專利名稱：3,4-二氫苯并[f][1,4]噻氮雜*類化合物或其鹽及其藥物用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域。涉及3，4_ 二氫苯并[f][l，4]噻氮雜萆類化合物或 其鹽及其藥物用途。該3，4_ 二氫苯并[f][l，4]噻氮雜罩類化合物能抑制糖原合成酶激 酶-3 β (GSK-3i3)，可作為GSK-3i3的非ATP競爭的小分子抑制劑用于制備預(yù)防或治療與 GSK-3 β相關(guān)疾病的藥物。
背景技術(shù)：
據(jù)國際糖尿病聯(lián)合會預(yù)測，由于不良飲食習(xí)慣和缺乏鍛煉，2025年全球糖尿病患 者將高達(dá)3億。其中大部為II型糖尿病患者。在中國，糖尿病已成為心血管疾病和腫瘤之 后的第三大致死性疾病。當(dāng)前，開發(fā)糖原合成酶激酶-3 (Glycogen Synthase Kinase-3, GSK-3)的小分子抑 制劑用于治療復(fù)雜性疾病，如癌癥、糖尿病和早老年性癡呆癥等正在成為一個新的研究熱 點(diǎn)。GSK-3是一個多功能的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，不僅參與肝糖代謝過程，還參與Wnt 和Hedgehog信號通路，通過磷酸化多種底物蛋白來調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理過程。GSK-3的小分子 抑制劑能夠抑制GSK-3的磷酸化活性，從而調(diào)控機(jī)體糖代謝、Tao蛋白代謝等過程，可用于 治療II型糖尿病或阿耳茨海默氏病等與GSK-3活性高表達(dá)相關(guān)的疾病(Eldar-Finkelman， Hagit，Trends in Molecular Medicine,8(3) : 126—132，2002)GSK-3是胰島素信號通道重要的負(fù)調(diào)節(jié)因子，其功能受損或過度表達(dá)均直接導(dǎo) 致 II 型糖尿病(Frame，Sheelagh，Expert Opinion on Therapeutic Targets，10 (3) 429-444,2006)。異常高活性的GSK-3通過抑制糖原合成酶的活性從而阻止糖原合成是導(dǎo) 致血糖升高的主要原因(Nikoulina SE, et al, Diabetes, 49 (2) :263_271，2000) ；GSK-3 還直接抑制胰島素受體，影響糖代謝平衡(Eidar FH, Pro Nat Acad Sci USA,94(18) 9660-9664，1997)。胰島素受體和糖原合成酶分別處于胰島素糖代謝信號通路的最上游和 最下游，其活性被抑制限制了胰島素介導(dǎo)的大部分生理反應(yīng)。GSK-3是胰島素信號通路最下游的調(diào)節(jié)因子，對它進(jìn)行選擇性調(diào)控可能引起較少 的副作用。迄今為止的研究表明，GSK-3抑制劑未顯示出明顯的副作用。對Zucker糖尿病肥 胖(ZDF)大鼠連續(xù)注射GSK-3抑制劑CT99021[130mg/(kg*d)]達(dá)20小時，并未發(fā)現(xiàn)其肝、 肺、脂肪等組織細(xì)胞中β連環(huán)蛋白及cyclinDl的mRNA水平升高，也未發(fā)現(xiàn)其它GSK-3小分 子抑制劑對糖尿病哺乳動物存在明顯副作用(Ring DB, et al,Diabetes, 52 (3) 588-595， 2003)。事實(shí)上，LiCl作為最明確的GSK-3抑制劑已在臨床使用50多年，至今未見導(dǎo)致腫 瘤的報道(Vestergaard P, World J Biol Psychiatry, 2 (1) 18-26，2001)。而且，對于糖尿病治療而言，僅需對高活性的GSK-3進(jìn)行短時間(約40min)、中強(qiáng) 度(約30% 40%)的抑制即已足夠；而要影響GSK-3對生長等其它功能的調(diào)節(jié)作用，通 常需要高強(qiáng)度地抑制(>75%) (McManus，et al，EMB0 Journal, 24 (8) 1571-1583，2005)。 可以預(yù)期，適當(dāng)抑制高表達(dá)的GSK-3活性用于治療目的可能是安全而且有效的。
