專利名稱：：一種天名精總內(nèi)酯提取物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥制劑
技術領域：
，涉及明還涉及該提取物的制備方法及其醫(yī)藥用途。種從中藥天名精中提取的有效部位，本發(fā)
背景技術：
：當前，惡性腫瘤-------癌癥已成為常見且嚴重威脅人類生命和生活質(zhì)量的主要疾病之一，從1996年以來全球每年新增確診的腫瘤病人都在1000萬以上，死亡700多萬人，到2008年全球腫瘤病人總數(shù)已超過1億，我國的腫瘤發(fā)病率同樣十分驚人，已成為我國人口死亡的第二大原因。現(xiàn)有的抗腫瘤化學藥物較多，如環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、長春堿、順鉑、卡鉑等，但這些藥物不僅僅殺死局部的癌細胞，而且會殺傷骨髓中的白細胞，引起白細胞減少，導致病人易患感染性疾病，化學藥物也會影響骨髓造血細胞和產(chǎn)生血小板的能力，另外，化學藥物引起的繼發(fā)性腫瘤可能在多年后出現(xiàn)，同時，還有許多副作用，如惡心、嘔吐、厭食、脫發(fā)、肝功能損害、機體抵抗力下降等，因此，化學藥物的應用有較大的限制?，F(xiàn)有中藥用于腫瘤治療分為兩類，一類為治療類用藥，如一些復方，但存在作用成分不明確、機理不清楚、效價不高等缺點，甚至有的復方中含有劇毒成分，如砒霜、天仙子、斑蝥等，應用不當，容易產(chǎn)生嚴重的毒副作用；另一類為腫瘤輔助用藥，用以減輕放療、化療的副作用，但不具備直接治療腫瘤作用。因此，臨床上急需高效低毒的抗腫瘤藥物。流行性感冒(influenza,流感)由流感病毒(influenzavirus)呼吸道感染所致，自1918年在美國流行并席巻全球以來，流行性感冒對人類造成的損失居傳染病之首，而已發(fā)生的流行性感冒中，80X是甲型H1N1流感。當前，甲型H1N1流感作為一種嚴重危害公眾健康的病毒性傳染病，正席巻全球，威脅著人類的生命，據(jù)我國衛(wèi)生部統(tǒng)計，截至2010年l月31日，全國31個省份累計報告甲型H1N1流感確診病例12.6萬例，其中死亡775例?，F(xiàn)有治療流感的化學藥品有一些，如金剛烷胺、金剛乙胺，扎那米韋、Oseltamivir(達菲膠囊)、利巴韋林等，雖有一定的治療效果，但副作用大，同時，對于變異和變型的流感病毒沒有效果。而中藥抗病毒的獨特療效已得到了全世界的公認，中藥治療流感是"多成分、多途徑、多靶點"起效，不管流感病毒如何變異和變型均有效，因此，從中藥中尋找和開發(fā)治療流感的藥物具有廣闊的前景。中藥天名精為菊科植物天名精CarpesiumabrotanoidesLinn.的全草，具有清熱解毒、破血、止血、殺蟲等功效，臨床上主用于治療疔腫瘡毒、喉痹、肝炎等。經(jīng)檢索，尚未見天名精總內(nèi)酯提取物抗腫瘤、抗流感病毒作用的報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種高效低毒的的天名精總內(nèi)酯提取物。本發(fā)明的另一個目的是提供上述天名精總內(nèi)酯提取物的制備方法。3本發(fā)明還有一個目的是提供上述天名精總內(nèi)酯提取物的的醫(yī)藥用途。本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是—種天名精總內(nèi)酯提取物，它是從中藥天名精中提取的含內(nèi)酯的提取物，其中總內(nèi)酯含量在50%以上。本發(fā)明天名精總內(nèi)酯提取物中，總內(nèi)酯含量優(yōu)選在70%以上更好。