專利名稱：一種抗流感病毒鼻黏膜吸收劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物制劑及制備方法，特別是涉及用于預(yù)防、治療感冒及流行性感冒領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
感冒、流行性感冒屬常見多發(fā)病，皆由病毒所致。
利用藥物制劑有效抑制流感病毒是當(dāng)前醫(yī)藥領(lǐng)域研究課題。研究證實(shí)EGCG和ECG對進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)流感病毒有顯著抑制作用，量效關(guān)系明顯，毒性低，安全范圍寬。
相關(guān)文獻(xiàn)，專利申請01106982.1“一種抗白血病藥物”公開了表沒食子兒茶素沒食子酸酯為主要原料的抗白血病藥物。用于治療急性早幼粒白血病，慢性粒細(xì)胞白血病，維甲酸耐藥早幼粒細(xì)胞白血病，是一種白血病基因調(diào)控劑，具有顯著抑制急性早幼粒白血病細(xì)胞HL-60的生長，并可誘導(dǎo)其凋亡的作用?？梢?，EGCG作為現(xiàn)有已知藥物已被公開，研究表明，其制劑對白血病細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制作用。
眾所周知，EGCG是一個(gè)單體，具有極強(qiáng)的供氫能力，但不可忽視，其鄰苯三酚結(jié)構(gòu)在溶液中更不穩(wěn)定，易氧化聚合。
《醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)》第13卷，“綠茶組分和療效研究進(jìn)展”公開了EGCG具有抗流感病毒的活性，然而，細(xì)胞外凝聚流感病毒，防止細(xì)胞吸收，能作為預(yù)防或消毒劑。
因此，此文猷資料表明，EGCG和ECG的藥理作用可用于預(yù)防感冒、流行性感冒。
相關(guān)文獻(xiàn)，《中國飼料》第16期，“茶多酚的生物學(xué)活性及應(yīng)用前景”公開了流感病毒一般是分散聚集，比病毒更小的表沒食子兒茶素沒食子酸酯與免疫反應(yīng)抗體一樣粘附在突起的表面上和病毒相粘連，而且表沒食子兒茶素沒食子酸酯還能粘附于動(dòng)物的細(xì)胞壁上，完成抑制感染的編碼。
上海諾德生特實(shí)業(yè)有限公司“兒茶素純品”，配料專題第3期，公開了EGCG有較強(qiáng)的收斂作用，對病原菌、病毒有明顯的抑制和殺滅作用，對消炎止瀉有明顯效果。它能夠覆蓋在突起的粘膜細(xì)胞上，防止流感病毒和粘膜結(jié)合，同時(shí)殺死病毒。
然而，EGCG和ECG的鄰苯三酚結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致它們在溶液中極易氧化、聚合，此為制劑的難題。
因此，研究利用EGCG和ECG化學(xué)特性，固態(tài)密封，避光保存等，大幅延長保質(zhì)期，提供一種較為穩(wěn)定的制劑，實(shí)際應(yīng)用于抗感冒、流感。
同時(shí)，考慮EGCG和ECG的氧化速度受到溶液劑PH影響明顯的特性，PH升高，氧化速度加快，研究利用溶劑的酸度以延長EGCG和ECG制劑的有效期。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一方面提供了一種以表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG)和表兒茶素-3-O-沒食子酸醅(ECG)的單體或復(fù)方為有效成分，直接給藥于流感病毒復(fù)制區(qū)，或通過鼻黏膜吸收，吸收速度快，有效抑制流感病毒。
本發(fā)明的另一方面提供一種鼻黏膜吸收劑制備方法，較為穩(wěn)定的表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG)和表兒茶素-3-O-沒食子酸酯(ECG)的單體或復(fù)方固態(tài)制劑，緩沖液的酸度有效地延長了制劑的有效使用期。