此外，GSK-3作為神經(jīng)退行性疾病的治療靶也已開展了大量研究。GSK-3涉及與 阿耳茨海默氏病(AD)相關(guān)的生物途徑。AD的主要病理學(xué)特征即是細(xì)胞外β-淀粉樣蛋白 (Α β)和細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)纖維纏結(jié)的形成和進(jìn)展(Goate，A. et al. Nature，349，704-706，1991)， 而 GSK-3 能通過磷酸化 APP 促使 A β 的產(chǎn)生(Hanger，D. P.，et al. Neurosci. Lett. 147， 58-62,1992)。已有研究證明，通過抑制GSK-3，尤其是GSK-3 β的活性可減少Αβ的生成 和神經(jīng)纖維混亂(LeCl ere, C. et al. J. Biol. Chem. 276，251-260，2001)。如鋰鹽作為一 種明確的GSK-3抑制劑，在治療濃度通過干擾APP剪切可以阻止Αβ的生成(Sim，X. et al. Neurosci. Lett. 321，61-64，2002)。因此，GSK-3 β抑制劑也可應(yīng)用于治療阿耳茨海默 氏病。GSK-3有α和β兩種亞型，其結(jié)構(gòu)和功能都極為相似，目前研究最多的是β亞 型。多家大型制藥公司，如葛蘭素史克、羅氏、禮來，Chiron已開發(fā)了多種GSK-3i3抑制劑， 正在進(jìn)行臨床前的研究。這些抑制劑均有十分明顯的降糖作用，并可促進(jìn)葡萄糖誘導(dǎo)的胰 島素釋放、刺激葡萄糖攝取、提高細(xì)胞對胰島素的敏感度等多種效應(yīng)，顯示出治療糖尿病和 胰島素抵抗的巨大潛力。但目前研究開發(fā)的GSK-3抑制劑幾乎都是ATP競爭型抑制劑，即它們都作用于 GSK-3的ATP作用區(qū)。由于ATP結(jié)合區(qū)在其它蛋白激酶中高度保守，ATP競爭型抑制劑與其 作用可能導(dǎo)致較多的副作用，因而此類抑制劑的選擇性問題不容忽視。而非ATP競爭抑制 劑作用于有著較強(qiáng)結(jié)構(gòu)特異性的GSK-3非ATP結(jié)合區(qū)，應(yīng)該具有更好的選擇性和更小的副 作用。三維晶體結(jié)構(gòu)研究已發(fā)現(xiàn)，與大多數(shù)酶不同，在GSK-3的ATP結(jié)合區(qū)之外有-個 獨(dú)有且 GSK-33 高度保守的底物作用區(qū)(Dajani, R. et al. Cell, 105 (6) =721-732, 2001 ； terHaar, E. et al. Nat Struct Biol,8(7) :593_6· 2001)。GSK-3 的大多數(shù)底物，如糖代 謝底物GS，必須首先預(yù)磷酸化后并作用于此結(jié)合區(qū)才能被GSK-3識別，進(jìn)而參與糖代謝平 衡(Fiol，C.J.et al. J. Biol. Chem.，262 (29) 14042-14048，1987)。而 GSK-3 參與調(diào)控的 Wnt信號通路中的axin，β-連環(huán)蛋白則不需要其他激酶的預(yù)磷酸化，其活性結(jié)合部位并不 位于此區(qū)域(Ikeda，S. et a 1. EMBO J. 17，1371-1384，1998)。GSK-3 在各個信號通路中的 功能互不干擾的特點(diǎn)很可能與這個非ATP活性區(qū)與其相應(yīng)底物的特異性結(jié)合有關(guān)。不難 想象，能夠競爭結(jié)合到這個結(jié)構(gòu)特異的活性區(qū)的小分子可能僅僅抑制GSK-3的活性，而不 致影響到其它酶的活性，具有較高的選擇性；同時也不影響其它信號通道的功能，降低致癌 的風(fēng)險，具有較高的特異性。2002年報道的噻二唑酮類化合物(TDZD)是首個作用于此結(jié) 合區(qū)的非ATP競爭抑制劑，它對GSK-3 β有μ M級的抑制作用，而對PKA，PKC, CK-2，⑶Kl/ cyclin B等多種激酶均無抑制(Martinez，A. et al. J. Med. Chem. 45(6) :1292_1299，2002)； 后續(xù)研究也表明，此類化合物只要其作用模式是非ATP競爭的，都顯示出了很好的選擇性 (Castro, A. et al. bioorgan. med. chem. , 16 (1) :495_510，2008)。