專利名稱：一種具有增強(qiáng)免疫力和抗輻射作用的靈芝組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及保健品領(lǐng)域，涉及保健品組合物，具體來(lái)說(shuō)是一種具有增強(qiáng)免疫力和 抗輻射作用的靈芝活性成分組合物及其提取制作工藝。
背景技術(shù)：
靈芝(Ganoderma lucidum)又稱為瑞草、靈芝草，其英文名稱為Reishimushroom， 是我國(guó)傳統(tǒng)的扶正固本、滋補(bǔ)強(qiáng)壯的中藥，歷代醫(yī)書中將之列為中藥中的上品。我國(guó)傳統(tǒng)的 中醫(yī)藥學(xué)稱靈芝為“性溫、味甘、能益精氣、強(qiáng)筋骨，主治心悸、失眠、健忘、神疲乏力等癥?！?現(xiàn)代研究表明靈芝具有抗腫瘤作用、降血糖作用、調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)和免疫調(diào)節(jié)、抗病毒等作 用；還有在臨床方面的應(yīng)用，主要用于治療慢性支氣管炎、哮喘、消化不良、神經(jīng)衰弱、冠心 病、肝炎、高血脂、高血壓、白細(xì)胞減少癥、糖尿病、癌癥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、過(guò)敏癥、腎病等疾 ?。辉诒＝∈称贩矫嬷饕糜诿庖哒{(diào)節(jié)、護(hù)肝、改善睡眠、抗輻射和增強(qiáng)抵抗力等方面，靈芝 具有上述功效的有效成分主要是靈芝多糖和三萜類物質(zhì)(孢子油)。免疫，即是人體對(duì)疾病的抵抗力，亦是機(jī)體的一種保護(hù)性功能。眾所周知，人體的 主要防線，是由數(shù)以百億計(jì)的免疫細(xì)胞所組成，擔(dān)負(fù)著防止病原微生物(指細(xì)菌、病毒等) 侵入，識(shí)別和清除衰老及死亡的細(xì)胞、監(jiān)視可能發(fā)生染色體畸變或基因突變細(xì)胞的任務(wù)，一 旦發(fā)現(xiàn)這些異?，F(xiàn)象，就能及時(shí)清除以防病變。人體免疫系統(tǒng)是抵御疾病侵襲的免疫屏障， 由骨髓、淋巴結(jié)、扁桃體、淋巴組織等免疫器官及其產(chǎn)生的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞 組成。醫(yī)學(xué)研究證明，靈芝提取物、靈芝孢子油可有效提高免疫細(xì)胞的抗病能力；能消除免 疫抑制劑對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的抑制；提高淋巴細(xì)胞活性，保護(hù)機(jī)體組織免受癌癥等疾病侵襲， 全面增強(qiáng)機(jī)體抵抗力。核能的廣泛使用使從事放射性工作的軍事、醫(yī)務(wù)、研究等人員，經(jīng)常面臨受輻射危 害的可能。同時(shí)，日常生活中廣泛存在的輻射源，對(duì)人們的健康也存在一定程度的影響。因 此，能夠生產(chǎn)出一種具有增強(qiáng)免疫力和抗輻射功能的天然中藥制劑日益受到消費(fèi)者的關(guān)注。目前市場(chǎng)上銷售的以靈芝/靈芝孢子粉為主要原料制成的保健食品不少，這類保 健食品主要以單一靈芝或靈芝孢子粉為原料制成，產(chǎn)品成分標(biāo)示物僅為單一成分靈芝多糖 或靈芝三萜類物質(zhì)(孢子油)，缺乏將靈芝提取物和靈芝孢子油共同作為活性成分提取而 得到的產(chǎn)品。而且現(xiàn)有的制備工藝均為通用的多功能提取、烘箱干燥法工藝，由于多功能提 取設(shè)備對(duì)活性成分選擇性提取效率低、提取所得浸膏長(zhǎng)期處于高溫烘箱內(nèi)干燥，故活性成 分易受分解，導(dǎo)致藥效有所降低。下面對(duì)在中藥有效成分的提取中常用的技術(shù)做一些介紹A.超聲波萃取超聲波是頻率高于2萬(wàn)赫茲的聲波，它具有頻率高、波長(zhǎng)短，傳播方向性好、穿透 力強(qiáng)等特點(diǎn)。