專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種(±)-Murracarpin的合成方法及其抗炎鎮(zhèn)痛作用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種天然香豆素類(lèi)化合物的化學(xué)合成方法；本發(fā)明還涉及所述化合物的抗炎鎮(zhèn)痛新用途。
背景技術(shù)：
：(士)-Murracarpin化學(xué)名為(士)_8_(1，-甲氧基_2，-羥基_3，-甲基_1，-丁烯基)-7_甲氧基苯并吡喃，是一種簡(jiǎn)單香豆素類(lèi)化合物，其結(jié)構(gòu)如下所示jOTXΜθΟ(士)-Murracarpin是一種天然香豆素類(lèi)化合物，系傳統(tǒng)中藥材九里香的主要成分之一?？茖W(xué)家們已經(jīng)分離鑒定了該化合物(DananharMD,IndianJChemSerl9B，1980，1006-1008；WuTS,Phytochemistry,1989,28(1):293_294)。根據(jù)中藥古籍記載，九里香具有抗炎鎮(zhèn)痛等功效，但未見(jiàn)有對(duì)其中香豆素類(lèi)化合物抗炎鎮(zhèn)痛作用等生物學(xué)活性的研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)室利用小鼠扭體試驗(yàn)、熱板試驗(yàn)、耳朵腫脹試驗(yàn)及足腫脹試驗(yàn)等動(dòng)物篩選模型，對(duì)多種香豆素化合物進(jìn)行了抗炎鎮(zhèn)痛活性篩選研究。結(jié)果表明，(士Pmurracarpin顯示出極強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛活性。從天然產(chǎn)物中篩選具有生物活性的化合物作為先導(dǎo)化合物，不失為當(dāng)前新藥研發(fā)的一個(gè)重要途徑。曾有報(bào)告稱(chēng)，已對(duì)化合物(士Pmurracarpin進(jìn)行了酸水解半合成(ChowPff,Aust.J.Chem.1966,19,484-488；FujioI,Chemical&Ph￡irm￡iceutic￡ilBulletin,1986,34(9):3978-3981)。然而，到目前為止，還未見(jiàn)有對(duì)(士)-murracarpin進(jìn)行化學(xué)全合成的報(bào)道，也未見(jiàn)有(士)-murracarpin的抗炎鎮(zhèn)痛活性的相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)pechmann反應(yīng)、Duff反應(yīng)、醚化、Darzens反應(yīng)以及wittig(維蒂希)反應(yīng)等，對(duì)(士)-murracarpin進(jìn)行了化學(xué)全合成，總收率為1.05%。通過(guò)探討(士)-murracarpin的構(gòu)效關(guān)系，發(fā)現(xiàn)C-8位上含氧且含雙鍵的短鏈可能與(士)-murracarpin的抗炎鎮(zhèn)痛作用有關(guān)。這為開(kāi)發(fā)抗炎鎮(zhèn)痛活性更強(qiáng)的(士)-murracarpin衍生物提供了有益的探討。本發(fā)明的目的之一是，提供一種反應(yīng)條件較為溫和、實(shí)施操作相對(duì)簡(jiǎn)單的合成(±)-murracarpin^Tjfe；本發(fā)明的另一目的是，提供所述化合物(士)-murracarpin的抗炎鎮(zhèn)痛活性新用途。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所提供(士)-murracarpin的合成路線為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>具體步驟如下A)將1-10份7-羥基香豆素溶于10-1000份含有乙酸酐的無(wú)水丙酮中，緩慢滴加吡啶1-100份，室溫反應(yīng)0.5-3h，制得7-乙酰氧基香豆素。乙酸酐與無(wú)水丙酮的體積比為15。B)、將1-10份的7-乙酰氧基香豆素、1-10份的六亞甲基四胺在冰浴下加入到1-50份的三氟乙酸中，在60-100°C條件下反應(yīng)8-12h，制得7-羥基-8-甲?