TDZD 類的一個化合物 ΝΡ-12 對 AD 呈現(xiàn)出很好的治療效果(Seren0L，etal. Neurobiology of Disease. 35(3) 359-67,2009)，已于2009年11月在歐洲順利完成II期臨床實(shí)驗(yàn)(http://www. noscira. com),現(xiàn)已進(jìn)入 III 期臨床實(shí)驗(yàn)(http//www. clinicaltrials. gov, NCT01049399, NCT00948259)。這也是迄今為止進(jìn)入臨床研究的唯一一個GSK-3 β抑制劑，表明非ATP競 爭型抑制劑具有良好的應(yīng)用前景。
競爭結(jié)合這個非ATP結(jié)合區(qū)甚至可以直接產(chǎn)生擬胰島素作用。GSK-3自身磷酸 化后的氨基酸殘基可以占據(jù)這個特殊區(qū)域從而導(dǎo)致GSK-3的失活。胰島素對GSK-3的抑 制即是通過這種自占據(jù)模式實(shí)現(xiàn)的(Dajani, R. et al. Cell, 105 (6) :721_732，2001 ；ter Haar, E. et al. Nat Struct Biol,8(7) :593_6· 2001)。2003 年報道的非 ATP 競爭擬制的 短肽L803-mts正是模擬GSK-3的這一段氨基酸殘基，可以選擇性作用于GSK-3 β的這個 非ATP結(jié)合區(qū)。它可在μ M級濃度提高人的胚胎腎293細(xì)胞的GS活性2. 5倍，而對測試的 6種其它激酶ΜΑΡΚ，ΡΚΑ, PKB, PKC- δ和CK-2，甚至與GSK-3最密切的Cdc2均無抑制作用 (Plotkin, B. et al. JPET，305 (3) :974_980，2003)。對 ob/ob 大鼠每天腹腔注射 400nmol， 連續(xù)注射三周，也未引起血脂、體重等發(fā)生變化，且無明顯毒副作用(Kaidanovich-Beilin， 0. et al. JPET, 316(1) 17-24，2006)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供對GSK-3 β具有抑制活性的如下式I所示結(jié)構(gòu)的新型3， 4_ 二氫苯并[f][l，4]噻氮雜罩類化合物或其鹽，該類化合物能作用于GSK-3 β的非ATP
結(jié)合區(qū)并抑制其活性。 其中，X任選地為氧、硫或氮原子，優(yōu)選為0 ；m取自1 3，且為整數(shù)，優(yōu)選為1。η取自0 2，且為整數(shù)，優(yōu)選為0。RpHR4獨(dú)立地為氫、鹵素、硝基、羥基、甲基、羥甲基、甲氧基、三氟甲氧基、乙 酰基或者乙酰氧基。R5為芳香基，優(yōu)選為苯基和取代苯基。其中所述取代基個數(shù)為1-5個，取代基任意 選自于鹵素、硝基、氨基、氰基、羥基、羧基、硼酸基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、三氟甲氧 基、?；蛘啧Ｑ趸6為芳香基，優(yōu)選為呋喃基、吡啶基、苯基、取代苯基。其中所述取代基個數(shù)為1-5 個，取代基任意選自于鹵素、硝基、羥基、氨基、氰基、羥基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、三 氟甲氧基、?；蛘啧Ｑ趸?。本發(fā)明以GSK_3i3的非ATP結(jié)合區(qū)為靶標(biāo)，利用計算機(jī)虛擬篩選、設(shè)計和化學(xué)合 成、并通過生物活性評價，提供了如上述的具有全新化學(xué)骨架結(jié)構(gòu)的GSK-3 β非ATP競爭抑 制劑。本發(fā)明某一實(shí)施例中，X為氧原子時，R5為5-7元芳香基，m為1 3 ;R6為5-7元 芳香基，η為0 2 ；其中，R5選自苯基或取代苯基，R6選自呋喃基、吡啶基、苯基或取代苯 基；其中所述取代基數(shù)為1-5個，該取代基任意選自于鹵素、硝基、羥基、甲基，甲氧基、三氟甲氧基、乙?