專利名稱：聚酯包衣的羥基磷灰石微球及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，涉及聚酯包衣的羥基磷灰石微球及其制備方法，具體涉及一種用于包載小分子藥物和實(shí)現(xiàn)藥物長(zhǎng)時(shí)間緩釋的微球及其制備方法。

背景技術(shù)：
目前，長(zhǎng)效藥物傳遞系統(tǒng)是藥物制劑研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。普通的口服、注射或黏膜的緩控釋制劑給藥后，藥物的釋放和作用時(shí)間一般在1天以內(nèi)，有些經(jīng)皮給藥的貼劑可連續(xù)貼敷1周，其藥物持續(xù)作用時(shí)間較長(zhǎng)。長(zhǎng)效藥物傳遞系統(tǒng)通常指藥物制劑植入人體體內(nèi)后，藥物持續(xù)緩慢釋放，發(fā)揮長(zhǎng)時(shí)間的治療效果，其作用時(shí)間通?？沙掷m(xù)3天以上，甚至可在半年或一年時(shí)間內(nèi)持續(xù)緩慢釋放藥物，發(fā)揮長(zhǎng)期治療效果。由于給藥頻率顯著減少、體內(nèi)藥物濃度的波動(dòng)性降低且可實(shí)現(xiàn)植入部位的局部高藥物濃度，長(zhǎng)效藥物傳遞系統(tǒng)的毒副作用更低、患者用藥的安全性和順應(yīng)性等更好。
以往的長(zhǎng)效藥物傳遞系統(tǒng)多采用手術(shù)植入的方式給藥，由于藥物載體(如硅橡膠)不降解，藥物釋放后還需再次手術(shù)取出載體。隨著藥物制劑技術(shù)的進(jìn)步，新近出現(xiàn)的長(zhǎng)效藥物傳遞系統(tǒng)多采用微?；鞈摇⑷芤夯蚰z類型的制劑，可利用適當(dāng)規(guī)格的針頭用注射器注射植入體內(nèi)的方式給藥，如載體材料在人體內(nèi)可被降解或吸收，給藥時(shí)和藥物消耗完后均不需要手術(shù)，患者用藥的順應(yīng)性更理想。
目前，已有應(yīng)用的可注射長(zhǎng)效藥物傳遞系統(tǒng)包括油性注射劑、藥物的不溶性鹽或酯的混懸型注射劑、脂質(zhì)體、多囊脂質(zhì)體、微球、原位凝膠等形式的制劑，其中最著名的已上市的產(chǎn)品如日本武田公司在上世紀(jì)90年代推出的第一個(gè)可注射微球長(zhǎng)效制劑——亮丙瑞林PLGA微球注射劑，Skypharm公司推出的阿糖孢苷多囊脂質(zhì)體

和嗎啡多囊脂質(zhì)體(DepoMorphineTM)等(鄭俊民等譯.可注射緩釋制劑.化學(xué)工業(yè)出版社，2005.)。盡管微球和多囊脂質(zhì)體這類多單元顆粒系統(tǒng)的藥物釋放可控性好、較低突釋等性能優(yōu)于溶液型或凝膠型的系統(tǒng)，但是原料成本方面的因素極大限制了其應(yīng)用。對(duì)于可生物降解微球，研究最多、應(yīng)用安全并被FDA等多個(gè)國(guó)家法定機(jī)構(gòu)允許用于人體內(nèi)注射給藥的材料，目前只有脂肪族聚酯類均聚物和共聚物，而多囊脂質(zhì)體所用制劑輔料除生產(chǎn)普通脂質(zhì)體所用的注射級(jí)脂質(zhì)，還必須加入相當(dāng)大比例的荷電脂質(zhì)材料。
就目前而言，可供藥用的脂肪族聚酯和脂質(zhì)材料的價(jià)格都相當(dāng)昂貴。對(duì)于所有可注射的長(zhǎng)效藥物傳遞系統(tǒng)而言，降低小分子藥物，尤其是水溶性小分子藥物的突釋是這類藥物制劑所共同面對(duì)的問題，但降低藥物突釋往往又同時(shí)導(dǎo)致藥物釋放過于緩慢，即在預(yù)期藥物作用時(shí)間內(nèi)藥物釋放不完全或達(dá)不到有效的藥物濃度。
羥基磷灰石(Hydroxyapatite，HAP)是一種價(jià)格低廉、用途廣泛的生物材料，1871年被首次合成，1960年發(fā)現(xiàn)其為骨和牙的主要無機(jī)成分，1971年以來HAP陶瓷成功用于蓋髓劑和硬組織修復(fù)，羥基磷灰石在其他工業(yè)領(lǐng)域也有廣泛應(yīng)用。羥基磷灰石具有優(yōu)良的生物相容性、化學(xué)穩(wěn)定性、可降解和可吸收性、對(duì)多種藥物分子有吸附作用，羥基磷灰石和羥基磷灰石微球在藥物傳遞領(lǐng)域越來越受到人們關(guān)注，近年來，有報(bào)道用其吸附包載蛋白和多肽類藥物、抗生素、抗炎藥物、止痛藥、抗癌藥物、生長(zhǎng)因子等，制成微球、植入劑、支架和骨水泥等形式的局部靶向或長(zhǎng)效藥物傳遞系統(tǒng)(Matsumoto T，Okazaki M，Inoue M，Yamaguchi S，Kusunose T，Toyonaga T，Hamada Y，J.Takahashi.Hydroxyapatite particles as a controlled release carrier of protein.Biomaterials，2004，253807-3812.Ginebra M P.Traykova T.Calcium phosphate cements as bone drug deliverysystemsAreview.J Controlled Release，2006，113102-110.)