；愣顾?。C)將1-10份的7-羥基-8-甲酰基香豆素溶于10-1000份含有無(wú)水K2CO3的干燥丙酮中，加入1-100份的(Me)2S04，40°C條件下反應(yīng)l_5h，制得7-甲氧基-8-甲?；愣顾?。無(wú)水K2CO3與丙酮的比例為130。D)將10-100份的7-甲氧基_8_甲酰基香豆素與10-500份的1_氯丙酮加入1-1000份含有無(wú)水K2CO3的干燥乙腈中，N2保護(hù)，室溫?cái)嚢?2-48h，制得8-(2’-乙酰環(huán)氧乙烷基)-7-甲氧基香豆素。無(wú)水K2CO3與乙腈的比例為150。E)-450C、N2保護(hù)下，將1-10份的甲基三苯基溴化鱗溶于10-1000份的干燥THF(四氫呋喃)中，1-30份的LDA(二異丙胺鋰)。Ih后，加入1-10份的8-(2’_乙酰環(huán)氧乙烷基)-7_甲氧基香豆素，繼續(xù)反應(yīng)2h，制得8-(2’-丙烯基環(huán)氧乙烷基)-7-甲氧基香豆素。F)所得的8_(2’-丙烯基環(huán)氧乙烷基)-7_甲氧基香豆素溶于甲醇/10%H2SO4混和溶液中，在60°C條件下進(jìn)行酸水解3-8h，制得產(chǎn)物，S卩(士)-murracarpin。甲醇與10%H2SO4體積比為101-100。其中，步驟A)中乙酸酐無(wú)水丙酮吡啶的體積比優(yōu)選為10501，反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為Ih。步驟B)中的反應(yīng)溫度優(yōu)選為88°C，反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為10h。步驟C)中(Me)2SO4的優(yōu)選加入方式為分三批加入，每批間隔Ih后加入1/3倍，反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為3h。步驟D)中7-甲氧基-8-甲酰基香豆素與1-氯丙酮的優(yōu)選比例為13，反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為30h。步驟Ε)中加入甲基三苯基溴化鱗LDA8_(2，-乙酰環(huán)氧乙烷)_7_甲氧基香豆素的優(yōu)選比例為11.20.75。步驟F)中甲醇10%H2SO4的體積優(yōu)選為11，水解時(shí)間優(yōu)選為5h。本發(fā)明所提供合成(士)-murracarpin的方法，除了步驟E)中Wittig(維蒂希)反應(yīng)外，其余反應(yīng)條件溫和，操作及后處理簡(jiǎn)單。本發(fā)明提供了(士Pmurracarpin的抗炎鎮(zhèn)痛活性研究，包括1)小鼠二甲苯致耳朵腫脹試驗(yàn)；2)小鼠角叉菜膠致足腫脹試驗(yàn)；3)小鼠扭體試驗(yàn)；4)角叉菜膠誘導(dǎo)的胸腔積液模型；5)坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型。研究結(jié)果表明，(士Pmurracarpin、蛇床子素、傘形花內(nèi)酯均顯示良好的抑制炎癥作用，其中(士Pmurracarpin對(duì)二甲苯致耳朵腫脹、角叉菜膠致足腫脹的抑制能力最強(qiáng)，抑制率分別為64.29士3.41%,66.39士4.72%，呈顯著性差異，高于蛇床子素及傘形花內(nèi)酯；(士PMurracarpin、蛇床子素、傘形花內(nèi)酯均能降低醋酸致痛引起的扭體反應(yīng)，其中(士Pmurracarpin對(duì)醋酸所致的小鼠扭體次數(shù)減少最多，減少至14.2士3.3次，呈顯著性差異，扭體次數(shù)低于蛇床子素組及傘形花內(nèi)酯組，但仍然高于吲哚美辛組8.9士1.6次。50mg/kg的(士)-murracarpin抑制IL-1β表達(dá)能力最強(qiáng)，且與對(duì)照組呈差異性顯著(*Ρ<0.05)，強(qiáng)于地塞米松組(121.01士7.08ng/L)；50mg/kg的(士)-murracarpin可顯著性的抑制胸腔積液中TNFα的表達(dá)釋放(57.01士4.89ng/L)，明顯低于陰性對(duì)照組(100.07士6.64ng/L)；50mg/kg的(士)-murracarpin可顯著性地抑制胸腔積液中PGE2的表達(dá)釋放(30.34士6.87ng/L)，稍微強(qiáng)于地塞米松組(34.51士6.91ng/L)；(士)-Murracarpin對(duì)坐骨神經(jīng)組織中的IL-1β、TNFα及PGE2具有抑制表達(dá)釋放的作用。