；蛘咭阴Ｑ趸?。本發(fā)明中，所述的鹽為藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明所述的“藥學(xué)上可接受的鹽”具體地可列舉為與鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫 酸、硝酸、磷酸等無機(jī)酸形成的鹽，或與甲酸、乙酸，甲磺酸、乙磺酸等有機(jī)酸形成的鹽。本發(fā)明所述的3，4_ 二氫苯并[f] [1,4]噻氮雜罩類化合物或其藥學(xué)上可接受的 鹽可用于制備GSK_3i3抑制劑。本發(fā)明的另一目的是提供包含上述化合物或其鹽的藥物組合物。本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供上述化合物或其鹽以及包含該化合物或其鹽的組合 物用于制備預(yù)防或治療GSK-3i3相關(guān)疾病的藥物。所述與GSK-3i3相關(guān)的疾病可以是糖尿 病、阿耳茨海默氏病和腫瘤，但并不受限于此。本發(fā)明的有益效果在于1.本發(fā)明提供并證明了對GSK_3i3具有抑制活性的新的3，4_ 二氫苯并[f][l，4] 噻氮雜罩類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。2.本發(fā)明所述的3，4_ 二氫苯并[f] [1,4]噻氮雜罩類化合物或其藥學(xué)上可接受 的鹽在體外抑制活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，證明其對GSK-3 β具有抑制作用。3.本發(fā)明所述的3，4_ 二氫苯并[f] [1,4]噻氮雜萆類化合物或其藥學(xué)上可接受 的鹽經(jīng)酶動力學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)其對GSK-3i3的抑制作用是非ATP競爭型抑制。4.本發(fā)明所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可用于制備預(yù)防或治療與GSK-3 β 相關(guān)疾病的藥物。所述的與GSK_3i3相關(guān)疾病是糖尿病、阿耳茨海默氏病或腫瘤，但不受限 于此。


圖1是已知的GSK-3 β的ATP競爭型抑制劑SB 216763對GSK-3 β活性測試的動 力學(xué)數(shù)據(jù)雙倒數(shù)圖，其中顯示了 SB 216763的曲線與對照曲線相交于Y軸，表明其是ATP競 爭型抑制劑。圖2是本發(fā)明的3，4- 二氫苯并[f] [1,4]噻氮雜罩類化合物中的實(shí)例HZkcc對 GSK-3i3活性測試的動力學(xué)數(shù)據(jù)雙倒數(shù)圖，其中顯示了 50uM濃度的HZkcc的曲線與對照曲 線相交于X軸，表明HZkcc為非ATP競爭型抑制劑。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不 以任何方式限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照 常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。所采用的原料為商業(yè)上可購得的或者可以由本 領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)已知文獻(xiàn)方法制備的。實(shí)施例14-芐基-3，4-二氫-2-苯基苯并[f] [1,4]噻氮_5(2H)_雜罩酮(HZkca)的制備 1. 1 β -硝基苯乙烯(HZkcOl)的制備 取KOHl 1. 2g(200mmol)溶于水56mL，置冰水浴攪拌冷卻；然后滴加 CH3N027 . 2g(120mmol)，攪拌5分鐘；在40分鐘內(nèi)滴加苯甲醛10. 6g (IOOmmol)的甲 醇溶液(32mL)；加畢，繼續(xù)攪拌1小時，然后將反應(yīng)液快速倒入冰水浴預(yù)冷的濃鹽酸 30ml (600mmol)，攪拌10分鐘；所得固體抽濾，水洗，得鮮黃色針晶12. 