專利名稱：含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由多種植物提取物相混合而成的組合物，尤其涉及一種含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，用于糖尿病的預(yù)防和治療。

背景技術(shù)：
糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一種因體內(nèi)胰島素絕對或者相對不足所導(dǎo)致的一系列臨床綜合癥。糖尿病患者中，II型糖尿病(Diabetes type II，non-Insulin DependentDiabetes Mellitus，NIDDM)患者占絕大多數(shù)。由于糖代謝的紊亂，在該病的發(fā)展進(jìn)程中還會引起一些并發(fā)癥，如低血糖癥(Hypoglycemia)、酮癥酸中毒(Ketoacidosis)、非酮高滲性昏迷(Nonketotic Hyperosmolar Coma)、心血管疾病、慢性腎衰竭、視網(wǎng)膜病變、神經(jīng)病變及微血管病變等。II型糖尿病治療常用的藥物主要有三大類生物藥類，如胰島素(Insulin)；化學(xué)藥，如磺酰脲類(Sulfonylurea)、雙胍類(Biguanide)、格列酮類(Glitazone)和中成藥類。限于目前尚沒有較為成熟的胰島素非注射給藥技術(shù)，其使用仍以注射為主，且注射過程也存在安全性風(fēng)險?；瘜W(xué)類藥物雖具有較強(qiáng)的降血糖作用，但對肝、腎等毒副作用大，還容易導(dǎo)致心血管并發(fā)癥加重。此外，還有一些藥物，如胰高血糖素類多肽(Glucagon-like peptide 1，GLP-1)、脂?；雀哐撬仡惗嚯?NN2211，Novo Nordisk)、Exendin-4(

Amylin)和聚乙二醇修飾的Exendin-4(中國發(fā)明專利申請00809516.7)等，長期給藥后雖能有效控制血糖、降低糖化血紅蛋白(HbAlc)數(shù)值和改善β胰島細(xì)胞功能，但由于這些分子還同樣作用于中樞神經(jīng)受體，所以給藥后嘔吐和眩暈的癥狀較難避免，且給藥方式仍以注射為主。另一類DPPIV酶抑制劑，雖能口服，但其將對生物體內(nèi)的一大類酶均產(chǎn)生抑制作用，從而會使體內(nèi)脂肪分布發(fā)生變化，且給藥的實際效果也相對較差。
知母為百合科(Liliaceae)植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bunge)的根莖，具有滋陰降火、潤燥滑腸的功效，中醫(yī)臨床多用于消渴癥。知母藥用以單位知母飲片或與其它中藥配伍后煎煮或熬煮為主。中藥材知母中含知母皂甙(苷)(timosaponin)A-I、A-II、A-III、A-IV、B-I、B-II和B-III等成分，其中，知母皂甙A-II、A-IV結(jié)構(gòu)尚不明。還包括知母皂甙(amemarsaponin)A2，即馬爾考皂甙元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖甙B(marlogenin-3-O-β-D-glucopyranosy(1→2)-β-D-galactopyranosideB)、去半乳糖替告皂甙(desgalactotigonin)、F-芰脫皂甙(F-gitonin)和異菝葜皂甙(smilageninoside)等。此外，還含有知母多糖(anemaran)A/B/C/D、順-扁柏樹脂酚(cis-hinokiresinol)、單甲基-順-扁柏樹脂酚(monomethyl-cis-hinokiresinol)、氧化-順-扁柏樹脂酚(oxy-cis-himokiresinol)、2，6，4′-三羥基-4-甲氧基二苯甲酮(2，6，4′-trihydroxy-4-methoxy benzophenone)、對-羥苯基巴豆油酸(p-hydroxyphenyl crotonic acid)、二十五烷酸乙烯脂(pentacosyl vinyl ester)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、芒果甙(mangiferin)、煙酸(nicotinic acid)、煙酰胺(nicotinamide)及泛酸(pantothenic acid)等。
黃柏來源于蕓香科(Rutaceae)植物黃皮樹(Phellodendron chinense Schneid.)或黃檗(Phellodendronamurense Rupr.)的干燥樹皮，前者習(xí)稱“川黃柏”，后者習(xí)稱“關(guān)黃柏”。黃柏始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，原名“檗術(shù)”，列上品。為清熱燥濕、瀉火解毒、退虛熱的常用中藥材，化學(xué)成分以生物堿——小檗堿為主。小檗堿對溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、淋球菌，以及弗氏、志賀氏痢疾桿菌均有抗菌作用，并有增強(qiáng)白血球吞噬作用。小檗堿的鹽酸鹽(俗稱鹽酸黃連素)已廣泛用于治療胃腸炎、細(xì)菌性痢疾等，對肺結(jié)核、猩紅熱、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定療效。
關(guān)黃柏為黃檗樹(Phyllodendron amurense Rupr.)的樹皮，黃檗樹皮含小檗堿(berberine)約1.6％，并含少量黃柏堿(phellodendrine)、木蘭堿(magnoflorine)、藥根堿(jatrorrhizine)、掌葉防己堿(palmatine)和白栝樓堿(candicine)等，其根皮可分離出的小檗堿約9％，尚有藥根堿、黃柏堿和白栝樓堿等。川黃柏為黃皮樹(Phyllodendron Chinense Schneid)和禿葉黃皮樹(P.ChinenseSchneid.var.Glabriusculum Schneid)的樹皮，其中含小檗堿3-8％，是提取小檗堿的重要來源之一。黃皮樹樹皮含小檗堿達(dá)3％。禿葉黃皮樹樹皮含小檗堿達(dá)6.5％，并含少量掌葉防己堿、藥根堿、黃柏堿和木蘭堿。
蒼術(shù)(Rhizoma Atractylodis)來源于菊科植物茅蒼術(shù)(Atractylodes lancea(Thunb.)DC.)或北蒼術(shù)(Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.)的干燥根莖。此外，還有關(guān)蒼術(shù)(Rhizoma Atractylodis Japonicae)、鄂西蒼術(shù)(Atractylodes carlinoides(Hand.-Mazz.)Kitam.)和朝鮮蒼術(shù)(Atractylodes coreana(Nakai)Kitam.)等。其性溫，味辛、苦，用于燥濕健脾、祛風(fēng)、散寒和明目，主治脘腹脹滿、泄瀉、水腫、腳氣、痿辟、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)寒感冒、雀目夜盲?；瘜W(xué)成分主要為揮發(fā)油、萜醇類化合物、蒼術(shù)苷類化合物、蒼術(shù)多糖等成分。其中蒼術(shù)油中主要含蒼術(shù)素(atractylodin)、β-桉油醇(β-eudesmol)、茅術(shù)醇(hinesol)、羥基蒼術(shù)酮(hydroxy-atractylon)等。蒼術(shù)苷類為倍半萜苷類化合物，如蒼術(shù)苷A。蒼術(shù)提取物有抗菌、保肝、抗氧化、抗病毒和抗癌等多種藥理活性。
近年來，已有一些關(guān)于黃柏、知母、蒼術(shù)單味藥材或其組合用于治療糖尿病的研究。已經(jīng)有研究表明知母黃酮類成分具有防治糖尿病的作用(國外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊，2002，24，353；中國發(fā)明專利ZL03115509.X)?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，知母總皂苷(中藥藥理與臨床，2005，21，22-23)、知母皂苷A-III、B-II、B-III和芒果苷等(Wakan IyakugaknZasshi，1995，5，404-405；中國生化藥物雜志，2005，26，332)具有降低血糖的功效。據(jù)報道，知母醇提物可刺激糖尿病大鼠分泌胰島素而起到降血糖作用(Exp.Clin.Endocrinol.Diabetes，2004，112，520-525)；知母中的多糖類成分可顯著降低四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠血糖及肝糖元(中草藥，1996，17，605-606)。研究表明，黃柏中的主要成分小檗堿具有能促進(jìn)胰島素分泌，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和抗糖尿病的功效(ActaPharmacologica Sinica，2004，25，496-502；中國發(fā)明專利ZL01118320.9)。進(jìn)一步臨床研究證實，黃連素，即小檗堿，對II型糖尿病(Non-Insulin-Dependent Diabetes Mellitus，NIDDM)患者的臨床有效率為63.3％，且不良反應(yīng)小(新中醫(yī)，1997，29，33-34)。
蒼術(shù)苷是蒼術(shù)中一系列倍半萜苷化合物的總稱(Chem.Pharm.Bull.2003，51，152-157)，在“蒼術(shù)的化學(xué)藥理研究進(jìn)展”一文中(中國中醫(yī)藥信息雜志，2002，9，79-82)，提及了蒼術(shù)提取物中的蒼術(shù)苷具有降血糖活性。而事實上，該文章所引用的原文獻(xiàn)記載的是從關(guān)蒼術(shù)中提取的多糖成分Atractans A、B和C，表現(xiàn)出降血糖的活性(Planta.Medica，1985，Apr，(2)102)，并非“蒼術(shù)的化學(xué)藥理研究進(jìn)展”一文中(中國中醫(yī)藥信息雜志，2002，9，79-82)所說的“蒼術(shù)苷”。迄今為止，尚無公開的文獻(xiàn)報道蒼術(shù)苷具有降血糖活性。