當(dāng)給予50mg/kg時(shí)，IL-Ιβ的含量為51.63士7.32叫/1，1順(！的含量為25.31士2.02ng/L,PGE2的含量為16.94士2.23ng/L。發(fā)明優(yōu)點(diǎn)及效果本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果在于，提供了一種合成(士)-murracarpin的方法，其所需原料易得，反應(yīng)條件較為溫和，實(shí)施操作相對(duì)簡(jiǎn)單。與此同時(shí)，還提供了化合物(士)-murracarpin在抗炎鎮(zhèn)痛中的新用途。具體實(shí)施方案以下所列實(shí)施例僅為幫助本領(lǐng)域技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。<實(shí)施例1>(士)-Murracarpin合成制備-I步驟A將8.lg(50mmol)的7_羥基香豆素、20ml的醋酸酐溶于IOOml的無(wú)水丙酮，緩慢滴加吡啶2ml。室溫下反應(yīng)lh，加入等體積的水可見(jiàn)有大量的白色沉淀。整個(gè)反應(yīng)體系用10倍體積的蒸餾水沖洗，收集沉淀即為7-乙酰氧基香豆素9.73g(95%)。直接用于下一步反應(yīng)。步驟B將7.5g(37mmol)的7_乙酰氧基香豆素在冰浴下加入50ml的三氟乙酸，激烈攪拌下加入六亞甲基四胺7.5g(53.5mmol)。冷卻至室溫后，開(kāi)始加熱至88°C，回流8h。蒸去多余的三氟乙酸，加入30ml的蒸餾水，60°C下繼續(xù)攪拌30min可見(jiàn)有大量白色沉淀。冷卻至0°C，過(guò)濾收集并用大量冰水沖洗沉淀可得粗品，得到灰黃色固體4g(56.9%)。直接用于下一步反應(yīng)。步驟C將3.8g(20mmol)的8_甲酰基_7_羥基香豆素和20g的無(wú)水K2CO3溶于320ml干燥的丙酮中，逐滴加入Me2SO46ml(40mmol)，在40°C下反應(yīng)3h，每隔Ih補(bǔ)充1/3的Me2SO4及無(wú)水K2C03。加入等體積的冰水終止反應(yīng)，大量冰水洗滌并收集白色沉淀，此產(chǎn)物經(jīng)無(wú)水乙醇重結(jié)晶可得白色晶體8-甲?；?7-甲氧基香豆素3.46g(85%)0步驟D取2g(10.6mmOl)的化合物8_甲?；鵢7_甲氧基香豆素與1_氯丙酮(2.6ml,32mmol)及8.8g(64mmol)的無(wú)水K2CO3溶于溶于IOOml的無(wú)水乙腈中，N2保護(hù)，室溫?cái)嚢?0h，加入200ml的水終止反應(yīng)。用2倍體積的乙酸乙酯萃取后再用3倍體積的氯仿萃取，合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌有機(jī)相，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸干可得粗品。經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯石油醚=1LRf=O.4)分離可得灰白色固體即8-(2，-乙酰環(huán)氧乙烷)-7_甲氧基香豆素1.378g(50.4%)。步驟E:-45°C下，取1.05g(3mmOl)的甲基三苯基溴化鱗(本實(shí)驗(yàn)室自制)懸浮于30ml的干燥THF中，干燥的N2保護(hù)，冰浴下用干燥的針筒逐滴注入1.775ml的LDA。反應(yīng)Ih后，加入500mg(2.25mmol)的8-(2’-乙酰環(huán)氧乙烷)-7-甲氧基香豆素，繼續(xù)反應(yīng)2h后，將溫度升至0°C，TLC跟蹤反應(yīng)，繼續(xù)反應(yīng)2h，原料消失。加水50ml終止反應(yīng)，加入50ml氯仿萃取三次，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鎂干燥，蒸去氯仿得到黃色油狀液體。