。但是，由于羥基磷灰石-藥物分子間通過吸附作用載藥的特點(diǎn)，對(duì)于水溶性藥物而言，在人體內(nèi)生理液中，單純的羥基磷灰石或羥基磷灰石微球難以避免藥物快速釋放和實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)時(shí)間緩釋，用聚合物包衣是一個(gè)可能的解決途徑。已有報(bào)道聚合物包衣的羥基磷灰石微球用于大分子藥物的緩釋(石海濤，張志榮，龔濤，劉世偉，陳蜀.胰島素口服緩釋給藥系統(tǒng)的制備.華西藥學(xué)雜志，2005，20(2)101-104.Boonsongrit Y.Sato K，Kondo A，Abe H，Naito M，Yoshimura M，Ichikawa H，F(xiàn)ukumori Y，Encapsulation of Protein-Loaded Hydroxyapatite Granules withPoly(lactic-co-glycolic acid).J Ceram Soc Japan，2007，115745-747.)，但是對(duì)于小分子藥物(尤其是水溶性小分子藥物)，藥物突釋和藥物釋放速度之間的矛盾仍然存在。另外，上述文獻(xiàn)報(bào)道的包衣的羥基磷灰石微球的制備過程中，包衣聚合物的用量較高，所得到的微球內(nèi)部具有多個(gè)羥基磷灰石微球分散在聚合物骨架中的結(jié)構(gòu)，并非真正的包衣結(jié)構(gòu)，而且粒徑較大。包衣聚合物的用量較高必然導(dǎo)致成本較高，而過大的粒徑則不適合于注射植入給藥。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種聚酯包衣的羥基磷灰石微球，以解決現(xiàn)有可注射緩釋制劑成本高、小分子藥物(尤其是水溶性小分子藥物)突釋明顯等缺點(diǎn)，提供一種可用于包載小分子藥物和實(shí)現(xiàn)藥物長(zhǎng)時(shí)間緩釋的微球及其可注射給藥的藥物制劑。
本發(fā)明采用可生物降解和吸收的羥基磷灰石微球作為吸附藥物的載體材料，羥基磷灰石微球可以通過噴霧干燥法由納米羥基磷灰石顆粒制備。羥基磷灰石微球的表面或內(nèi)部吸附載有適宜的小分子藥物，然后用一種可生物降解和吸收、并且經(jīng)法定機(jī)構(gòu)允許植入人體內(nèi)皮下、肌內(nèi)、或骨骼等部位的藥用脂肪族聚酯材料包衣載藥羥基磷灰石微球，根據(jù)包衣工藝條件的不同，包衣微球內(nèi)部只含有1個(gè)載藥羥基磷灰石微球或僅有少數(shù)(如少于包衣微球總數(shù)的5％)載藥羥基磷灰石微球。粒徑合適的聚酯包衣的羥基磷灰石微球可通過適宜規(guī)格的針頭以注射方式給藥，也可以通過手術(shù)埋植方式植入人或動(dòng)物體內(nèi)。
利用羥基磷灰石與藥物分子之間的相互作用，以及包衣膜對(duì)藥物擴(kuò)散的阻滯作用，延緩藥物的釋放和降低藥物突釋，包衣微球包載的小分子藥物在體內(nèi)緩慢釋放發(fā)揮治療作用，包衣微球逐漸生物降解、溶蝕和被機(jī)體吸收。由于羥基磷灰石和脂肪族聚酯本身具有良好的生物相容性和安全性、生物降解和生物吸收性等優(yōu)點(diǎn)，結(jié)合本發(fā)明的吸附-包衣雙重控制釋放作用，本發(fā)明所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球具有以下優(yōu)點(diǎn)實(shí)現(xiàn)小分子藥物(尤其是水溶性小分子藥物)的長(zhǎng)時(shí)間緩釋作用、無明顯藥物突釋、可注射植入給藥、藥物釋放后載體可在人體內(nèi)降解或吸收、顯著降低成本、以及明顯改善患者用藥的安全性和順應(yīng)性等。
盡管文獻(xiàn)報(bào)道的有多種可生物降解的聚合物可望用于人體內(nèi)植入給藥的載體材料，包括脂肪族聚酯、聚原酸酯、殼聚糖、聚瞵腈等，但目前已被證實(shí)安全和被法定機(jī)構(gòu)允許植入人體的可生物降解聚合物只有脂肪族聚酯類，包括聚乳酸或聚丙交酯(PLA)、聚乙醇酸或聚乙交酯(PGA)，乳酸-乙醇酸共聚物或丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA)、聚己內(nèi)酯(PCL)、或丙交酯-己內(nèi)酯共聚物。本發(fā)明所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球，包衣聚合物與載藥羥基磷灰石微球的重量比應(yīng)小于4，最好小于2。如包衣聚合物/載藥羥基磷灰石微球的重量比大于或等于4，所得到的包衣羥基磷灰石微球粒徑較大，且每個(gè)包衣微球內(nèi)含有多個(gè)羥基磷灰石微球。顯然，隨著微球中聚酯所占比例增大，這種結(jié)構(gòu)的微球的性質(zhì)更接近于普通的聚酯微球，并導(dǎo)致微球的成本增加。
