專利名稱：殼聚糖對頭孢曲松鈉抑菌性能的協(xié)同增效方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及殼聚糖對頭孢曲松鈉抑菌性能的協(xié)同增效方法。
背景技術(shù)：
隨著抗生素的應(yīng)用日益廣泛，細(xì)菌對一些常用的藥物呈現(xiàn)不同程度的耐藥性。對于那些應(yīng)用時間越長，使用范圍越廣泛的藥物，細(xì)菌的耐藥性往往越嚴(yán)重。頭孢曲松鈉作為第三代頭孢菌素類抗生素也面臨同樣的問題，在通常的解決方法是使用內(nèi)酰胺酶抑制藥，制成內(nèi)酰胺類抗生素的復(fù)方制劑或者加大抗生素的劑量，但問題是無論加入何種有機(jī)成分或加大藥物劑量，藥物對人體的副作用也隨之增加。同時會造成無法對藥物的療程進(jìn)行正確的掌握，這樣就給病人帶來經(jīng)濟(jì)上、身體上以及精神上等多重負(fù)擔(dān)。至今為止，Au納米單質(zhì)已被報道協(xié)同β -內(nèi)酰胺類抗菌素聯(lián)合抗菌，研究表明具有較好的效果。有報道發(fā)現(xiàn)抗生素阿莫西林與納米銀粒子相互作用，在更低的抗生素劑量上能產(chǎn)生更好的抑菌效果。但是，納米材料，重金屬材料，其他藥物有費用較高，無法控制用量，生物毒性不明確等缺點，在使用藥物的過程中添加無生物毒性的天然材質(zhì)，通過改變藥物的吸收，運輸，作用方式，實現(xiàn)使用較低的藥物濃度而達(dá)到更好的抑菌效果成為一個有價值的研究方向。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種原料易得，成本低廉，操作簡單，以期設(shè)備簡單，適合于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的殼聚糖對頭孢曲松鈉抑菌性能的協(xié)同增效方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)殼聚糖對頭孢曲松鈉抑菌性能的協(xié)同增效方法，其特征在于，該方法是使用天然無毒的高分子物質(zhì)殼聚糖加入市售頭孢曲松鈉中對其抑菌性能進(jìn)行增效。所述的方法的具體步驟如下(1)配制殼聚糖醋酸溶液稱取殼聚糖溶于醋酸溶液，加熱攪拌至充分溶解，呈現(xiàn)無色透明的粘稠溶液，得到濃度為0. 5-5mg/ml的殼聚糖醋酸溶液；(2)配制頭孢曲松鈉溶液將市售的注射用頭孢曲松鈉加入無菌水，配制成 50-500mg/ml頭孢曲松鈉溶液待用；C3)在超聲攪拌條件下，將殼聚糖醋酸溶液按照質(zhì)量比1 (0. 5-20)同市售注射用頭孢曲松鈉溶液進(jìn)行混合，攪拌10-60min使二者充分混合，即可對頭孢曲松鈉抑菌性能進(jìn)行殼聚糖協(xié)同增效。所述的殼聚糖為DD > 90%的殼聚糖，所述的頭孢曲松鈉為常規(guī)市售抑菌劑，為注射用針劑。所述的醋酸溶液的體積濃度為2%。
步驟(1)所述的殼聚糖醋酸溶液的濃度優(yōu)選lmg/ml。步驟⑵所述的頭孢曲松鈉溶液的濃度優(yōu)選100mg/ml。步驟⑵所述的超聲攪拌的時間優(yōu)選30min。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明利用無毒害的天然物質(zhì)殼聚糖對常規(guī)的市售藥劑進(jìn)行協(xié)同增效，為有效的提高藥物的療效，特別是如何對低效及失效藥物進(jìn)行優(yōu)化改良提供了一種全新的思路。在只添加入少量殼聚糖的基礎(chǔ)上，大大降低原有頭孢曲松鈉的使用劑量，實現(xiàn)使用較低的藥物濃度而達(dá)到更好的抑菌效果。這為發(fā)展新的抑菌劑提供了一種新的經(jīng)驗方法。為未來研究多功能抑菌藥物，減少臨床診斷環(huán)節(jié)，減輕病人的負(fù)擔(dān)及痛苦打下了堅實的基礎(chǔ)。本發(fā)明原料易得，成本低廉，操作簡單，以期設(shè)備簡單，適合于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。


