專利名稱：紫金砂中香豆素和色原酮類提取物、其制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥、化學(xué)藥物領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及富含香豆素和色原酮類成分的紫金砂提取物、其制備方法及在治療疼痛和/或炎性疾病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
紫金砂為為傘形科當歸屬植物拐芹(Angelica polymorpha Maxim)的根及根莖。 主要功效為祛風、散寒、燥濕、止痛。現(xiàn)多用于感冒鼻塞、胃痛、腹痛、胸脅痛、風濕關(guān)節(jié)痛、跌打損傷、毒蛇咬傷等癥。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)紫金砂在抗菌、解痙、抗?jié)儭⒚庖哒{(diào)節(jié)等方面具有較好療效。紫金砂中主要含有香豆素類、揮發(fā)油等成分。迄今為止，國內(nèi)外學(xué)者從紫金砂中分離得到的化合物大多為直線呋喃型香豆素類，主要包括氧化前胡內(nèi)酯、石當歸素、歐前胡素、珊瑚菜素、異歐前胡素、佛手柑內(nèi)酯、異氧化前胡內(nèi)酯、獨活素、3-甲基白芷屬腦、異石當歸素等。有關(guān)紫金砂化學(xué)成分的藥理活性、應(yīng)用及制備方法，目前公開的發(fā)明專利有“紫金砂提取物及其醫(yī)藥用途”(申請?zhí)?00610105622. 6)，發(fā)明涉及紫金砂提取物，其提取方法， 含有該提取物的藥物組合物及其用于制備炎性疾病和/或疼痛的藥物產(chǎn)品的用途。此發(fā)明僅通過乙醇提取制得提取物，其提取方案沒有明確技術(shù)特征，有效成分不清楚。目前公開的專利還有“含有紫金砂提取物的藥物制備方法及其應(yīng)用”(申請?zhí)?00710051331. 8)，該發(fā)明涉及一種含有以揮發(fā)油為主的紫金砂提取物的藥物的制備方法及其在鎮(zhèn)痛、抗?jié)兗敖獐d攣藥物中的應(yīng)用，其提取物制備方法是通過分別以水、95%乙醇加熱回流提取制得提取物，再將兩部分混合得到紫金砂提取物。其涉及的化學(xué)成分為沒藥烷吉酮和水芹烯。由于中藥化學(xué)成分復(fù)雜，難以確定有效成分，因此，難以準確評價藥效，同時，由于中藥成分含量因產(chǎn)地、批次不同而不同，導(dǎo)致中成藥質(zhì)量難以控制。針對中藥研究中存在的缺點，本發(fā)明人對中藥紫金砂中各類化學(xué)成分進行系統(tǒng)分離和活性篩選研究，發(fā)現(xiàn)一類具有顯著抗炎、 鎮(zhèn)痛活性的提取物，其化學(xué)成分與上述兩個專利所披露的化學(xué)成分不同，主要為香豆素類、 色原酮類成分的組合。本發(fā)明的提取物的制備方法與前述專利明顯不同，在紫金砂粗提物基礎(chǔ)上又經(jīng)過溶劑萃取與大孔樹脂精制，其技術(shù)方案新穎，化學(xué)成分明確，質(zhì)量可控。國內(nèi)外相關(guān)研究中未見有從紫金砂中獲得抗炎鎮(zhèn)痛活性良好的香豆素類、色原酮類成分復(fù)合物的相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個方面涉及一種紫金砂提取物，其富含有香豆素類和色原酮類成分。 其中，香豆素類成分為水合氧化前胡素內(nèi)酯、栓翅芹烯醇、異歐前胡素、奧斯索(osthol)、 佛手柑內(nèi)酯、歐前胡素、二氫歐山芹素、異虎耳草素(isopimpinellin)、氧化前胡素乙基醚的一種或多種；色原酮類成分為3’ R_(+)_亥茅酚、3’ -0-乙?；ッ┓?、拐芹色原酮、 Iedebouriellol 的一種或多種。
在本發(fā)明的一個實施方案中，以提取物的總重量計算，上述香豆素類、色原酮類含量以重量百分比計合計為40-100%，50-100%，優(yōu)選為60-80%。在本發(fā)明的一個實施方案中，以提取物的總重量計算，水合氧化前胡素內(nèi)酯、栓翅芹烯醇、異歐前胡素、3’ R_(+)_亥茅酚、3’ -0-乙?；ッ┓游宸N成分的含量以重量百分比計分別為:10-30 %,0. 6-3. 0%U. 0-6. 0%,0. 3-1. 5%,0. 1-1. 0%，優(yōu)選為 15-25%, 1. 0-2. 0%Λ. 0-3. 5%,0. 5-1. 3%,0. 3-0. 7%。