專利名稱：：可常溫保存的白蛋白制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物制品，尤其涉及注射用的白蛋白制劑。
背景技術(shù)：
：白蛋白(又稱清蛋白，albumin,Alb)系由肝實質(zhì)細胞合成，是血漿中含量最豐富的蛋白，占血漿總蛋白的5256%，其分子結(jié)構(gòu)在已于1975年闡明，為585個氨基酸殘基的單鏈多肽，分子量約為66400，等電點約為4.7，分子中含有17個二硫鍵和一個游離的半胱氨酸殘基，這使得白蛋白分子具有多個環(huán)和橫向裂縫的緊密結(jié)構(gòu)，具有很強的非特異性結(jié)合能力，許多水溶性差的物質(zhì)可以通過白蛋白的結(jié)合而被運輸。其具有多種生理功能，主要是維持血液中的滲透壓和血液循環(huán)中難溶性物質(zhì)的運輸，用于失血創(chuàng)傷、燒傷引起的休克、腦水腫及損傷引起的顱壓升高、肝硬化及腎病引起的水腫或腹水、低蛋白血癥的防治、新生兒高膽紅素血癥、用于心肺分流術(shù)、燒傷的輔助治療、血液透析的輔助治療和成人呼吸窘迫綜合征。白蛋白主要是從血漿中分離提取得到。白蛋白制劑需要去除病毒以保證產(chǎn)品的安全性，例如巴氏消毒法，在滅活前加入辛酸鈉和/或N-乙酰色氨酸作為穩(wěn)定劑，病毒滅活后分裝，這樣的白蛋白制品需要儲存于28t:中，用以保證制劑的有效性。白蛋白制劑在常溫下無法保存的主要原因是制劑中多聚體隨保存時間不斷增加，這可能制劑中白蛋白分子內(nèi)或分子間二硫鍵的不正確交聯(lián)，特別是分子間的不正確交聯(lián)，他們的形成可能表現(xiàn)出新的抗原性或者其他不良影響，從而引起患者發(fā)生非藥物治療目的的有害反應(yīng)。受產(chǎn)品穩(wěn)定的限制和儲存要求，白蛋白制品的保存非常不方便，同時在運輸和存放時需要保持低溫，這需要消耗非常大的運輸和保存成本。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種可在常溫下長期保存的白蛋白制劑。本發(fā)明白蛋白制劑添加有CeQ。飽和脂肪酸或其醫(yī)學(xué)上可接受的鹽，或者它們的組合，其添加的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的412倍；L-精氨酸，其添加的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的220倍；還原型谷胱甘肽，其添加的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的0.15倍；氧化型谷胱甘肽，其添加的摩爾數(shù)為還原型谷胱甘肽摩爾數(shù)的0.51倍。本發(fā)明中，白蛋白可以是經(jīng)低溫乙醇法，高溫乙醇法，或者其他方法人血中提取的白蛋白，也可以是通過基因工程技術(shù)而獲得的重組人白蛋白。白蛋白制劑中白蛋白濃度可以在50250mg/ml范圍內(nèi)，制劑pH值可在59的范圍內(nèi)。C6C1Q飽和脂肪酸包括分子中碳原子數(shù)量為610的直鏈或含有支鏈的脂肪酸。醫(yī)學(xué)上可接受的C6Q。飽和脂肪酸鹽包括其鈉鹽、鉀鹽、鋅鹽，常見的有辛酸鈉、癸酸鈉。優(yōu)選的是CeQ。飽和脂肪酸鹽如鈉鹽，可以迅速溶解于白蛋白制劑。CeQ。飽和脂肪酸或其鹽的添加量優(yōu)選的是白蛋白摩爾數(shù)的610倍。L-精氨酸的添加量優(yōu)選的是白蛋白摩爾數(shù)的512倍。谷胱甘肽是谷氨酸、胱氨酸和甘氨酸縮合形成的三肽。還原型谷胱甘肽的添加量優(yōu)選的是白蛋白摩爾數(shù)的24倍。本發(fā)明制劑可以使用這樣的方法配制將白蛋白溶解于注射用水中，添加所述脂肪酸或其鹽和L-精氨酸，配制成半成品，然后進行病毒滅活，再添加還原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽，充分溶解后，分裝成注射用的白蛋白制劑。L-精氨酸液也可以在半成品病毒滅活之后再加入。本發(fā)明使用含有巰基的谷胱甘肽，能有效的保護蛋白質(zhì)，減少或避免白蛋白分子間發(fā)生錯誤的交聯(lián)，形成多聚體。氧化型谷胱甘肽能保證白蛋白正確的折疊、抑制白蛋白聚集，還原型谷胱甘肽能促進發(fā)生錯誤交聯(lián)的白蛋白多聚體進行重組，使其選擇天然的二硫鍵，促進折疊。L-精氨酸能穩(wěn)定白蛋白的天然構(gòu)象，使錯誤交聯(lián)的白蛋白重新折疊，保持天然活性。因此本發(fā)明能有效的保持白蛋白制劑在常溫下的穩(wěn)定性，在常溫下保存5年后白蛋白多聚體含量沒有明顯變化。本發(fā)明的添加成分對人體不產(chǎn)生毒副作用，可與低溫保藏的白蛋白制品等效使用，制劑中所含的還原型谷胱甘肽對肝病患者可有輔助療效的作用。具體實施方式實施例1從血漿中分離出白蛋白溶解于注射用水中，配制成濃度為200mg/ml的5000ml白蛋白溶液，添加辛酸鈉O.15mol、L-精氨酸O.lmol，進行6(TC，10小時的病毒滅活，然后添加還原型谷胱甘肽添加量為0.06mol，氧化型谷胱甘肽為0.03mol，充分溶解后，分裝成注射用的白蛋白制劑，25°C保存進行長期考察。對比例1按《中國藥典》描述的制法將白蛋白溶解于注射用水中，配制成濃度為200mg/ml的5000ml白蛋白溶液，其中含辛酸鈉O.160mmol/gpro，進行60°C，10小時的病毒滅活，然后分裝成注射用的白蛋白制劑，25°C保存進行對比考察。檢測方法采用高效液相色譜法。