中國發(fā)明專利申請93100485.3公開了一種蕎麥保健食品，以苦蕎麥粉為基料，輔以大豆蛋白粉，再添加枸杞、人參、知母和活性鈣等中草藥天然成分，其配方重量百分組成為苦蕎麥面粉60-80％、大豆蛋白粉15-30％、枸杞多糖0.5-2.5％、知母皂甙0.2-0.5％、人參多糖0.5-1.5％、活性鈣1.2-4.3％。所制成的食品對糖尿病具有治療作用。該保健食品以蕎麥為主，能對糖尿病患者的飲食起到一定作用。
中國發(fā)明專利ZL95116521.6公開了一種雙補(bǔ)降糖膠囊及其制作方法，使用熟地、黃芪、枸杞子、丹參、黃柏、知母和肉桂等20味原料藥，經(jīng)特殊炮制和加工而成。該降糖膠囊由中藥材粉碎后制成，由于含有的纖維素含量多，而能減緩糖的吸收，加入附子和肉桂二藥材后使得藥物降糖效果更為顯著，是該發(fā)明的重點(diǎn)所在。
中國發(fā)明專利申請99126988.8公開了一種專治糖尿病降糖膠囊，以生地、天花粉、玄參、知母、黃柏、黃連、鹿茸、邊桂、山藥、石膏和干藕粉等藥材為主要組分，治療由糖尿病引起的上消、中消、下消和多食多尿等病癥。
中國發(fā)明專利申請02107203.5公開了一種治療2型糖尿病的復(fù)方中藥制劑，以葛根、天花粉、蒼術(shù)、玄參、生黃芪、山藥、生石膏、肉桂、熟附片、鬼箭羽、地鱉蟲、桑寄生、蠶繭、炮山甲、水蛭、血竭、菝葜、知母、絞股藍(lán)、生地、麥冬、赤芍、地骨皮和制大黃等天然中藥材為原料，通過粉碎、煎煮、烘干、滅菌等工序制成，用于II型糖尿病及其并發(fā)癥的治療。
中國發(fā)明專利申請200310110332.7公開了一種治療糖尿病的藥物參芪山藥膏及其制備方法，由“君”藥山藥和人參；“臣”藥海龍、海馬、阿魏、乳香、沒藥、紅花、肉桂、珍珠、人工麝香、天花粉、黃柏、黃芪、芒果葉和番石榴葉；以及“使”藥冰片等藥材共同配伍而成。將山藥、人參、天花粉、黃柏、黃芪、芒果葉和番石榴葉等藥材的碎段混勻，浸泡于麻油中，三天后經(jīng)加熱，過濾，在濾油中加入紅丹，再攪勻，收膏；將藥膏加入冷水中，不斷攪拌，擠壓換水；取藥膏用文火熔化，加入珍珠層粉、冰片粉、人工麝香、海龍、海馬、阿魏、乳香、沒藥、紅花和肉桂等藥材的細(xì)粉，攪勻，分?jǐn)傇跓o紡布上制成膏藥。所制得的藥膏益氣養(yǎng)陰、生津止渴，具有治療II型糖尿病的功效。
中國發(fā)明專利申請200510025208.X公開了一種治療非胰島素依賴型糖尿病的中藥組合物，主要由1-5重量份的蒼術(shù)總糖苷和1-10份的玄參總萜苷組成，還含有10-30重量份的生地粉末和10-30重量份的山藥粉末。中藥組合物對四氧嘧啶糖尿病模型動物連續(xù)給藥4周后，使得動物血糖得到改善。
現(xiàn)有技術(shù)中的多種治療糖尿病的藥物組合物，雖然分別出現(xiàn)知母、黃柏和蒼術(shù)三種藥材，但尚無由知母、黃柏和蒼術(shù)三種藥材為主配伍的藥物組合物，更無由這三種藥材提取物和有效成分配伍、藥效顯著的藥物組合物用于預(yù)防和治療糖尿病。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的在于提供一種含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，包括知母皂苷B-II、小檗堿和蒼術(shù)提取物，蒼術(shù)提取物含有蒼術(shù)苷A或蒼術(shù)多糖或其組合。還包括知母皂苷A-III、知母皂苷B-III和/或芒果苷，能有效治療糖尿病，對糖尿病，尤其是II型糖尿病的發(fā)生和發(fā)展也有預(yù)防作用。
本發(fā)明的另一個目的在于提供一種含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，包括知母皂苷B-II提取物、小檗堿提取物和蒼術(shù)提取物，還包括知母皂苷A-III提取物、芒果苷提取物和/或B-III提取物，能有效治療糖尿病，對糖尿病，尤其是II型糖尿病的發(fā)生和發(fā)展也有預(yù)防作用。
本發(fā)明的又一個目的在于提供一種含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，由知母提取物、黃柏提取物和蒼術(shù)提取物組成，能有效治療糖尿病，還對糖尿病，尤其是II型糖尿病的發(fā)生和發(fā)展有預(yù)防作用。
本發(fā)明的再一個目的在于提供一種含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，在蒼術(shù)提取物、知母提取物、黃柏提取物及其藥學(xué)上可接受的鹽或其混合物中加入各種藥物輔料制成的制劑，該制劑可用于預(yù)防和治療糖尿病，尤其是II型糖尿病。
知母皂苷A-III，化學(xué)名稱薩爾薩皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷，是一種甾體皂苷，其結(jié)構(gòu)式如式I所示。


式I 知母皂苷A-III可以通過化學(xué)合成制得，從植物或中藥材中提取是最主要的制取方式。將知母置于索氏提取器中，加入乙醇，并回流濃縮，然后濃縮液萃取3次并脫脂，再經(jīng)萃取得到知母總皂苷，其中就含有知母皂苷A-III(鄭州大學(xué)學(xué)報，2008，43，167-168)。知母藥材經(jīng)乙醇回流、減壓回收、溶解再萃取和分離等步驟就能得到知母皂苷A-III純化合物(中國發(fā)明專利ZL02160151.8)。
知母皂苷B-II，化學(xué)名稱25(S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5β-呋甾-22-羥基-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷，是一種甾體皂苷，其結(jié)構(gòu)式如式II所示。


式II 知母皂苷B-II可以通過化學(xué)合成制得，從植物或中藥材中提取是最主要的制取方式。根據(jù)中國發(fā)明專利申請200810032324.8公開的各種提取方法，所得到的提取物中的知母皂苷B-II含量為30％-70％，也可以得到純度高于90％的知母皂苷B-II。知母藥材采用溶劑提取法、樹脂吸附法、聚酰胺層析法、反相層析法和Sephadex LH-20層析法等分離方法，結(jié)合減壓干燥、冷凍干燥和/或噴霧干燥等方法能制得純度高于90％的知母皂苷B-II(中國發(fā)明專利申請200510059467.4)。
知母皂苷B-III，化學(xué)名稱25(S)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-3β，26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷，是一種甾體皂苷，其結(jié)構(gòu)式如式III所示。


式III 知母皂苷B-III可以通過化學(xué)合成制得，從植物或中藥材中提取是最主要的制取方式。根據(jù)中國發(fā)明專利申請200810032324.8公開的各種提取方法，能得到含有知母皂苷B-III的提取物。知母藥材先經(jīng)C6-C30的脂肪烴滲漉，再使用低級醇回流并萃取后，經(jīng)層析分離和重結(jié)晶后能制得純度大于90％的知母皂苷B-III(中國發(fā)明專利申請200710040730.4)。
芒果苷，又稱知母寧，化學(xué)名稱2-β-D-吡喃葡萄糖基-1，3，6，7-四羥基口山酮，是一種黃酮類化合物，其結(jié)構(gòu)式如式IV所示。


式IV 芒果苷略溶于甲醇、乙醇和水，可溶于熱稀甲醇、熱稀乙醇，不溶于非極性溶劑?？梢酝ㄟ^化學(xué)方法直接合成制得，一般從含有芒果苷的植物或中藥材(如知母)中提取。這類藥材經(jīng)溶媒，如但不僅限于，水、乙醇、甲醇、丙醇、丁醇或純的水溶液，經(jīng)高溫提取并濃縮后，再通過分離等步驟得到純度大于60％的芒果苷(中國發(fā)明專利申請200710066354.6)。這類藥材依次經(jīng)醇提、脫色、去溶劑、稀醇溶解和去溶劑等步驟能得到芒果苷純度大于90％的提取物(中國發(fā)明專利申請200610079234.5)。這些含有芒果苷的藥材如但不僅限于，芒果葉、扁桃葉、知母和石韋等。
小檗堿，化學(xué)名稱5，6-二氫-9，10-二甲氧基苯并-1，3-二苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5，6α-喹嗪，是一種異喹啉生物堿，也是一種季銨生物堿，存在于小檗科(Berberidaceae)等4科10屬的植物中，其結(jié)構(gòu)式如式V所示。


式V 小檗堿的熔點(diǎn)145℃，能溶于水和乙醇，在冷乙醇中的溶解度為1∶100，易溶于熱水或熱乙醇；難溶于苯、乙醚和氯仿。其從乙醚中可析出黃色針狀晶體；從水或稀乙醇中析出的晶體帶有5.5分子結(jié)晶水；若從氯仿、丙酮或苯中結(jié)晶，也帶有相應(yīng)的結(jié)晶溶劑分子。小檗堿主要以氫氧化季銨的形式存在，在季銨式小檗堿的水溶液中加入過量的堿則生成醇式(叔胺)和醛式(仲胺)小檗堿的沉淀，由此可得到季銨式、醛式和醇式等三種不同形式的小檗堿，其中以季銨式最穩(wěn)定。小檗堿的鹽類在水中的溶解度都比較小，如其鹽酸鹽溶解度為1∶500，其硫酸鹽溶解度為1∶30。
小檗堿及其鹽可以通過化學(xué)合成的方式獲得。如以胡椒乙胺和3，4-二甲氧基苯乙酸為起始原料，通過縮合、還原和氧化等多個步驟得到小檗堿(Ber.，1912，44，2980-2985)。又如以兒茶酚為起始原料，經(jīng)成環(huán)反應(yīng)得胡椒環(huán)，經(jīng)氯氰化反應(yīng)得胡椒乙腈，再經(jīng)縮合、催化和氫化步驟得縮合物鹽酸鹽，又經(jīng)環(huán)合反應(yīng)得小檗堿粗品，經(jīng)堿化和成鹽可制得小檗堿鹽酸鹽、小檗堿硫酸鹽或小檗堿鞣酸鹽(中國發(fā)明專利ZL01106089.1)。還有如以2，3-二甲氧基苯甲醇和胡椒乙胺為原料，經(jīng)過烷基化、氯甲基化、氰化、醇解、縮合和環(huán)合六步制得鹽酸小檗堿(中國發(fā)明專利申請200710020332.6)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)能夠從含有小檗堿的天然植物或藥材中提取得到純度大于90％的小檗堿，經(jīng)過條件的優(yōu)化能進(jìn)一步得到純度大于95％的小檗堿。