經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯石油醚=11，Rf=0.5)分離可得白色固體并丙酮重結(jié)晶得到8-(2’_丙烯基環(huán)氧乙烷)-7_甲氧基香豆素95mg(19%)。步驟F取8-(2’_丙烯基環(huán)氧乙烷)-7_甲氧基香豆素2.58g(0.Olmol)在冰浴攪拌下加入30ml的甲醇與10%H2SO4(11，V/V)中，升溫至60°C，TLC跟蹤反應(yīng)，繼續(xù)反應(yīng)5h后原料消失。反應(yīng)結(jié)束后加30ml的冰水終止反應(yīng)，加入60ml氯仿萃取三次，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鎂干燥，蒸去氯仿得到白色固體，TLC顯示為(士)-murracarpin(Rf=0.4)，經(jīng)過(guò)柱層析得到1.45g(50.3%)0<實(shí)施例2>(士)-Murracarpin合成制備-II步驟A將8.lg(50mmol)的7_羥基香豆素、30ml的醋酸酐溶于120ml的無(wú)水丙酮，緩慢滴加吡啶3ml。室溫下反應(yīng)lh，加入等體積的水可見(jiàn)有大量的白色沉淀。整個(gè)反應(yīng)體系有10倍體積的蒸餾水沖洗，收集沉淀即為7-乙酰氧基香豆素9.75g(96%)。直接用于下一步反應(yīng)。步驟B將7.5g(37mmol)的7_乙酰氧基香豆素在冰浴下加入40ml的三氟乙酸，激烈攪拌下加入六亞甲基四胺7.5g(53.5mmol)。冷卻至室溫后，開(kāi)始加熱至90°C，回流llh。蒸去多余的三氟乙酸，加入30ml的蒸餾水，60°C下繼續(xù)攪拌30min可見(jiàn)有大量白色沉淀。冷卻至0°C，過(guò)濾收集并用大量冰水沖洗沉淀可得粗品，得到灰黃色固體2.81g(40.)。直接用于下一步反應(yīng)。步驟C將3.8g(20mmol)的8_甲?；?7-羥基香豆素和20g的無(wú)水K2CO3溶于320ml干燥的丙酮中，逐滴加入Me2SO46ml(40mmol)，在40°C下反應(yīng)4h。加入等體積的冰水終止反應(yīng)，大量冰水洗滌并收集白色沉淀，此產(chǎn)物經(jīng)無(wú)水乙醇重結(jié)晶可得白色晶體8-甲?；?7-甲氧基香豆素1.7g(42%)。步驟D取2g(10.6mmOl)的化合物8_甲?；鵢7_甲氧基香豆素與1_氯丙酮(0.9ml,10.6mmol)及8.8g(64mmol)的無(wú)水K2CO3溶于溶于IOOml的無(wú)水乙腈中，N2保護(hù)，室溫?cái)嚢?0h，加入200ml的水終止反應(yīng)。用2倍體積的乙酸乙酯萃取后再用3倍體積的氯仿萃取，合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗滌有機(jī)相，無(wú)水硫酸鎂干燥，減壓蒸干可得粗品。經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯石油醚=1LRf=O.4)分離可得灰白色固體即8-(2，-乙酰環(huán)氧乙烷)-7_甲氧基香豆素0.485g(17.6%)0步驟E:-45°C下，取L05g(3mmol)的甲基三苯基溴化鱗(本實(shí)驗(yàn)室自制)懸浮于30ml的干燥THF中，干燥的N2保護(hù)，冰浴下用干燥的針筒逐滴注入3.55ml的LDA。反應(yīng)Ih后，加入500mg(2.25mmol)的8-(2’-乙酰環(huán)氧乙烷)-7-甲氧基香豆素，繼續(xù)反應(yīng)2h后，將溫度升至0°C，TLC跟蹤反應(yīng)，繼續(xù)反應(yīng)2h，原料消失。加水50ml終止反應(yīng)，加入50ml氯仿萃取三次，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鎂干燥，蒸去氯仿得到黃色油狀液體。經(jīng)硅膠柱層析(乙酸乙酯石油醚=11，Rf=0.5)分離可得白色固體并丙酮重結(jié)晶得到8-(2’_丙烯基環(huán)氧乙烷)-7-甲氧基香豆素25.6mg(5.1%)0步驟F:取8-(2’_丙烯基環(huán)氧乙烷)-7_甲氧基香豆素2.58g(0.Olmol)在冰浴攪拌下加入30ml的甲醇與10%H2SO4(13，V/V)中，升溫至60°C，TLC跟蹤反應(yīng)，繼續(xù)反應(yīng)3h后原料消失。