專(zhuān)利名稱(chēng)：鬼臼毒素醇質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬制藥領(lǐng)域，涉及一種鬼白毒素醇質(zhì)體；本發(fā)明還涉及該醇質(zhì)體的制備方 法。
背景技術(shù)：
鬼臼毒素(Podophyllotoxin，PPT)是從小檗科植物桃耳七、八角蓮或六角蓮的根 及根莖中提取分離得到的木脂素類(lèi)化合物，它是世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦使用治療尖銳濕 疣(CA)的一線(xiàn)藥物，它的主要作用機(jī)理是通過(guò)其細(xì)胞毒作用使受人類(lèi)乳頭瘤(HPV)感染的 細(xì)胞死亡，常用的是0.5%的鬼臼毒素酊劑。CA占我國(guó)性傳播疾病的第二位，其病因是HPV感染人體后寄居于基底細(xì)胞等角質(zhì) 層形成細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，其DNA可整合到宿主細(xì)胞的DNA中并進(jìn)行表達(dá)，因而出現(xiàn)表皮的過(guò) 度增生甚至癌變。目前CA的治療主要由冷凍、激光、微波、免疫療法及外用藥物等，臨床主 要使用的就是鬼臼毒素酊劑。鬼臼毒素酊劑雖然能去除肉眼可見(jiàn)的病變，但過(guò)量大面積的 使用會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用，而脂質(zhì)體雖然能夠減少不良反應(yīng)，但是其作用也僅限于皮膚 表層，所以難以消除皮膚深部的HPV潛伏感染而導(dǎo)致其復(fù)發(fā)。2000年，以色列Touitou等的研究小組對(duì)另一種新型脂質(zhì)體——醇質(zhì)體 (Ethosomes)進(jìn)行了報(bào)道，其是在常規(guī)脂質(zhì)體中添加高濃度的醇制備的含醇脂質(zhì)體。醇質(zhì)體 不僅能夠滲入皮膚深部，還能夠與細(xì)胞膜脂質(zhì)融合，滲入細(xì)胞內(nèi)部，因此將鬼白毒素制成醇 質(zhì)體可以達(dá)到減少用藥量，增加療效減少?gòu)?fù)發(fā)及毒副作用的目的，具有一定的臨床意義。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有臨床常用的鬼白毒素酊劑在治療尖銳濕疣(CA)存在的、會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重毒 副作用的不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種鬼白毒素醇質(zhì)體，以提高鬼白毒素 在皮膚內(nèi)的滯留量，減少全身毒副作用及局部刺激性；本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題還包括 提出鬼白毒素醇質(zhì)體的制備方法。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供的載藥醇質(zhì)體的活性組分為鬼白毒素，鬼臼 毒素包封于醇質(zhì)體中，所用載藥脂質(zhì)材料為磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺或者二棕櫚酰磷脂 酰膽堿，鬼臼毒素醇質(zhì)體粒徑范圍為50 300nm。優(yōu)選地，本發(fā)明上述鬼臼毒素醇質(zhì)體的含醇量為20 50%，脂質(zhì)含量為2 5%， 載藥量為0. 1 1.0%，包封率為30 90%。本發(fā)明上述鬼白毒素醇質(zhì)體可通過(guò)下述兩種方法制備一、注入法將鬼白毒素與載藥脂質(zhì)材料置于密閉容器中，在磁力攪拌狀態(tài)下加入 乙醇使其溶解，恒速緩慢滴入2 5倍量的水繼續(xù)恒速攪拌0. 5 lh，于冰水浴中探頭超聲 后過(guò)孔徑為0. 22 0. 5 μ m的微孔濾膜，即得鬼臼毒素醇質(zhì)體。二、薄膜超聲法將鬼臼毒素與磷脂類(lèi)溶于甲醇與氯仿的體積比為(3-5) 1的混 合溶液中，溶解后加入茄型瓶中，在25 50°C下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，
3使脂質(zhì)在器壁上形成均勻薄膜，加入一定體積的乙醇水溶液，旋轉(zhuǎn)水合，與冰水浴中探頭超 聲0. 5 Ih后過(guò)孔徑為0. 22 0. 5 μ m的微孔濾膜，即得鬼臼毒素醇質(zhì)體。本發(fā)明鬼白毒素醇質(zhì)體性質(zhì)穩(wěn)定，可以按照常規(guī)方法將其制成貼劑、凝膠劑等多 種外用劑型。目前臨床常用的0. 5%鬼臼毒素酊劑含有60 80%的乙醇，高濃度的乙醇對(duì)皮膚 有強(qiáng)烈的刺激作用，且用藥面積過(guò)大會(huì)帶來(lái)全身毒性，且臨床實(shí)驗(yàn)證明該制劑由于不能作 用到皮膚深部而極其容易復(fù)發(fā)。隨后的實(shí)施例將證明，本發(fā)明含鬼白毒素醇質(zhì)體的局部刺激性較小，與酊劑及脂 質(zhì)體相比增加了皮膚內(nèi)的滯留量而減少了透過(guò)量，且醇質(zhì)體與細(xì)胞膜具有良好的生物相容 性，可以滲入細(xì)胞內(nèi)部，這對(duì)降低疾病的復(fù)發(fā)具有重要的意義。