為了保證在注射給藥過程中良好的通針性(即混懸有微球的制劑可順利通過一定規(guī)格的針頭)、以及給藥的安全性和無刺激性，注射植入給藥的微球的尺寸應(yīng)有一定的要求。本發(fā)明所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球，其平均粒徑在1-200微米之間，最好在5-50微米之間，通針性良好。
羥基磷灰石表面帶有大量吸附位點(diǎn)，通常解離的藥物與吸附位點(diǎn)之間通過離子相互作用物理吸附在羥基磷灰石表面，羥基磷灰石微球具有多孔性、高比表面積的特點(diǎn)，也可吸附一些非解離型小分子藥物。羥基磷灰石作為藥物傳遞的載體材料，更適合水溶性的解離型藥物，可用來包載多種類型的小分子藥物，包括抗生素類藥物、局麻藥物、小肽類藥物、抗腫瘤藥物等，如多西環(huán)素、米諾環(huán)素、慶大霉素、甲硝唑、阿米卡星、妥布霉素、更昔洛韋、布比卡因、利多卡因、草烏甲素、高烏甲素、嗎啡、亮丙瑞林、戈舍瑞林、腦肽、奧曲肽、腦啡肽、阿糖孢苷、氟尿嘧啶、順鉑、甲氨喋呤、博來霉素、葫蘆素、昂丹西瓊、格拉西瓊、利培酮、石杉?jí)A甲等藥物的原形或其鹽酸鹽、硫酸鹽、醋酸鹽等鹽的形式。
根據(jù)不同的治療需要，可注射緩釋制劑要求的藥物持續(xù)釋放時(shí)間不等，如牙周袋治療一般需7天左右，術(shù)后止痛需3-5天，其他治療大多需15天以上，長(zhǎng)的可能要求半年甚至1年內(nèi)持續(xù)釋放藥物。本發(fā)明所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球，藥物的持續(xù)釋放時(shí)間在3天以上，可以改變包衣的聚酯材料的類型和包衣的厚度調(diào)節(jié)藥物釋放速率和持續(xù)釋放時(shí)間，一般包衣厚度增加藥物釋放緩慢，乳酸-乙醇酸共聚物為包衣材料時(shí)的藥物釋放速率與聚乙醇酸共聚物為包衣材料相比緩慢。由于藥物分子與羥基磷灰石的吸附作用，以及包衣膜的阻滯作用，聚酯包衣的羥基磷灰石微球的藥物突釋不明顯，一般0-12小時(shí)累計(jì)釋放的藥物不超過微球所含藥物總量的30％，且藥物釋放完全，可獲得相對(duì)平穩(wěn)的血藥濃度。
本發(fā)明所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球的制備可以采用如下方法和步驟。
方法一 ①取粒徑適宜的市售羥基磷灰石微球、或用化學(xué)沉淀法制備納米羥基磷灰石顆粒經(jīng)噴霧干燥制備羥基磷灰石微球，純化后，根據(jù)藥物性質(zhì)和載藥量的要求加入適宜濃度的藥物溶液，使藥物吸附在羥基磷灰石微球的表面和內(nèi)部； ②藥物吸附達(dá)到平衡后，過濾或離心分離微球，洗去微球表面的藥物，干燥； ③采用液中干燥技術(shù)、流化包衣技術(shù)、噴霧干燥技術(shù)，或其他制劑技術(shù)在載藥羥基磷灰石微球外表面包一層脂肪族聚酯衣膜，得聚酯包衣的羥基磷灰石微球，干燥后密閉、低溫貯存。
方法二 ①用化學(xué)沉淀法制備納米羥基磷灰石顆粒，純化后，根據(jù)藥物性質(zhì)和載藥量的要求加入適宜濃度的藥物溶液，使藥物吸附在羥基磷灰石顆粒的表面，經(jīng)噴霧干燥制備載藥羥基磷灰石微球； ②采用液中干燥技術(shù)、流化包衣技術(shù)、噴霧干燥技術(shù)，或其他制劑技術(shù)在載藥羥基磷灰石微球外表面包一層聚合物衣膜，得包衣的羥基磷灰石微球，干燥后密閉、低溫貯存。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球能夠安全方便地應(yīng)用于臨床治療，穩(wěn)定性良好和質(zhì)量可控，需要配合使用其他藥劑輔料制成適宜的藥物制劑，如冷凍干燥的注射用微球制劑，這些藥劑輔料為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，包括助懸劑、等滲調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、凍干保護(hù)劑等。無菌是注射制劑的最重要的質(zhì)量要求之一，對(duì)于本發(fā)明所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球制劑，可以采用無菌操作工藝加工，也可以采用輻射滅菌等終端滅菌技術(shù)實(shí)現(xiàn)無菌要求。
本發(fā)明所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球及其藥物制劑，可采用多種給藥途徑，如牙周袋內(nèi)注射、皮下注射、肌內(nèi)注射，也可通過手術(shù)埋植的方式給藥；在臨床治療中應(yīng)用廣泛，如用于骨修復(fù)，術(shù)后鎮(zhèn)痛，放化療的鎮(zhèn)吐，治療牙周病、老年癡呆、惡性腫瘤等疾病，也可用于動(dòng)物疾病治療或預(yù)防。



