專利名稱：一種富含溶菌酶的新型生物增效劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種高含溶菌酶的新型生物增效劑，本發(fā)明涉及獸藥增效劑、飼料添加劑、食品安 全及酶制劑領(lǐng)域，具體說(shuō)是一種新型綠色獸藥增效劑，具有殺菌、提高生產(chǎn)性能等特性，可 以增效或替代抗生素，降低動(dòng)物產(chǎn)品藥物殘留。
背景技術(shù)：
抗生素作為獸藥和飼料添加劑在養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用已經(jīng)有60多年的歷史，對(duì)預(yù)防動(dòng) 物疾病，提高養(yǎng)殖業(yè)的產(chǎn)量和質(zhì)量起到了積極的作用。但是隨著抗生素在動(dòng)物生產(chǎn)中的廣 泛使用，其弊端日益凸現(xiàn)，如導(dǎo)致動(dòng)物胃腸道菌群失調(diào)，產(chǎn)生耐藥性和藥物殘留等，引發(fā)了 一系列公共安全、環(huán)境保護(hù)和畜禽產(chǎn)品質(zhì)量方面的問(wèn)題。一些發(fā)達(dá)國(guó)家已把抗生素在動(dòng)物 產(chǎn)品中的殘留作為產(chǎn)品進(jìn)出口貿(mào)易壁壘。在這種情況下，尋找能夠克服上述弊端的抗生素 替代物，研發(fā)和使用新型、綠色獸藥增效劑和飼料添加劑，已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)注和研究的執(zhí)占。酶廣泛存在于生物體內(nèi)，參與新陳代謝等多種生理功能，其中對(duì)微生物細(xì)胞壁具 有水解功能的抗菌酶，如溶菌酶能夠溶解微生物細(xì)胞壁而使微生物死亡，而且溶菌酶在人 和動(dòng)物的唾液、眼淚、乳汁以及機(jī)體組織中大量存在，是人和動(dòng)物自身重要的非特異性免疫 因子，與人和動(dòng)物的健康息息相關(guān)。溶菌酶的溶菌(殺菌)作用與傳統(tǒng)的抗生素藥物相比，具有對(duì)某一病原菌所有血 清型都有效的優(yōu)點(diǎn)，克服了一種抗生素只能預(yù)防一種或其中一種血清型病原菌的不足，更 不存在藥物殘留和耐藥性的問(wèn)題。溶菌酶不但能溶解(殺死)細(xì)菌，增強(qiáng)動(dòng)物的免疫能力， 而且還能和病毒結(jié)合使病毒失活，在增效/替代抗生素、控制耐藥菌、生產(chǎn)綠色肉蛋奶食品 方面是很好的選擇。1、溶菌酶在人和動(dòng)物的多種組織、分泌液及某些植物組織、微生物細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn) 了溶菌酶的存在，是人和動(dòng)物自身的重要的非特異性免疫因子，具有殺菌消炎、抗病毒、增 強(qiáng)免疫力和促進(jìn)有益菌繁殖等作用。2、β-1，3-葡聚糖酶主要來(lái)源于藤黃節(jié)桿菌、木霉、梨孢霉等，它的主要作用是 溶解酵母細(xì)胞壁和霉菌細(xì)胞壁。3、其它半纖維素酶包括木聚糖酶、甘露聚糖酶和聚半乳糖酶等，主要作用是將植 物細(xì)胞中的半纖維素水解為多種五碳糖，且降低半纖維素溶于水后的粘度。谷物飼料含有較 多的非淀粉多糖NSP，可溶性β -葡聚糖和阿拉伯木聚糖一般占NSP的30 %，是NSP抗?fàn)I養(yǎng)作 用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。在飼料中添加半纖維素酶可明顯降低谷物飼料中抗?fàn)I養(yǎng)碳水化合物的粘 稠度，改善大部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率和吸收率，進(jìn)而改善飼料的能量值和適口性，提高飼料營(yíng) 養(yǎng)價(jià)值。NSP酶在一定程度上能改善籠養(yǎng)雞的衛(wèi)生條件，也可減少呼吸道疾病的發(fā)生。