反應(yīng)結(jié)束后加30ml的冰水終止反應(yīng)，加入60ml氯仿萃取三次，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鎂干燥，蒸去氯仿得到白色固體，TLC顯示為(士)-murracarpin(Rf=0.4)，經(jīng)過(guò)柱層析得到0.98g(33.6%)0<實(shí)施例3>不同化合物對(duì)二甲苯致小鼠耳朵腫脹抑制率的影響實(shí)驗(yàn)方法參照ChenYF,TsaiHY,WuTS.Anti-inflammatoryandanalgesicactivitiesfromrootsofAngelicapubescens[J].Planta-Med.1995.61(1),2-8.取(士)-murracarpin、蛇床子素、傘形花內(nèi)酯，溶于吐溫-80溶液中，超聲溶解，配制成濃度10mg/kg。陽(yáng)性對(duì)照組給予0.5mg/kg地塞米松。每組6只大鼠，實(shí)驗(yàn)前禁食18-22小時(shí)，不禁水。給藥組分別腹腔注射(ig)給予各化合物。陽(yáng)性組ig地塞米松0.5mg/kg，空白對(duì)照組給予等體積的生理鹽水，連續(xù)給藥7d，末次給藥后lh，于小鼠右耳正反面均勻涂抹二甲苯30μ1/只，左耳為參照。Ih后脫頸處死，用8mm的打孔器在左右耳相同部位打下耳孔片，萬(wàn)分之一天平稱(chēng)重，計(jì)算腫脹度(mg)及腫脹度抑制率(％)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>表1不同的化合物對(duì)二甲苯致小鼠耳朵腫脹抑制率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>蛇床子素52.78士2.84*傘形花內(nèi)酯50.38士4.23*地塞米松57.59士2.71*陰性對(duì)照0.89士0.3_由表1可見(jiàn)，(士Pmurracarpin、蛇床子素、傘形花內(nèi)酯均顯示良好的抑制炎癥作用，其中(士Pmurracarpin對(duì)二甲苯致耳朵腫脹的抑制能力最強(qiáng)，抑制率為64.29士3.41%，呈顯著性差異，高于蛇床子素組及傘形花內(nèi)酯組。<實(shí)施例4>小鼠角叉菜膠致足腫脹試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法參照:ffinterCA,RisleyEA,NussGff.Carrageenin-inducededemainhindpawoftheratasanassayforanti~inflammatorydrug.ProSocExpBiolMed.1962.111,544-547.取(士Pmurracarpin、蛇床子素、傘形花內(nèi)酯，溶于吐溫-80溶液中，超聲溶解，配制成濃度10mg/kg。陽(yáng)性對(duì)照組給予0.5mg/kg地塞米松。每組6只大鼠，實(shí)驗(yàn)前禁食18-22小時(shí)，不禁水。給藥組分別ig給予各化合物。陽(yáng)性組ig地塞米松0.5mg/kg，空白對(duì)照組給予等體積的生理鹽水，連續(xù)給藥7d，末次給藥后lh，于每只小鼠右后足跖部皮下注射的角叉菜膠20μ1，左足為參照。并于注射后的3h用毛細(xì)管放大裝置測(cè)量小鼠的足體積。計(jì)算大鼠的足腫脹度(cm3)及腫脹度抑制率(％)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>表2不同的化合物對(duì)角叉菜膠致小鼠足腫脹抑制率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>_由表2可知，(士Pmurracarpin、蛇床子素、傘形花內(nèi)酯均顯示良好的抑制炎癥作用，其中(士Pmurracarpin對(duì)角叉菜膠致足腫脹的抑制能力最強(qiáng)，抑制率為66.39士4.72%，呈顯著性差異，高于蛇床子素組及傘形花內(nèi)酯組。<實(shí)施例5>小鼠扭體試驗(yàn)實(shí)I卞法參M=NakamuraH,ShimodaA,IshiiK,KadokawaT.Centralandperipheralanalgesicactionofnon-acidicnon-steroidalanti-inflammatorydrugsinmiceandrats[J].ArchivesInternationalPharmacodynamicTherapy.1986.282，16-25.