圖1為PLGA/羥基磷灰石微球比例分別為8(實(shí)施例1中的處方1，左圖)和2(實(shí)施例1中的處方4，右圖)的條件下所制備的包衣微球的顯微照片。
圖2為載有鹽酸多西環(huán)素的PLGA包衣的羥基磷灰石微球的體外累積藥物釋放量曲線。
■-羥基磷灰石微球，□-PLGA/羥基磷灰石微球＝2.7，Δ-PLGA/羥基磷灰石微球＝1.0，◇-PLGA/羥基磷灰石微球＝0.5，○-PLGA/羥基磷灰石微球＝0.25，●-PLGA微球。
PLGA與羥基磷灰石微球的重量比對(duì)藥物釋放速率有明顯影響，PLGA所占比例越大，則包衣厚度越大，藥物釋放緩慢。
圖3為載有鹽酸多西環(huán)素的不同規(guī)格PLGA包衣的羥基磷灰石微球的體外累積藥物釋放量曲線。
□-LG/GA＝50/50，IV＝0.28dl/g；○-LG/GA＝50/50，IV＝0.60dl/g；△-LG/GA＝75/25，IV＝0.60dl/g。
其中，LA/GA指PLGA中丙交酯與乙交酯的比例，IV是商品PLGA的標(biāo)示黏度，IV越大則PLGA溶液的黏度越大，分子量越高；PLGA與羥基磷灰石微球的重量比小于2.7。
圖4為載有鹽酸多西環(huán)素的羥基磷灰石微球(■)和PLGA包衣的羥基磷灰石微球(○)小鼠皮下注射給藥后的體內(nèi)累積藥物釋放量曲線。
圖5為載有鹽酸多西環(huán)素的羥基磷灰石微球(■)和PLGA包衣的羥基磷灰石微球(○)小鼠皮下注射給藥后的體內(nèi)血藥濃度-時(shí)間曲線。
圖6為分別載有醋酸奧曲肽(□)、葫蘆素B(○)、草烏甲素(△)、鹽酸昂丹西瓊(◇)、鹽酸利培酮(■)和石杉?jí)A甲(●)的聚酯包衣羥基磷灰石微球的體外累積藥物釋放量曲線。

具體實(shí)施例方式 本發(fā)明將在下文對(duì)照具體實(shí)施例進(jìn)行更加詳盡的說明，但本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，這些具體實(shí)施例不具有限制性。
實(shí)施例1載有鹽酸多西環(huán)素的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羥基磷灰石微球 液中干燥法制備載有鹽酸多西環(huán)素的PLGA包衣的羥基磷灰石微球的一般制備過程如下 ①吸附法制備載藥羥基磷灰石微球取適量空白羥基磷灰石微球，加入一定濃度鹽酸多西環(huán)素溶液，50轉(zhuǎn)/分-120轉(zhuǎn)/分的速度恒溫(0-60℃)振蕩混合1-12小時(shí)，藥物吸附在羥基磷灰石微球上，過濾收集微球，用少量去離子水清洗3次，冷凍干燥，得載藥羥基磷灰石微球。
②用PLGA包衣載藥羥基磷灰石微球向上述載藥羥基磷灰石微球干粉中加入適當(dāng)體積的濃度為0-100毫克/毫升的PLGA溶液(可以用二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙腈等有機(jī)溶劑，或其中一種或多種的混合溶劑溶解PLGA)，攪拌使微球在有機(jī)相中分散均勻，將其滴加入含有0％-5％(重量/體積濃度)穩(wěn)定劑(如聚乙烯醇，PVA)的水性溶液中(如水、緩沖液、模擬體液等)，0℃-60℃恒溫條件下持續(xù)穩(wěn)定機(jī)械攪拌4-8小時(shí)揮發(fā)有機(jī)溶劑，過濾分離包衣微球，用少量去離子水反復(fù)清洗3次，減壓干燥，得PLGA包衣的羥基磷灰石微球。
按上述制備方法，分別用不同規(guī)格的PLGA，以及不同的PLGA/載藥羥基磷灰石微球的重量比制備包衣微球，具體制備條件如下，處方組成如表1。
取50克羥基磷灰石微球，加入濃度為1毫克/毫升鹽酸多西環(huán)素水溶液7000毫升，100轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速、25℃恒溫振蕩混合12小時(shí)，使藥物吸附在羥基磷灰石微球上，過濾收集微球，用少量去離子水清洗3次，冷凍干燥，得載藥羥基磷灰石微球。經(jīng)測(cè)定每克干燥的載藥羥基磷灰石微球含鹽酸多西環(huán)素26.5毫克。
取0.8克干燥的載藥羥基磷灰石微球，加入20毫升濃度為40毫克/毫升的PLGA二氯甲烷溶液，高速機(jī)械攪拌混合均勻，得固/油(S/O)型混懸液，將其滴加入200毫升2.5％聚乙烯醇(PVA)的水性溶液中，25℃下恒溫?cái)嚢?小時(shí)，揮發(fā)有機(jī)溶劑，過濾分離微球，少量去離子水反復(fù)清洗3次，減壓干燥，得PLGA包衣的羥基磷灰石微球。
表1.用不同規(guī)格的PLGA和不同PLGA/載藥羥基磷灰石微球的重量比制備的包衣微球的粒徑

其中，處方1、處方2和處方3的外水相溶劑為水；其他處方的外水相溶劑為模擬體液。