2g(81. 8mmol)，收率 81. 8%。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8. 02 (d, 1H, J = 13. 69Hz, -CH = C) ；7. 60 (d, 1H, J =13. 70Hz, = CH-NO2) ；7. 57-7. 44(m，5H，PhH).1·22-{[(α-(硝基甲基)芐基]硫代苯甲酸(HZkc02)的制備 β-硝基苯乙烯12. 2g(81.8mmol)，硫代水楊酸12. 67g(81. 8mmol)，無水乙醇 70mL加入三頸瓶，回流3小時，反應(yīng)完畢，室溫靜置冷卻，析出白色針晶，抽濾，乙醇洗滌，得 16. 3g(53. 7mmol)，收率 65. 7%。1HNMR(400MHz, d6_DMS0) δ ppm 13. 20 (s, 1H, C00H) ；7. 83 (d, 1H, J = 7. 69Hz, PhH) ；7· 62-7. 50(m，4H，PhH) ；7· 37-7. 25 (m，4H，PhH) ；5. 30-5. 18(m，2H，CH-CE,) ；5. 04 (m, 1H, CH-CH2) .MS (+ESI) m/z :303. 7 [M+H]+，628. 5 [2M+Na].·1·32-{[(α-(硝基甲基)芐基]硫代苯甲酸甲酯(HZkc03)的制備 2-{[(α_(硝基甲基)芐基]硫代苯甲酸16.3g(53.7mmol)加入三頸瓶，加甲醇 80ml，冰水浴攪拌冷卻，滴加S0Cl216ml。加畢，回流反應(yīng)兩小時，反應(yīng)液室溫冷卻，析出固 體，抽濾，甲醇洗，得白色針晶15. 6g(49mmol)，收率91.2%。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7. 91 (d, 1H, J = 7. 22Hz, PhH) ；7. 50-7. 46 (m，2H， PhH) ；7. 43-7. 41(m，2H，PhH) ；7. 38-7. 26 (m，4H，PhH) ；5. 14 (dd, 1H, J = 5. 56Hz, 11. 20Hz, CH-CH2) ；4. 90-4. 77(m，2H，CH-CH2). MS (+ESI) m/z :318· 1[M+H]+ ；340. 0 [M+Na]+·1·42-{[(α_(氨基甲基)芐基]硫代苯甲酸甲酯(HZkc04)的制備 將 2- {[( α -(硝基甲基)芐基]硫代苯甲酸 15. 6g (49mmol)，SnCl2 · 2H20 44. 0g(196mmol)，AcOH 47ml (784mmol)，MeOH 140ml 加入三頸瓶，回流反應(yīng) 3 小時。反應(yīng)完畢，冷卻至室溫，在冰水浴條件下滴加K2CO3 (135g)的水溶液200ml，加畢，室溫下EtOAc 萃取，萃取液減壓濃縮，得糖漿狀物；將此產(chǎn)物粗品溶于EtOAc 50ml,加Et2O/濃鹽酸 (1 l)80ml，充分震蕩，分層，下層用乙醚萃取三次，減壓濃縮。然后溶于EA，冰水浴條件下 加入K2C03aq (20g溶于60ml水)，EA萃取。EA萃取液減壓濃縮，得橘紅色糖漿狀物7. Ig,收 率 57. 0%。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7. 86 (d, 1H, J = 7. 57Hz, PhH) ；7. 43-7. 24 (m, 7H, PhH) ；7. 15(m，lH，PhH) ；4. 42 (t, 1H, J = 6. 62Hz, CH-CH2) ;3.91(s，3H，COOCH3) ；3. 47 (bs, 3H, NE2 and CH-CH2) ；3. 21 (d, 1H, J = 5. 68Hz, CH-CE,). MS (+ESI)m/z 288. 1[M+H]+.1.53，4-二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮 _5(2H)_ 雜萆酮(HZkc05) 將2- {[( α -(氨基甲基)芐基]硫代苯甲酸甲酯粗品于150°C加熱1. 5小時，反應(yīng) 畢，加入乙腈3ml，室溫冷卻，析出晶體。