(士)-MurraCarpin、蛇床子素、傘形花內(nèi)酯溶于1%吐溫_80溶液中，超聲溶解，配制成濃度10mg/kg。陽(yáng)性對(duì)照組給予吲哚美辛10mg/kg。每組6只大鼠，實(shí)驗(yàn)前禁食18-22小時(shí)，不禁水。給藥組分別ig給予各化合物。陽(yáng)性組ig吲哚美辛10mg/kg，空白對(duì)照組給予等體積的生理鹽水，連續(xù)給藥7d，末次給藥后lh，于腹腔注射0.6%醋酸0.2ml/只，同時(shí)用秒表計(jì)時(shí)，記錄在注射醋酸溶液后15min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)(包括腹部收縮內(nèi)凹，伸展后肢，臀部抬高，蠕行等陽(yáng)性行為)。表3不同的化合物對(duì)醋酸所致的小鼠扭體次數(shù)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由表3可知，(士Pmurracarpin、蛇床子素、傘形花內(nèi)酯均能降低醋酸致痛引起的扭體反應(yīng)，其中(士Pmurracarpin對(duì)醋酸所致的小鼠扭體次數(shù)減少最多，減少至14.2士3.3次，呈顯著性差異，扭體次數(shù)低于蛇床子素組及傘形花內(nèi)酯組。但仍然高于吲哚美辛組8.9士1.6次。<實(shí)施例6>角叉菜膠誘導(dǎo)的胸腔積液模型實(shí)驗(yàn)方法參照HaradaY,HatanakaK,KawamuraM,etal.RoleofprostaglandinHsynthase-2inprostaglandinE2formationinratcarrageenin-inducedpleurisy[J].Prostaglandins.1996,5119-33.將(士)_murracarpin溶于吐溫-80溶液中，超聲溶解，配制成濃度50、25及12.5mg/kg(劑量在事先的動(dòng)物模型確定)。陽(yáng)性對(duì)照組給予0.5mg/kg地塞米松。滲出液中IL-10、TNFa、PGE2的含量檢測(cè)均嚴(yán)格按照ELISA試劑盒(美國(guó)R&D公司)方法執(zhí)行。每組6只大鼠，實(shí)驗(yàn)前禁食18-22小時(shí)，不禁水。將大鼠常規(guī)75%酒精消毒、3%戊巴比妥(0.lml/100g)麻醉后，仰立位固定在手術(shù)臺(tái)上，選右鎖骨中線第7-8肋間交界處作為穿刺點(diǎn)，刺入胸腔時(shí)感覺(jué)有落空感時(shí)，注射入2%角叉菜膠0.2ml。試驗(yàn)組在手術(shù)前30min給予50、25及12.5mg/kg,陽(yáng)性對(duì)照組給予0.5mg/kg地塞米松。陰性對(duì)照組給予等量生理鹽水。6h后，腹主動(dòng)脈放血處死大鼠，打開(kāi)胸腔抽取滲出液，4°C保存，待檢測(cè)滲出液中IL-13、TNFa、PGE2的含量。胸膜炎各組大鼠胸腔內(nèi)注射2%角叉菜膠6h后可見(jiàn)有胸腔積液，(士Pmurracarpin治療組大鼠胸腔內(nèi)的胸腔積液明顯比模型組少。炎性積液中的IL-13表達(dá)情況由表4可知，(士Pmurracarpin抑制IL-10表達(dá)能力最強(qiáng)，且與對(duì)照組呈顯著性差異(*P<0.05)，強(qiáng)于地塞米松組(121.01士7.08ng/L)。由表5可知，50mg/kg的(士)-murracarpin可顯著性的抑制胸腔積液中TNFa的表達(dá)釋放(57.01士4.89ng/L)，顯著低于陰性對(duì)照組(100.07士6.64ng/L)。表4.不同劑量的(士)-murracarpin對(duì)胸腔積液中IL_10的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表5.不同劑量的(士)-murracarpin對(duì)胸腔積液中TNFa的影響化合物TNFa(ng/L)50mg/kg白勺(+)-murracarpin57.01士4.89*25mg/kg白勺(+)-murracarpin73.18士4.51*12.5mg/kg白勺(+)-murracarpin84.94士8.42*地塞米松64.67士8.96*陰性對(duì)照100.07士6.64表6.