超聲波萃取設(shè)備通過(guò)配備的超聲裝置，在常、低溫條件下，使用各種揮發(fā)性有機(jī)溶劑，可以從植物藥材和藥用真菌中提取各種有效成分。提取時(shí)間縮短，確保了連續(xù)化作 業(yè)及動(dòng)態(tài)逆流提取，提高生產(chǎn)效率，減少溶劑用量，降低提取溫度，保證產(chǎn)品質(zhì)量，增強(qiáng)產(chǎn)品 功效。實(shí)現(xiàn)了連續(xù)化全封閉管道內(nèi)作業(yè)，是一套高效、安全、環(huán)保的中藥和藥用真菌高精度 萃取設(shè)備，廣泛應(yīng)用于使用各種溶劑從單味中藥中提取各種天然有效成分，超聲波連續(xù)逆 流萃取生產(chǎn)線，實(shí)現(xiàn)了全程低溫萃取，最大限度的保持中藥和真菌多糖有效成分的活性，增 強(qiáng)產(chǎn)品的功效，實(shí)現(xiàn)了中藥西制，結(jié)束了高溫萃取有效成分的活性被破壞，傳統(tǒng)中藥顯效慢 的歷史。B.超臨界C02萃取超臨界C02流體萃取分離過(guò)程的原理，是利用超臨界流體的溶解能力與其密度的 關(guān)系，即利用壓力和溫度對(duì)超臨界流體溶解能力的影響而進(jìn)行的。在超臨界狀態(tài)下，將超臨 界流體與待分離的物質(zhì)接觸，使其有選擇性地把極性大小、沸點(diǎn)高低和分子量大小的成分 依次萃取出來(lái)。對(duì)各壓力范圍所得到的萃取物不可能是單一的，但可控制條件得到最佳比 例的混合成分，然后借助減壓、升溫的方法使超臨界流體變成普通氣體，被萃取物質(zhì)則完全 或基本析出，達(dá)到分離提純的目的，所以超臨界C02流體萃取過(guò)程是由萃取和分離過(guò)程組 合而成。C.超微納米破壁20世紀(jì)90年代，人們才開始真正有效地對(duì)分離的納米粒子進(jìn)行研究，納米是十 億分之一米，又稱為超微粉或超細(xì)粉，一般指粒度在100納米以下的粉末或顆粒，是介于原 子、分子與宏觀物體之間處于中間物態(tài)的固體顆粒材料，根據(jù)粉碎技術(shù)的深度和粉體物料 物理化學(xué)性質(zhì)及應(yīng)用性能的變化，一般將細(xì)粉體和微細(xì)粉體分為10-1000 μ m (細(xì)粉)，加工 0. 1-10 μ的超細(xì)粉體和相應(yīng)的分級(jí)技術(shù)稱為超微納米破壁或超微納米粉碎。超微納米破壁，是指利用機(jī)械超音速和流體動(dòng)力的方法克服固體物料內(nèi)部凝聚力 使之破碎，外界激振力的作用，筒內(nèi)介質(zhì)進(jìn)行自轉(zhuǎn)和公轉(zhuǎn)，對(duì)物料進(jìn)行敲擊、剪切、研磨等混 合作用力，使物料粉碎到一定細(xì)度。從而將3毫米以上的物料顆粒粉碎至10微米以下，與 以往的純機(jī)械粉碎方法完全不同。在粉碎過(guò)程中不會(huì)產(chǎn)生局部過(guò)熱現(xiàn)象，在低溫狀態(tài)下進(jìn) 行快速粉碎，也稱為物理破壁，解決了目前粉碎領(lǐng)域無(wú)法解決的難題。最大限度地保留粉體 的生物活性成分，以利于制成所需的高質(zhì)量產(chǎn)品。超微細(xì)粉末是超微納米破壁的最終產(chǎn)品， 具有一般顆粒所沒有的特殊理化性質(zhì)，如良好的溶解性、分散性、吸附性、化學(xué)反應(yīng)活性等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的為提供一種以靈芝提取物和靈芝孢子油為主要原料制成的中藥組合 物，提高靈芝組合物中活性成分的含量，并且采用超聲波萃取技術(shù)、超臨界C02萃取技術(shù)和 超微納米破壁技術(shù)，使得原料損耗率小，活性成分不易分解，藥效高。本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容如下一、產(chǎn)品配方本發(fā)明活性成分中，靈芝提取物占15-35%，而靈芝孢子油占65-85%。二、工藝路線本品將原料經(jīng)調(diào)配、壓丸、洗丸、干燥、裝瓶、外包裝、檢驗(yàn)、入庫(kù)等為主要工藝制 成，工藝科學(xué)合理。
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三、靈芝提取物及靈芝孢子油生產(chǎn)工藝(一)靈芝提取物生產(chǎn)過(guò)程(全程低溫提取干燥)原料粉碎一投料一超聲波水提一膜過(guò)濾一醇沉一微波干燥一包裝一檢驗(yàn)1、粉碎將靈芝用粉碎機(jī)粉碎至10-30目備用；2、投料將粗粉粒投入提取管料桶內(nèi)；3、超聲波水提原料加8-10倍純化水進(jìn)行超聲波連續(xù)逆流提取，超聲波頻率為 2-3萬(wàn)赫茲，提取溫度為50-60°C，200目過(guò)濾獲取含水量85-90%的提取液；4.膜過(guò)濾經(jīng)超濾膜(截留分子量為IOkDa)過(guò)濾，去掉小分子物質(zhì)和水，獲取含 水量30-60%的濃縮物；5.醇沉濃縮物邊攪拌邊加入4倍量95度食用酒精，靜置Mh，去上清液，離心甩 干獲取含酒精量5-15%的浸膏；6.微波干燥浸膏裝入微波料盤，抽真空干燥，溫度40°C --50°C，時(shí)間60_80分 鐘，干燥物含水率< 6% ；7、包裝干燥物80目粉碎過(guò)篩，包裝；8、檢驗(yàn)檢驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)，全部合格進(jìn)庫(kù)；9.本工藝為1 20提取比例。( 二)靈芝孢子油生產(chǎn)工藝原料(破壁靈芝孢子粉)一制粒一干燥一超臨界(X)2萃取一再度提純一獲得金黃 色靈芝孢子油一包裝、檢驗(yàn)(1)原料采用破壁率為95-98%的破壁靈芝孢子粉；(2)制粒為了保證提取的出油率和產(chǎn)品的質(zhì)量，制粒時(shí)料液比為1 1，粘合液為純化水和酒精混合液，若直接采用破壁的靈芝孢子粉進(jìn)行超臨界(X)2萃 取，由于少量孢子微粉進(jìn)入(X)2管道，造成堵塞；(3)干燥制粒后在50 60°C溫度下，進(jìn)行熱風(fēng)循環(huán)干燥8 9小時(shí)，使顆粒的含 水量小于5 %，如果顆粒的含水量大于5 %，不但孢子油的得率低，而且容易造成循環(huán)系統(tǒng) 結(jié)冰而導(dǎo)致(X)2氣路堵塞；(4)超臨界CO2萃取壓力25_35MPa，溫度40_50°C，提取時(shí)間3_4h，CO2流量為 30-40kg/h ；(5)再度提純用超濾膜在25-30°C進(jìn)行過(guò)濾，獲得金黃色靈芝孢子油；(6)包裝，成品檢驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)，全部合格方能出廠。(三)將靈芝提取物與靈芝孢子油進(jìn)行混合得到組合物包括以下步驟(1)將經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)的靈芝提取物和靈芝孢子油經(jīng)混合攪拌30分鐘后，再經(jīng)研磨三次 和在-0. 06MPa條件下脫氣后待用；(2)明膠、水和甘油經(jīng)70-80°C的化膠后，減壓濃縮后至水分小于40%，然后在 50-60°C的條件下保存?zhèn)溆茫?3)將上述得到的靈芝提取物和靈芝孢子油以及明膠、水和甘油經(jīng)化膠和減壓濃 縮后的物質(zhì)混合在一起進(jìn)行壓丸處理，然后在18-28°C下定形4-6小時(shí)，醇洗3次，冷風(fēng)干燥 24小時(shí)，然后再進(jìn)行燈檢和裝瓶，上述過(guò)程都是在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行的；(4)將產(chǎn)品進(jìn)行貼標(biāo)和檢驗(yàn)，最后裝箱到成品。
四、本發(fā)明的工藝特點(diǎn)1、本發(fā)明所用超聲波萃取的特點(diǎn)超聲波連續(xù)逆流萃取生產(chǎn)線，實(shí)現(xiàn)了全程低溫萃取，最大限度的保持中藥和真菌 多糖有效成分的活性，增強(qiáng)產(chǎn)品的功效，實(shí)現(xiàn)了中藥西制，結(jié)束了高溫萃取有效成分的活性 被破壞，傳統(tǒng)中藥顯效慢的歷史。極大地促進(jìn)了中藥天然產(chǎn)物和藥用真菌多糖產(chǎn)業(yè)化和現(xiàn) 代化建設(shè)。2、本發(fā)明所用超臨界C02萃取的特點(diǎn)a.超臨界萃取可以在接近室溫(35 40°C )及C02氣體籠罩下進(jìn)行提取，有效地 防止了熱敏性物質(zhì)的氧化和逸散，因此，在萃取物中保持著藥用植物的有效成分，而且能把 高沸點(diǎn)、低揮發(fā)性、易熱解的物質(zhì)在遠(yuǎn)低于其沸點(diǎn)溫度下萃取出來(lái)。b.由于全過(guò)程不用有機(jī)溶劑，因此萃取物絕無(wú)殘留的溶劑物質(zhì)，從而防止了提取 過(guò)程中對(duì)人體有害物的存在和對(duì)環(huán)境的污染，保證了 100%的純天然性。c.萃取和分離合二為一，當(dāng)飽和溶解物的C02流體進(jìn)入分離器時(shí)，由于壓力的下 降或溫度的變化，使得C02與萃取物迅速成為兩相(氣液分離)而立即分開，不僅萃取的效 率高而且提高了生產(chǎn)效率。d.食用級(jí)的C02是一種不活潑氣體，萃取過(guò)程中不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，且屬于不燃性 氣體，無(wú)味、無(wú)臭、無(wú)毒、安全性非常好。3、超臨界C02萃取+再度提純(用超濾膜在25_30°C進(jìn)行過(guò)濾)本發(fā)明使用的超臨界C02萃取靈芝孢子油技術(shù)，是以破壁靈芝孢子粉為原料，通 過(guò)控制雜質(zhì)，經(jīng)破壁、造粒、低溫干燥等多道工序，經(jīng)最佳溫控、壓力下分離萃取出高三萜的 脂溶性物質(zhì)，創(chuàng)新對(duì)最新分離萃取技術(shù)的更新、改良和優(yōu)化的結(jié)果，它根據(jù)分子運(yùn)動(dòng)理論， 使萃取物在一定條件下，其中一部分成分成為揮發(fā)性氣相分子，從而達(dá)到分離有效成分的 目的。本發(fā)明申請(qǐng)的靈芝孢子油獨(dú)有的萃取提純工藝，其有效成分的最大優(yōu)化提純使靈芝 三萜大于20%和靈芝總?cè)拼笥?0%。4、本發(fā)明超微納米粉碎的特點(diǎn)(1)全封閉作業(yè)，無(wú)粉塵污染及氣味泄漏，很好保證物料的潔凈度；(2)設(shè)計(jì)合理，數(shù)字控制，計(jì)時(shí)操作，24小時(shí)連續(xù)工作；(3)隨時(shí)調(diào)整出物料細(xì)度，大多數(shù)物料可以粉碎達(dá)到10000目；(4)超微品種多，適用面廣，適用于植物、動(dòng)物、礦物等；(5)加冷卻系統(tǒng)、在連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)情況下，生產(chǎn)溫度不超過(guò)45度；(6)控溫粉碎，避免高溫影響藥物的藥性和活性。本品是以靈芝提取物、靈芝孢子油為主要原料制成的保健食品，二者復(fù)合應(yīng)用為 本產(chǎn)品具有的特點(diǎn)，其優(yōu)點(diǎn)主要有以下兩方面1、其標(biāo)志性成分含量高于現(xiàn)有產(chǎn)品，穩(wěn)定性試驗(yàn)最低值，每100克中含靈芝多糖 5. 3克、靈芝三萜15. 8克，與以單一靈芝或靈芝孢子粉為原料制成的保健品相比，功能更為 強(qiáng)大，具有增強(qiáng)免疫力、對(duì)輻射危害有輔助保護(hù)的顯著功能，尤其適宜于免疫力低下者、接 觸輻射者。2、而且本品在加工過(guò)程中采取了超臨界(X)2萃取、超微納米破壁和超聲波萃取技 術(shù)，對(duì)原材料的損耗小，防止了對(duì)人和環(huán)境的污染，工藝穩(wěn)定，可以工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的特點(diǎn)。


附圖為本發(fā)明的工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式下面以含有本發(fā)明所述的中藥組合物的膠囊劑為例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施過(guò)程，應(yīng) 該明確的是實(shí)施例只是為了更好的說(shuō)明本發(fā)明，不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制，事實(shí)上，任何 在藥學(xué)上可以接受的輔劑都可以用于該組合物中以得到不同的劑型，包括膠囊劑、片劑、 顆粒劑和粉針劑等。一、靈芝提取物生產(chǎn)過(guò)程(全程低溫提取干燥)原料粉碎一投料一超聲波水提一膜過(guò)濾一醇沉一微波干燥一包裝一檢驗(yàn)1、粉碎將靈芝用粉碎機(jī)粉碎至10-30目備用；2、投料將粗粉粒投入提取管料桶內(nèi)；3、超聲波水提原料加8-10倍純化水進(jìn)行超聲波連續(xù)逆流提取，超聲波頻率為 2-3萬(wàn)赫茲，提取溫度為50-60°C，200目獲取含水量85-90%的提取液；4.膜過(guò)濾經(jīng)超濾膜(截留分子量為IOkDa)過(guò)濾，去掉小分子物質(zhì)和水，獲取含 水量30-60%的濃縮物；5.醇沉濃縮物邊攪拌邊加入4倍量95度食用酒精，靜置Mh，去上清液，離心甩 干獲取含酒精量5-15%的浸膏；6.微波干燥浸膏裝入微波料盤，抽真空干燥，溫度40°C --50°C，時(shí)間60_80分 鐘，干燥物含水率< 6% ；7、包裝干燥物80目粉碎過(guò)篩，包裝；8、檢驗(yàn)檢驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)，全部合格進(jìn)庫(kù)；9.本工藝為1 20提取比例。二、靈芝孢子油生產(chǎn)工藝原料(破壁靈芝孢子粉)—制粒一干燥一超臨界(X)2萃取一再度提純一獲得金黃 色靈芝孢子油一包裝、檢驗(yàn)(1)原料采用破壁率為95-98%的破壁靈芝孢子粉；(2)制粒為了保證提取的出油率和產(chǎn)品的質(zhì)量，制粒時(shí)料液比為1 1，粘合液為 純化水和酒精混合液，若直接采用破壁的靈芝孢子粉進(jìn)行超臨界(X)2萃取，由于少量孢子微 粉進(jìn)入(X)2管道，造成堵塞；(3)干燥制粒后在50 60°C溫度下，進(jìn)行熱風(fēng)循環(huán)干燥8 9小時(shí)，使顆粒的含 水量小于5 %，如果顆粒的含水量大于5 %，不但孢子油的得率低，而且容易造成循環(huán)系統(tǒng) 結(jié)冰而導(dǎo)致(X)2氣路堵塞；(4)超臨界CO2萃取壓力25_35MPa，溫度40_50°C，提取時(shí)間3_4h，CO2流量為 30-40kg/h ；(5)再度提純用超濾膜在25_30°C進(jìn)行過(guò)濾，獲得金黃色靈芝孢子油；(6)包裝，成品檢驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)，全部合格方能出廠。三、結(jié)合附圖來(lái)說(shuō)明本發(fā)明組合物的制備過(guò)程(見附圖)
(1)將經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)的靈芝提取物和靈芝孢子油經(jīng)攪拌30分鐘后，再經(jīng)研磨(三次) 和脫氣(-0. 06MPa條件下)后待用；(2)明膠、水和甘油經(jīng)70-80°C的化膠后，減壓濃縮后至水分小于40%，然后在 50-60°C的條件下保存?zhèn)溆茫?3)將上述得到的靈芝提取物和靈芝孢子油以及明膠、水和甘油經(jīng)化膠和減壓濃 縮后的物質(zhì)混合在一起進(jìn)行壓丸處理，然后在18-28°C下定形4-6小時(shí)，醇洗3次，冷風(fēng)干燥 24小時(shí)，然后再進(jìn)行燈檢和裝瓶，上述過(guò)程都是在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行的；(4)將產(chǎn)品進(jìn)行貼標(biāo)和檢驗(yàn)，最后裝箱到成品。