抽濾，乙腈洗滌，得淺黃色砂晶2. 36g(8. 6mmol)，收 率 50. 6%。1HNMR(400MHz, CDCl3) δ ppm 8. 08 (t, 1H, J = 6. 30Hz, PhH) ；7. 73 (m, 1H, PhH)； 7. 62 (m, 1H, PhH) ； 7. 52-7. 45 (m, 2H, PhH) ； 7. 32—7. 24 (m，4H，PhH) ；4. 63 (m, 1H, CH-CH2)； 3. 63-3. 56 (m, 1H, CH-CH2) ；3. 41-3. 33 (m, 1H, CH-CH2). MS (+ESI) m/z 255. 9[M+H]+， 510. 5[2M+H]+.1.64-芐基-3，4-二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮 _5(2H)_ 雜罩酮(HZkca)的 制備 60% 的 NaH(0. 60g，6mmol)加入到溶有 HZkc05(0. 51g，2mmol)的 8ml DMF 中，25°C 攪拌30分鐘后于0°C滴加溶有溴芐(0. 68ml,4mmol)的6ml DMF溶液，繼續(xù)攪拌1小時。反 應(yīng)液經(jīng)鹽酸酸化，冷卻，沉淀水洗至中性，甲醇重結(jié)晶得白色晶體0. 87g，收率42.2%。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7. 83 (dd, 1H, J = 1. 40Hz, 5. 90Hz, PhH)； 7. 56-7. 31 (m, 8H, PhH) ；7. 27-7. 22 (m, 3H, PhH) ；7. 06-7. 04 (m, 2H, PhH) ；5. 07 (d, 1H, J =14.7Hz，PhCE,) ;4.71(d，lH，J = 14. 7Hz, PhCH2) ；4. 18 (dd, 1H, J = 5. 20Hz, 11. OOHz, CH-CH2) ；3. 57-3. 43 (m, 2Η, CH-CH2). MS (+ESI) m/z :346. 1[M+H]+ ；368. 0 [M+Na]+·實(shí)施例24-(4-硝基芐基)-3，4-二氫-2-苯基苯并[f] [1,4]噻氮 _5(2H)_ 雜萆酮(HZkcc) 的制備
將實(shí)施例1步驟1. 6中的溴芐替換成對硝基溴芐，其余所需原料試劑及制備方法 同實(shí)施例1，得產(chǎn)物4-(4_硝基芐基)-3，4_ 二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜 萆酮，黃色砂晶，收率51.2%。1HwrGOOMHz, CDCl3) δ ppm 8. 22 (d, 1H, J = 8. 7IHz，PhH) ；8. 07 (d, 1H, J = 8.41Hz，PhH) ；7. 83-7. 81 (dd，1H，J = 1. 40Hz,5. 62Hz, PhH) ；7. 59-7. 47 (m，5H，PhH)； 7.30-7. 10(m，5H，PhH) ；5. 06 (d, 1H, J = 15. 50Hz, PhCH2) ；4. 85(d, 1H,J= 15. 52Hz, PhCH2)； 4. 37 (dd, 1H, J = 4. 81Hz, 11. 04Hz, CH-CH2) ；3. 68-3. 62 (m, 1H, CH-CE,) ；3. 52-3. 47 (m, 1H, CH-CH2) .MS (+ESI) m/z :391. 1 [M+H]+，413. 2 [M+Na]+·實(shí)施例34-(3-硝基芐基)-3，4-二氫-2-苯基苯并[f] [1,4]噻氮 _5(2H)_ 雜罩酮(HZkcd) 的制備 將實(shí)施例1步驟1. 6中的溴芐替換成間硝基溴芐，其余所需原料試劑及制備方法 同實(shí)施例1，得產(chǎn)物4-(3_硝基芐基)-3，4_ 二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜 萆酮，黃色針狀晶體，收率86. 2%。1HNMR(400MHz, CDCl3) δ ppm 8. 21 (s, 1H, PhH) ；8. 18 (d, 1H, J = 6. 