圖1本發(fā)明實施例1中使用的平板對峙生長法和混菌法示意圖；其中0為平板中心，藥液分貝加入孔1，2，3，4，線段b的長度即為抑菌圈半徑；圖2為本發(fā)明實施例1混菌法中單獨使用醋酸和殼聚糖醋酸溶液對大腸桿菌的抑制作用；其中a為2%醋酸溶液，b為lmg/ml殼聚糖溶液2%醋酸溶液；圖3為本發(fā)明實施例1混菌法中不同濃度藥液對大腸桿菌的抑制作用示意圖；其中a為20mg/ml頭孢曲松鈉，b為10mg/ml頭孢曲松鈉和殼聚糖混合溶液，c為 10mg/ml頭孢曲松鈉d為殼聚糖溶液；圖4為本發(fā)明實施例1平板對峙生長法中不同濃度藥液對大腸桿菌的抑制作用示意圖；其中a為2%醋酸溶液，b為lmg/ml殼聚糖溶液2%醋酸溶液，c為20mg/ml頭孢曲松鈉，d為0. 5mg/ml頭孢曲松鈉，e為0. 5mg/ml頭孢曲松鈉殼聚糖溶液。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。下面實施例以試驗大腸桿菌為例，測試殼聚糖對頭孢曲松鈉抑菌性能的協(xié)同增效性能，測試步驟方法如下(1)首先冷凍狀態(tài)下大腸桿菌(BH21)必須進(jìn)行激活以使其恢復(fù)活性，以的接種量將大腸桿菌菌種加入LB液體培養(yǎng)基，在恒溫振蕩水槽中以37. 5°C的溫度過夜培養(yǎng)復(fù)蘇。將培養(yǎng)得到的大腸桿菌菌液用LB液體培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，使其達(dá)到濃度1. OX IO7Cfu待用。(2)采用平板對峙生長法進(jìn)行試驗。在距離LB固體培養(yǎng)基平板中央30mm的四角用孔徑8mm的打孔器開孔，孔內(nèi)注入100 μ 1的藥液(分別為lmg/ml殼聚糖溶液，2%醋酸溶液，不同濃度頭孢曲松鈉和殼聚糖混合溶液)，于37. 5°C過夜，讓藥液完全進(jìn)入培養(yǎng)基。將第二步制備的大腸桿菌取800 μ 1均勻涂布在上步制備的培養(yǎng)基上。于37. 5°C培養(yǎng)M小時，觀察實驗結(jié)果。(3)采用混菌法進(jìn)行試驗。將藥液(分別為lmg/ml殼聚糖溶液，2%醋酸溶液，不同濃度頭孢曲松鈉和殼聚糖混合溶液)400 μ 1與第二步制備的大腸桿菌800 μ 1混合均勻， 并作用30分鐘，然后取800 μ 1混合液均勻涂布于平板上。于37. 5°C培養(yǎng)M小時，觀察實
驗結(jié)果。實施例1(1)配制殼聚糖醋酸溶液稱取0. Olg殼聚糖溶于10ml2%醋酸溶液，加熱攪拌至充分溶解，呈現(xiàn)無色透明的粘稠溶液，濃度為lmg/ml。將市售的注射用頭孢曲松鈉(Ig)加入IOml無菌水，配制成100mg/ml藥液待用。(2)在超聲攪拌條件下，將殼聚糖醋酸溶液按照質(zhì)量比1 0. 5同市售注射用頭孢曲松鈉溶液進(jìn)行混合，攪拌30min使二者充分混合來達(dá)到對頭孢曲松鈉抑菌性能進(jìn)行殼聚糖協(xié)同增效。(3)首先冷凍狀態(tài)下大腸桿菌(BH21)必須進(jìn)行激活以使其恢復(fù)活性，以的接種量將大腸桿菌菌種加入LB液體培養(yǎng)基，在恒溫振蕩水槽中以37. 5°C的溫度過夜培養(yǎng)復(fù)蘇。將培養(yǎng)得到的大腸桿菌菌液用LB液體培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，使其達(dá)到濃度1. OX IO7Cfu待用。(4)采用平板對峙生長法進(jìn)行試驗。在距離LB固體培養(yǎng)基平板中央30mm的四角用孔徑8mm的打孔器開孔，孔內(nèi)注入100 μ 1的藥液，于37. 5°C過夜，讓藥液完全進(jìn)入培養(yǎng)基。將第二步制備的大腸桿菌取800 μ 1均勻涂布在上步制備的培養(yǎng)基上。于37.5°C培養(yǎng) M小時，觀察實驗結(jié)果。從圖2，3中可以看出殼聚糖與頭孢曲松鈉混合溶液取得了很好的協(xié)同增效抑菌效應(yīng)，遠(yuǎn)超過二者單獨使用的效果。(5)采用混菌法進(jìn)行試驗。將藥液400 μ 1與第二步制備的大腸桿菌800 μ 1混合均勻，并作用30分鐘，然后取800 μ 1混合液均勻涂布于平板上。于37. 5°C培養(yǎng)M小時，觀