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種綠色新型生物增效劑，用于動(dòng)物保健及預(yù)防治療動(dòng)物疾病，具有一種廣譜、無(wú)殘留、無(wú)污染、促生長(zhǎng)的特點(diǎn)。本發(fā)明的技術(shù)方案一種新型酶組合飼料添加劑，以添加劑中酶活含量計(jì)算，按溶 菌酶5000000IU/g、纖維素CMC酶5000IU/g、木聚糖酶140000IU/g、酸性蛋白酶5000IU/g、 β -葡聚糖酶20000IU/g、果膠酶5000IU/g配比為飼料添加劑。所述酶組合飼料添加劑的制備方法1)本增效劑中溶菌酶為動(dòng)物基因工程酶，通過(guò)基因克隆至工程菌，發(fā)酵和生物提 取制的。2)組合酶的配制根據(jù)所用酶的酶活含量換算成質(zhì)量，按組合酶的配比稱取相應(yīng) 質(zhì)量的溶菌酶、纖維素、木聚糖酶等然后混合均勻?yàn)榻M合酶。本增效劑的應(yīng)用，用于獸藥中；以粉末形式直接添加到獸藥里，添加量見(jiàn)下列表 格表一溶菌酶增效劑在獸藥中的添加量
獸藥粉劑散劑粉針劑口服液添加量1-1. 5%0. 3-0. 5%lg/100L (深部肌肉注射)3g/1000 羽 (主要用于家禽) 本發(fā)明的有益效果1、抗菌促長(zhǎng)本增效劑能水解細(xì)菌細(xì)胞壁，阻礙致病細(xì)菌的活性繁殖，并殺死致病 菌。在細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察中表現(xiàn)出很強(qiáng)的溶菌現(xiàn)象，在溶菌的同時(shí)還具有殺菌作用。并對(duì)各 種動(dòng)物具有較好的促生長(zhǎng)效果。2、抗病毒本增效劑可以阻止流感和腺病毒繁殖，同帶負(fù)電荷的病毒蛋白直接作 用，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活。3、增強(qiáng)免疫力本增效劑作用為機(jī)體非特異性免疫因子之一，參與機(jī)體多種免疫 反應(yīng)，在機(jī)體正常防御功能和非特異免疫中，具有保持機(jī)體生理平衡的重要作用。溶菌酶本 身具有T細(xì)胞表位，有誘導(dǎo)2型(th2)T輔助細(xì)胞反應(yīng)；口服溶菌酶能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生全身性 的thl和th2免疫反應(yīng)，增強(qiáng)免疫功能，因此口服溶菌酶具有控制上呼吸道感染的功能并能 治療痢疾。4、抗球蟲(chóng)本增效劑作為家禽體內(nèi)非常重要的免疫因子，在腸道內(nèi)和腸道有益菌 群及其他免疫細(xì)胞聯(lián)合作用，參與腸粘膜的修復(fù)，具有抗球蟲(chóng)的重要作用。它還具有激活血 小板的功能，可以改善局部組織血液循環(huán)障礙，分解濃液，促進(jìn)機(jī)體損傷組織的修復(fù)。它還 可以作為一種宿主抵抗因子，對(duì)組織局部起保護(hù)作用。。5、與抗生素配伍的增效作用溶菌酵素能增加抗菌藥物效果的主要原因是它本身 能抗菌抗病毒，直接作用于病原菌細(xì)胞壁，而不像抗生素僅僅作用于細(xì)菌代謝途徑，所以病 原菌不易對(duì)其產(chǎn)生耐藥性。與抗生素配伍，雙管齊下殺滅病菌，消除抗生素帶來(lái)的免疫抑制 作用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施案例詳細(xì)闡述本發(fā)明。實(shí)施案例1溶菌酶新型生物增效劑的配制以添加劑中酶活含量計(jì)，將溶菌酶5000000IU/g、纖維素CMC酶5000IU/g、木聚糖 酶140000IU/g、酸性蛋白酶5000IU/g、β -葡聚糖酶20000IU/g、果膠酶5000IU/g組合，制 備成為生物增效劑。