不同劑量的(士)-murracarpin對(duì)胸腔積液中PGE2的影響化合物PGE2(ng/L)50mg/kg白勺(+)-murracarpin30.34士6.87*25mg/kg白勺(+)-murracarpin50.61士8.21*12.5mg/kg白勺(+)-murracarpin57.97士7.14*地塞米松34.51士6.91*陰性對(duì)照78.63士5.69由表6可知，(士)-murracarpin可顯著性的抑制胸腔積液中PGE2的表達(dá)釋放(30.34士6.87ng/L)，稍微強(qiáng)于地塞米松組(34.51士6.91ng/L)。<實(shí)施例7>坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型實(shí)驗(yàn)方法參照:0kamatoK,MartinDP,SchmelzerJD,etal.Pro-andanti-inflammatorycytokinegeneexpressioninratsciaticnervechronicconstrictioninjurymodelofneuropathicpain[J].ExperimentalNeurology.2001，169:386_391.將大鼠常規(guī)75%酒精消毒、3%戊巴比妥(0.lml/100g)麻醉后，仰立位固定在手術(shù)臺(tái)上，于右側(cè)股骨中段常規(guī)切開(kāi)皮膚和皮下組織，鈍性分離肌層，找到并分離坐骨神經(jīng)主干，用“3-0”鉻制羊腸線結(jié)扎4個(gè)，每個(gè)結(jié)間距約1mm，松緊度以稍微影響血管運(yùn)行為準(zhǔn)，對(duì)照組僅暴露坐骨神經(jīng)而不結(jié)扎。然后逐層縫合傷口。試驗(yàn)組在手術(shù)前30min給予50、25及12.5mg/kg,陽(yáng)性對(duì)照組給予0.5mg/kg地塞米松，陰性對(duì)照組給予等量生理鹽水，待動(dòng)物清醒后歸籠飼養(yǎng)觀察7天。腹主動(dòng)脈放血處死大鼠。切開(kāi)傷口，在神經(jīng)結(jié)扎處上游取下1.5cm坐骨神經(jīng)，生理鹽水漂洗一下，4°C保存。待全部大鼠處死后，取三段坐骨神經(jīng)加入1mlpH為7.4的PBS緩沖液，進(jìn)行組織勻漿，3000g4°C離心，取上清夜4°C保存，檢測(cè)坐骨神經(jīng)組織中的IL-13、TNFa及PGE2的含量。由表7可見(jiàn)，(士)-murracarpin對(duì)坐骨神經(jīng)組織中的IL_1^具有較強(qiáng)的抑制表達(dá)釋放的作用，但均未呈顯著性差異。當(dāng)給予50mg/kg時(shí)，IL-13的含量為(51.63±7.32ng/L)，明顯高于地塞米松的抑制作用。表7.不同劑量的(士)_murracarpin對(duì)坐骨神經(jīng)組織中IL-10的影響_化合物_IL-10(ng/L)50mg/kg白勺(+)-murracarpin25mg/kg白勺(+)-murracarpin12.5mg/kg白勺(+)-murracarpin地塞米松陰性對(duì)照_表8.不同劑量的(士)-murracarpin對(duì)坐骨神經(jīng)組織中TNFa的影響_51.63士7.3263.56士7.6569.83士16.0766.91士33.0874.85士20.13化合物TNFa(ng/L)50mg/kg白勺(+)-murracarpin25mg/kg白勺(+)-murracarpin12.5mg/kg白勺(+)-murracarpin地塞米松陰性對(duì)照25.31士2.0234.34士5.1237.63士11.6236.51士4.0844.24士1.93_由表8可知，(士)-murracarpin對(duì)坐骨神經(jīng)組織中TNFa的影響與對(duì)IL-13的影響類(lèi)似，均未呈顯著性差異。50mg/kg的(士)-murracarpin可顯著降低坐骨神經(jīng)組織中TNFa的含量(25.31士2.02ng/L)(士)-Murracarpin對(duì)坐骨神經(jīng)組織中PGE2的具有顯著性抑制作用(見(jiàn)表9)。給予50mg/kg時(shí)，其PGE2的含量為(16.94士2.23ng/L)，明顯高于地塞米松組的PGE2含量(20.31士3.35ng/L)。