本發(fā)明天名精總內(nèi)酯提取物中，總內(nèi)酯含量更優(yōu)選在90%以上更好，100%最好。上述天名精總內(nèi)酯提取物的制備方法包括如下步驟(1)制備天名精粗提物取天名精藥材，加30%95%的乙醇進行提取，濾過，得提取液，將此提取液濃縮成稀浸膏，即得天名精粗提物。(2)將(1)步制得的天名精粗提物過大孔吸附樹脂，先用水或1%30%的低濃度乙醇洗脫，將該水或低濃度乙醇洗脫液棄去不用，除去極性大的雜質(zhì)，再用40%95%的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，干燥，即得天名精總內(nèi)酯提取物。如有必要，經(jīng)上述(2)步精制得的含內(nèi)酯的天名精提取物，可用乙酸乙酯進一步純化處理，以制得總內(nèi)酯含量高的天名精總內(nèi)酯提取物。其中(2)步中所述的大孔吸附樹脂為中低極性的大孔吸附樹脂，如D101、D201、D301、AB-8、X-5、HP-20等。其中(2)步中所述的干燥方法可以為烘干、真空干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等。上述天名精總內(nèi)酯提取物的醫(yī)藥用途為(l)將上述天名精總內(nèi)酯提取物用于制備治療癌癥的藥物，所述治療癌癥的藥物中含有有效劑量的上述天名精總內(nèi)酯提取物；(2)將上述天名精總內(nèi)酯提取物用于制備治療流行性感冒的藥物，所述治療流行性感冒的藥物中含有有效劑量的上述天名精總內(nèi)酯提取物。所述的藥物劑型可以是粉針、滴丸、片劑、緩釋片、硬膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑等任何一種現(xiàn)有藥物劑型。含有上述天名精總內(nèi)酯提取物的治療癌癥藥物，它所治療的癌癥主要包括胃癌、肝癌、腸癌、食道癌、乳腺癌、白血病、肺癌、宮頸癌等，它還可作為癌癥治療過程中的輔助用藥。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是經(jīng)藥效學及毒理學試驗證明，該天名精總內(nèi)酯提取物具有較好的抗癌和抗流感病毒的作用，且毒副作用小。不僅有效成分(內(nèi)酯類)明確，而且，總內(nèi)酯的含量越高，雜質(zhì)越少，其效果越好，這可減少服用量，在一定程度上也可減少毒副作用，更有利于保證藥物的安全性和有效性。同時，該天名精總內(nèi)酯提取物不同于化學藥物單一成分起效，而是"多成分、多途徑、多靶點"的作用，不僅毒副作用小，而且不管癌癥的種類、流感病毒如何變型，均有效。本發(fā)明以抗癌和抗流感病毒活性為先導，對天名精的有效部位進行了追蹤，以不同含量的天名精總內(nèi)酯提取物為藥物進行試驗，結果證實了天名精總內(nèi)酯提取物的抗癌和抗流感病毒作用。藥效學試驗試驗一、對小鼠移植S18。的抑制作用動物昆明種小鼠，體重1822g。藥物天名精總內(nèi)酯提取物(含總內(nèi)酯50%的由實施例1制得、含總內(nèi)酯70%的4由實施例2制得、含總內(nèi)酯90%的由實施例3制得)，分別給藥200mg/kg;陽性對照藥環(huán)磷酰胺(上海華聯(lián)制藥有限責任公司生產(chǎn)，批號071126)。瘤株S18。購自中南大學醫(yī)學院。