當(dāng)PLGA/載藥羥基磷灰石微球的重量比大于等于4時(shí)(處方1和處方2)，所得到的包衣羥基磷灰石微球粒徑較大，且每個(gè)包衣微球內(nèi)含有多個(gè)羥基磷灰石微球。其他處方所得包衣微球，其平均粒徑與包衣前羥基磷灰石微球的粒徑(11.4±5.3微米)比較增大不多，在顯微鏡下觀察可見每個(gè)微球內(nèi)僅含有1個(gè)，或少數(shù)幾個(gè)羥基磷灰石微球。按處方1和處方4所制備的包衣微球的顯微照片見附圖1。
實(shí)施例2載有鹽酸多西環(huán)素的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羥基磷灰石微球的體外藥物釋放性質(zhì) 體外藥物釋放實(shí)驗(yàn)方法如下精密稱量載藥微球適量，置于10毫升具塞塑料試管中，加入釋放介質(zhì)(純水)4毫升，置于恒溫水浴搖床(25℃，120轉(zhuǎn)/分)中，分別于0.25天、0.5天、1天、1.5天、2天、3天、4天、5天、6天和7天取出，離心(8000轉(zhuǎn)/分，5min)取上清液3mL，補(bǔ)加純凈水3mL。取上清液用紫外分光光度法測(cè)定藥物含量，計(jì)算鹽酸多西環(huán)素累積釋放量。
未包衣羥基磷灰石微球、實(shí)施例1中處方3、處方5、處方6和處方7，以及同法制備的PLGA微球的體外累積藥物釋放量曲線見附圖2。不同規(guī)格PLGA包衣的羥基磷灰石微球的體外累積藥物釋放量曲線的比較見附圖3。
PLGA與羥基磷灰石微球的重量比對(duì)藥物釋放速率有明顯影響，PLGA所占比例越大，則包衣厚度越大，藥物釋放緩慢。羥基磷灰石微球呈明顯的快速釋放，8小時(shí)的釋放百分率達(dá)60％，隨后藥物緩慢釋放。PLGA微球存在明顯的突釋，12小時(shí)釋放百分率約10％，隨后釋放率緩慢增加，72小時(shí)后釋放量幾乎不再增加。而PLGA包衣的羥基磷灰石微球均未出現(xiàn)明顯的突釋現(xiàn)象，8小時(shí)后以接近恒定的速率釋放藥物。
PLGA的標(biāo)示黏度對(duì)藥物的緩釋也有影響，IV越大則PLGA溶液的黏度越大，分子量越高，藥物釋放緩慢。
實(shí)施例3載有鹽酸多西環(huán)素的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羥基磷灰石微球的注射劑的制備及其體內(nèi)藥物釋放性質(zhì)和血藥濃度-時(shí)間曲線 取包衣和未包衣的載鹽酸多西環(huán)素的微球，γ-射線輻射滅菌。在無菌操作柜中，將滅菌的包衣微球分別分散于滅菌的0.5％羧甲基纖維素鈉注射用水溶液中，混勻，得鹽酸多西環(huán)素微球注射劑。
用1毫升注射器取約0.2毫升微球注射劑，小鼠背部皮下注射給藥。分別于給藥后2小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí)(未包載藥羥基磷灰石微球)和0.5天、1天、2天、3天、4天和5天(包衣載藥羥基磷灰石微球)，小鼠眼眶取血，全血置于含肝素的離心管中8000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上層血漿，冰箱冷凍備用；斷頸處死小鼠，剪開背部皮膚，可觀察到被包裹的微球，將其與皮膚鈍性分離，置5毫升具塞離心管中，冰箱冷凍備用。將血漿和微球分別處理提取藥物后，用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算血漿中藥物濃度和殘留在微球中未釋放的藥量。
載有鹽酸多西環(huán)素的羥基磷灰石微球和PLGA包衣的的羥基磷灰石微球小鼠皮下注射給藥后，體內(nèi)累積藥物釋放量曲線見附圖4，體內(nèi)血藥濃度-時(shí)間曲線見附圖5。
與羥基磷灰石微球比較，PLGA包衣的羥基磷灰石微球小鼠皮下注射給藥后，體內(nèi)藥物釋放呈明緩慢，血藥濃度更平穩(wěn)。
實(shí)施例4載有醋酸奧曲肽的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羥基磷灰石微球 取10克羥基磷灰石微球，加入濃度為2毫克/毫升醋酸奧曲肽水溶液100毫升，100轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速、25℃恒溫振蕩混合12小時(shí)，使藥物吸附在羥基磷灰石微球上，過濾收集微球，用少量去離子水清洗3次，冷凍干燥，得載藥羥基磷灰石微球。經(jīng)測(cè)定每克干燥的載藥羥基磷灰石微球含醋酸奧曲肽12.7毫克。
取0.8克干燥的載藥羥基磷灰石微球，加入20毫升濃度為10毫克/毫升的PLGA(LA/GA＝50/50，IV＝0.28dl/l)二氯甲烷溶液，攪拌混合均勻，得S/O型混懸液，將其滴加入300毫升2.5％聚乙烯醇(PVA)的PBS溶液中，25℃下恒溫?cái)嚢?小時(shí)，揮發(fā)有機(jī)溶劑，過濾分離微球，少量去離子水反復(fù)清洗3次，減壓干燥，得PLGA包衣的羥基磷灰石微球。
PLGA包衣羥基磷灰石微球包封率為72.9％，平均粒徑為16.7μm，按實(shí)施例2中的方法測(cè)定釋放度，5天藥物釋放百分率達(dá)90％以上，體外累積藥物釋放量曲線見附圖6。
實(shí)施例5載有葫蘆素B的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羥基磷灰石微球 取5克羥基磷灰石微球，加入濃度為10.0毫克/毫升葫蘆素B甲醇20毫升，100轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速、25℃恒溫振蕩混合12小時(shí)，使藥物吸附在羥基磷灰石微球上，過濾收集微球，真空干燥，得載藥羥基磷灰石微球。經(jīng)測(cè)定每克干燥的載藥羥基磷灰石微球含硫酸葫蘆素B 30.5毫克。
取0.8克干燥的載藥羥基磷灰石微球，加入20毫升濃度為10毫克/毫升的PLGA(LA/GA＝50/50，IV＝0.28dl/l)二氯甲烷溶液，攪拌混合均勻，得S/O型混懸液，將其滴加入300毫升2.5％聚乙烯醇(PVA)的PBS溶液中，25℃下恒溫?cái)嚢?小時(shí)，揮發(fā)有機(jī)溶劑，過濾分離微球，少量去離子水反復(fù)清洗3次，減壓干燥，得PLGA包衣的羥基磷灰石微球。
PLGA包衣羥基磷灰石微球包封率為75.3％，平均粒徑為16.5μm，按實(shí)施例2中的方法測(cè)定釋放度，7天藥物釋放百分率達(dá)70.2％，體外累積藥物釋放量曲線見附圖6。
實(shí)施例6載有草烏甲素的聚己內(nèi)酯(PCL)包衣羥基磷灰石微球 取10克羥基磷灰石微球，加入濃度為5.0毫克/毫升草烏甲素的乙醇溶液50毫升，100轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速、25℃恒溫振蕩混合12小時(shí)，使藥物吸附在羥基磷灰石微球上，過濾收集微球，用少量乙醇潤(rùn)洗，真空干燥，得載藥羥基磷灰石微球。經(jīng)測(cè)定每克干燥的載藥羥基磷灰石微球含草烏甲素18.4毫克。
取0.8克干燥的載藥羥基磷灰石微球，加入20毫升濃度為20毫克/毫升的PCL(BPI公司生產(chǎn))二氯甲烷溶液，攪拌混合均勻，得S/O型混懸液，將其滴加入300毫升2.5％聚乙烯醇(PVA)的PBS溶液中，25℃下恒溫?cái)嚢?小時(shí)，揮發(fā)有機(jī)溶劑，過濾分離微球，少量去離子水反復(fù)清洗3次，減壓干燥，得PCL包衣的羥基磷灰石微球。
PCL包衣羥基磷灰石微球包封率為92.5％，平均粒徑為18.9μm，按實(shí)施例2中的方法測(cè)定釋放度，7天藥物釋放百分率達(dá)74.1％，體外累積藥物釋放量曲線見附圖6。
實(shí)施例7載有昂丹西瓊的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羥基磷灰石微球 取50克羥基磷灰石微球，加入濃度為10.0毫克/毫升鹽酸昂丹西瓊水溶液2000毫升，100轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速、25℃恒溫振蕩混合12小時(shí)，使藥物吸附在羥基磷灰石微球上，過濾收集微球，用少量去離子水清洗3次，冷凍干燥，得載藥羥基磷灰石微球。經(jīng)測(cè)定每克干燥的載藥羥基磷灰石微球含鹽酸昂丹西瓊178.9毫克。
取0.8克干燥的載藥羥基磷灰石微球，加入20毫升濃度為40毫克/毫升的PLGA(LA/GA＝50/50，IV＝0.28dl/l)二氯甲烷溶液，攪拌混合均勻，得S/O型混懸液，將其滴加入300毫升2.5％聚乙烯醇(PVA)的PBS溶液中，25℃下恒溫?cái)嚢?小時(shí)，揮發(fā)有機(jī)溶劑，過濾分離微球，少量去離子水反復(fù)清洗3次，減壓干燥，得PLGA包衣的羥基磷灰石微球。
PLGA包衣羥基磷灰石微球包封率為67.5％，平均粒徑為17.2μm，按實(shí)施例2中的方法測(cè)定釋放度，用pH6.8的緩沖液作釋放介質(zhì)，7天藥物釋放百分率達(dá)80.3％，體外累積藥物釋放量曲線見附圖6。
實(shí)施例8載有利培酮的聚乳酸(PLA)包衣羥基磷灰石微球 取50克羥基磷灰石微球，加入濃度為4毫克/毫升鹽酸利培酮水溶液1000毫升，100轉(zhuǎn)份轉(zhuǎn)速、25℃恒溫振蕩混合12小時(shí)，使藥物吸附在羥基磷灰石微球上，過濾收集微球，用少量去離子水清洗3次，冷凍干燥，得載藥羥基磷灰石微球。經(jīng)測(cè)定每克干燥的載藥羥基磷灰石微球含鹽酸利培酮43.6毫克。
取0.8克干燥的載藥羥基磷灰石微球，加入20毫升濃度為20毫克/毫升的PLA(IV＝0.28dl/l)二氯甲烷溶液，攪拌混合均勻，得S/O型混懸液，將其滴加入300毫升2.5％聚乙烯醇(PVA)的PBS溶液中，25℃下恒溫?cái)嚢?小時(shí)，揮發(fā)有機(jī)溶劑，過濾分離微球，少量去離子水反復(fù)清洗3次，減壓干燥，得PLA包衣的羥基磷灰石微球。PLA包衣羥基磷灰石微球包封率為81.5％，平均粒徑為18.4μm，按實(shí)施例2中的方法，分別于0.25天、0.5天、1天、1.5天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天和15天取樣測(cè)定釋放度，15天藥物釋放百分率達(dá)93.7％，體外累積藥物釋放量曲線見附圖6。