表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG)或表兒茶素-3-O-沒食子酸酯(ECG)呈固態(tài)制劑； 而且，醋酸一醋酸鈉緩沖液； 而且，固態(tài)制劑EGCG或ECG溶入緩沖液； 而且，鼻黏膜吸收劑濃度為6～7mg/ml。
因此，充分利用EGCG和ECG在固態(tài)條件下較穩(wěn)的特性，可大幅延長鼻黏膜吸收劑保質(zhì)期。充分考慮EGCG和ECG的氧化速度受到溶液劑PH影響明顯的特性，利用緩沖對控制溶劑的酸度以延長鼻黏膜吸收劑的有效使用期。
本發(fā)明的技術(shù)方案為 一、EGCG和ECG的主要理化性質(zhì)易發(fā)生氧化聚合反應(yīng)，固態(tài)較溶液穩(wěn)定.水溶性好，易受光、熱、氧、酸堿的影響。
制劑取EGCG按比例加入PEG混勻.制粒，顆粒低溫真空干燥，壓片.薄膜包衣，鋁箔真空包裝，每片含EGCG70mg，另取醋酸鈉189加冰乙酸9.8ml以蒸溜水溶解稀釋至1000ml.即得PH4.5的噴霧溶劑.分裝成10ml廠每瓶，使用時(shí)將藥片置入噴瓶內(nèi)溶解噴霧。
二、表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG)和表兒茶素-3-O-沒食子酸酯(ECG)體外抗流感病毒的實(shí)驗(yàn)研究。
1、實(shí)驗(yàn)材料 1.1細(xì)胞狗腎傳代細(xì)胞(MDCK)由武漢市疾病控制中心提供，開始實(shí)驗(yàn)時(shí)為第18代(實(shí)驗(yàn)結(jié)束細(xì)胞不超過35代)。細(xì)胞培養(yǎng)基是DMEM(GIBCOBRI公司產(chǎn)品)，細(xì)胞用含10％胎牛血清(三利生物制品廠產(chǎn)品)的DMEM培養(yǎng)基作為生長液，用含2ug/ml胰蛋白酶的DMEM培養(yǎng)基作為維持液；常規(guī)加入青霉素，鏈霉素。
1.2病毒株流感病毒H2N3型由北京中國疾病控制中心提供。將病毒按常規(guī)方法接種于9-11d齡雞胚尿囊腔，35℃孵育72h，收集尿囊液，以3000r/min離心15min，取上清液進(jìn)行血凝實(shí)驗(yàn)，將血凝滴度大于1∶320且細(xì)菌培養(yǎng)陰性的病毒液分裝，置-80℃保存?zhèn)溆谩?br> 1.3藥物EGCG和ECG用PBS溶解，配成終濃度為30mg/ml的溶液，經(jīng)0.22ul濾膜過濾除菌，密封，避光4℃冷藏保存。
2、實(shí)驗(yàn)方法及過程(略) 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 3.1EGCG對MDCK細(xì)胞的毒性作用EGCG對MDCK細(xì)胞的毒性作用主要表現(xiàn)在細(xì)胞折光性增強(qiáng).細(xì)胞變圓，粘連，破碎，脫落。且藥物對細(xì)胞的毒性作用在一定范圍內(nèi)隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞存活率降低。
用SPASSII.5軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，結(jié)果EGCG對MDCK細(xì)胞的TDs。，是88.04ul/ml，實(shí)驗(yàn)選擇的最大藥物濃度是32ug/ml。見表1 表1EGCG的藥毒結(jié)果 3.2EGCG對H2N3繁殖的抑制作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，EGCG有明顯抑制H2N3生物合成的作用，表現(xiàn)在隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞腫脹變圓，脫離并裂解等典型CPE逐漸減弱，病毒抑制率(細(xì)胞存活率)明顯升高。在藥物濃度為2～32ug/ml的范圍內(nèi)，隨著藥物濃度的增加，H2N3的抑制率增加，并表現(xiàn)出量效關(guān)系。MTT法檢測的EGCG對H2N3的ED50為1.47ug/ml，TI為60.1；血凝實(shí)驗(yàn)法檢測EGCG對H2N3的ED50為1.28ul/ml，TI為68.6。