試驗方法在無菌條件下，取荷瘤動物處死固定，用碘酊及酒精對操作部位的皮膚進行消毒，然后切開，選擇生長良好的瘤塊組織，置組織勻漿器中，按l:2的比例加入無菌生理鹽水制成細胞懸液，于試驗小鼠腋窩皮下接種0.2ml，每批接種50只，接種后次日隨機分組，每組10只，按表1所示劑量灌胃給藥，每日1次，連續(xù)10日，在末次給藥后處死小鼠，稱體重，摘瘤稱重，計算抑瘤率，試驗重復3次。表1對小鼠移植S1S。的抑制作用(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表l中三批重復試驗結果表明沃名精總內(nèi)酯對小鼠移植S，有明顯的抑制作用，是天名精總內(nèi)酯提取物抗癌的有效成分，且呈量效關系，隨著其中總內(nèi)酯含量的增高，其抗癌效果越好。試驗二、對小鼠移植胃癌的抑制作用動物昆明種小鼠，體重1822g。藥物天名精總內(nèi)酯提取物(含總內(nèi)酯50%的由實施例1制得、含總內(nèi)酯70%的由實施例2制得、含總內(nèi)酯90%的由實施例3制得)，分別給藥200mg/kg;陽性對照藥環(huán)磷酰胺(上海華聯(lián)制藥有限責任公司生產(chǎn)，批號071126)。瘤株胃癌株購自中南大學醫(yī)學院。試驗方法在無菌條件下，取荷瘤傳代鼠，對腹部皮膚進行消毒，然后切開，用無菌空注射器抽吸腹水，按l:2的比例用無菌生理鹽水進行稀釋，每批取雌性小鼠50只，每只接種O.2ml，接種后次日隨機分組，每組10只，按表2所示劑量灌胃給藥，每日1次，連續(xù)10日，記錄小鼠生存時間，計算生命延長率，試驗重復3次。表2對小鼠移植胃癌的抑制作用(X士SD)試驗組另u劑量動物數(shù)生存時間生命延長率次數(shù)(mg/kg)(只)(d)(%)第荷瘤對照組1010.4±1.12環(huán)磷酰胺50(ip)1016.8±1.9361.54天名精總內(nèi)酯提取物2001014.7±2,2641.35(含總內(nèi)酯50%)天名精總內(nèi)酯提取物2001015.2±1.8446.16次(含總內(nèi)酯70%)天名精總內(nèi)酯提取物2001016.5±2.3858.65(含總內(nèi)酯90%)第荷瘤對照組1011.2±1.54環(huán)磷酰胺50(ip)1018.8±2.0367.86天名精總內(nèi)酯提取物2001015.6±2.2139.29(含總內(nèi)酯50%)天名精總內(nèi)酯提取物2001016.3±1.0545.53次(含總內(nèi)酯70天名精總內(nèi)酯提取物2001017.4±1.6755.36(含總內(nèi)酯90第.荷瘤對照組109,9±2.25二次環(huán)磷酰胺50(ip)天名精總內(nèi)酯提取物200(含總內(nèi)酯50%)天名精總內(nèi)酯提取物200(含總內(nèi)酯70W天名精總內(nèi)酯提取物200(含總內(nèi)酯90%)1017.2±1.7773.741014.7±1.6048.49101015.4±2.4555.5617.1±0.8272.73表2中三批重復試驗結果表明天名精總內(nèi)酯對小鼠移植胃癌有明顯的抑制作用，能明顯延長小鼠生存時間，是天名精總內(nèi)酯提取物的有效成分，且呈量效關系，隨著其中總內(nèi)酯含量的增高，其抗癌效果增強。試驗三、抗流感病毒試驗雞胚10日齡雞胚購自湖南亞華種業(yè)股份有限公司。病毒株甲型H1N1流感病毒株由湖南省疾病預防控制中心提供，經(jīng)10日齡雞胚尿囊腔接種培養(yǎng)傳代，微量血凝試驗滴點病毒，血凝效價l:640以上，-701:保存，實驗時以無菌生理鹽水i:io稀釋后使用。藥物天名精總內(nèi)酯提取物(含總內(nèi)酯50%的由實施例1制得、含總內(nèi)酯70%的由實施例2制得、含總內(nèi)酯90%的由實施例3制得)；陽性對照藥病毒唑注射劑(批號091012，上海禾豐制藥有限公司)。