表9.不同劑量的(士)-murracarpin對(duì)坐骨神經(jīng)組織中PGE2的影響_化合物PGE2(ng/L)_50mg/kg的(士)-murracarpin16.94士2.23*1125mg/kg白勺(+)-murracarpin12.5mg/kg白勺(+)-murracarpin地塞米松陰性對(duì)照19.94士1.14*30.53士8.1620.31士3.35*42.64士12.5權(quán)利要求一種(±)-murracarpin的合成方法，其特征在于依次包括如下步驟A將7-羥基香豆素溶于含有乙酸酐的無(wú)水丙酮中，緩慢滴加催化劑吡啶，室溫反應(yīng)0.5-3h，制得7-乙酰氧基香豆素；B將所得7-乙酰氧基香豆素和六亞甲基四胺在冰浴下加入到三氟乙酸中，在60-100℃條件下反應(yīng)8-12h，制得7-羥基-8-甲酰基香豆素；C將所得7-羥基-8-甲?；愣顾厝苡诤袩o(wú)水K2CO3的干燥丙酮中，加入(Me)2SO4，40℃條件下反應(yīng)1-5h，制得7-甲氧基-8-甲?；愣顾?；D7-甲氧基-8-甲?；愣顾嘏c1-氯丙酮加入含有無(wú)水K2CO3的干燥乙腈中，N2保護(hù)下，室溫?cái)嚢?2-48h，制得8-(2’-乙酰環(huán)氧乙烷基)-7-甲氧基香豆素；E在45℃、N2保護(hù)下，將甲基三苯基溴化鏻溶于干燥THF中，注入二異丙胺鋰LDA；1h后，加入8-(2’-乙酰環(huán)氧乙烷基)-7-甲氧基香豆素，繼續(xù)反應(yīng)2h，制得8-(2’-丙烯基環(huán)氧乙烷基)-7-甲氧基香豆素；F所得8-(2’-丙烯基環(huán)氧乙烷基)-7-甲氧基香豆素溶于甲醇/10％H2SO4混和溶液中，在60℃條件下進(jìn)行酸水解3-8h，制得產(chǎn)物，即(±)-murracarpin。2.如權(quán)利要求1所述的合成方法，其特征在于步驟A中，將1-10份7-羥基香豆素溶于10-1000份含有乙酸酐的無(wú)水丙酮中，所用乙酸酐與無(wú)水丙酮的體積比為15;催化劑吡啶為1-100份。3.如權(quán)利要求1所述的合成方法，其特征在于步驟B中，7-乙酰氧基香豆素與六亞甲基四胺的體積比為11，與三氟乙酸的體積比為15。4.如權(quán)利要求1所述的合成方法，其特征在于步驟C中，將1-10份的7-羥基-8-甲酰基香豆素溶于10-1000份含有無(wú)水K2CO3的干燥丙酮中，加入1-100份的(Me)2S04。5.如權(quán)利要求1所述的合成方法，其特征在于步驟D中，10-100份的7-甲氧基-8-甲?；愣顾嘏c10-500份的1-氯丙酮，在反應(yīng)溶劑為1-1000份含有無(wú)水K2CO3的干燥乙腈中進(jìn)行反應(yīng)。6.如權(quán)利要求1所述的合成方法，其特征在于步驟E中，加入1-30份的二異丙胺鋰LDA。7.如權(quán)利要求1所述的合成方法，其特征在于步驟F中的反應(yīng)溶液甲醇與10%H2SO4的體積比為101-100。8.權(quán)利要求1所述合成方法所得(士PMurracarpin在制備抗炎鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種(±)-murracarpin的合成方法及其抗炎鎮(zhèn)痛作用；所說(shuō)(±)-murracarpin的制備方法是將7-羥基香豆素與醋酸酐、三氟乙酸、六亞甲基四胺反應(yīng)制得7-羥基-8-甲酰基香豆素；再與(Me)2SO4反應(yīng)制得7-甲氧基-8-甲酰基香豆素；所得7-甲氧基-8-甲酰基香豆素與1-氯丙酮反應(yīng)制得8-(2’-乙酰環(huán)氧乙烷基)-7-甲氧基香豆素，再與甲基三苯基溴化鏻、LDA反應(yīng)制得8-(2’-丙烯基環(huán)氧乙烷基)-7-甲氧基香豆素；所得8-(2’-丙烯基環(huán)氧乙烷基)-7-甲氧基香豆素在甲醇中進(jìn)行酸水解得到(±)-murracarpin；研究表明，本發(fā)明制得的化合物具有抗炎鎮(zhèn)痛作用。文檔編號(hào)A61K31/352GK101824015SQ20101014273公開(kāi)日2010年9月8日申請(qǐng)日期2010年4月9日優(yōu)先權(quán)日2010年4月9日發(fā)明者吳龍火,許瑞安申請(qǐng)人:許瑞安