圖1是鬼臼毒素醇質(zhì)體的脂質(zhì)囊泡的電鏡掃描圖。圖2是鬼臼毒素醇質(zhì)體的粒徑分布圖。圖3是鬼白毒素醇質(zhì)體與其他給藥系統(tǒng)24h大鼠皮膚體外累積滲透量。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例應(yīng)理解為僅用于說(shuō) 明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。在閱讀了本發(fā)明記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù) 人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等效變化和修飾同樣落入本發(fā)明權(quán)利要求所限 定的范圍。本發(fā)明以下實(shí)施例對(duì)制備得到的鬼白毒素醇質(zhì)體的粒徑、包封率和載藥量等指標(biāo) 采用以下措施進(jìn)行如下評(píng)價(jià)和表征1、鬼臼毒素醇質(zhì)體的透射電鏡(TEM)照片樣品加適量乙醇水溶液稀釋?zhuān)渭釉诟采w碳膜的銅網(wǎng)上，用2.0%磷鎢酸負(fù)染，于 透射電鏡下觀察，放大10萬(wàn)倍拍攝透射電鏡照片，如圖1所示。2、測(cè)定鬼臼毒素醇質(zhì)體的粒徑將鬼白毒素醇質(zhì)體用激光粒度分析儀(Mcomp 380/ZLS)測(cè)定鬼白毒素醇質(zhì)體的 粒徑，如圖2所示。3、測(cè)定鬼白毒素醇質(zhì)體的包封率采用微柱離心法分離鬼白毒素醇質(zhì)體和游離藥物，HPLC法測(cè)定游離藥物濃度，根 據(jù)公式計(jì)算其包封率。4、鬼白毒素醇質(zhì)體體外經(jīng)皮滲透特性考察采用Tp-5智能透皮擴(kuò)散儀，離體SD大鼠腹部皮膚為滲透屏障，以累計(jì)滲透量為指 標(biāo)，用HPLC測(cè)定鬼白毒素Mh的累積滲透速率及皮膚滯留量，研究鬼白毒素醇質(zhì)體的體外 滲透特性。實(shí)施例1稱(chēng)取35mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰膽堿含量> 95% )置于密閉容器 中，加入3mL無(wú)水乙醇置于磁力攪拌器上，在37°C，700rpm密閉條件下邊變攪拌邊緩慢注入
42倍量的水，注完后繼續(xù)攪拌5min，然后在冰水浴條件下探頭超聲0. 5h,最后過(guò)0. 45 μ m微 孔濾膜，即得。經(jīng)檢測(cè)，本實(shí)施例制得的鬼臼毒素醇質(zhì)體的平均粒徑為83nm，包封率為51 %。實(shí)施例2稱(chēng)取35mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰膽堿含量> 95% )溶解于5mL甲 醇氯仿(體積比為3 1)混合溶劑中，將該溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水浴 溫度下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去溶劑，并真空保持30min，使脂質(zhì)在器壁上形成均勻薄 膜，加入IOmL的30%乙醇水溶液，旋轉(zhuǎn)水合30min，室溫放置，于冰水浴中探頭超聲5min，過(guò) 0. 22 μ m微孔濾膜，即得。經(jīng)檢測(cè)，本實(shí)施例制得的鬼臼毒素醇質(zhì)體的平均粒徑為80nm，包封率為49. 5%。實(shí)施例3稱(chēng)取30mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰膽堿含量> 95% )溶解于3mL甲 醇氯仿(體積比為4 1)混合溶劑中，將該溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水浴 溫度下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去溶劑，并真空保持30min，使脂質(zhì)在器壁上形成均勻薄 膜，加入SmL的35%乙醇水溶液，旋轉(zhuǎn)水合30min，室溫放置，于冰水浴中探頭超聲2min，過(guò) 0. 50 μ m微孔濾膜，即得。經(jīng)檢測(cè)，本實(shí)施例制得的鬼臼毒素醇質(zhì)體的平均粒徑為157nm，包封率為80. 3%。實(shí)施例4稱(chēng)取35mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰膽堿含量> 95% )溶解于IOmL甲 醇氯仿(體積比為5 1)混合溶劑中，將該溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水浴 溫度下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去溶劑，并真空保持30min，使脂質(zhì)在器壁上形成均勻薄 膜，加入15mL的25%乙醇水溶液，旋轉(zhuǎn)水合30min，室溫放置，于冰水浴中探頭超聲lOmin， 過(guò)0. 