試驗方法1、藥物對雞胚毒性的檢測用無菌生理鹽水對藥物進行連續(xù)稀釋。天名精總內(nèi)酯提取物和病毒唑注射劑各自均取4個濃度劑量進行雞胚尿囊腔接種，每一濃度接種4個胚，每個胚0.2ml，35t:培養(yǎng)，同步設生理鹽水對照，每個胚0.2ml。24h內(nèi)死亡的雞胚不計入藥物毒性作用的死亡數(shù)。連續(xù)觀察4d，記錄雞胚存活情況，確定藥物對雞胚的最大無毒限量(TC。)。2、藥物對流感病毒增殖抑制作用的檢測10日齡雞胚63個，隨機分組正常組3個；空白組4個(加生理鹽水0.4ml);病毒對照4個；陽性對照組4個；藥物組48個。分別用無菌生理鹽水將天名精總內(nèi)酯提取物稀釋成4個濃度，分別為200mg/ml、100mg/ml、50mg/ml和25mg/ml。將1:10稀釋的病毒液接種10日齡雞胚尿囊腔，每胚0.2ml，35"培養(yǎng)lh后，每胚注射上述各濃度的藥液0.2ml，35t:培養(yǎng)72h，4t:冰箱過夜，收集尿囊液，用微量血凝試驗滴點病毒血凝效價。同時，陽性對照組每胚注射0.2ml病毒唑，同步進行培養(yǎng)、結果1、藥物對雞胚毒性的檢測結果天名精總內(nèi)酯提取物對雞胚的無毒限量為200mg/ml;病毒唑注射劑的無毒限量為100mg/ml;無菌生理鹽水對雞胚無毒作用。2、藥物對流感病毒增殖抑制作用的檢測結果見表3。天名精總內(nèi)酯具有明顯的抑制流感病毒增殖的作用，是天名精總內(nèi)酯提取物的有效成分，且呈量效關系，隨著其中總內(nèi)酯含量的增高，其抗流感病毒效果增強。表3對流感病毒增殖的抑制作用組別濃度血凝效價血凝抑制倍數(shù)病毒對照組1:640天名精總內(nèi)酯提200mg/ml1:808取物(含總內(nèi)酯100mg/ml1:160490%)50mg/ml1:160425mg/ml1:3202天名精總內(nèi)酯提200mg/ml1:1604取物(含總內(nèi)酯lOOmg/ml1:160470%)50mg/ml1:320225mg/ml1:3202天名精總內(nèi)酯提200mg/ml1:1604取物(含總內(nèi)酯lOOmg/ml1:320250%)50mg/ml1:320225mg/ml1:6401病毒唑注射劑lOOmg/ml1:808空白對照組-—…正常組__—-急性毒性試驗為了考察天名精總內(nèi)酯提取物的安全性，特對其進行了急性毒性的考察研究，試驗方法結果如下藥物由實施例3制得的天名精總內(nèi)酯提取物(含總內(nèi)酯90%)。動物ICR小鼠，一級，鼠齡89周，體重1822g。方法改良寇法(參照《中藥藥理研究方法學》第113頁，人民衛(wèi)生出版社，第l版，陳奇主編)。結果LD5。為12.01g/kg，95X的可信限為11.3612.68g/kg。結果表明本發(fā)明藥物急性毒性小，安全度大。由上述藥效學和毒理學試驗的結果可以得出天名精總內(nèi)酯提取物提取物具有較好的抗癌和抗病毒作用，且LD5。為12.01g/kg，毒性很低。具體實施例方式下面結合具體實施方式對本發(fā)明作進一步的詳細描述。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于下述實施例。