四、下面以動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證本發(fā)明所述的組合物的效果目的探討靈芝提取混合物(含有按本發(fā)明配方的活性成分靈芝提取物和靈芝孢 子油)的抗輻射和增強(qiáng)免疫功能的雙重作用。方法選用小鼠進(jìn)行抗輻射和增強(qiáng)免疫功能 試驗(yàn)。結(jié)果1、靈芝提取混合物可恢復(fù)輻照后小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)量，明顯增加輻射后骨髓 有核細(xì)胞數(shù)和血清SOD (超氧化物歧化酶)活性及顯著提高半數(shù)溶血值，骨髓細(xì)胞微核率明 顯降低。2、靈芝提取混合物中、高劑量組能增強(qiáng)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)和抗體生成細(xì)胞數(shù)，高 劑量組可增強(qiáng)小鼠單核-巨噬細(xì)胞碳廓清能力，血清半數(shù)溶血值和NK細(xì)胞活性，各劑量組 對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)，脾臟/體重比值，胸腺/體重比值，ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力和 小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞無(wú)明顯影響。結(jié)論靈芝提取混合物(含有按本發(fā)明配方的活 性成分靈芝提取物和靈芝孢子油)具有抗輻射和增強(qiáng)免疫功能的雙重作用。1.材料和方法1. 1樣品由深圳市匯康生物科技有限公司提供，軟膠囊，內(nèi)容物為棕色油性膏狀 物，含有按本發(fā)明配方的活性成分靈芝提取物和靈芝孢子油。300mg/粒，置陰涼干燥處保 存，取內(nèi)容物進(jìn)行試驗(yàn)。1. 2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物18_22g健康雄性清潔級(jí)昆明種小鼠，由長(zhǎng)沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物科技服務(wù)部提供，生產(chǎn)許可證SCXK (湘)2006-001。1. 3實(shí)驗(yàn)環(huán)境屏障系統(tǒng)，溫度22_24°C，濕度52-58%。1.4劑量分低、中、高三個(gè)試驗(yàn)組，按人體推薦量的5、10、30倍，分為0. lg/kg. bw, 0. 2g/kg. bw,0. 6g/kg. bw劑量，分別稱1. Og, 2. Og, 6. Og樣品內(nèi)容物，加植物油至100ml，對(duì)
照組予以等體積食用植物油。分別給予受試動(dòng)物每天灌胃一次，灌胃體積為0. lml/10g. bw。 抗輻射試驗(yàn)連續(xù)灌胃21天后，劑量組與輻射模型對(duì)照組均以同一劑量γ射線全身照射一 次，據(jù)不同指標(biāo)選擇不同照射劑量，照射后繼續(xù)灌胃至每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束，而提高免疫試驗(yàn)需連 續(xù)灌胃30天。1. 5主要儀器試劑血球計(jì)數(shù)板，顯微鏡，722分光光度計(jì)，綿羊紅細(xì)胞等。1.6實(shí)驗(yàn)方法1.6. 1外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)各組均以3Gy γ射線全身照射一次，于照射前，照射后 第3天，照射后第14天三次采尾尖血20 μ 1，加入0.38ml 鹽酸中，混勻后加入血球計(jì)數(shù)板中，計(jì)算外周血白細(xì)胞數(shù)目。白細(xì)胞數(shù)(109/L)=四個(gè)大方格白細(xì)胞總數(shù)/4X稀釋倍數(shù)XlO71. 6. 