察實驗結(jié)果。從圖2，4中可以看出殼聚糖與頭孢曲松鈉混合溶液取得了很好的協(xié)同增效抑菌效應(yīng)，遠(yuǎn)超過二者單獨使用的效果。實施例2在超聲攪拌條件下，將殼聚糖醋酸溶液按照質(zhì)量比1 2同市售注射用頭孢曲松鈉溶液進(jìn)行混合，攪拌30min使二者充分混合來達(dá)到對頭孢曲松鈉抑菌性能進(jìn)行殼聚糖協(xié)同增效。從表1的抑菌圈直徑變化可以看出同樣取得較好的協(xié)同增效抑菌性能，超過二者單獨使用的功效。實施例3在超聲攪拌條件下，將殼聚糖醋酸溶液按照質(zhì)量比1 10同市售注射用頭孢曲松鈉溶液進(jìn)行混合，攪拌30min使二者充分混合來達(dá)到對頭孢曲松鈉抑菌性能進(jìn)行殼聚糖協(xié)同增效。從表1的抑菌圈直徑變化可以看出同樣取得較好的協(xié)同增效抑菌性能，超過二者單獨使用的功效。實施例4在超聲攪拌條件下，將殼聚糖醋酸溶液按照質(zhì)量比1 20同市售注射用頭孢曲松鈉溶液進(jìn)行混合，攪拌30min使二者充分混合來達(dá)到對頭孢曲松鈉抑菌性能進(jìn)行殼聚糖協(xié)同增效。從表1的抑菌圈直徑變化可以看出同樣取得較好的協(xié)同增效抑菌性能，超過二者單獨使用的功效。表1為本發(fā)明實施例1-4中頭孢曲松鈉溶液、殼聚糖溶液、以及頭孢曲松鈉和殼聚糖混合溶液同大腸桿菌作用的抑菌圈直徑變化
權(quán)利要求
1.殼聚糖對頭孢曲松鈉抑菌性能的協(xié)同增效方法，其特征在于，該方法是使用天然無毒的高分子物質(zhì)殼聚糖加入市售頭孢曲松鈉中對其抑菌性能進(jìn)行增效。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的殼聚糖對頭孢曲松鈉抑菌性能的協(xié)同增效方法，其特征在于，所述的方法的具體步驟如下(1)配制殼聚糖醋酸溶液稱取殼聚糖溶于醋酸溶液，加熱攪拌至充分溶解，呈現(xiàn)無色透明的粘稠溶液，得到濃度為0. 5-5mg/ml的殼聚糖醋酸溶液；(2)配制頭孢曲松鈉溶液將市售的注射用頭孢曲松鈉加入無菌水，配制成50-500mg/ ml頭孢曲松鈉溶液待用；(3)在超聲攪拌條件下，將殼聚糖醋酸溶液按照質(zhì)量比1 (0. 5-20)同市售注射用頭孢曲松鈉溶液進(jìn)行混合，攪拌10-60min使二者充分混合，即可對頭孢曲松鈉抑菌性能進(jìn)行殼聚糖協(xié)同增效。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的殼聚糖對頭孢曲松鈉抑菌性能的協(xié)同增效方法，其特征在于，所述的殼聚糖為DD >90%的殼聚糖，所述的頭孢曲松鈉為常規(guī)市售抑菌劑，為注射用針劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的殼聚糖對頭孢曲松鈉抑菌性能的協(xié)同增效方法，其特征在于，所述的醋酸溶液的體積濃度為2%。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的殼聚糖對頭孢曲松鈉抑菌性能的協(xié)同增效方法，其特征在于，步驟(1)所述的殼聚糖醋酸溶液的濃度優(yōu)選lmg/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的殼聚糖對頭孢曲松鈉抑菌性能的協(xié)同增效方法，其特征在于，步驟(2)所述的頭孢曲松鈉溶液的濃度優(yōu)選100mg/ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的殼聚糖對頭孢曲松鈉抑菌性能的協(xié)同增效方法，其特征在于，步驟( 所述的超聲攪拌的時間優(yōu)選30min。
全文摘要
本發(fā)明涉及殼聚糖對頭孢曲松鈉抑菌性能的協(xié)同增效方法，該方法是使用天然無毒的高分子物質(zhì)殼聚糖加入市售頭孢曲松鈉中對其抑菌性能進(jìn)行增效。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明殼聚糖對頭孢曲松鈉抑菌性能取得了優(yōu)異的協(xié)同增效抑菌，大大降低原有頭孢曲松鈉的使用劑量，實現(xiàn)使用較低的藥物濃度而達(dá)到更好的抑菌效果。
文檔編號A61K31/722GK102198144SQ201010132998
公開日2011年9月28日 申請日期2010年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月26日
發(fā)明者吳慶生, 張孟 申請人:同濟(jì)大學(xué)