實施例1取天名精藥材100kg，加60%的乙醇回流提取2次，每次1小時，第1次加800kg60X的乙醇，第2次加600kg60%的乙醇，濾過，合并提取液，提取液回收乙醇并濃縮至相對密度1.05的稀浸膏，將此稀浸膏過D101大孔吸附樹脂，先用20%的乙醇洗脫至無色，將此20%乙醇洗脫液棄去，再用85%的乙醇洗脫至無色，收集此85%乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮成相對密度1.25的稠膏，真空干燥，即得到含總內(nèi)酯50%的天名精總內(nèi)酯提取物。實施例2取天名精藥材100kg，加80%的乙醇回流提取2次，每次1.5小時，第1次加700kg80%的乙醇，第2次加600kg80%的乙醇，濾過，合并提取液，提取液回收乙醇并濃縮至相對密度1.08的稀浸膏，將此稀浸膏過AB-8大孔吸附樹脂，先用30%的乙醇洗脫至無色，將此30%乙醇洗脫液棄去，再用70%的乙醇洗脫至無色，收集此70%乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮成相對密度1.10的清膏，噴霧干燥，即得到含總內(nèi)酯70%的天名精總內(nèi)酯提取物。實施例3取天名精藥材100kg，加90X的乙醇回流提取2次，每次2小時，第l次加800kg90X的乙醇，第2次加600kg90%的乙醇，濾過，合并提取液，提取液回收乙醇并濃縮至相對密度1.10的稀浸膏，將此稀浸膏過D201大孔吸附樹脂，先用水洗脫至無色，將此水洗脫液棄去，再用90%的乙醇洗脫至無色，收集此90%乙醇洗脫液，回收乙醇，真空干燥，即得到含總內(nèi)酯50%的天名精總內(nèi)酯提取物。將此天名精總內(nèi)酯提取物加5倍量水使混懸，用乙酸乙酯萃取4次，每次乙酸乙酯的用量與樣品體積相等，合并乙酸乙酯層，回收乙酸乙酯后，真空干燥，即得到含總內(nèi)酯90%的天名精總內(nèi)酯提取物。實施例4取天名精藥材100kg，加50%的乙醇回流提取3次，每次1小時，第1次加600kg50%的乙醇，第2、3次分別加400kg50%的乙醇，濾過，合并提取液，提取液回收乙醇并濃縮至相對密度1.03的稀浸膏，將此稀浸膏過D301大孔吸附樹脂，先用30%的乙醇洗脫至無色，將此30%乙醇洗脫液棄去，再用80%的乙醇洗脫至無色，收集此80%乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮成相對密度1.25的稠膏，真空干燥，即得到含總內(nèi)酯60%的天名精總內(nèi)酯提取物。實施例5取天名精藥材100kg，加90%的乙醇回流提取2次，每次1小時，第1次加700kg90%的乙醇，第2次加600kg90%的乙醇，濾過，合并提取液，提取液回收乙醇并濃縮至相對密度1.08的稀浸膏，將此稀浸膏過HP-20大孔吸附樹脂，先用30%的乙醇洗脫至無色，將此30%乙醇洗脫液棄去，再用70%的乙醇洗脫至無色，收集此70%乙醇洗脫液，回收乙醇，真空干燥，即得到含總內(nèi)酯70%的天名精總內(nèi)酯提取物。將此天名精總內(nèi)酯提取物加5倍量水使混懸，用乙酸乙酯萃取4次，每次乙酸乙酯的用量與樣品體積相等，合并乙酸乙酯層，回收乙酸乙酯后，再加5倍量水使混懸，再用乙酸乙酯萃取3次，每次乙酸乙酯的用量與樣品體積相等，合并乙酸乙酯層，回收乙酸乙酯，冷凍干燥，即得到含總內(nèi)酯100%的天名精總內(nèi)酯提取物。實施例6取所述的天名精總內(nèi)酯提取物300g，糊精700g，混合均勻，采用現(xiàn)有硬膠囊劑制備工藝，即制得含天名精總內(nèi)酯提取物的硬膠囊劑型的藥物。實施例7取所述的天名精總內(nèi)酯提取物3kg，植物油7kg，混合均勻，用明膠作囊殼材料，采用現(xiàn)有軟膠囊劑制備工藝，即制得含天名精總內(nèi)酯提取物的軟膠囊劑型的藥物。實施例8取所述的天名精總內(nèi)酯提取物300g，聚乙二醇e。。。700g，混合均勻，采用現(xiàn)有滴丸9劑制備工藝，即制得含天名精總內(nèi)酯提取物的滴丸劑型的藥物。實施例9取所述的天名精總內(nèi)酯提取物300g，可溶性淀粉500g，蔗糖200g，混合均勻，制粒，過篩，干燥，即制得含天名精總內(nèi)酯提取物的顆粒劑型的藥物。或?qū)⒅频玫念w粒進一步壓片，即制得含天名精總內(nèi)酯提取物的片劑的藥物。實施例10取所述的天名精總內(nèi)酯提取物420g，羥丙甲纖維素60g，羧甲基淀粉鈉8g，微晶纖維素10g，混合均勻，再加硬脂酸鎂lg作為潤滑劑，壓片，即制得含天名精總內(nèi)酯提取物的緩釋片劑型的藥物。實施例11取所述的天名精總內(nèi)酯提取物300g，溶于10000ml注射用水中(加少許乙醇使溶解)，采用粉針劑冷凍干燥制備工藝，即制得含天名精總內(nèi)酯提取物的粉針劑型的藥物。10權利要求一種天名精總內(nèi)酯提取物，它是從中藥天名精中提取的含內(nèi)酯的提取物，其特征在于其中總內(nèi)酯含量在50％以上；而且，該提取物是通過包括以下步驟的方法制得的(1)制備天名精粗提物取天名精藥材，加30％～95％的乙醇進行提取，濾過，得提取液，將此提取液濃縮成稀浸膏，即得天名精粗提物；(2)將(1)步制得的天名精粗提物過大孔吸附樹脂，先用水或1％～30％的低濃度乙醇洗脫，將該水或低濃度乙醇洗脫液棄去不用，除去極性大的雜質(zhì)，再用40％～95％的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，干燥，即得天名精總內(nèi)酯提取物。2.根據(jù)權利要求1所述的天名精總內(nèi)酯提取物，其特征在于所述的天名精總內(nèi)酯提取物中總內(nèi)酯含量在70%以上。3.根據(jù)權利要求2所述的天名精總內(nèi)酯提取物，其特征在于所述的天名精總內(nèi)酯提取物中總內(nèi)酯含量在90%以上。4.根據(jù)權利要求1所述的天名精總內(nèi)酯提取物，其特征在于制得該提取物的方法中，經(jīng)(2)步精制得的天名精總內(nèi)酯提取物，用乙酸乙酯進一步純化處理。5.根據(jù)權利要求1所述的天名精總內(nèi)酯提取物，其特征在于制得該提取物的方法中，(2)步中所述的大孔吸附樹脂為中低極性的大孔吸附樹脂。6.權利要求1-3中任一項所述的天名精總內(nèi)酯提取物的醫(yī)藥用途，其特征在于將其用于制備具有治療癌癥作用的藥物。7.權利要求1-3中任一項所述的天名精總內(nèi)酯提取物的醫(yī)藥用途，其特征在于將其用于制備具有治療流感作用的藥物。8.根據(jù)權利要求6或7所述的天名精總內(nèi)酯提取物醫(yī)藥用途，其特征在于所述的藥物劑型可以是粉針、滴丸、片劑、緩釋片、硬膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑等任何一種現(xiàn)有藥物劑型。全文摘要本發(fā)明公開了一種天名精總內(nèi)酯提取物。該提取物是從中藥天名精中提取、精制而得的含內(nèi)酯的提取物，其中總內(nèi)酯含量在50％以上。經(jīng)藥效學和毒理學試驗證明，該天名精總內(nèi)酯提取物具有較好的抗癌和抗流感病毒作用，毒副作用小。本發(fā)明還公開了上述天名精總內(nèi)酯提取物的制備工藝及其醫(yī)藥用途。文檔編號A61K36/28GK101773532SQ20101011323公開日2010年7月14日申請日期2010年2月24日優(yōu)先權日2010年2月24日發(fā)明者周小江,李雪晶申請人:周小江