實(shí)施例9載有石杉?jí)A甲的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羥基磷灰石微球 取5克羥基磷灰石微球，加入濃度為6.0毫克/毫升石杉?jí)A甲乙醇溶液25毫升，100轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速、25℃恒溫振蕩混合12小時(shí)，使藥物吸附在羥基磷灰石微球上，過濾收集微球，用少量乙醇清洗3次，冷凍干燥，得載藥羥基磷灰石微球。經(jīng)測(cè)定每克干燥的載藥羥基磷灰石微球含石杉?jí)A甲21.3毫克。
取0.8克干燥的載藥羥基磷灰石微球，加入20毫升濃度為40毫克/毫升的PLGA(LA/GA＝25/75，IV＝0.28dl/l)二氯甲烷溶液，攪拌混合均勻，得S/O型混懸液，將其滴加入300毫升2.5％聚乙烯醇(PVA)的PBS溶液中，25℃下恒溫?cái)嚢?小時(shí)，揮發(fā)有機(jī)溶劑，過濾分離微球，少量去離子水反復(fù)清洗3次，減壓干燥，得PLGA包衣的羥基磷灰石微球。
PLGA包衣羥基磷灰石微球包封率為85.6％，平均粒徑為19.2μm，按實(shí)施例2中的方法測(cè)定釋放度，用pH5.6的緩沖液作釋放介質(zhì)，分別于0.25天、0.5天、1天、1.5天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天和15天取樣測(cè)定釋放度，15天藥物釋放百分率達(dá)73.8％，體外累積藥物釋放量曲線見附圖6。
實(shí)施例10載有鹽酸多西環(huán)素的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羥基磷灰石微球 PLGA包衣羥基磷灰石微球的制備方法，包括下列步驟 ①羥基磷灰石微球的制備按常規(guī)的化學(xué)沉淀法制備納米羥基磷灰石顆粒。將250毫升(NH4)2HPO4溶液(0.3摩爾/升，溶液1)和250毫升Ca(NO3)2·4H2O溶液(0.5摩爾/升，溶液2)，分別用氨水調(diào)節(jié)至pH為10-11范圍內(nèi)。將溶液1緩慢加入溶液2中(體系中Ca/P為1.67)。攪拌2小時(shí)，靜置，陳化24小時(shí)。所得白色沉淀用去離子水洗滌3遍，待納米羥基磷灰石顆粒沉降后，傾去上層的水，加水至原體積的1/2。調(diào)節(jié)噴霧干燥器進(jìn)口溫度120℃，出口溫度83℃，供液流速1.2毫升/分鐘，噴霧干燥得羥基磷灰石微球，平均粒徑為8.2μm。
②吸附法制備載藥羥基磷灰石微球和用PLGA包衣載藥羥基磷灰石微球按實(shí)施例1中所述的方法載藥、按實(shí)施例1中處方6的條件制備PLGA包衣的載藥羥基磷灰石微球，得平均粒徑為10.7μm的包衣載藥羥基磷灰石微球。
實(shí)施例11載有鹽酸多西環(huán)素的乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)包衣羥基磷灰石微球PLGA包衣羥基磷灰石微球的制備方法，包括下列步驟 ①羥基磷灰石微球的制備按實(shí)施例5總所述的常規(guī)的化學(xué)沉淀法制備納米羥基磷灰石顆粒。將100毫升(NH4)2HPO4溶液(0.3摩爾/升，溶液1)和100毫升Ca(NO3)2·4H2O溶液(0.5摩爾/升，溶液2)，分別用氨水調(diào)節(jié)至pH為10-11范圍內(nèi)。將溶液1緩慢加入溶液2中(體系中Ca/P為1.67)。攪拌2小時(shí)，靜置，陳化24小時(shí)。所得白色沉淀用去離子水洗滌3遍，待納米羥基磷灰石顆粒沉降后，傾去上層的水，加水至原體積的1/2，加入鹽酸多西環(huán)素5克，室溫條件下攪拌2小時(shí)。調(diào)節(jié)噴霧干燥器進(jìn)口溫度120℃，出口溫度83℃，供液流速1.2毫升/分鐘，噴霧干燥得載藥羥基磷灰石微球，平均粒徑為8.7μm，經(jīng)測(cè)定每克干燥的載藥羥基磷灰石微球含鹽酸多西環(huán)素28.1毫克。
②吸附法制備載藥羥基磷灰石微球和用PLGA包衣載藥羥基磷灰石微球按實(shí)施例1中所述的方法載藥、按實(shí)施例1中處方6的條件制備PLGA包衣的載藥羥基磷灰石微球，得平均粒徑為11.4μm的包衣載藥羥基磷灰石微球。
實(shí)施例12用噴霧干燥法包衣載鹽酸利多卡因羥基磷灰石微球 按實(shí)施例4中所述的方法制備載鹽酸布比卡因羥基磷灰石微球。取0.5克干燥的載藥羥基磷灰石微球，加入40毫升濃度為25毫克/毫升的PLGA乙酸乙酯溶液，攪拌混合均勻，得S/O型混懸液。