本發(fā)明的另一方面涉及上述的紫金砂提取物的制備方法，包括如下步驟1)將紫金砂以溶劑提取法或(X)2超臨界萃取法進行提取，濃縮后得到粗提物；2)取藥材粗提物在水中分散均勻，用低極性溶劑進行萃取，得到萃取液；3)萃取液蒸干，用低極性溶劑超聲洗滌，靜置，過濾沉淀，干燥。4)萃取后水溶液過大孔樹脂柱，乙醇洗脫，濃縮洗脫液，蒸干。5)將3)或4)所得提取物用硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯(0 100-100 0)梯度洗脫，劃分成F1-F20段；F3段用硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯12 1洗脫，再用石油醚 /乙酸乙酯(1 1)重結(jié)晶，得到單體化合物異歐前胡素；F4段用硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯10 1洗脫，再將F4-2反復(fù)用凝膠柱層析(氯仿甲醇1 1洗脫)，得到單體化合物奧斯索；F5段經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯(10 1-7 1)梯度洗脫，再將F5-1段經(jīng)RP-18柱，甲醇-水QO 80-80 20)梯度洗脫，得到歐前胡素、佛手柑內(nèi)酯；F5-2段經(jīng) RP-18柱，甲醇-水QO 80-80 20)梯度洗脫，得到二氫歐山芹素；F-7段經(jīng)硅膠柱層析， 石油醚-乙酸乙酯(8 1)洗脫，再將F7-3段經(jīng)RP-18柱，甲醇-水QO 80-80 20)梯度洗脫，得到拐芹色原酮；F7-4段反復(fù)用凝膠柱層析(氯仿甲醇1 1洗脫)，得到氧化前胡素乙基醚。F-8段經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯(6 1)洗脫，再將F8-2段經(jīng)RP-18 柱，甲醇-水(30 70-80 20)梯度洗脫，再經(jīng)過凝膠柱層析(氯仿甲醇1 1洗脫)得到栓翅芹烯醇、ledebouriellol ;F10段經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯(3 1)洗脫，再將 F10-2段經(jīng)RP-18柱，甲醇-水(30 70-80 20)梯度洗脫，再經(jīng)過凝膠柱層析(氯仿甲醇 1 1洗脫)得到3，R-(+)-亥茅酚；F10-3段經(jīng)過RP-18柱，甲醇-水GO 60-80 20) 梯度洗脫，得到3’ -0-乙?；ッ┓印惢⒍菟?。F-14段經(jīng)硅膠柱層析石油醚-乙酸乙酯(1 2)洗脫，F(xiàn)14-6段重結(jié)晶得到水合氧化前胡素內(nèi)酯。采用溶劑提取法提取時，包括以下步驟取適量紫金砂藥材粉碎，加入固液比為 1:6-1: 10的水、甲醇、乙醇或丙酮或者其混合溶劑，加熱回流提取，然后合并提取液，減壓濃縮至干。其中優(yōu)選的溶劑為含水的乙醇。提取時可以采用煎煮、加熱回流、超聲提取、 冷浸、滲漉、微波提取、高壓提取等方法。采用CO2超臨界萃取法進行提取時，包括以下步驟取適量紫金砂藥材粉碎，過 20-60數(shù)目的篩；選用超臨界萃取裝置，以無水乙醇作夾帶劑，在萃取溫度40-50°C、萃取壓力25-45MPa時提取-小時，將萃取物于40_50°C減壓蒸干。采用溶劑萃取法進行萃取時，包括以下步驟取藥材粗提物在水中分散，然后用加入體積比為1 2-1 6的低極性的酯類、烷烴類或醚類溶劑萃取2-3次，以去除其中的色素及焦油物。其中優(yōu)選的溶劑為石油醚、環(huán)己烷、乙酸乙酯。將萃取得到的乙酸乙酯萃取液蒸干，濃縮成膏狀，加入石油醚，超聲30分鐘后靜置，析出沉淀，過濾，沉淀用石油醚洗滌，干燥得到提取物。
采用大孔吸附樹脂法時，包括以下步驟取萃取后的水溶液蒸干，用10-30%的乙醇溶散均勻，上大孔樹脂柱，樹脂柱徑高比1 6-1 10，上樣后用4-8倍BV的10-40% 乙醇洗去雜質(zhì)，除雜流速為1. 5-6BV/h,再用3-10倍BV的60-95%乙醇洗脫，洗脫流速為 3-9BV/h，收集后者洗脫部分，減壓濃縮至干，得到富含有香豆素類和色原酮類成分的紫金砂提取物。大孔吸附樹脂包括非極性、弱極性、中等極性、弱堿性或弱酸性等任意一種類型的樹脂，如 HP20、D101、D4020、HPD400、AB-8、S_8、HZ-806、D4006、X_5、NKA-II、NKA-9 等，其中優(yōu)選的為弱極性或中等極性的樹脂，如HP20、AB-8、I-IPD400、D101、D4006、X-5等，其中最優(yōu)選AB-8型樹脂。本發(fā)明的又一方面涉及該提取物制備的藥物組合物，該提取物可以單獨或與其它任何中西藥物或食物按任意比例配伍，用于制備藥物或功能性食品，所制得的藥物或功能性食品可以是膠囊劑、片齊 、丸齊 、顆粒劑、口服液、糖漿、沖齊 、酒齊 、注射齊 、膏齊 、散齊 、飲料等。本發(fā)明藥物組合物中含有的載體或賦形劑包括藥劑學(xué)常規(guī)應(yīng)用的載體和賦形劑， 例如填充劑、粘合劑、防腐劑、矯味劑、稀釋劑、著色劑等，本發(fā)明藥物組合物可按本領(lǐng)域已知方法制備。本發(fā)明的又一方面涉及紫金砂提取物在制備治療炎癥和/或疼痛的產(chǎn)品或藥物中的應(yīng)用，其中的炎癥包括痛風性關(guān)節(jié)炎、風濕性關(guān)節(jié)炎、類風濕性關(guān)節(jié)炎等；其中的疼痛包括痛風性關(guān)節(jié)痛、風濕性關(guān)節(jié)痛、類風濕性關(guān)節(jié)痛、頭痛、腹痛、胃痛、跌打損傷痛等。本發(fā)明的提取物可采用本領(lǐng)域已知的或者本文公開的途徑給藥。給藥途徑包括但不局限于下述幾種外用(包括眼、鼻)；吸入(包括氣管內(nèi)、口腔內(nèi)、過皮或皮外的乳化劑或噴霧劑)；口服；注射或點滴(包括靜脈、動脈、皮下腹腔或肌肉內(nèi))；顱內(nèi)給藥(包括鞘膜、腦室內(nèi))。本發(fā)明提取物及其有效成分的用量取決于適用對象的年齡、體重和疾病的類型及嚴重程度等因素。本發(fā)明質(zhì)量控制方法可包括以下含量測定方法中的一種或兩種1.香豆素類、色原酮類成分總含量測定(紫外分光光度法)對照品溶液的配制精密稱取水合氧化前胡素內(nèi)酯對照品3. Omg，置IOml量瓶中， 加甲醇使其完全溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。標準曲線的制備精密吸取對照品溶液2. 5ml至25ml容量瓶中，定容。分別吸取 2. 0,3. 0,4. 0,5. 0,6. 0,6. 7ml，用甲醇稀釋定容到IOml量瓶中，搖勻，在307nm波長處測定吸光度。以水合氧化前胡素內(nèi)酯對照品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線。供試品溶液的配置取紫金砂提取物適量，加甲醇溶解定容至25ml量瓶中，搖勻。 精密吸取1ml，加甲醇定容至IOml量瓶中，搖勻。測定法取供試品溶液在307nm波長處測定吸光度，按標準曲線法計算樣品中香豆素、色原酮類成分總含量，即得。香豆素類、色原酮類成分含量測定(紫外分光光度法)2.紫金砂提取物中水合氧化前胡素內(nèi)酯、栓翅芹烯醇、3’R_(+)_亥茅酚、3’-0_乙?；ッ┓雍繙y定(高效液相法)色譜條件色譜柱用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；流動相甲醇-水；流速1. Oml/mim ；柱溫室溫。洗脫條件如表1 表1.梯度洗脫條件
權(quán)利要求
1.一種紫金砂提取物，其含有香豆素和色原酮類成分，其中，所述香豆素類成分為選自水合氧化前胡素內(nèi)酯、栓翅芹烯醇、異歐前胡素、奧斯索、佛手柑內(nèi)酯、歐前胡素、二氫歐山芹素、異虎耳草素、氧化前胡素乙基醚中的一種或多種，所述色原酮類成分為3’ R_(+)_亥茅酚、3’ -0-乙酰基亥茅酚、拐芹色原酮、Iedebouriellol的一種或多種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取物，其中，以提取物總重量計算，香豆素類和色原酮類成分以重量比計算分別為40-100%，優(yōu)選為60-80%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取物，以提取物的總重量計算，水合氧化前胡素內(nèi)酯、栓翅芹烯醇、異歐前胡素、3’ R_(+)_亥茅酚、3’ -0-乙酰基亥茅酚五種成分以重量比計算， 含量分別為:10-30 %,0. 6-3. 0%U. 0-6. 0%,0. 3-1. 5%^P 0. 1-1. 0% ；優(yōu)選為 15-25%, 1. 0-2. 0%Λ. 0-3. 5%,0. 5-1. 3%和 0. 3-0. 7%。
4.權(quán)利要求1-3中任一項所述提取物的制備方法，包括如下步驟1)將紫金砂藥材以溶劑提取法或CO2超臨界萃取法進行提取，濃縮后得到粗提物；2)取藥材粗提物在水中分散均勻，用低極性溶劑進行萃取，得到萃取液；3)萃取液蒸干，用低極性溶劑超聲洗滌，靜置，過濾沉淀，干燥；或者按照4)處理萃取液，將萃取液過大孔樹脂柱，乙醇洗脫，濃縮洗脫液，蒸干，得到產(chǎn)品。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其中，步驟1)中所述的溶劑提取法包括如下步驟 取適量紫金砂藥材粉碎，加入固液體積比為1 6-1 10的溶劑，加熱回流提取，然后合并提取液，減壓濃縮至干，其中所述溶劑選自水、甲醇、乙醇、丙酮、或者它們的混合物，優(yōu)選地，所述溶劑為乙醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其中，步驟1)所述的CO2超臨界萃取法，包括如下步驟取適量紫金砂藥材粉碎，過20-60目篩；以無水乙醇作夾帶劑，在萃取溫度40-50°C、 萃取壓力25-45MPa時提取1小時，將萃取物于40_50°C減壓蒸干。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其中，所述步驟幻包括以下步驟將步驟1)中的粗提物在水中分散均勻，然后按照1 2-1 4的體積比加入低極性的溶劑萃取2-3次，其中所述低極性的溶劑選自烷烴類、酯類或醚類，優(yōu)選為石油醚、環(huán)己烷、乙酸乙酯。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其中，所述步驟幻包括如下步驟將步驟幻中得到的萃取液蒸干，濃縮成膏狀，加入石油醚，超聲30分鐘后靜置，析出沉淀，過濾，沉淀用石油醚洗滌，干燥得到提取物。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其中，所述步驟4)包括如下步驟將步驟幻中萃取液蒸干，用10-30%的乙醇溶散均勻，上大孔樹脂柱，樹脂柱徑高比1 6-1 10，上樣后用4-8倍BV的10-40%乙醇洗去雜質(zhì)，除雜流速為1. 5-6BV/h,再用3-10倍BV的60-95% 乙醇洗脫，洗脫液流速為3-9BV/h，收集后者洗脫部分，減壓濃縮至干，得到紫金砂提取物， 其中大孔樹脂優(yōu)選為弱極性或中等極性的樹脂HP20、AB-8、I-IPD400、D101、D4006、X-5，更優(yōu)選為AB-8型樹脂。
10.根據(jù)含有權(quán)利要求1-3任一項所述提取物制備的藥物組合物，所述提取物可以單獨或與其他任何中西藥按任意比例配伍，所述藥物組合物的劑型為膠囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、口服液、糖漿、沖劑、酒劑、注射劑、膏劑、散劑。
11.含有權(quán)利要求1-3任一項所述提取物用于制備治療炎癥或疼痛的藥物的用途，其中，所述炎癥包括痛風性關(guān)節(jié)炎、風濕性關(guān)節(jié)炎和類風濕性關(guān)節(jié)炎，所述疼痛包括痛風性關(guān)節(jié)痛、風濕性關(guān)節(jié)痛、類風濕性關(guān)節(jié)痛、頭痛、腹痛、胃痛和跌打損傷痛。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種紫金砂提取物，所述提取物含有香豆素類和色原酮類成分。其中，香豆素類為水合氧化前胡素內(nèi)酯、栓翅芹烯醇、異歐前胡素、奧斯索、佛手柑內(nèi)酯、歐前胡素、二氫歐山芹素、異虎耳草素、氧化前胡素乙基醚的一種或多種；色原酮類為3’R-(+)-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、拐芹色原酮、ledebouriellol的一種或多種。本發(fā)明還涉及紫金砂提取物的制備方法、質(zhì)量控制方法、藥物組合物及其在制備治療疼痛和/或炎性疾病的藥物或產(chǎn)品中的應(yīng)用。本發(fā)明提取物的藥效學(xué)和急性毒性實驗表明，本發(fā)明提取物具有有效成分清楚、藥效作用強、毒副作用小，以及產(chǎn)品純度高，服用劑量較小，質(zhì)量可控等優(yōu)點。
文檔編號A61P19/06GK102188464SQ20101012715
公開日2011年9月21日 申請日期2010年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月16日
發(fā)明者于能江, 楊郁, 梁菲菲, 趙毅民 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所