型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長16cm)，以水80ml洗脫，棄去水液。再用40X乙醇50ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇150ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶內(nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定法精密吸取對照品溶液10ii1、20ii1，供試品溶液20ii1，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。本品含黃芪以黃芪甲苷(C41H6504)計，每粒不得少于0.10mg。權(quán)利要求一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，主要包括鑒別、含量測定等項目，其特征在于它是將熊果酸、馬錢苷、山茱萸對照藥材、知母對照藥材、知母皂苷、菝葜皂苷元、黃柏對照藥材、鹽酸小檗堿中、大黃對照藥材、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、土大黃苷、五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙、黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖、丹參對照藥材、丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙、中的全部或部分品種作為該中藥制劑的質(zhì)量控制的檢測指標。2.按照權(quán)利要求1所述的一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于對于鑒別技術(shù)，采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量控制的方法對于松花粉的鑒別技術(shù)取本品粉碎，采用顯微鑒別；對于松花粉的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530iU之間任一體積，以松花粉對照藥材作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于山茱萸的鑒別技術(shù)采用薄層色譜法，使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530iU之間任一體積，以熊果酸、馬錢苷、山茱萸對照藥材中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于知母的鑒別技術(shù)采用薄層色譜法，使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530iU之間任一體積，以知母對照藥材、知母皂苷、菝葜皂苷元中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于黃柏的鑒別技術(shù)采用薄層色譜法，使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530iU之間任一體積，以黃柏對照藥材、鹽酸小檗堿中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于大黃的鑒別技術(shù)采用薄層色譜法，使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530iU之間任一體積，以大黃對照藥材、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、土大黃苷中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于五味子的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530iU之間任一體積，以五味子對照藥材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酯甲、五味子酯乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法；對于黃芪的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530iU之間任一體積，以黃芪對照藥材、黃芪甲苷、山柰素、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、異鼠李素、葡萄糖中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、妣啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、10%硫酸溶液、5%三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色的方法；對于丹參的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530i！1之間任一體積，以丹參對照藥材、丹參酮1、丹參酮IIA、丹參酮IIB、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，展開劑可以為正己烷、醋酸乙酯、石油醚、甲酸乙酯、甲酸、二甲苯、甲苯、環(huán)己烷的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以變色酸硫酸溶液、茴香醛硫酸溶液、碘蒸氣、10%磷鉬酸乙醇溶液溶液顯色的方法。3.按照權(quán)利要求1或2所述的一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于對于鑒別技術(shù)采用以下方法對于松花粉的鑒別取本品內(nèi)容物，置顯微鏡下觀察花粉粒橢圓形，長4555ym，直徑2940iim，表面光滑，兩側(cè)各有1膨大氣囊，氣囊壁有明顯的網(wǎng)狀紋理，網(wǎng)眼多角形；對于山茱萸的鑒別取本品內(nèi)容物10g，加硅藻土5g，混勻，加乙醚100ml，加熱回流1小時，濾過，回收乙醚至干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液；另取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各4iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(9:3:0.3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；對于五味子的鑒別取本品內(nèi)容物10g，加硅藻土5g，混勻，加乙醚100ml，加熱回流1小時，濾過，回收乙醚至干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液；取五味子甲素對照品，加三氯甲烷制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；取上述供試品溶液10iU及對照品溶液2ia，分別點于同一硅膠GF^薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯(7:3)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254mm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；對于松花粉的鑒別取本品內(nèi)容物10g，加硅藻土5g，混勻，加乙醚100ml，加熱回流1小時，濾過，回收乙醚至干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液；取松花粉對照藥材3g，加乙醚60ml，加熱回流1小時，濾過，回收乙醚至干，殘渣加2ml三氯甲烷使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述供試品溶液及對照品溶液各5ia，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-醋酸乙酯(9:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；對于知母的鑒別取本品內(nèi)容物3g，加乙醇50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液加鹽酸2ml，繼續(xù)回流1小時，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)pH至中性，回收乙醇至無醇味，加水20ml，加苯30ml，振搖提取，水液棄去，回收苯至約2ml，置已處理好的中性氧化鋁柱(內(nèi)徑15mm，5g，濕法裝柱)上，以苯-三氯甲烷(4:1)50ml洗脫，收集洗脫液，回收洗脫液至約0.5ml，作為供試品溶液；另取菝葜皂苷元對照品，加苯制