其制備方法為1)復(fù)合酶的配制根據(jù)酶的酶活含量，將酶活換算成所需的質(zhì)量，稱取相應(yīng)質(zhì)量 的溶菌酶、纖維素酶、木聚糖酶等。2)混合包裝將稱取好的復(fù)合酶混合均勻，并密封包裝。實(shí)施案例2富含溶菌酶生物增效劑對(duì)大腸桿菌的抑制作用采用藥敏紙片法進(jìn)行檢測(cè)(1)藥敏紙片的制作取質(zhì)量較好的定性濾紙，用普通打孔器打成直徑6mm的圓形小紙片。取圓紙片50 片放入清潔于燥的小瓶，以單層牛皮紙包扎。經(jīng)15磅15-20分鐘高壓滅菌后，置于37°C溫 箱中數(shù)天，使完全干燥。按每張紙片飽和吸水量為0. Olml計(jì)，在上述含有50片紙片的小瓶 內(nèi)加入藥液0. 5ml，不時(shí)翻動(dòng)，使濾紙片將藥液均勻吸凈，浸泡30分鐘后，于37°C溫箱過(guò)夜。 干燥后即密封，置陰暗干燥處保存。(2)藥液的制備將本飼料添加劑按300g/噸用量的十倍溶解稀釋，浸泡藥敏紙片。(3)試驗(yàn)操作方法在超凈工作臺(tái)中，用無(wú)菌棉拭子蘸取大腸桿菌菌液，在管壁上擠壓去掉多余菌液。 用棉拭子涂布整個(gè)培養(yǎng)基表面，反復(fù)幾次，每次將平板旋轉(zhuǎn)60度，最后沿周邊繞兩圈，保證 涂均勻。然后用無(wú)菌鑷子將紙片放于固體培養(yǎng)基表面并輕壓，使紙片與培養(yǎng)基表面完全接 觸。一般各紙片中心相距應(yīng)大于24mm，可在平皿中央貼一片，外周等距離貼5-6片。貼完紙 片的平皿15分鐘后再置于37°C溫箱中培養(yǎng)16-24小時(shí)，觀察記錄結(jié)果。藥敏試驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)抑菌圈直徑(毫米)敏感性> 20極敏感 15-20高敏感 10-14中敏感 < 10低敏感 0不敏感(4)試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表二表二 大腸桿菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種富含溶菌酶的新型生物增效劑，其特征在于以制劑中酶活含量計(jì)，溶菌酶 5000000IU/g、纖維素 CMC 酶 5000IU/g、木聚糖酶 140000IU/g、酸性蛋白酶 5000IU/g、β -葡 聚糖酶20000IU/g、果膠酶5000IU/g配比為飼料添加劑。
2.—種權(quán)利要求1所述溶菌酶是利用DNA重組技術(shù)，將健康動(dòng)物體內(nèi)的溶菌酶基因調(diào) 出，進(jìn)行基因修飾后，克隆至工程菌中，通過(guò)發(fā)酵、生物提取而制取的一種天然酶，安全、綠 色、無(wú)抗藥性。
3.權(quán)利要求1的富含溶菌酶生物增效劑的應(yīng)用，其特征是應(yīng)用于獸藥中；以粉末形式 直接添加，添加量獸藥粉劑散劑粉針劑口服液添加量1-1. 5%0. 3-0. 5%lg/100L (深部肌肉注射)3g/1000 羽 (主要用于家禽)
全文摘要
本發(fā)明旨在提供一種富含溶菌酶的新型生物增效劑，包含物質(zhì)如下溶菌酶5000000IU/g、纖維素CMC酶5000IU/g、木聚糖酶140000IU/g、酸性蛋白酶5000IU/g、β-葡聚糖酶20000IU/g、果膠酶5000IU/g。該種增效劑具有殺菌、綠色環(huán)保，增強(qiáng)畜禽免疫力，降低藥物殘留，提高生產(chǎn)性能等功效。
文檔編號(hào)A61P31/12GK102139098SQ20101010406
公開(kāi)日2011年8月3日 申請(qǐng)日期2010年2月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月2日
發(fā)明者李龍 申請(qǐng)人:李龍, 杭州易泰生物工程有限公司, 田相迪