小檗堿及其鹽還可以從天然植物/中藥材(如三顆針、黃連和黃柏)提取的提取物中獲得。酸水法是目前提取小檗堿常用的方法，從三顆針中提取小檗堿，常用多倍量的0.3％硫酸水溶液浸泡24小時，過濾后濾液用石灰乳調(diào)pH值至12，經(jīng)過濾的濾液用鹽酸將pH值調(diào)至2-3，再加入6％左右的精制食鹽，使食鹽完全溶解，放置過夜，抽濾得鹽酸小檗堿(中藥化學(xué)，山東科學(xué)技術(shù)出版社，1997)；或用0.5％的硫酸水溶液冷浸提取，將提取液pH值調(diào)至7，濾液濃縮后pH值再調(diào)至2-3，再加入6％左右的食鹽并過濾，將沉淀溶于熱水，將pH值調(diào)至8.5-9后過濾，濾液pH值再調(diào)至2-3，放冷過濾得鹽酸小檗堿(天然藥物化學(xué)，人民衛(wèi)生出版社，2003)。在小檗堿提取過程中，提取工藝的條件，如pH值、酸用量、水用量和溫度等，對提高產(chǎn)物的提取率有一定影響(天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1998，10，62；廣東藥學(xué)院學(xué)報，1996，12，261；懷化醫(yī)專學(xué)報，2004，3，26；海峽藥學(xué)，1999，11，100；時珍國醫(yī)國藥，2001，12，982)。廖自基等人采用硫酸液浸泡，加入氯化鈉、氯化鋅沉降濃集后，再用石灰、強(qiáng)堿除去堿性雜質(zhì)，用硫化銨除鋅及膠體雜質(zhì)的方法從“十大功勞”中提取黃連素，制得的成品小檗堿含量98.1％，提取率65-69％(中國發(fā)明專利申請91105606.8)。
乙醇法是另一種小檗堿常用的提取方法，一般包括投料→提取→蒸發(fā)→溶解→洗滌→精制→成品等多個步驟。將中藥材(如黃連或黃柏)用熱乙醇浸泡后，將乙醇濃縮液經(jīng)過濾、加酸、沉淀、放置和過濾等步驟制得鹽酸小檗堿。或于乙醇中回流30分鐘后靜置，反復(fù)多次后合并濾液，減壓除去乙醇，加酸液后過濾冷卻制得鹽酸小檗堿。黃連用9倍體積50％乙醇，60℃提取兩次，能使小檗堿的提取率達(dá)到91％以上，平均回收率為97.38％(山東農(nóng)業(yè)生物學(xué)報，2004，6，502-505)。當(dāng)提取工藝采用6倍量80％乙醇，乙醇中硫酸加入量為0.25％，提取時間為1.5小時/次，提取次數(shù)為3次時，制備所得鹽酸小檗堿精制品含量在90％以上(中國藥房，2004，15，18)。
小檗堿的堿提取法中，最常用的是石灰乳法，如黃柏粗粉中加入石灰乳攪拌均勻，常法裝滲漉桶，加入飽和石灰水浸泡6小時后滲漉(pH值在10以上)，收集滲漉液，加入滲漉體積7％(質(zhì)量濃度)的固體食鹽，攪拌后放置過夜，經(jīng)過濾、沉淀、用熱水溶解再過濾。濾液加酸調(diào)pH值至2，放置過夜，過濾，沉淀用蒸餾水洗至中性，抽干后于80℃下干燥，即得鹽酸小檗堿。在比較幾種提取方法如酸水法、石灰乳法和乙醇提取法等，并加以改進(jìn)后，證明石灰乳法提取效率優(yōu)于其他方法(基層中藥雜志，2000，14，27-29)。
當(dāng)單獨(dú)使用超聲波(海峽藥學(xué)，1999，11，100-101；中醫(yī)藥學(xué)報，2004，32，29-30；中成藥，2004，26，186-189；時珍國醫(yī)國藥，2005，16，374-375)、微波(數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2002，15，88-89；化工進(jìn)展，2003，22，1338-1341；光譜實驗室，2006，23，526-529)和酶法(中草藥，1994，25，123；應(yīng)用化工，2006，35，373-374)等方法提取小檗堿；或與酸水法、堿提法和醇提法等方法相結(jié)合提取小檗堿時，能大大縮短提取的時間并顯著提高小檗堿的提取率。
蒼術(shù)苷A，化學(xué)名[1S，4S，5R，7R，10R-4，10，11，14-tetrahydroxyguai-3-one-11-O-β-D-glucopyranoside]，分子式為C21H36O10，分子量為448，其結(jié)構(gòu)式如式IV所示

式IV 蒼術(shù)苷A可通過如下方法制得蒼術(shù)用乙醇溶液提取后，所得提取物減壓回收乙醇，分散于水中；然后乙酸乙酯萃取，棄去萃取液，水溶液經(jīng)非離子型大孔樹脂(如XAD-2)吸附，水洗除雜，10％-50％(v/v)乙醇洗脫，洗脫液濃縮，干燥即得。(Chem.Pharm.Bull.，2003，51，152-157) 蒼術(shù)多糖采用水提法，將蒼術(shù)或經(jīng)有機(jī)溶劑提取后的蒼術(shù)沉淀物，經(jīng)水浸泡或溶解后，所得的水溶液經(jīng)去蛋白、透析、過濾、濃縮、乙醇沉淀和干燥等步驟后得到。在用水浸泡或溶解過程中，可以單獨(dú)或聯(lián)合使用加熱和pH調(diào)節(jié)等方式使多糖溶解入水。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知的，有多種方式可以除去所得水溶液中的蛋白，如但不僅限于，三氯乙酸法、三氟乙酸法、三氟三氯乙烷法、酶解法和Sevage法等。
本發(fā)明提供的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，至少含有知母皂苷B-II、小檗堿和蒼術(shù)提取物，知母皂苷B-II和小檗堿兩種組分總量占組合物的重量百分比為5％-95％，蒼術(shù)提取物中蒼術(shù)苷A含量大于重量百分比0.2％。蒼術(shù)提取物中還包括蒼術(shù)多糖。必要的，本發(fā)明組合物中還包括各種與所含化合物相適應(yīng)的藥物輔料，以制成制劑，如但不僅限于，水溶液注射劑、粉針劑、丸劑、散劑、片劑、貼劑、栓劑、乳劑、霜劑、凝膠劑、顆粒劑、膠囊劑、氣霧劑、噴霧劑、粉霧劑、緩釋劑和控釋劑等。這些藥用輔料既可以是各種制劑中常規(guī)使用的，如但不僅限于，等滲劑、緩沖液、矯味劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、崩解劑和潤滑劑等；也可以是為了與所述物質(zhì)相適應(yīng)而選擇使用的，如乳化劑、增溶劑、抑菌劑、止痛劑和抗氧劑等，這類輔料能有效提高組合物所含化合物的穩(wěn)定性和溶解性或改變化合物的釋放速率和吸收速率等，如使用環(huán)糊精增加芒果苷的溶解性(中國發(fā)明專利申請200710088853.5)，從而改善各種化合物在生物體內(nèi)的代謝，進(jìn)而增強(qiáng)組合物的給藥效果。此外，還可以為實現(xiàn)特定的給藥目的或方式，如緩釋給藥、控釋給藥和脈沖給藥等，而使用的輔料，如但不僅限于，明膠、白蛋白、殼聚糖、聚醚和聚酯類高分子材料，如但不僅限于，聚乙二醇、聚氨酯、聚碳酸酯及其共聚物等。
口服液體制劑，除本發(fā)明組合物各種主要組分外，輔料一般包括溶劑，以及必要的矯味劑(如蔗糖)、抑菌劑、乳化劑和著色劑等。
片劑，除本發(fā)明組合物各種主要組分外，輔料一般包括填充劑(如但不僅限于，淀粉、糖粉、糊精、乳糖、可壓性淀粉、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣和甘露醇等)、粘合劑(如但不僅限于，乙醇、淀粉漿、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、明膠溶液、蔗糖溶液和聚乙烯吡咯烷酮的水溶液或醇溶液等)、崩解劑(如但不僅限于，干淀粉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮和交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)和潤滑劑(如但不僅限于，硬脂酸鎂、微粉硅膠、滑石粉、氫化植物油、聚乙二醇4,000、聚乙二醇6,000和月桂醇硫酸鎂等)等。
乳劑，除本發(fā)明組合物各種主要組分外，輔料一般為水、油(如脂肪酸)、乳化劑，以及必要的防腐劑和矯味劑等。
顆粒劑，除本發(fā)明組合物各種主要組分外，其它輔料與片劑類似，但造粒過程不同。根據(jù)需要，將制得的顆粒劑與助流劑混合后裝入膠囊即得膠囊劑。
一種本發(fā)明提供的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，主要包含知母皂苷B-II、小檗堿和蒼術(shù)提取物，知母皂苷B-II和小檗堿兩種組分總量占組合物的重量百分比為5％-95％，蒼術(shù)提取物中含有蒼術(shù)多糖、蒼術(shù)苷A或其組合，蒼術(shù)苷A占組合物總量的重量百分比大于0.2％，蒼術(shù)多糖占組合物總量的重量百分比大于2％。根據(jù)需要可以增加各種組分在組合物中的比例，如為了實現(xiàn)在預(yù)防和治療糖尿病方面更好的效果，所述組合物中，小檗堿占組合物的重量百分比為2％-60％；知母皂苷B-II占組合物的重量百分比為5％-80％；蒼術(shù)苷A占組合物總量的重量百分比0.2％-10％。出于實現(xiàn)預(yù)防和治療糖尿病更好療效的目的，三種組分的含量可以單獨(dú)增加，也可以互相配合，以增加或減少其中的1個或幾個組分。
相應(yīng)的，小檗堿還包括其藥學(xué)上可接受的鹽如但不僅限于，鹽酸小檗堿和硫酸小檗堿。
在預(yù)防和治療糖尿病方面，為使生物體糖代謝能力得以更顯著的改善，血糖水平為更為穩(wěn)定，還可以在組合物中同時或單獨(dú)添加占組合物的重量百分比大于1％的知母皂苷A-III、占組合物的重量百分比大于1％的知母皂苷B-III和占組合物的重量百分比大于1.5％的芒果苷三種組分。芒果苷占組合物的重量百分比優(yōu)先選擇2％-30％。
本發(fā)明組合物中，還可以使用含有知母皂苷A-III、知母皂苷B-II、知母皂苷B-III、小檗堿、芒果苷和蒼術(shù)苷A等幾種組分的提取物，再根據(jù)各個組分的重量百分比含量進(jìn)行配伍后獲得。
知母皂苷A-III提取物從植物或中藥材的總知母皂苷中提取獲得，提取物中知母皂苷A-III含量大于15％(w/w)。根據(jù)需要可以增加知母皂苷A-III的含量，如增強(qiáng)預(yù)防和治療糖尿病的效果、減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等，知母皂苷A-III提取物中知母皂苷A-III含量一般大于50％(w/w)，優(yōu)先選擇大于90％(w/w)。
知母皂苷B-II提取物從植物或中藥材的總知母皂苷中提取獲得，提取物中知母皂苷B-II含量大于15％(w/w)。根據(jù)需要可以增加知母皂苷B-II的含量，如增強(qiáng)預(yù)防和治療糖尿病的效果，減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等，知母皂苷B-II提取物中知母皂苷B-II含量一般大于50％(w/w)，優(yōu)先選擇大于90％(w/w)。
知母皂苷B-III提取物從植物或中藥材的總知母皂苷中提取獲得，提取物中知母皂苷B-III含量大于15％(w/w)。根據(jù)需要可以增加知母皂苷B-III的含量，如增強(qiáng)預(yù)防和治療糖尿病的效果，減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等，知母皂苷B-III提取物中知母皂苷B-III含量一般大于50％(w/w)，優(yōu)先選擇大于90％(w/w)。
知母皂苷A-III、B-II和B-III既可以從植物或中藥材的總知母皂苷中分別提取，也可以從植物或中藥材的總知母皂苷中共同提取，還可以從植物或中藥材的總知母皂苷中提取知母皂苷A-III、B-II和B-III之一種或兩種，再與其它相應(yīng)組分的提取物混合而成。本領(lǐng)域技術(shù)人員單獨(dú)或聯(lián)合使用現(xiàn)有的各種提取技術(shù)就能從含有知母皂苷的植物或中藥材的總皂苷部位中提取得到能實現(xiàn)預(yù)防和治療糖尿病的效果所需的各種知母皂苷含量的知母皂苷A-III提取物、知母皂苷B-II提取物、知母皂苷B-III提取物以及知母總皂苷提取物。
知母皂苷A-III、B-II和B-III是從植物或中藥材的總知母皂苷中共同提取的，知母提取物中知母皂苷A-III、B-II和B-III三個組分的總含量大于50％(w/w)，三個組分的總含量優(yōu)先選擇大于90％(w/w)以增強(qiáng)預(yù)防和治療糖尿病的效果，減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等。
芒果苷存在于漆樹科植物芒果(Mangifera indica L.)的果實、葉和樹皮，以及知母的根莖，以及地上部分，鳶尾科植物射干(Belamcanda chinensis(L.)DC.)的花和葉等植物中。芒果苷提取物從植物或中藥材的總黃酮中提取獲得，提取物中芒果苷含量大于60％(w/w)，優(yōu)選大于90％(w/w)。本領(lǐng)域技術(shù)人員單獨(dú)或聯(lián)合使用現(xiàn)有的各種提取技術(shù)就能從含有芒果苷的植物或中藥材的總黃酮部位中提取得到能實現(xiàn)預(yù)防和治療糖尿病的效果所需的各種芒果苷含量的芒果苷提取物。
小檗堿提取物從植物或中藥材的總生物堿中提取獲得，提取物中小檗堿含量大于15％(w/w)。根據(jù)需要可以增加小檗堿的含量，如增強(qiáng)預(yù)防和治療糖尿病的效果，減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等，小檗堿提取物中小檗堿含量一般大于50％(w/w)，優(yōu)先選擇大于90％(w/w)。
可用于提取小檗堿的中藥材可以為黃柏及其相應(yīng)植物的部位。此外，還可以選擇黃連和三顆針。黃連為毛茛科植物黃連(Coptis chinensis Franch.)、三角葉黃連(Coptisdeltoidea C.Y.Chenget Hsiao)或云連(Coptis teeta Wall.)的根莖。根莖中小檗堿含量5-8％，并含少量的黃連堿、甲基黃連堿、巴馬亭、藥根堿和木蘭花堿等；須根含小檗堿可達(dá)5％；黃連葉含小檗堿1.4％-2.9％。因此，黃連是另一種提取小檗堿的重要來源。本領(lǐng)域技術(shù)人員單獨(dú)或聯(lián)合使用現(xiàn)有的各種提取技術(shù)就能從含有小檗堿的植物或中藥材的總生物堿部位中提取得到能實現(xiàn)預(yù)防和治療糖尿病的效果所需的各種小檗堿含量的小檗堿提取物。
本發(fā)明蒼術(shù)提取物中含有蒼術(shù)苷A，含量大于0.5％(w/w)。根據(jù)需要可以增加蒼術(shù)苷A的含量，如增強(qiáng)預(yù)防和治療糖尿病的效果，減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等，蒼術(shù)提取物中蒼術(shù)苷A含量一般為2％-10％(w/w)，優(yōu)先選擇大于10％(w/w)。
本發(fā)明蒼術(shù)提取物中含有蒼術(shù)多糖，含量大于15％(w/w)。根據(jù)需要可以增加蒼術(shù)多糖的含量，如增強(qiáng)預(yù)防和治療糖尿病的效果，減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等，蒼術(shù)提取物中蒼術(shù)多糖含量一般為15％-30％(w/w)，優(yōu)先選擇大于30％(w/w)。
另一種本發(fā)明提供的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，包括小檗堿提取物、知母皂苷B-II提取物和蒼術(shù)提取物。提取物中，小檗堿和知母皂苷B-II的總量占組合物的重量百分比為5％-95％；蒼術(shù)提取物中含有蒼術(shù)多糖或蒼術(shù)苷A，蒼術(shù)苷A占組合物總量的重量百分比大于0.2％，如但不僅限于，大于1％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％或大于10％。蒼術(shù)多糖占組合物總量的重量百分比大于2％。
另一種本發(fā)明提供的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，主要包括小檗堿提取物、知母皂苷B-II提取物和蒼術(shù)提取物。提取物中，小檗堿和知母皂苷B-II的總量占組合物的重量百分比為5％-95％，蒼術(shù)提取物中含有蒼術(shù)多糖和蒼術(shù)苷A，蒼術(shù)苷A占組合物總量的重量百分比大于0.2％，如但不僅限于，大于1％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％或大于10％。蒼術(shù)多糖占組合物總量的重量百分比大于2％。
在這些組合物中，優(yōu)選的，小檗堿占組合物的重量百分比為2％-60％；知母皂苷B-II占組合物的重量百分比為5％-80％；蒼術(shù)苷A占組合物總量的重量百分比0.2-10％。出于實現(xiàn)預(yù)防和治療糖尿病更好療效的目的，三種組分的含量可以單獨(dú)增加，也可以互相配合，以增加或減少其中的1個或幾個組分。必要的，組合物中還包括各種藥用輔料。為了實現(xiàn)在預(yù)防和治療糖尿病更好的效果、減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)等目的，小檗堿和知母皂苷B-II兩種組分總量占組合物的重量百分比進(jìn)一步選擇20％-95％，優(yōu)先選擇50-95％；蒼術(shù)苷A占組合物總量的重量百分比進(jìn)一步選擇大于10％。
在預(yù)防和治療糖尿病方面，為使生物體糖代謝能力得以更顯著的改善，血糖水平為更為穩(wěn)定，還可以在本發(fā)明組合中同時或單獨(dú)添加知母皂苷A-III提取物、知母皂苷B-III提取物和芒果苷提取物，提取物中所含的知母皂苷A-III占組合物的重量百分比大于1％，所含的知母皂苷B-III占組合物的重量百分比大于1％，所含的芒果苷占組合物的重量百分比大于1.5％。所含芒果苷占組合物的重量百分比優(yōu)先選擇2％-30％。
本發(fā)明提供的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物還可以是從一定重量份的相應(yīng)植物/中藥材中直接提取后制得。
另一種本發(fā)明提供的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，由知母提取物、黃柏提取物和蒼術(shù)提取物。其中，知母提取物占組合物的重量百分比為1％-90％；黃柏提取物占組合物的重量百分比為1％-90％；蒼術(shù)提取物中含有蒼術(shù)多糖或蒼術(shù)苷A或其組合，蒼術(shù)苷A占組合物總量的重量百分比大于0.2％，蒼術(shù)多糖占組合物總量的重量百分比大于2％。組合物中，含有的知母皂苷B-II和小檗堿兩種組分總量為5％-95％。優(yōu)選的，本發(fā)明組合物，知母皂苷B-II占組合物的重量百分比為5％-80％；小檗堿占組合物的重量百分比為2％-60％；蒼術(shù)苷A占組合物總量的重量百分比0.2％-10％，蒼術(shù)多糖占組合物總量的重量百分比2％-10％。出于實現(xiàn)預(yù)防和治療糖尿病更好療效的目的，幾種組分的含量可以單獨(dú)增加，也可以互相配合，增加或減少其中的1個或幾個組分。
為使生物體糖代謝能力得以更顯著的改善，血糖水平為更為穩(wěn)定，本發(fā)明組合物中，還含有占組合物的重量百分比大于1％的知母皂苷A-III、占組合物的重量百分比大于1％的知母皂苷B-III和占組合物的重量百分比大于1.5％的芒果苷三種組分。
知母提取物由0.5-9重量份的知母先用10％-95％(v/v)的乙醇提取后，將提取液去乙醇，于大孔樹脂上樣，用20％-95％(v/v)乙醇洗脫并收集，濃縮洗脫液并去乙醇，調(diào)節(jié)pH至4-10，以水飽和正丁醇反復(fù)萃取后得知母總皂苷提取物，再將萃取后水溶液(母液)的pH值調(diào)至中性，再以水飽和正丁醇反復(fù)萃取后得知母總黃酮提取物。
所得知母總皂苷提取物中，知母皂苷B-II的含量為10％-90％(w/w)，通常含有20％-50％(w/w)，通過后續(xù)分離可以大于90％(w/w)。優(yōu)先選擇pH9-10以提取知母總皂苷。
知母總黃酮提取物中，芒果苷的含量為5％-90％(w/w)，通常含有5％-30％(w/w)，通過后續(xù)分離可以大于90％(w/w)。
黃柏提取物由1重量份的黃柏先用10％-90％(v/v)的乙醇提取后，將提取液濃縮并去乙醇，于大孔樹脂上樣，再用20％-95％(v/v)的乙醇洗脫并收集，濃縮后即得總生物堿提取物，其中所含小檗堿≥15％(w/w)，通常為15％-90％(w/w)。經(jīng)離子交換、硅膠、Sephadex LH-20和ODS反相色譜之一或幾種方法能得到小檗堿含量≥50％(w/w)的總生物堿提取物。純化所用的大孔樹脂，優(yōu)先選擇離子交換與吸附樹脂為填料，用含有H+、Na+、K+和Ca+離子的C1-C5醇(如乙醇)及其溶液洗脫，洗脫液除醇濃縮后即得。