2骨髓有核細(xì)胞數(shù)實(shí)驗(yàn)各組均以3Gy γ射線全身照射一次，于照射后第3 天，頸椎脫臼處死小鼠，剝離出股骨，用Iml注射器共吸取5ml Hank’ s液，沖出股骨中的全部骨髓細(xì)胞，細(xì)胞懸液通過(guò)4號(hào)針頭注射器使細(xì)胞在懸液中分散，鏡下計(jì)數(shù)，計(jì)算每毫升骨 髓細(xì)胞中的有核細(xì)胞數(shù)。1. 6. 3小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)各組均以3Gy γ射線全身照射一次，照射后第3 天，頸椎脫臼處死小白鼠，取出胸骨，用止血鉗擠出骨髓液與玻片一端的小牛血清混勻，常 規(guī)涂片自然干燥后甲醇固定lOmin，Giemsa染色蒸餾水沖洗晾干，光學(xué)顯微鏡下，每只動(dòng)物 計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞中微核細(xì)胞數(shù)，微核率以千分率表示。1. 6. 4血清超氧化物歧化酶(SOD)活性實(shí)驗(yàn)各組均以6Gy γ射線全身照射一 次，照射后第7天，摘眼球采血，離心取血清，按試劑盒說(shuō)明書測(cè)定SOD活力。1. 6. 5血清溶 血素實(shí)驗(yàn)各組均以2GyY射線全身照射一次，照射后20天內(nèi)，每鼠腹腔注射2% (ν/ν)壓 積SRBC，0. 2ml致敏，免疫5天后，摘小鼠眼球采血，取血清測(cè)溶血反應(yīng)，另設(shè)不加血清(以 SA緩沖液代替)的對(duì)照管為比色空白，于MOnm分別測(cè)定各管光離度值，計(jì)算各鼠的HC5(1。 (HC50 =樣品光離度值/SRBC半數(shù)溶血時(shí)的光度值X稀釋倍數(shù))。1. 6. 6免疫功能試驗(yàn)按衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003版)，進(jìn) 行ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(MTT法)，小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)(DTH)(足跖增原 法)，抗體生成細(xì)胞檢測(cè)(Jerne改良玻片法)和半數(shù)溶血值(HC5tl)的測(cè)定，小鼠碳廓清試 驗(yàn)和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(半體內(nèi)法)NK細(xì)胞活性測(cè)定(乳酸脫氫酶測(cè)定 法)臟器/體重比值測(cè)定。1. 7實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)用SPSS(11. 0)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2.結(jié)果2. 1靈芝提取混合物對(duì)小鼠外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響表1靈芝提取混合物對(duì)小鼠照射前后外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響
權(quán)利要求
1.一種具有增強(qiáng)免疫力和抗輻射功能的組合物，特征在于其活性成分以靈芝提取 物、靈芝孢子油為原料制成，其中靈芝孢子油占65-85%，靈芝提取物占15-35%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物的制作工藝，其特征在于靈芝提取物提取包括以下 步驟a)粉碎將靈芝用粉碎機(jī)粉碎至10-30目備用；b)投料將粗粉粒投入提取管料桶內(nèi)；c)超聲波水提原料加8-10倍純化水進(jìn)行超聲波連續(xù)逆流提取，超聲波頻率為2-3萬(wàn) 赫茲，提取溫度為50-60°C，200目過(guò)濾獲取含水量85-90%的提取液；d)膜過(guò)濾經(jīng)超濾膜過(guò)濾，去掉小分子物質(zhì)和水，獲取含水量30-60%的濃縮物；e)醇沉濃縮物邊攪拌邊加入4倍量95度酒精，靜置24h，去上清液，離心甩干獲取含 酒精量5-15%的浸膏；f)微波干燥浸膏裝入微波料盤，抽真空干燥，溫度40°C-50°C，時(shí)間60-80分鐘，干 燥物含水率< 6% ；g)包裝干燥物80目粉碎過(guò)篩，包裝； i)檢驗(yàn)檢驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)，全部合格進(jìn)庫(kù)； j)本工藝為1 20提取比例。