見表2 表2EGCG對H2N3生物合成的抑制作用 Tab 2Inbibitory effects of EGCG on biosynthesis of H2N3 *++++75％以上細(xì)胞病變(cytopathic up t075％)；+++750h～50％細(xì)胞病變(cytopathic in 75％～50％)；++50％～25％細(xì)胞病變(cytopathic in 50％～25％)；+25％一下細(xì)胞病變(cytopathic below 25％)；一無細(xì)胞病變(noncytopathic) Δlog[TCID50/0.01ml] 本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，藥物EGCG具有很強(qiáng)的體外抗流感病毒的作用，TI＞60，而且隨著藥物濃度的增加，其抗病毒效率增加。實(shí)驗(yàn)證實(shí)藥物抗H2N3的作用是在病毒進(jìn)入細(xì)胞后的某個(gè)環(huán)節(jié)產(chǎn)生。該藥毒性小，安全范圍較寬，屬目前少見的高效低毒抗感冒、流感病毒的化合物。
一、抗感冒病毒實(shí)用范例120例臨床觀察。
制劑EGCG、ECG噴霧鼻劑，暫定為天奇露。藥物濃度1.0％。
排除標(biāo)準(zhǔn)感冒多日，并發(fā)有肺炎、肺結(jié)核及其他肺、支氣管疾患者。
療效判斷給藥后1小時(shí)觀察 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3首批80例臨床療效統(tǒng)計(jì)(治療藥EGCG噴鼻劑)
表4EGCG和ECG復(fù)方制劑20例臨床觀察表(ECG噴鼻劑)
小結(jié)臨床實(shí)驗(yàn)表明，EGCG和ECG混合物噴霧劑能快速消除感冒、流感的卡他癥狀，用藥后均未出現(xiàn)發(fā)燒癥狀。其作用速度快、療效是目前極少見的高效低毒抗感冒、流感病毒制劑。
權(quán)利要求
1.一種抗流感病毒鼻黏膜吸收劑及其制備方法，其特征在于表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG)或表兒茶素-3-O-沒食子酸酯(ECG)呈固態(tài)制劑，醋酸-醋酸鈉緩沖液為溶劑，固態(tài)制劑EGCG或ECG溶入緩沖液，鼻黏膜吸收劑濃度為6-7mg/L。
2.一種抗流感病毒鼻黏膜吸收劑及其制備方法，其特征在于表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG)或表兒茶素-3-O-沒食子酸酯(ECG)呈固態(tài)制劑，醋酸-醋酸鈉緩沖液為溶劑，固態(tài)制劑EGCG或ECG溶入緩沖液，鼻黏膜吸收劑濃度為4-5mg/L。
3.一種抗流感病毒鼻黏膜吸收劑及其制備方法，其特征在于表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG)或表兒茶素-3-O-沒食子酸酯(ECG)呈固態(tài)制劑，醋酸-醋酸鈉緩沖液為溶劑，固態(tài)制劑EGCG或ECG溶入緩沖液，
其中EGCG含量為3.2mg/L，ECG含量為1.8mg/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗流感病毒鼻黏膜吸收劑及其制備方法，以表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG)或表兒茶素-3-O-沒食子酸醅(ECG)固態(tài)制劑為功效成分，以醋酸-醋酸鈉緩沖液為溶劑，將EGCG或ECG固態(tài)制劑溶入醋酸-醋酸鈉緩沖液，鼻黏膜吸收劑濃度為6-7mg/L。以EGCG或ECG為抗流感病毒功效成分制成的固、液分裝，使用時(shí)混溶，有效解決了EGCG或ECG在溶液中不穩(wěn)定，保質(zhì)期短的問題，延長EGCG或ECG制劑的試用期，本發(fā)明鼻黏膜吸收劑直接作用于流感病毒，吸收速度快，有效抑制流感病毒。
文檔編號A61K47/12GK101816645SQ20101013237
公開日2010年9月1日 申請日期2010年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月25日
發(fā)明者聶建群 申請人:江西康寶醫(yī)藥生物科技有限公司