83Hz, PhH)； 7. 83 (dd, 1H, J = 1. 95Hz,5. 85Hz, PhH) ；7. 81(d，lH，J = 7. 80Hz, PhH) ；7. 59-7. 47 (m，4H， PhH) ；7. 30-7. 25(m，3H，PhH) ；7. 13(d，lH，J = 2. 44Hz, PhH) ；7. 12 (d, 1H, J = 1. 47Hz, PhH) ；4. 40 (d, 1H, J = 15. 12Hz, PhCH2) ;4.91(d，lH，J = 15. 11Hz, PhCH2) ；4. 39 (dd, 1H, J = 4. 88Hz, 10. 73Hz, CHCH2) ；3. 69-3. 49 (m, 2H, CH-CH2). MS (+ESI)m/z :390. 7 [M+H]+ ； 412. 6 [M+Na]+.實(shí)施例44-(2-硝基芐基)-3，4-二氫-2-苯基苯并[f] [1,4]噻氮 _5(2H)_ 雜罩酮(HZkce) 的制備 將實(shí)施例1步驟1. 6中的溴芐替換成鄰硝基溴芐，其余所需原料試劑及制備方法 同實(shí)施例1，得產(chǎn)物4-(2_硝基芐基)-3，4_ 二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜 萆酮，黃色針狀晶體，收率84. 2%。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8. 06 (dd, 1H, J = 0. 97Hz, 7. 32Hz, PhH)； 7. 86-7. 18 (m, 12H, PhH) ;5.32(d，lH，J = 17. 06Hz, PhCE,) ；5. 20 (d, 1H, J = 17. 06Hz, PhCH2) ；4. 57 (m, 1H, CH-CH2) ；3. 72-3. 56 (m, 2H, CH-CH2). MS (+ESI) m/z 391. 1[M+H]+ ； 413. 0[M+Na]+.實(shí)施例54-(4-氯芐基)-3，4-二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮 _5(2H)_ 雜萆酮(HZkcf) 的制備
將實(shí)施例1步驟1. 6中的溴芐替換成對氯溴芐，其余所需原料試劑及制備方法同 實(shí)施例1，得產(chǎn)物4-(4_氯芐基)-3，4_ 二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜萆酮， 白色針狀晶體，收率90.3%。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7. 87 (dd, 1H, J = 1. 47Hz, 5. 85Hz, PhH)； 7. 63-7. 50 (m, 3H, PhH) ；7. 43-7. 38 (m, 4H, PhH) ；7. 35-7. 29 (m, 3H, PhH) ；7. 15-7. 12 (m, 2H, PhH) ；5. 06 (d, 1H,J= 15. 12Hz, PhCH2) ；4. 73 (d, 1H, J = 15. 12Hz, PhCH2) ；4. 30 (dd，1H，J = 4. 87Hz, 1. 21Hz, CH-CH2) ；3. 66-3. 49 (m, 2H, CH-CE,). MS (+ESI)m/z :380· 0 [M+H]+·實(shí)施例64-(2_氰基芐基)-3，4_二氫-2-苯基苯并[f] [1,4]噻氮_5(2H)_雜罩酮(HZkcg) 的制備