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用親水硅膠高效體積排阻色譜柱(SEC，排阻極限300kD，粒度10iim)，柱直徑7.5mm，長60cm;以含1%異丙醇，pH值7.O，O.2mol/L磷酸鹽緩沖液(取0.5mol/L磷酸二氫鈉200ml、0.5mol/L磷酸氫二鈉420ml、異丙醇15.5ml及水914.5ml均勻混合)為流動相；檢測波長為280nm;流速為每分鐘O.6ml;取總蛋白質(zhì)含量為12mg/ml的白蛋白溶液20iU注入色譜柱，記錄色譜圖，白蛋白單體峰與二聚體峰間的分離度應(yīng)大于1.5，拖尾因子按白蛋白單體峰計算應(yīng)為0.951.40。按面積歸一法計算，色譜圖中未保留(全排阻)峰的含量(％)除以2，即為人血白蛋白多聚體含量。取實施例1、對比例1的制劑適量，用上述流動相稀釋成蛋白質(zhì)含量12mg/ml的溶液，取20iU注入色譜柱，記錄色譜圖。計算得到的白蛋白多聚體含量如下表實施例1:4<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>從對比結(jié)果明顯看出，保存25年后，實施例1的制劑白蛋白分子結(jié)構(gòu)基本穩(wěn)定，較少交聯(lián)，能較好的保持其天然結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，對比例1的普通市售制劑，在2年后白蛋白多聚體含量明顯增加，而且每年加速提高。實施例2從血漿中分離出白蛋白溶解于注射用水中，配制成濃度為150mg/ml的5000ml白蛋白溶液，添加辛酸鈉O.10mol、L-精氨酸O.15mol，進行6(TC，10小時的病毒滅活，然后添加還原型谷胱甘肽添加量為0.03mol，氧化型谷胱甘肽為0.03mol，充分溶解后，分裝成注射用的白蛋白制劑，在40°C進行加速熱穩(wěn)定性試驗。對比例2從血漿中分離出白蛋白溶解于注射用水中，配制成濃度為150mg/ml的5000ml白蛋白溶液，添加辛酸鈉O.180mmol/gpro進行60°C，10小時的病毒滅活，分裝成注射用的白蛋白制劑，在40°C進行加速熱穩(wěn)定性對比。檢測方法按實施例1的方法進行，計算得到的白蛋白多聚體含量如下表實施例2<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>對比例2<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>從對比結(jié)果可以看出，實施例2的制劑進行4(TC加速熱穩(wěn)定性試驗，在6個月內(nèi)白蛋白多聚體含量變化較少，說明分子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，極少交聯(lián)，能較好的保持其天然結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，對比例2的普通制劑，在6個月后分子多聚體含量明顯增加了，提高幅度超過1個百分點。權(quán)利要求一種可常溫保存的白蛋白制劑，其特征在于，該制劑中添加有C6～C10飽和脂肪酸或其醫(yī)學(xué)上可接受的鹽，其添加的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的4～12倍；L-精氨酸，其添加的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的2～20倍；還原型谷胱甘肽，其添加的摩爾數(shù)為白蛋白摩爾數(shù)的0.1-5倍；氧化型谷胱甘肽，其添加的摩爾數(shù)為還原型谷胱甘肽摩爾數(shù)的0.5～1倍。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述白蛋白制劑，其特征在于，所述制劑中白蛋白濃度50250mg/ml。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述白蛋白制劑，其特征在于，所述C6C1Q飽和脂肪酸或其醫(yī)學(xué)上可接受的鹽的添加量優(yōu)選的是白蛋白摩爾數(shù)的610倍。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述白蛋白制劑，其特征在于，所述L-精氨酸的添加量是白蛋白摩爾數(shù)的512倍。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述白蛋白制劑，其特征在于，所述還原型谷胱甘肽的添加量是白蛋白摩爾數(shù)的24倍。全文摘要本發(fā)明公開一種可在常溫下長期保存的白蛋白制劑，該制劑添加有C6～C10飽和脂肪酸或其醫(yī)學(xué)上可接受的鹽，L-精氨酸，還原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽，可減少或避免白蛋白分子間發(fā)生錯誤的交聯(lián)，穩(wěn)定白蛋白的天然構(gòu)象，有效的保持白蛋白制劑在常溫下的穩(wěn)定性，在常溫下保存5年后白蛋白多聚體含量沒有明顯變化，添加成分對人體不產(chǎn)生毒副作用，可與低溫保藏的白蛋白制品等效使用，制劑中所含的還原型谷胱甘肽對肝病患者可有輔助療效的作用。文檔編號A61K47/42GK101745103SQ201010101818公開日2010年6月23日申請日期2010年1月19日優(yōu)先權(quán)日2010年1月19日發(fā)明者汪偉軍,王文杰,陳成坤,黃國華,黃育升,黃邦春,黃錦程申請人:廣東衛(wèi)倫生物制藥有限公司