30 μ m微孔濾膜，即得。經(jīng)檢測(cè)，本實(shí)施例制得的鬼臼毒素醇質(zhì)體的平均粒徑為497nm，包封率為30. 0%。實(shí)施例5稱(chēng)取30mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰膽堿含量> 95% )溶解于5mL甲 醇氯仿(體積比為3.5 1)混合溶劑中，將該溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水 浴溫度下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去溶劑，并真空保持30min，使脂質(zhì)在器壁上形成均勻 薄膜，加入IOmL的30%乙醇水溶液，旋轉(zhuǎn)水合30min，室溫放置，于冰水浴中探頭超聲5min， 過(guò)0. 40 μ m微孔濾膜，即得。經(jīng)檢測(cè)，本實(shí)施例制得的鬼臼毒素醇質(zhì)體的平均粒徑為lMnm，包封率為42. 3%。實(shí)施例5稱(chēng)取25mg鬼臼毒素、0. 5g大豆卵磷脂(磷脂酰膽堿含量> 95% )溶解于3mL甲 醇氯仿(體積比為4. 5 1)混合溶劑中，將該溶液置于500mL磨口茄型瓶中，在37°C水 浴溫度下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去溶劑，并真空保持30min，使脂質(zhì)在器壁上形成均勻 薄膜，加入8mL的30%乙醇水溶液，旋轉(zhuǎn)水合30min，室溫放置，于冰水浴中探頭超聲2min， 過(guò)0. 35 μ m微孔濾膜，即得。經(jīng)檢測(cè)，本實(shí)施例制得的鬼臼毒素醇質(zhì)體的平均粒徑為57nm，包封率為89. 5%。實(shí)施例6
以SD大鼠腹部皮膚為媒介，F(xiàn)ranza單室擴(kuò)散池為體外模型，用HPLC法測(cè)定透過(guò) 皮膚及皮膚內(nèi)的鬼白毒素含量，求算穩(wěn)態(tài)透皮速率，皮膚滯留量，考察不同給藥形式(鬼臼 毒素酊劑、不同劑量的鬼白毒素脂質(zhì)體、鬼白毒素游離藥物與空白醇質(zhì)體的物理混合物及 鬼臼毒素乙醇水混懸液)對(duì)鬼白毒素經(jīng)皮滲透的影響。研究結(jié)果如表1和圖3顯示，相較 于其它給藥系統(tǒng)鬼白毒素醇質(zhì)體具有較大的皮膚滯留量及較小的透皮速率。表1.鬼白毒素醇質(zhì)體與其他給藥系統(tǒng)24h大鼠皮膚皮膚滯留量
權(quán)利要求
1.一種鬼白毒素醇質(zhì)體，其特征在于，鬼白毒素包封于醇質(zhì)體中，載藥脂質(zhì)材料為磷脂 酰膽堿、磷脂酰乙醇胺或者二棕櫚酰磷脂酰膽堿，粒徑為50 300nm。
2.按權(quán)利要求1所述的鬼白毒素醇質(zhì)體，其特征在于，含醇量為20 50%，脂質(zhì)含量 為2 5%，載藥量為0. 1 1. 0%，包封率為30 90%。
3.權(quán)利要求1或2所述的鬼白毒素醇質(zhì)體的制備方法，其特征是，將鬼白毒素與載藥脂 質(zhì)材料置于密閉容器中，在磁力攪拌狀態(tài)下加入乙醇使其溶解，恒速緩慢滴入2 5倍量的 水繼續(xù)恒速攪拌0. 5 lh，于冰水浴中探頭超聲后過(guò)孔徑為0. 22 0. 5 μ m的微孔濾膜，即 得鬼白毒素醇質(zhì)體。
4.權(quán)利要求1或2所述的鬼白毒素醇質(zhì)體的制備方法，其特征是，將鬼白毒素與載藥脂 質(zhì)材料溶于甲醇與氯仿體積比為(3-5) 1的混合溶液中，溶解后加入茄型瓶中，在25 50°C下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，使脂質(zhì)在器壁上形成均勻薄膜，加入處方 量的乙醇水溶液，旋轉(zhuǎn)水合，于冰水浴中探頭超聲0. 5 Ih后過(guò)孔徑為0. 22 0. 5 μ m的 微孔濾膜，即得鬼白毒素醇質(zhì)體。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種鬼臼毒素醇質(zhì)體，鬼臼毒素包封于醇質(zhì)體中，載藥脂質(zhì)材料為磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺或者二棕櫚酰磷脂酰膽堿，粒徑為50～300nm。本發(fā)明鬼臼毒素醇質(zhì)體可制成貼片、凝膠等外用劑型，能減少用藥量，達(dá)到增加療效減少?gòu)?fù)發(fā)及毒副作用的目的。本發(fā)明還公開(kāi)了上述鬼臼毒素醇質(zhì)體的兩種制備方法。
文檔編號(hào)A61P31/20GK102144972SQ20101010801
公開(kāi)日2011年8月10日 申請(qǐng)日期2010年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月9日
發(fā)明者于燕燕, 馮年平, 施曉琴, 翁海挺, 趙繼會(huì) 申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué)