專利名稱：一種從姬松茸中同時高效提取多糖和多酚的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食用菌有效成份提取方法技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從食藥用菌姬松茸
中同時高效提取多糖及多酚的方法。
背景技術(shù)：
姬松茸，又稱巴西蘑菇，是一種珍貴的食用真菌，屬于擔子菌亞門，層菌綱，散菌 目，蘑菇科，蘑菇屬，拉丁學(xué)名為Agaricus blazei Murill.。該菌原產(chǎn)于巴西、美國等地，日 本于上世紀70年代成功引種栽培，并于上世紀90年代初傳入我國。現(xiàn)在福建、浙江等地有 大量栽培。 目前，我國的姬松茸產(chǎn)品以鹽漬品、子實體干品及鮮品消費為主，深加工保健產(chǎn)品 研發(fā)和應(yīng)用還處在起步階段。研究表明，姬松茸的水提液及水溶性多糖具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免 疫、保肝、降血糖等廣泛的藥理活性。目前有關(guān)姬松茸多糖提取方法的研究報導(dǎo)較多，如公 開號CN1647695A，先用乙醇除去小分子雜質(zhì)，再用水提取水溶性的多糖，然后將水溶液直接 濃縮。這種方法雖然除去了部分雜質(zhì)，但是不能排除蛋白質(zhì)的干擾，而且提取率比較低；公 開號為CN1663965A，采用超臨界來除雜質(zhì)，然后水提，這種方法對實驗設(shè)備要求比較高，而 且蛋白的去除也不徹底，并且多糖的提取率也不高，活性較低。 現(xiàn)已了解在姬松茸中，不僅含有較多的多糖成分，而且還有較高的多酚成分。多酚 是一類具有多酚羥基化合物的總稱，具有抗氧化、抗衰老、抗癌防癌，預(yù)防心腦血管疾病等 多種生理和藥理活性。現(xiàn)在對姬松茸多糖的研究較多，且已有多種姬松茸多糖產(chǎn)品上市，然 而對多酚等其它的活性成分沒有很好的研究。因此，當我們利用現(xiàn)有的技術(shù)來提取分離姬 松茸多糖時，往往造成對其它的活性成分如多酚等被白白的浪費掉，這不但提高了多糖的 提取成本，而且造成了多酚等資源的浪費。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是，針對已有技術(shù)在從姬松茸中提取多糖時，不能排除蛋白質(zhì)干擾、提 取率與活性較低及不能同時提取多酚成分導(dǎo)致浪費等的缺陷，提供一種能從姬松茸中同 時、高效、低成本、去除蛋白雜質(zhì)較徹底的提取多糖和多酚的方法。
本發(fā)明目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn) —種從姬松茸中同時高效提取多糖和多酚的方法，該方法按以下步驟進行
(1)原料預(yù)處理干燥姬松茸子實體超微粉碎后，將其與蒸餾水按重量l : 30 50比例混合成混合液后，備用； (2)酶解處理將占混合液重量0. 05% 0. 5%的復(fù)合酶加入混合液中，調(diào)節(jié)pH 值至4-6，置震蕩器上在45 55。C下酶解15-120分鐘； (3)水提取將步驟(2)酶解液進行超聲或微波處理15-30分鐘后，將該液加熱至 90 IO(TC，提取30-60分鐘后，在6000轉(zhuǎn)/分下離心10分鐘，得上清液I和沉淀物；
(4)乙醇提取將步驟(3)沉淀物與濃度為50 60%的乙醇按重量體積1公
3斤30 50升比例混合，在80 9(TC下震蕩提取1小時，過濾得濾液II ;將濾渣與濃度 為90% 100%的乙醇按同上方法提取、過濾，棄濾渣，得濾液III ; (5)醇沉多糖將步驟(3)的上清液I和步驟(4)的濾液II及濾液III合并，用 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至原體積的五分之一后，再加入3倍體積的95%乙醇進行醇沉后，在 6000轉(zhuǎn)/分下離心10分鐘，得上清液和即為姬松茸多糖的沉淀物； (6)樹酯純化多酚將步驟(5)的上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至原體積的五分 之一后，過大孔樹酯，以50%的乙醇為洗脫液進行洗脫純化，得到姬松茸多酚。
所述復(fù)合酶為纖維素酶果膠酶中性蛋白酶=3-5:i: 2-4的混合物。 所述超聲處理為100 500Hz， 100 1000W ;所述微波處理為50 100Hz，300 800W。所述大孔樹脂為PNIOO、 PN400、 CDA40或YWD04B2。
本發(fā)明的有益效果是 1 、由于姬松茸先超微粉碎，更便于多糖和多酚的提取。 2、乙醇提取則破壞了細胞膜的脂質(zhì)結(jié)構(gòu)，也有利于細胞內(nèi)容物的溶出。 3、針對姬松茸本身具有纖維素、果膠和蛋白質(zhì)的干擾，不同配比的復(fù)合酶作用則
破壞了纖維素和果膠的阻礙，使多糖和多酚的提取更為有效。 4、超聲或微波也有利于活性物質(zhì)的溶出，同時蛋白酶能夠水解多糖和多酚中混入 的蛋白，提高多糖和多酚的純度。 5、用水-低濃度醇-高濃度醇的提取方式則有利于更好的將水溶性和脂溶性的物 質(zhì)提出，便于更好的提取多糖和多酚。 6、此方法高效，無毒，無污染，純度高，條件溫和，提出的成分具有不同的生物活 性，多糖具有抗腫瘤和免疫的活性，而多酚具有較強的抗氧化活性。 因此本發(fā)明將超微粉碎、酶解，輔助萃取，樹酯吸附有機結(jié)合，同時提取的多糖和 多酚，具有產(chǎn)量高、純度高的特點，對于挖掘姬松茸的潛在價值具有非常重要的意義。


圖1從姬松茸中同時高效提取多糖和多酚的工藝流程圖
具體實施例方式
通過以下具體實施例對本發(fā)明作進一步的具體說明，但應(yīng)該理解本發(fā)明并不受這 些內(nèi)容所限制。
對以下實施例所涉材料的說明 纖維素酶160000u/g，湖州禮來生物科技有限公司 果膠酶15000-25000u/g，天津市利華酶制劑廠 中性蛋白酶80000-100000u/g，蘇州維邦生物科技有限公司 大孔樹脂PNIOO :天津市海光化工有限公司 大孔樹脂PN400 :天津市海光化工有限公司 大孔樹脂CDA40 :天津市海光化工有限公司 大孔樹脂YWD04B2 ;天津市海光化工有限公司
實施例1 :(從姬松茸中同時高效提取多糖和多酚的方法1) (1)原料預(yù)處理干燥姬松茸子實體超微粉碎后，將其與蒸餾水按重量1 : 30比 例混合成混合液后，備用； (2)酶解處理將占混合液重量O. 1%的復(fù)合酶(纖維素酶果膠酶中性蛋白酶 =3:1: 4)加入混合液中，調(diào)節(jié)混合液pH值為4，并置震蕩器上在45t:酶解15分鐘；
(3)水提取處理將步驟(2)酶解液進行超聲(200Hz，800W)處理15分鐘后，將該 液加熱至9(TC，提取30分鐘后，在6000轉(zhuǎn)/分下離心時間10分鐘，得上清液I和沉淀物；
(4)乙醇提取將步驟(3)沉淀物與濃度為50%的乙醇按重量體積1公斤30升 比例混合，在8(TC下震蕩提取1小時，過濾得濾液II ;將濾渣與濃度為90%的乙醇按同上
方法提取、過濾，棄濾渣，得濾液III ; (5)醇沉多糖將步驟(3)的上清液I和步驟(4)的濾液II及濾液III合并，用 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至原體積的五分之一后，再加入3倍體積的95%乙醇進行醇沉后，在 6000轉(zhuǎn)/分下離心10分鐘，得上清液和即為姬松茸多糖的沉淀物； (6)樹酯純化多酚將步驟(5)的上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至原體積的五分 之一，過PN100大孔樹酯，以50%的乙醇為洗脫液進行洗脫得到姬松茸多酚。
上述條件下姬松茸多糖得率為13. 7% ，多酚得率為0. 92% 。
實施例2 :(從姬松茸中同時高效提取多糖和多酚的方法2) 本例中，步驟(1)將姬松茸超微粉碎子實體與蒸餾水按重量1 : 40混合；步驟
(2)將占混合液重量o. 2%的復(fù)合酶(纖維素酶果膠酶中性蛋白酶=4 : i : 3)加入
混合液中，在4『C，pH值4.5下，震蕩、酶解30分鐘；步驟(3)將步驟(2)酶解液進行超聲 (400Hz，200W)處理20分鐘后，將該液加熱至95。C，提取40分鐘；步驟(4)將步驟(3)沉淀 物與濃度為55%的乙醇按重量體積1公斤40升比例混合，在85t:下震蕩提取1小時；將 濾渣與濃度為95%的乙醇按同上方法提取、過濾；步驟(6)所用的大孔樹酯為PN400。其余 步驟、工藝同實施例1。上述條件下姬松茸多糖得率為15. 1%，多酚得率為1.34%。
實施例3 :(從姬松茸中同時高效提取多糖和多酚的方法3) 本例中，步驟(1)將姬松茸超微粉碎子實體與蒸餾水按重量1 : 45混合；步驟(2)
將占混合液重量o. 3%的復(fù)合酶(纖維素酶果膠酶中性蛋白酶=5:i:2)加入混合
液中，在5(TC，pH值5下，震蕩、酶解60分鐘；步驟(3)將步驟(2)酶解液進行微波(50Hz， 800W)處理25分鐘后，將該液加熱至95t:，提取50分鐘；步驟(4)將步驟(3)沉淀物與濃度 為55%的乙醇按重量體積1公斤45升比例混合，在85t:下震蕩提取l小時；將濾渣與濃 度為95%的乙醇按同上方法提取、過濾；步驟(6)所用的大孔樹酯為CDA40。其余步驟、工 藝同實施例l。上述條件下姬松茸多糖得率為14.8%，多酚得率為1.15%。實施例4:(從 姬松茸中同時高效提取多糖和多酚的方法4) 本例中，步驟(1)將姬松茸超微粉碎子實體與蒸餾水按重量1 : 50混合；步驟(2)
將占混合液重量0.45%的復(fù)合酶(纖維素酶果膠酶中性蛋白酶=4 : i : 3)加入混
合液中，在55t:， pH值5.5下，震蕩、酶解120分鐘；步驟(3)將步驟(2)酶解液進行微波 (100Hz，300W)處理30分鐘后，將該液加熱至IO(TC，提取60分鐘；步驟(4)將步驟(3)沉 淀物與濃度為60%的乙醇按重量體積1公斤50升比例混合，在9(TC下震蕩提取1小時； 將濾渣與濃度為100%的乙醇按同上方法提取、過濾；步驟(6)所用的大孔樹酯為YWD04B2。其余步驟、工藝同實施例1。上述條件下姬松茸多糖得率為18.6%，多酚得率為1.33%。
權(quán)利要求
一種從姬松茸中同時高效提取多糖和多酚的方法，其特征在于該方法按以下步驟進行(1)原料預(yù)處理干燥姬松茸子實體超微粉碎后，將其與蒸餾水按重量1∶30～50比例混合成混合液后，備用；(2)酶解處理將占混合液重量0.05％～0.5％的復(fù)合酶加入混合液中，調(diào)節(jié)pH值至4-6，置震蕩器上在45～55℃下酶解15-120分鐘；(3)水提取將步驟(2)酶解液進行超聲或微波處理15-30分鐘后，將該液加熱至90～100℃，提取30-60分鐘后，在6000轉(zhuǎn)/分下離心10分鐘，得上清液I和沉淀物；(4)乙醇提取將步驟(3)沉淀物與濃度為50～60％的乙醇按重量體積1公斤∶30～50升比例混合，在80～90℃下震蕩提取1小時，過濾得濾液II；將濾渣與濃度為90％～100％的乙醇按同上方法提取、過濾，棄濾渣，得濾液III；(5)醇沉多糖將步驟(3)的上清液I和步驟(4)的濾液II及濾液III合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至原體積的五分之一后，再加入3倍體積的95％乙醇進行醇沉后，在6000轉(zhuǎn)/分下離心10分鐘，得上清液和即為姬松茸多糖的沉淀物；(6)樹酯純化多酚將步驟(5)的上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至原體積的五分之一后，過大孔樹酯，以50％的乙醇為洗脫液進行洗脫純化，得到姬松茸多酚。
2. 按權(quán)利要求i所述的方法，其特征在于所述復(fù)合酶為纖維素酶果膠酶中性蛋白 酶=3-5 : i : 2-4的混合物。
3. 按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述超聲處理為100 500Hz， 100 1000W ; 所述微波處理為50 100Hz，300 800W。
4. 按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述大孔樹脂為PNIOO、 PN400、 CDA40或 YWD04B2。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從姬松茸中同時高效提取多糖和多酚的方法，屬于食用菌有效成份提取方法技術(shù)領(lǐng)域。該方法包括(1)原料預(yù)處理；(2)酶解；(3)水提取；(4)乙醇提??；(5)醇沉多糖；(6)樹脂純化多酚等步驟。本發(fā)明將超微粉碎、酶解，輔助萃取，樹脂吸附等工藝有機結(jié)合，同時提取不同生物活性的多糖和多酚，具有產(chǎn)量高、純度高、成本低、安全可靠的特點，對于挖掘姬松茸的潛在價值具有較大的意義。本發(fā)明可在保健食品企業(yè)推廣應(yīng)用。
文檔編號A61K36/07GK101768614SQ20101011877
公開日2010年7月7日 申請日期2010年3月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月5日
發(fā)明者呂國英, 張作法, 潘慧娟, 范雷法 申請人:浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院