所述含有蒼術(shù)苷A的蒼術(shù)提取物由0.5-9重量份的蒼術(shù)用50v/v％-95v/v％乙醇溶液提取后，所得提取物減壓除醇，分散于水中；然后乙酸乙酯萃取，棄去萃取液，水液經(jīng)非離子型大孔樹脂吸附，水洗除雜，10v/v％-50v/v％乙醇洗脫，洗脫液濃縮、干燥得含有蒼術(shù)苷A的提取物； 所述含有蒼術(shù)多糖的蒼術(shù)提取物由0.5-9重量份的蒼術(shù)于水中加熱提取，水液合并后離心，濃縮，除去蛋白后，水液經(jīng)減壓蒸餾、透析、濃縮、離心和干燥得含有蒼術(shù)多糖的提取物； 含有蒼術(shù)苷A和蒼術(shù)多糖的蒼術(shù)提取物由0.5-9重量份的蒼術(shù)用50％-95％(v/v)乙醇溶液提取后，所得提取物減壓除醇，分散于水中；然后乙酸乙酯萃取，棄去萃取液，水液經(jīng)非離子型大孔樹脂(如XAD-2)吸附，水洗除雜，10％-50％(v/v)乙醇洗脫，洗脫液濃縮、干燥即得。所含蒼術(shù)苷A占組合物總量的重量百分比大于0.2％，一般為0.2％-10％。經(jīng)乙醇提取后的蒼術(shù)于水中加熱回流提取，水提取液合并后離心，低溫濃縮，除去蛋白后，水液經(jīng)減壓蒸餾、透析、濃縮和干燥，得蒼術(shù)多糖，蒼術(shù)多糖占組合物總量的重量百分比大于2％。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以了解，蒼術(shù)苷A和蒼術(shù)多糖的提取使用不同的提取介質(zhì)。既可以將蒼術(shù)先于醇中提取蒼術(shù)苷A，再將殘留固體用于提取蒼術(shù)多糖；也可以將蒼術(shù)先于水中提取，水提取液可分別制備出蒼術(shù)多糖和蒼術(shù)苷A。使用同一重量份(如0.5-9)蒼術(shù)藥材，既可以單獨(dú)提取含有蒼術(shù)苷A或蒼術(shù)多糖的本發(fā)明提取物，也可以通過先由醇提取再由水提取得到含有蒼術(shù)苷A和蒼術(shù)多糖的本發(fā)明提取物。通過單味的蒼術(shù)藥材提取蒼術(shù)苷A和蒼術(shù)多糖的先后順序不得限定本發(fā)明。
本發(fā)明中，還可以將知母和黃柏混合后共同提取獲得所需的提取物。將1重量份的黃柏和0.5-9重量份的知母混合，用10％-95％(v/v)乙醇提取，提取液除醇后于大孔樹脂上樣，再用20％-95％(v/v)乙醇洗脫，所得洗脫液經(jīng)除醇、濃縮和干燥后即為本發(fā)明組合物，含有的知母皂苷A-III、B-II、B-III、芒果苷和小檗堿五種組分，知母皂苷B-II和小檗堿總量占組合物的重量百分?jǐn)?shù)為5％-95％。經(jīng)離子交換樹脂、硅膠、Sephadex LH-20和ODS反相色譜之一或幾種方法可以將知母皂苷A-III和B-III除去。
知母、黃柏和蒼術(shù)的提取物組合物中，優(yōu)選的，知母皂苷B-II和小檗堿總量占組合物的重量百分?jǐn)?shù)為5％-95％。
必要的，本發(fā)明各個組合物中還包括將所述組合物制成各種制劑所需的藥用輔料。根據(jù)制成各種制劑的實際需要，如各種組分與輔料的配伍關(guān)系、組分之間的配伍關(guān)系，以及改善藥代動力學(xué)和藥效學(xué)等，對組合物中各個組分的配伍關(guān)系進(jìn)行個例適當(dāng)調(diào)整。
本發(fā)明技術(shù)方案實現(xiàn)的有益效果 本發(fā)明提供的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，包括知母皂苷B-II、小檗堿和蒼術(shù)提取物三種組分。蒼術(shù)提取物含有蒼術(shù)苷A或蒼術(shù)多糖或其組合，蒼術(shù)苷A占組合物的重量百分比大于0.2％，蒼術(shù)多糖占組合物總量的重量百分比大于2％。本發(fā)明還提供的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，包括知母總皂苷、黃柏總生物堿和蒼術(shù)提取物三種組分。蒼術(shù)提取物含有蒼術(shù)苷A、蒼術(shù)多糖或其組合，蒼術(shù)苷A占組合物的重量百分比大于0.2％，蒼術(shù)多糖占組合物總量的重量百分比大于2％。本發(fā)明藥物組合物可顯著改善機(jī)體的葡萄糖耐受水平，提高機(jī)體對葡萄糖的處置能力，降低糖化血紅蛋白，降低隨機(jī)血糖和空腹血糖。不同的組分組合都有明顯的降糖效果，可以適應(yīng)不同的需要。
此外，在小檗堿、知母皂苷B-II和蒼術(shù)提取物的基礎(chǔ)上，增加芒果苷、知母皂苷A-III和知母皂苷B-III之一種或幾種組分后，所得組合物的各個單體之間互相協(xié)同，從而在預(yù)防和治療糖尿病方面取得更好的綜合效果，如除降低血糖外，還可改善患者的綜合機(jī)能等。本發(fā)明不同的組分組合，可根據(jù)預(yù)防或治療的不同階段和不同目的需要，綜合考慮預(yù)防和治療效果、性價比、成本和藥材利用等因素取舍。
本發(fā)明所涉及的術(shù)語與其一般概念相同。
所述的“預(yù)防”是指在未被臨床標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)定的疾病前，各種用于防止疾病發(fā)生或發(fā)展的手段或措施，包括醫(yī)學(xué)、物理或化學(xué)的方法，以阻止和降低疾病各種癥狀的發(fā)生或發(fā)展。
所述的“預(yù)防糖尿病”是指將本發(fā)明組合物用于還未符合“糖尿病”臨床指標(biāo)的，隨著時間的延續(xù)將慢慢發(fā)展成為臨床上定義為“糖尿病”的潛在患者，從而改善這些患者對葡萄糖的耐受，促進(jìn)肌體對糖代謝的能力，增加肌體對胰島素的敏感性。這類潛在的患者通?；加小按x綜合癥(Metabolic Syndrome)”(Annnu.Rev.Nutri.，2005，25，391-406；Annnu.Rev.Med.，2005，56，45-62；Nat.Rev.Drug.Disc.，2006，5，295-309；Nat.Rev.Endocri.，2006，2，335-348)，如肥胖、胰島素抵制、葡萄糖不耐受、高血壓、動脈硬化癥(antherosclerosis)、血脂異常癥(dyslipidemia)(即血液中的甘油三酯水平偏高，高密度脂蛋白同時偏低)等。通常情況下，這類患者是II型糖尿病患者。
所述“治療”是指為了阻止和降低疾病的發(fā)生或發(fā)展，使疾病病程的發(fā)展或加重得以抑制、遏制、減輕、改善、減緩、停止、延遲或反轉(zhuǎn)，所描述的保持和/或用藥時的疾病的、紊亂的或病理學(xué)狀態(tài)的各種指標(biāo)包括減輕或減少癥狀或并發(fā)癥，或治愈或消除疾病、紊亂或狀況。
所述的“治療糖尿病”是指將本發(fā)明組合物用于臨床診斷為“糖尿病”的患者，改善這些患者對葡萄糖的耐受，促進(jìn)肌體對糖代謝的能力，增加肌體對胰島素的敏感性，進(jìn)而使得患者的餐后和空腹血糖得以控制在正常的水平。由于對葡萄糖代謝的能力得以提高，從而減緩了因長期高血糖而產(chǎn)生的各種心血管疾病、慢性腎衰竭、視網(wǎng)膜病變、神經(jīng)病變及微血管病變的發(fā)生和發(fā)展。通常情況下，這類患者是II型糖尿病患者。
所述的“增強(qiáng)預(yù)防和治療糖尿病的效果、減少給藥劑量和減少給藥次數(shù)”是指在有效治療劑量的前提下，將本發(fā)明組合物基于不同的患者的需要而使用不同的用藥量，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的實驗用小鼠、實驗用大鼠和人之間的給藥倍數(shù)關(guān)系；實驗用兔和人之間的給藥倍數(shù)關(guān)系；以及實驗用狗和人之間的給藥倍數(shù)關(guān)系等。本發(fā)明組合物在多種組分含量較低的情況下，如蒼術(shù)苷A含量0.2％-1％(w/w)，一天多次(3次以上)或長期給藥后，患者仍能表現(xiàn)出對隨機(jī)血糖和空腹血糖顯著下降，機(jī)體對葡萄糖的代謝能力顯著提高。根據(jù)患者重量換算關(guān)系而確定給藥量，當(dāng)給藥對象從實驗動物轉(zhuǎn)換到人時，本組合物的實際用量將顯著增加，因此需要將組合物中的各種組分含量略微增加減少服藥的數(shù)量，如1-10％(w/w)亦或更高?；蛞驗榫忈?、控釋或脈沖給藥的需要，單劑量藥物組合物中，需要將本發(fā)明所含有的多種組合物含量提高，如1-10％(w/w)亦或更高。
所述的“有效治療劑量”指能減緩各種病理學(xué)意義上的癥狀而使用本發(fā)明組合物的量。本發(fā)明組合物的特定劑量需要根據(jù)具體的情況加以確定，如給藥的方式、給藥途徑、給藥時患者的狀態(tài)以及在治療時的病理學(xué)狀況等。
所述的“患者”指人、野生動物和家畜(Livestock)。野生動物為自然狀態(tài)下未經(jīng)人工馴化的動物。家畜是為了提供食物來源而人工飼養(yǎng)的動物，如狗、鼠、倉鼠、豬、兔、奶牛、水牛、公牛、綿羊、山羊、鵝和雞等。給予治療的“患者”優(yōu)先選擇哺乳動物，尤其是人。
所述的“本發(fā)明組合物各種主要組分”指知母皂苷B-II、小檗堿和蒼術(shù)提取物，還包括知母皂苷A-III、知母皂苷B-III和芒果苷之一中或幾種。蒼術(shù)提取物中含有蒼術(shù)苷，以及蒼術(shù)多糖。
所述的“C1-C5醇”指直連或支鏈的飽和一元醇，如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇或正丁醇等；或直連或支鏈的不飽和一元醇，如丙烯醇；或直連或支鏈的飽和多元醇，如乙二醇、1，3-丙二醇或丙三醇等。其中，字母C表示碳原子，其后數(shù)字為正整數(shù)，如1、2、3、4或5等，表示基團(tuán)所含的碳原子個數(shù)。



圖1表示知母黃柏蒼術(shù)提取物對GK糖尿病大鼠葡萄糖耐量的影響；與正常組比##p＜0.01；與模型組比*p＜0.05，**p＜0.01。

具體實施例方式 以下結(jié)合附圖詳細(xì)描述本發(fā)明的技術(shù)方案。本發(fā)明實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍中。