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10ul、對照品溶液5ii1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(3060°C)_甲酸乙酯_甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以香草醛-無水乙醇-濃硫酸(0.4:8:1.5)溶液，熱風吹至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；對于黃柏的鑒別取本品內(nèi)容物5g，加硅藻土5g，混勻，加無水乙醇80ml，加熱回流1小時，趁熱濾過，濾液濃縮至約10ml，置已處理好的中性氧化鋁柱(內(nèi)徑15mm，10g，濕法裝柱)上，用無水乙醇30ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至約5ml作為供試品溶液；另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液5iU、對照品溶液lia，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(io:7:i:i)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜與對照品色譜相應的位置上，顯相同的熒光斑點；對于大黃的鑒別取本品內(nèi)容物10g，加硅藻土5g，混勻，加乙醚100ml，加熱回流1小時，濾過，回收乙醚至干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液；再取大黃素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述供試品溶液10ia、對照品溶液各5iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(306(TC)-醋酸乙酯-冰醋酸(15:1.5:1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的五個橙黃色熒光主斑點，在與對照品色譜相應的位置上顯相同的橙黃色熒光斑點；置氨氣中熏后，日光下檢視，斑點變?yōu)榧t色。4.按照權(quán)利要求1所述的一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于對于含量測定技術(shù)，采用以下方法中全部或部分作為質(zhì)量控制的方法方法1:采用高效液相色譜法測定本品中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、及五味子酷甲、五味子酷乙中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200600nm范圍內(nèi)；方法2:采用蒸發(fā)光散射檢測器與高效液相色譜聯(lián)用法測定本品中黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、異鼠李素中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200600nm范圍內(nèi)；方法3:采用薄層色譜法測定本品中黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、異鼠李素中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.530ul之間任一體積，以黃芪甲苷、山柰素、槲皮素、異鼠李素中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為乙酸乙酉旨、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、環(huán)己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一種或一種以上試劑按照一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以硫酸乙醇溶液、濃硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10%硫酸溶液、5%三氯化鐵乙醇溶液等溶液顯色后用薄層掃描儀進行掃描的方法；方法4:采用高效液相色譜法測定本品中丹參酮I、丹參酮I1A、丹參酮I1B、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹參素、丹參酸乙中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氫呋喃、磷酸溶液中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200600nm范圍內(nèi)；5.根據(jù)權(quán)力要求1或4的所述的一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，對于含量測定技術(shù)采用以下方法對于黃芪的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(32:68)為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器。理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計算應不低于4000;對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每lml含O.5mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品20粒，精密稱定，傾出內(nèi)容物，混勻，取約6g，精密稱定，加氧化鎂6g，混勻，置索氏提取器中，加三氯甲烷加熱回流提取4小時，棄去三氯甲烷液，殘渣揮盡三氯甲烷，加甲醇100ml，加熱回流提取6小時，提取液回收溶劑至干，殘渣加水40ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次(30ml，30ml，20ml，20ml)，合并正丁醇液，用氨試液振搖洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加無水乙醇57ml使溶解，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長16cm)，以水80ml洗脫，棄去水液。再用40%乙醇50ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇150ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶內(nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法精密吸取對照品溶液10ia、20iU，供試品溶液20iU，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數(shù)方程計算，即得；對于丹酚酸B的含量測定色譜條件色譜柱為LichrosorbC18。流動相A泵甲醇乙腈(3:1);B泵含lOml/L甲酸的水。兩泵同時進行梯度洗脫，洗脫時間為60min。流速為lml/min;檢測波長丹酚酸B為286nm;對照品溶液的制備精密稱取丹酚酸B對照品1.52mg，同時置5ml棕色容量瓶中，加850ml/L甲醇至刻度，搖勻即得高濃度對照品溶液，根據(jù)以下實驗的需要稀釋成不同濃度的對照品溶液；供試品溶液的制備取丹參粉末(過3號篩)約O.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加850ml/L甲醇超聲提取15min，超聲頻率為30kHz，功率為30W，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取上述對照液與供試品溶液lOul，注入高效液相色譜儀，測定，即得。全文摘要本發(fā)明是一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，屬于藥品的
技術(shù)領(lǐng)域：
?；ㄜ沃兴幹苿┦且渣S芪、地黃、黃精、五味子、山茱萸等味藥組成，具有益氣養(yǎng)陰、潤燥清熱的功效，用于消渴屬氣陰兩虛兼燥熱證等。本發(fā)明提供了一種花芪中藥制劑的質(zhì)量檢測方法，方法的提供直接向有關(guān)的生產(chǎn)、檢測機構(gòu)等提供了花芪制劑的檢測指標、技術(shù)方法等等；以便更好的控制該中藥制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性和療效，能夠更好的指導生產(chǎn)，為消費者提供一種品質(zhì)優(yōu)良的產(chǎn)品。文檔編號A61P1/00GK101732607SQ20101004180公開日2010年6月16日申請日期2010年1月5日優(yōu)先權(quán)日2010年1月5日發(fā)明者張觀福申請人:貴州信邦制藥股份有限公司