調(diào)節(jié)噴霧干燥器進(jìn)口溫度65℃，出口溫度0℃，供液流速2.0毫升/分鐘，噴霧干燥，回收有機(jī)溶劑，得包衣羥基磷灰石微球，平均粒徑為17.9μm，多數(shù)包衣羥基磷灰石微球內(nèi)部?jī)H有一個(gè)羥基磷灰石微球，少數(shù)含有多個(gè)羥基磷灰石微球。
權(quán)利要求
1.一種聚酯包衣的羥基磷灰石微球，其特征為包衣微球的內(nèi)部為由納米羥基磷灰石顆粒聚集構(gòu)成的羥基磷灰石微球，羥基磷灰石微球的表面或內(nèi)部吸附載有小分子藥物，載藥的羥基磷灰石微球用聚酯包衣，包衣微球內(nèi)部只含有1個(gè)載藥羥基磷灰石微球或僅有少于包衣微球總數(shù)5％的載藥羥基磷灰石微球；聚酯與載藥羥基磷灰石微球的重量比小于4。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球，其特征為所述聚酯包衣為可生物降解的脂肪族聚酯材料，選自聚乳酸或聚丙交酯、聚乙醇酸或聚乙交酯、乳酸-乙醇酸共聚物或丙交酯-乙交酯共聚物、聚己內(nèi)酯和丙交酯-己內(nèi)酯共聚物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球，其特征為聚酯與載藥羥基磷灰石微球的重量比小于2。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球，其特征在于所述微球的平均粒徑在1-200微米之間。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球，其特征在于所述微球的平均粒徑在5-50微米之間。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球，其特征為所述的小分子藥物選自抗生素類藥物、局麻藥物、小肽類藥物、抗腫瘤藥物、鎮(zhèn)吐藥、以及抗精神病藥物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球，其特征為所述的小分子藥物選自多西環(huán)素、米諾環(huán)素、慶大霉素、甲硝唑、阿米卡星、妥布霉素、更昔洛韋、布比卡因、利多卡因、草烏甲素、高烏甲素、嗎啡、亮丙瑞林、戈舍瑞林、腦肽、奧曲肽、腦啡肽、阿糖孢苷、氟尿嘧啶、順鉑、甲氨喋呤、博來霉素、葫蘆素、昂丹西瓊、格拉西瓊、利培酮、石杉?jí)A甲，及其鹽酸鹽、硫酸鹽、醋酸鹽、或其他類型的鹽的形式。
8.權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球的制備方法，其特征為包含如下步驟
①取粒徑適宜的市售羥基磷灰石微球、或用化學(xué)沉淀法制備納米羥基磷灰石顆粒經(jīng)噴霧干燥制備羥基磷灰石微球，純化后，根據(jù)藥物性質(zhì)和載藥量的要求加入適宜濃度的藥物溶液，使藥物吸附在羥基磷灰石微球的表面和內(nèi)部；
②藥物吸附達(dá)到平衡后，過濾或離心分離微球，洗去微球表面的藥物，干燥；
③采用液中干燥技術(shù)、流化包衣技術(shù)、噴霧干燥技術(shù)，或其他制劑技術(shù)在載藥羥基磷灰石微球外表面包一層聚合物衣膜，得包衣的羥基磷灰石微球，干燥后密閉、低溫貯存。
9.權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的聚酯包衣的羥基磷灰石微球的制備方法，其特征為包含如下步驟
①用化學(xué)沉淀法制備納米羥基磷灰石顆粒，純化后，根據(jù)藥物性質(zhì)和載藥量的要求加入適宜濃度的藥物溶液，使藥物吸附在羥基磷灰石顆粒的表面，經(jīng)噴霧干燥制備載藥羥基磷灰石微球；
②采用液中干燥技術(shù)、流化包衣技術(shù)、噴霧干燥技術(shù)，或其他制劑技術(shù)在載藥羥基磷灰石微球外表面包一層聚合物衣膜，得包衣的羥基磷灰石微球，干燥后密閉、低溫貯存。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種用可生物降解的脂肪族聚酯包衣的羥基磷灰石微球，包衣微球的內(nèi)部為由納米羥基磷灰石顆粒聚集構(gòu)成的羥基磷灰石微球，羥基磷灰石微球的表面或內(nèi)部吸附載有小分子藥物。所用的可生物降解的脂肪族聚酯材料，選自聚乳酸或聚丙交酯、聚乙醇酸或聚乙交酯、乳酸-乙醇酸共聚物或丙交酯-乙交酯共聚物、聚己內(nèi)酯和丙交酯-己內(nèi)酯共聚物。該聚酯包衣的羥基磷灰石微球可持續(xù)釋放藥物3天以上，且藥物釋放過程無明顯突釋現(xiàn)象。包衣微球可通過注射給藥方式或手術(shù)埋植給藥方式植入人或動(dòng)物體內(nèi)用于多種疾病的治療。
文檔編號(hào)A61K47/02GK101756908SQ20101010014
公開日2010年6月30日 申請(qǐng)日期2010年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月25日
發(fā)明者徐暉, 王曉蕓, 王紹寧, 郭建博 申請(qǐng)人:沈陽藥科大學(xué)