本發(fā)明所用的試劑若未明確指明，則均購自于西格瑪-奧德里奇(Sigma-Aldrich)。
本發(fā)明實施例中，知母黃柏蒼術(shù)給藥動物組(簡稱知母黃柏蒼術(shù)組)各組分相應(yīng)含量如下知母皂苷A-III含量為4％(w/w)，知母皂苷B-II含量為28％(w/w)，知母皂苷B-III含量為8％(w/w)，芒果苷含量為9％(w/w)，小檗堿含量為18％(w/w)。蒼術(shù)苷A含量為0.5％(w/w)，蒼術(shù)多糖含量為5％(w/w)。
實施例1知母皂苷A-III、B-II和B-III含量測定 色譜柱DiamonsilTM C18(200mm×4.6mm，5μm)。柱溫25℃，流速1.0ml/min。ELSD檢測器，漂移管溫度70℃，霧化氣體流速1.8SPLM。進(jìn)樣量20μl。
流動相A乙腈；流動相B0.2％甲酸水溶液；以30％流動相B平衡，30分鐘線性梯度洗脫，90％流動相B終止。
分別精密稱取知母皂苷A-III、B-II和B-III標(biāo)準(zhǔn)品各20.0mg置10ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，再配置成0.2mg/ml知母皂苷B-II、B-III、A-III對照品溶液，備用。
精密稱取知母總皂苷提取物20mg，置25ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，再稀釋至適當(dāng)濃度，則為知母總皂苷樣品溶液，備用。
精密稱取知母、黃柏、蒼術(shù)提取物組合物50mg，置25ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，再稀釋至適當(dāng)濃度，搖勻，則為樣品溶液，備用。
分別取樣品和對照品溶液20ml。注入高效液相色譜儀，根據(jù)各個物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，按相應(yīng)的計算方法計算樣品中三個皂苷的含量。
為了確定知母總皂苷提取物的結(jié)構(gòu)，可以收集相應(yīng)洗脫液后通過質(zhì)譜確定，或直接通過液質(zhì)連用確定分子量，配合核磁檢測具體化合物結(jié)構(gòu)。
實施例2芒果苷含量測定 色譜柱迪馬公司DiamonsilRC18柱(250mm×4.6mm，5μm)；柱溫為20℃。
流動相乙腈-水(15∶85，v/v)，(磷酸調(diào)pH＝3.0)；流速1ml/min；進(jìn)樣量20μL。
檢測波長254nm。
精密稱取芒果苷對照品5.2mg，置25ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配置成0.208mg/ml芒果苷對照品溶液，備用。
精密稱取知母總黃酮提取物20mg，置25ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，再稀釋至適當(dāng)濃度，則為知母總黃酮樣品溶液，備用。
精密稱取知母、黃柏、蒼術(shù)提取物組合物20mg，置25ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，再稀釋至適當(dāng)濃度，則為組合物樣品溶液，備用。
分別取樣品和對照品溶液20ml。注入高效液相色譜儀，根據(jù)各個物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，按相應(yīng)的計算方法計算樣品中芒果苷的含量。
為了確定芒果苷提取物的結(jié)構(gòu)，可以收集相應(yīng)洗脫液后通過質(zhì)譜確定，或直接通過液質(zhì)連用確定分子量，配合核磁檢測具體化合物結(jié)構(gòu)。
實施例3小檗堿含量測定 高效液相色譜儀Agilent 1100系統(tǒng)；杭州英譜色譜工作站。
色譜柱DiamonsilTM C18(250mm×4.6mm，5μm)；柱溫為20℃；進(jìn)樣量20μl。
流動相水-乙腈-冰醋酸-三乙胺(67∶33∶0.3∶0.8，v/v)，檢測波長345nm；流速1ml/min。
精密稱取鹽酸小檗堿10.0mg置25ml量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，配置成0.4mg/ml儲備液，精密吸取小檗堿儲備液1.0ml，加甲醇溶解并定容至20ml，制成1ml含小檗堿20μg的對照品溶液。
精密稱取黃柏提取物20mg，置25ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，再稀釋至適當(dāng)濃度，則為黃柏提取物樣品溶液，備用。
精密稱取知母、黃柏、蒼術(shù)提取物組合物20mg，置25ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，再稀釋至適當(dāng)濃度，搖勻，則為組合物樣品溶液，備用。
分別取樣品和對照品溶液20ml。注入高效液相色譜儀，根據(jù)各個物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，按相應(yīng)的計算方法計算樣品中小檗堿的含量。
為了確定小檗堿提取物的結(jié)構(gòu)，可以收集相應(yīng)洗脫液后通過質(zhì)譜確定，或直接通過液質(zhì)連用確定分子量，配合核磁檢測具體化合物結(jié)構(gòu)。
實施例4蒼術(shù)苷A含量測定 高效液相色譜儀Agilent 1100系統(tǒng)；杭州英譜色譜工作站；色譜柱Diamonsil TM C18(250mm×4.6mm，5μm)。流動相水-乙腈-甲酸(60∶40∶0.1，v/v)，流速1mL·min-1；柱溫為20℃；ELSD檢測器漂移管溫度70℃，霧化氣體流速1.8SPLM。進(jìn)樣量20μl。
精密稱取10.0mg蒼術(shù)苷A置25ml量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，配置成400μg/ml儲備液，精密吸取蒼術(shù)苷A儲備液0.5ml，加甲醇溶解并定容至5ml，制成1ml含40μg蒼術(shù)苷A的對照品溶液。
精密稱取20mg蒼術(shù)提取物，置25ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，再稀釋至適當(dāng)濃度，則為蒼術(shù)提取物樣品溶液，備用。精密稱取40mg知母、黃柏、蒼術(shù)提取物組合物，置25ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，再稀釋至適當(dāng)濃度，搖勻，則為組合物樣品溶液，備用。
分別取樣品和對照品溶液20ml。注入高效液相色譜儀，按相應(yīng)的計算方法計算樣品中小檗堿的含量。
實施例5蒼術(shù)多糖含量測定 UV-2401紫外分光光度計，石英比色皿，檢測波長490nm。
精密稱取無水葡萄糖對照品10mg，置50ml容量瓶中，加水適量，超聲使溶解，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品的溶液。
精密稱取蒼術(shù)多糖15mg，置50ml容量瓶中，加水適量，超聲使溶解，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含0.2mg的溶液，作為供試品的溶液。
精密吸取對照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml，分別置試管中，加水至1.5ml，再加5％苯酚溶液2ml，混勻，迅速加入濃硫酸6.5ml，搖勻，置沸水浴中，加熱15分鐘，立即冰水浴冷卻至常溫，以相應(yīng)試劑為空白測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
取供試品溶液0.4ml，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定步驟測定，按相應(yīng)計算方法計算蒼術(shù)多糖含量。
實施例6知母提取物的制備 100公斤知母藥材，經(jīng)粉碎后，投入提取罐中，在80-90℃條件下依次用80％(v/v)乙醇800升加熱提取3次，每次提取時間為90分鐘，合并三次提取液，濃縮至80升，過濾。將所得濾液用蒸餾水調(diào)節(jié)至160升，緩緩?fù)ㄟ^有150升AB-8型大孔樹脂的吸附柱，然后用200升蒸餾水淋洗除去雜質(zhì)，再用400升30％(v/v)乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇后再濃縮至50升，以NaOH調(diào)節(jié)pH至4，以水飽和的正丁醇35升萃取3次，合并萃取液，濃縮至干。將濃縮所得固體粉碎后得淺黃色粉末，作為提取物1；再用400升80％(v/v)乙醇洗脫大孔樹脂，收集洗脫液，濃縮除醇，加水至50升，以水飽和正丁醇35升萃取3次，合并萃取液，濃縮至干。將濃縮所得固體粉碎后得淺黃色粉末，作為提取物2。
合并提取物1與提取物2混合均勻，即為知母提取物。采用正、反相硅膠、Sephadex等手段分離并經(jīng)核磁鑒定為知母皂苷A-III、B-II和B-III，具體數(shù)據(jù)見表1 表1知母皂苷A-III、B-II和B-III13C-NMR數(shù)據(jù)(100MHz，in C5D5N，ppm)

采用正、反相硅膠、Sephadex等手段分離并經(jīng)核磁鑒定為芒果苷，具體數(shù)據(jù)如下 13C-NMR{(CD3)SO，100MHz，ppm}甙元179.2(羰基)，161.8(C-1)，107.9(C-2)，163.9(C-3)，93.4(C-4)，156.3(C-4a)，150.8(C-4b)，102.7(C-5)，154.1(C-6)，143.8(C-7)，108.2(C-8)，111.6(C-8a)，101.4(C-8b)；Glu81.5(C-1)，73.2(C-2)，70.7(C-3)，70.4(C-4)，79.1(C-5)，61.6(C-6)。
經(jīng)HPLC檢測，知母提取物中知母皂苷A-III含量為3％(w/w)，B-II含量為45％(w/w)，知母皂苷B-III含量為6％(w/w)，芒果苷含量為15％(w/w)。