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物的制作工藝，其特征在于靈芝孢子油提取包括以下 步驟a)原料采用破壁率為95-98%的破壁靈芝孢子粉；b)制粒為了保證提取的出油率和產(chǎn)品的質(zhì)量，制粒時(shí)料液比為1 1，粘合液為純化 水和酒精混合液；c)干燥制粒后在50-60°C溫度下，進(jìn)行熱風(fēng)循環(huán)干燥8-9小時(shí)，使顆粒的含水量小于5% ；d)超臨界C02萃取壓力25-35MPa，溫度40-50°C，提取時(shí)間3-4h，C02流量為30-40kg/h；e)再度提純用超濾膜在25-30°C進(jìn)行過(guò)濾，獲得金黃色靈芝孢子油。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物的制作工藝，其特征在于將靈芝提取物與靈芝孢子 油進(jìn)行混合得到組合物包括以下步驟(1)將經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)的靈芝提取物和靈芝孢子油經(jīng)混合攪拌30分鐘后，再經(jīng)研磨三次和 在-0. 06MPa條件下脫氣后待用；(2)明膠、水和甘油經(jīng)70-80°C的化膠后，減壓濃縮后至水分小于40%，然后在50-60°C 的條件下保存?zhèn)溆茫?3)將上述得到的靈芝提取物和靈芝孢子油以及明膠、水和甘油經(jīng)化膠和減壓濃縮后 的物質(zhì)混合在一起進(jìn)行壓丸處理，然后在18-28°C下定形4-6小時(shí)，醇洗3次，冷風(fēng)干燥24 小時(shí)，然后再進(jìn)行燈檢和裝瓶，上述過(guò)程都是在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行的；(4)將產(chǎn)品進(jìn)行貼標(biāo)和檢驗(yàn)，最后裝箱到成品。
5.含有權(quán)利要求1所述的組合物與藥學(xué)上可以接受的載體組合而成的各種劑 型，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑和粉針劑。
6.權(quán)利要求1所述的組合物在制備增強(qiáng)免疫力和抗輻射功能的保健藥品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種以靈芝提取物和靈芝孢子油為主要原料制成的真菌組合物，以及所述的組合物在制備增強(qiáng)免疫力和抗輻射功能的保健藥品中的應(yīng)用。本發(fā)明活性成分中，靈芝提取物占15-35％，而靈芝孢子油占65-85％。與以單一靈芝或靈芝孢子粉為原料制成的保健品相比，功能更為強(qiáng)大，具有增強(qiáng)免疫力、對(duì)輻射危害有輔助保護(hù)的顯著功能，尤其適宜于免疫力低下者、接觸輻射者，而且本品在加工過(guò)程中采取了超臨界CO2萃取、超微納米破壁和超聲波萃取技術(shù)，提高靈芝組合物中活性成分的含量，使得原料損耗率小，活性成分不易分解，藥效高，防止了對(duì)人和環(huán)境的污染，工藝穩(wěn)定，具有可以工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K36/074GK102145022SQ20101010739
公開日2011年8月10日 申請(qǐng)日期2010年2月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月4日
發(fā)明者張繼文 申請(qǐng)人:深圳市匯康生物科技有限公司