實施例7知母提取物的制備 100公斤知母藥材，粉碎，投入提取罐中，用50％(v/v)乙醇1000升加熱回流提取2次，每次提取時間為120分鐘，合并兩次提取液，濃縮至120升，過濾。將所得濾液用蒸餾水調(diào)節(jié)至200升，緩緩?fù)ㄟ^有200升D101型大孔樹脂的吸附柱，用400升蒸餾水淋洗除去雜質(zhì)；再用600升80％(v/v)乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇后再濃縮至50升，以NaOH調(diào)節(jié)pH至11-12，以水飽和正丁醇50升萃取2次，合并萃取液，濃縮至干。將濃縮所得固體粉碎后得淺黃色粉末，作為提取物1。母液用HCl調(diào)pH值至中性，以水飽和正丁醇50升萃取3次，合并萃取液，濃縮至干。將濃縮所得固體粉碎后得淺黃色粉末，為提取物2。
合并提取物1與提取物2混合均勻，即為知母提取物。經(jīng)HPLC檢測，知母提取物中知母皂苷A-III含量為4％(w/w)，知母皂苷B-II含量為40％(w/w)，知母皂苷B-III含量為8％(w/w)，芒果苷含量為16％(w/w)。
實施例8黃柏提取物制備 100公斤粉碎后的黃柏藥材，以70％(v/v)乙醇600升在80-90℃下提取1.5小時，提取3次，合并提取液，離心，上清液即為上柱樣品液。將樣品液通入裝有2*117型強(qiáng)酸型離子樹脂50Kg于色譜柱中，依次用蒸餾水和500升含0.4M NaOH的70％(v/v)乙醇洗脫，收集70％(v/v)乙醇洗脫液，用HCl調(diào)節(jié)pH值至4，減壓回收乙醇，加水定容至200升，加入內(nèi)裝已處理的D101大孔吸附樹脂100升的吸附柱上，水洗除雜，400升80％(v/v)乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至干。將所得固體粉碎得黃色粉末，即為本發(fā)明的黃柏提取物。采用正、反相硅膠、Sephadex等手段分離并經(jīng)核磁鑒定為鹽酸小檗堿，具體數(shù)據(jù)如下 13C-NMR{DMSO-d6，100MHz，ppm}150.5，149.9，147.8，145.6，143.8，137.6，133.2，130.8，126.9，123.7，121.5，120.6，120.4，108.6，105.6，102.2，62.1，57.2，55.3，26.5。
經(jīng)HPLC檢測，黃柏提取物中小檗堿含量為55％(w/w)。
實施例9黃柏提取物制備 100公斤粉碎后的黃柏藥材，以用量5∶1(溶劑體積∶藥材重量)60％(v/v)的乙醇浸潤24小時后滲濾提取，收集20倍量滲濾液，即為提取液。提取液減壓回收乙醇，濃縮液離心，用離心所得的上清液上柱。將樣品液通入裝有D113樹脂(西安電力樹脂廠生產(chǎn))的色譜柱中，依次用蒸餾水、20倍量柱體積的70％(v/v)酸性乙醇洗脫，洗脫液低溫減壓濃縮至干燥，粉碎得黃色粉末，即為本發(fā)明的黃柏提取物。經(jīng)HPLC檢測，黃柏提取物中鹽酸小檗堿含量為50％(w/w)。
實施例10知母、黃柏提取物組合物制備 取100Kg知母按實施例4所得的知母總皂苷和知母總黃酮，兩者混合，再加入100Kg黃柏藥材按實施例6所得的黃柏總生物堿，合并后的粉末打粉，過篩，即得知母、黃柏提取物組合物。經(jīng)HPLC檢測，其中知母皂苷A-III含量為3％(w/w)，知母皂苷B-II含量為35％(w/w)，知母皂苷B-III含量為5％(w/w)，芒果苷含量為12％(w/w)，小檗堿含量為22％(w/w)。
實施例11知母、黃柏提取物組合物制備 50公斤知母、50公斤黃柏藥材，粉碎，投入提取罐中，在80-90℃條件下用70％(v/v)乙醇1000升加熱提取3次，每次提取時間為90分鐘，合并三次提取液，濃縮至100升，過濾，將濾液用蒸餾水調(diào)節(jié)至150升。再緩緩?fù)ㄟ^裝有150升D101型大孔樹脂的吸附柱，用300升蒸餾水淋洗除去雜質(zhì)；再用300升70％(v/v)乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇后再濃縮至50升，以水飽和正丁醇50升萃取3次，合并正丁醇萃取液，濃縮至干，粉碎后得淺黃色粉末9公斤，為知母黃柏提取物。經(jīng)HPLC檢測，提取物中知母皂苷A-III含量為5％(w/w)，知母皂苷B-II含量為28％(w/w)，知母皂苷B-III含量為10％(w/w)，芒果苷含量為12％(w/w)，小檗堿含量為18％(w/w)。
實施例12知母、黃柏提取物組合物制備 60公斤粉碎后的知母、40公斤粉碎后的黃柏藥材，混合，以80％(v/v)乙醇500升浸潤24小時后滲濾提取，收集2000升滲濾液，即為提取液。提取液減壓回收乙醇后，加水定容至500升，過濾，濾液即為上柱樣品液。將樣品液通入裝有200升D113樹脂的色譜柱中，用200升蒸餾水洗滌樹脂，同前面的吸附后殘液合并，緩緩?fù)ㄟ^100升D101型大孔樹脂吸附。D113樹脂以70％的酸性乙醇洗脫，濃縮干燥，得提取物1。D101型大孔樹脂柱，水洗除雜，60％(v/v)乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮，干燥粉碎得淡黃色粉末，得提取物2。合并提取物1、2，即得知母黃柏提取物。經(jīng)HPLC檢測，提取物中知母皂苷A-III含量為4％(w/w)，知母皂苷B-II含量為30％(w/w)，知母皂苷B-III含量為8％(w/w)，芒果苷含量為10％(w/w)，小檗堿含量為20％(w/w)。
實施例13蒼術(shù)提取物的制備 蒼術(shù)飲片100公斤，用水加熱提取，提取液離心，棄去沉淀。上清液濃縮至100L，以95％(v/v)乙醇調(diào)節(jié)至混合液乙醇濃度為70％(v/v)，放置過夜冷藏沉淀，離心，分別取上清液和沉淀備用。上清液濃縮至80L，以等體積乙酸乙酯萃取3次，萃取液棄去。母液以80L水飽和正丁醇萃取3次，合并萃取液，濃縮干燥正丁醇萃取液即得含蒼術(shù)苷A的提取物。沉淀以100L水溶解，以Savage法去除蛋白8次，水液透析，過濾，濃縮，干燥，得蒼術(shù)多糖；蒼術(shù)總苷和蒼術(shù)多糖混合，即為本發(fā)明的蒼術(shù)提取物之一。經(jīng)正反向硅膠、Sephadex等方式分離，核磁鑒定為蒼術(shù)苷A，經(jīng)HPLC含量測定，確定蒼術(shù)苷A含量≥0.2％。核磁鑒定數(shù)據(jù)見表2 表2蒼術(shù)苷A核磁數(shù)據(jù)in(CD)3SO

實施例14蒼術(shù)提取物的制備 蒼術(shù)飲片100公斤，用800L 90％(v/v)乙醇浸泡提取三次，每次24小時，合并提取液，提取液離心后，上清液減壓回收乙醇，以3倍量水沉淀，離心除去沉淀雜質(zhì)。上清液上AB-8大孔樹脂吸附，水洗除雜，30％(v/v)乙醇洗脫，洗脫液濃縮，干燥，得蒼術(shù)苷A提取物。經(jīng)HPLC檢測，蒼術(shù)提取物中蒼術(shù)苷A含量≥0.2％。
實施例15蒼術(shù)提取物的制備 實施例14提取后的蒼術(shù)藥材，揮干乙醇，藥材以800L水加熱回流提取2次，水液合并后離心，低溫濃縮至100L，三氯乙酸法除蛋白3次，水液減壓蒸餾至20L，透析，濃縮，醇沉，離心，干燥，得蒼術(shù)多糖提取物。
將實施例14和實施例15分別制得的提取物混合，即得含有蒼術(shù)苷A和蒼術(shù)多糖的蒼術(shù)提取物。
實施例16知母、黃柏、蒼術(shù)提取物的制備 取100Kg知母按實施例4所得的知母總皂苷和知母總黃酮，兩者混合，加入100Kg黃柏藥材按實施例8所得的黃柏總生物堿，再加入100Kg蒼術(shù)藥材按實施例13所得的蒼術(shù)提取物，合并后的粉末打粉，過篩，即得知母、黃柏提取物組合物。經(jīng)HPLC檢測，其中知母皂苷A-III含量為2.5％(w/w)，知母皂苷B-II含量為30％(w/w)，知母皂苷B-III含量為4％(w/w)，芒果苷含量為10％(w/w)，小檗堿含量為20％(w/w)，蒼術(shù)苷A的含量為0.2％(w/w)，蒼術(shù)多糖的含量為3％(w/w)。
實施例17知母黃柏蒼術(shù)提取物對GK糖尿病大鼠隨機(jī)血糖的影響 GK糖尿病大鼠隨機(jī)分為模型組，羅格列酮組，知母黃柏蒼術(shù)組。正常組為Wistar大鼠。試驗期間，知母黃柏蒼術(shù)組灌胃給予知母黃柏蒼術(shù)提取物，每日一次，劑量為200mg/kg。每周測定隨機(jī)血糖，試驗結(jié)果見表3。
表3知母黃柏蒼術(shù)對GK糖尿病大鼠隨機(jī)血糖的影響
與正常組比##p＜0.01；與模型組比*p＜0.05，**p＜0.01。
試驗結(jié)果表明知母黃柏蒼術(shù)提取物能有效降低GK大鼠的隨機(jī)血糖。連續(xù)給予2周后，知母黃柏蒼術(shù)組GK大鼠的隨機(jī)血糖明顯下降，與模型組相比呈顯著性差異(p＜0.05，p＜0.01)。
實施例18知母黃柏蒼術(shù)提取物對GK糖尿病大鼠空腹血糖的影響 GK糖尿病大鼠隨機(jī)分為模型組，羅格列酮組，知母黃柏蒼術(shù)組。正常組為Wistar大鼠。試驗期間，知母黃柏蒼術(shù)組灌胃給予知母黃柏蒼術(shù)提取物，每日一次，劑量為200mg/kg。每周測定空腹血糖，試驗結(jié)果見表4。
表4知母黃柏蒼術(shù)對GK糖尿病大鼠空腹血糖的影響
與正常組比##p＜0.01；與模型組比*p＜0.05，**p＜0.01 試驗結(jié)果表明知母黃柏蒼術(shù)提取物能有效降低GK大鼠的空腹血糖，知母黃柏蒼術(shù)組給藥第3、4周血糖明顯降低，與模型組相比有顯著差異(P＜0.01)。
實施例19知母黃柏蒼術(shù)提取物對GK糖尿病大鼠葡萄糖耐量的影響 GK糖尿病大鼠隨機(jī)分為模型組，羅格列酮組，知母黃柏蒼術(shù)組。正常組為Wistar大鼠。試驗期間，知母黃柏蒼術(shù)組灌胃給予知母黃柏蒼術(shù)提取物，每日一次，劑量為200mg/kg。給藥四周后進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗，結(jié)果見圖1。
試驗結(jié)果表明知母黃柏蒼術(shù)能有效改善GK糖尿病大鼠的葡萄糖不耐受，提高機(jī)體對葡萄糖的處置能力。知母黃柏蒼術(shù)組在糖負(fù)荷60、90和120min后，顯著降低GK糖尿病大鼠血糖，與模型組相比，具有顯著性差異(p＜0.05) 實施例20知母黃柏蒼術(shù)提取物對GK大鼠糖化血紅蛋白的影響 表5是GK糖尿病大鼠糖化血紅蛋白的測定結(jié)果。表中數(shù)據(jù)顯示，GK糖尿病大鼠(模型組)的糖化血紅蛋白水平明顯高于正常組。知母黃柏蒼術(shù)提取物治療4周后，GK糖尿病大鼠血中的糖化血紅蛋白水平明顯降低，與模型組相比具有顯著性差異(p＜0.05)。
表5知母黃柏蒼術(shù)提取物對GK大鼠糖化血紅蛋白的影響
與正常對照組比△△p＜0.01，與模型組比*p＜0.05。
權(quán)利要求
1.一種含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于包括蒼術(shù)提取物、知母皂苷B-II和小檗堿；其中，蒼術(shù)提取物含有蒼術(shù)苷A或蒼術(shù)多糖或其組合；
所述含有蒼術(shù)苷A的蒼術(shù)提取物的提取方法如下蒼術(shù)用乙醇溶液提取后，所得提取物減壓除醇，分散于水中；然后乙酸乙酯萃取，棄去萃取液，水液經(jīng)非離子型大孔樹脂吸附，水洗除雜，10v/v％-50v/v％乙醇洗脫，洗脫液濃縮、干燥即得；
所述含有蒼術(shù)多糖的蒼術(shù)提取物的提取方法如下蒼術(shù)于水中加熱提取，水液合并后離心，濃縮，除去蛋白后，水液經(jīng)減壓蒸餾、透析、濃縮、離心和干燥得含有蒼術(shù)多糖的提取物；
所述含有蒼術(shù)苷A和蒼術(shù)多糖的蒼術(shù)提取物的提取方法如下蒼術(shù)用乙醇溶液提取后，所得提取物減壓除醇，分散于水中；然后乙酸乙酯萃取，棄去萃取液，水液經(jīng)非離子型大孔樹脂吸附，水洗除雜，10v/v％-50v/v％乙醇洗脫，洗脫液濃縮、干燥得含有蒼術(shù)苷A的提取物；經(jīng)乙醇提取后的蒼術(shù)于水中加熱提取，水液合并后離心，濃縮，除去蛋白后，水液經(jīng)減壓蒸餾、透析、濃縮、離心和干燥得含有蒼術(shù)多糖的提取物，將含有蒼術(shù)苷A的提取物與含有蒼術(shù)多糖的提取物混合，即得所述的含有蒼術(shù)苷A和蒼術(shù)多糖的蒼術(shù)提取物。
所述知母皂苷B-II和小檗堿總量占組合物的重量百分比為5％-95％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于所述蒼術(shù)提取物中蒼術(shù)苷A占組合物總量的重量百分比大于0.2％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于所述蒼術(shù)提取物還包括蒼術(shù)多糖，其提取方法如下蒼術(shù)于水中加熱提取，水液合并后離心，濃縮，除去蛋白后，水液經(jīng)減壓蒸餾、透析、濃縮、乙醇沉淀和干燥即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于所述蒼術(shù)多糖占組合物總量的重量百分比大于2％。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于所述組合物還包括芒果苷、知母皂苷A-III和知母皂苷B-III之一種或幾種組分。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于所述小檗堿還包括其藥學(xué)上可接受的鹽。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于所述藥學(xué)上可接受的鹽為鹽酸鹽或硫酸鹽。
8.一種含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于由知母提取物、黃柏提取物和蒼術(shù)提取物組成；其中，蒼術(shù)提取物含有蒼術(shù)苷A或蒼術(shù)多糖或其組合；
所述含有蒼術(shù)苷A的蒼術(shù)提取物由0.5-9重量份的蒼術(shù)用50v/v％-95v/v％乙醇溶液提取后，所得提取物減壓除醇，分散于水中；然后乙酸乙酯萃取，棄去萃取液，水液經(jīng)非離子型大孔樹脂吸附，水洗除雜，10v/v％-50v/v％乙醇洗脫，洗脫液濃縮、干燥得含有蒼術(shù)苷A的提取物；
所述含有蒼術(shù)多糖的蒼術(shù)提取物由0.5-9重量份的蒼術(shù)于水中加熱提取，水液合并后離心，濃縮，除去蛋白后，水液經(jīng)減壓蒸餾、透析、濃縮、離心和干燥得含有蒼術(shù)多糖的提取物；
所述含有蒼術(shù)苷A和蒼術(shù)多糖的蒼術(shù)提取物由0.5-9重量份的蒼術(shù)用50v/v％-95v/v％乙醇溶液提取后，所得提取物減壓除醇，分散于水中；然后乙酸乙酯萃取，棄去萃取液，水液經(jīng)非離子型大孔樹脂吸附，水洗除雜，10v/v％-50v/v％乙醇洗脫，洗脫液濃縮、干燥得含有蒼術(shù)苷A的提取物；經(jīng)乙醇提取后的蒼術(shù)于水中加熱提取，水液合并后離心，濃縮，除去蛋白后，水液經(jīng)減壓蒸餾、透析、濃縮、離心和干燥得含有蒼術(shù)多糖的提取物，將含有蒼術(shù)苷A的提取物與含有蒼術(shù)多糖的提取物混合，即得所述的含有蒼術(shù)苷A和蒼術(shù)多糖的蒼術(shù)提取物。
所述知母提取物由0.5-9重量份的知母先用10v/v％-95v/v％乙醇提取后，將提取液去乙醇，于大孔樹脂上樣，用20v/v％-95v/v％乙醇洗脫并收集，濃縮洗脫液并去乙醇，調(diào)節(jié)pH至4-10，以水飽和正丁醇反復(fù)萃取后得知母皂苷B-II重量百分比為10％-90％知母總皂苷提取物；
所述黃柏提取物由1重量份的黃柏先用10v/v％-90v/v％乙醇提取后，將提取液濃縮并去乙醇，于大孔樹脂上樣，再用20v/v％-95v/v％乙醇洗脫并收集，濃縮后制得，其中所含小檗堿的重量百分比為15％-90％。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于所述組合物還包括芒果苷提取物；其中，
所述知母提取物由0.5-9重量份的知母先用10v/v％-95v/v％的乙醇提取后，將提取液去乙醇，于大孔樹脂上樣，用20v/v％-95v/v％乙醇洗脫并收集，濃縮洗脫液并去乙醇，調(diào)節(jié)pH至4-10，以水飽和正丁醇反復(fù)萃取后得知母皂苷B-II重量百分比為10％-90％知母總皂苷提取物，再將萃取后水溶液的pH值調(diào)至中性，再以水飽和正丁醇反復(fù)萃取后得芒果苷重量百分比為5％-90％知母總黃酮提取物。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于所述組合物含有的芒果苷占組合物的重量百分比為2％-30％。
11.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于所述黃柏提取物中使用的大孔樹脂為離子交換與吸附樹脂。
12.一種含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于由知母提取物、黃柏提取物和蒼術(shù)提取物組成；其中，蒼術(shù)提取物含有蒼術(shù)苷A或蒼術(shù)多糖或其組合；
將1重量份的黃柏和0.5-9重量份的知母混合，用10v/v％-95v/v％乙醇提取，提取液除醇后于大孔樹脂上樣，再用20v/v％-95v/v％乙醇洗脫，所得洗脫液經(jīng)除醇、濃縮和干燥后即得；
所述含有蒼術(shù)苷A的蒼術(shù)提取物由0.5-9重量份的蒼術(shù)用50v/v％-95v/v％乙醇溶液提取后，所得提取物減壓除醇，分散于水中；然后乙酸乙酯萃取，棄去萃取液，水液經(jīng)非離子型大孔樹脂吸附，水洗除雜，10v/v％-50v/v％乙醇洗脫，洗脫液濃縮、干燥得含有蒼術(shù)苷A的提取物；
所述含有蒼術(shù)多糖的蒼術(shù)提取物由0.5-9重量份的蒼術(shù)于水中加熱提取，水液合并后離心，濃縮，除去蛋白后，水液經(jīng)減壓蒸餾、透析、濃縮、離心和干燥得含有蒼術(shù)多糖的提取物；
所述含有蒼術(shù)苷A和蒼術(shù)多糖的蒼術(shù)提取物由0.5-9重量份的蒼術(shù)用50v/v％-95v/v％乙醇溶液提取后，所得提取物減壓除醇，分散于水中；然后乙酸乙酯萃取，棄去萃取液，水液經(jīng)非離子型大孔樹脂吸附，水洗除雜，10v/v％-50v/v％乙醇洗脫，洗脫液濃縮、干燥得含有蒼術(shù)苷A的提取物；經(jīng)乙醇提取后的蒼術(shù)于水中加熱提取，水液合并后離心，濃縮，除去蛋白后，水液經(jīng)減壓蒸餾、透析、濃縮、離心和干燥得含有蒼術(shù)多糖的提取物，將含有蒼術(shù)苷A的提取物與含有蒼術(shù)多糖的提取物混合，即得所述的含有蒼術(shù)苷A和蒼術(shù)多糖的蒼術(shù)提取物。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于所述蒼術(shù)多糖占組合物的重量百分比大于2％。
14.根據(jù)權(quán)利要求8、9、10、12或13所述的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于所述的藥物組合物中知母皂苷B-II和小檗堿總量占組合物的重量百分?jǐn)?shù)為5％-95％。
15.根據(jù)權(quán)利要求8、9、10、12或13所述的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，其特征在于所述的蒼術(shù)提取物中蒼術(shù)苷A占組合物的重量百分比大于0.2％。
16.一種預(yù)防和治療糖尿病的制劑，包含權(quán)利要求1-15之一所述的含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物。
全文摘要
一種含有蒼術(shù)提取物的藥物組合物，可由蒼術(shù)提取物、知母皂苷B-II和小檗堿組成，還可由蒼術(shù)提取物、知母提取物和黃柏提取物組合而成，或從蒼術(shù)、知母和黃柏中直接提取而獲得。本發(fā)明組合物具有顯著的降低血糖作用，有效成分含量高，質(zhì)量容易控制，制備工藝易于產(chǎn)業(yè)化，可應(yīng)用于預(yù)防和治療糖尿病藥物。
文檔編號A61K31/704GK101757073SQ20101010788
公開日2010年6月30日 申請日期2010年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月9日
發(fā)明者黃成鋼, 范明松, 唐意紅, 李志雄, 孫兆林, 吳斌 申請人:中國科學(xué)院上海藥物研究所