將實(shí)施例1步驟1. 6中的溴芐替換成鄰氰基溴芐，其余所需原料試劑及制備方法 同實(shí)施例1，得產(chǎn)物4-(2_氰基芐基)-3，4_ 二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜罩酮，白色砂晶，收率93.2%。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7. 78-7. 43 (m, 7H, PhH) ；7. 38 (td, 1H, J=L 17Hz, 6.66Hz，PhH) ；7. 25-7. 20 (m，3H，PhH) ；7. 14-7. 12(m，2H，PhH) ；5. 13 (d, 1H, J = 15. 65Hz, PhCH2) ；5. 06 (d, 1H, J = 15. 65Hz, PhCE,) ；4. 42 (m, 1H, CH-CH2) ；3. 60-3. 47 (m, 2H, CH-CH2) · MS (+ESI)m/z 371. 0[Μ+Η]+ ；393. 1[M+Na]+.實(shí)施例74-(2-(四氮唑-5-基)芐基)-3，4-二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜 萆酮(HZkch)的制備 HZkcg 0. 37g (Immol)，四丁基氟化銨(TBAF) 260mg(0. Immol)，疊氮三甲基硅烷 (TMSN3) 230mg (2mmol)，加入三頸瓶，40°C反應(yīng)20小時。反應(yīng)完畢，反應(yīng)液加2M鹽酸稀釋， 用乙酸乙酯(EA)萃取，EA萃取液用2M鹽酸洗滌兩次，無水MgSO4干燥。抽濾，減壓蒸餾蒸 去溶劑，得白色片狀固體0. 37g(0. 9mmol)，收率91. 2%。1HNMR(400MHz, d6-DMS0) δ ppm 16. 92 (bs, ΙΗ,ΝΗ) ；7· 85 (d，1Η，J = 7. 83Hz，PhH)； 7. 75-7. 56 (m, 7Η, PhH) ；7. 34-7. 21 (m, 5H, PhH) ；5. 39 (d, 1H, J = 16. 19Hz, PhCE,) ；5. 05 (d, 1H, J = 16. 19Hz, PhCE,) ；4. 86 (m, 1H, CH-CH2) ；3. 66-3. 40 (m，2H，CH-CE,). MS (+ESI) m/z 414. 1[M+H]+ ；436. 0[M+Na]+.實(shí)施例84-(2_酰胺基芐基)-3，4_ 二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜罩酮 (HZkci)的制備HZkcg 0. 37g(lmmol)，三氟乙酸(TFA) lml，濃硫酸 lml，加入三頸瓶，100°C加熱 5 小時。反應(yīng)完畢，反應(yīng)液加水稀釋，室溫冷卻，析出固體，抽濾，得淺黃色粉末0. 36g，收率 92. 1%。1HNMR (400MHz, d6_DMS0) δ ppm 7. 95(s, 1H, PhH) ；7. 68-7. 17 (m, 14H, PhH, CONH2) ；5. 12 (d, 1H, J = 15. 26Hz, PhCH2) ；4. 87 (d, 1H, J = 15. 26Hz, PhCH2) ；4. 70 (dd, 1H, J = 4. 70Hz, 11. 74Hz, CH-CH2) ；3. 69-3. 35 (m, 2H, CH-CH2). MS (+ESI)m/z :389· 0 [M+H] + ; 411. 1[M+Na]+.實(shí)施例94-(3-氯芐基)-3，4-二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮 _5(2H)_ 雜萆酮(HZkcj)
的制備
將實(shí)施例1步驟1. 6中的溴芐替換成間氯基溴芐，其余所需原料試劑及制備方法 同實(shí)施例1，得產(chǎn)物4-(3_氯芐基)-3，4_ 二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜罩 酮，白色針晶，收率93.4%。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7. 90-7. 53 (m,4H, PhH) ； 7· 44 (s，1H，PhH)； 7. 36-7. 30(m，6H，PhH) ；7· 17-7. 15 (m，2H，PhH) ；5. 00 (d, 1H, J = 15. 11Hz, PhCE,) ；4. 82 (d, 1H, J = 15.11Hz，PhCE,) ；4. 35 (dd, 1H, J = 4. 88Hz, 11. 22Hz, CH-CH2) ；3. 67-3. 50 (m, 2H, CH-CH2). MS (+ESI)m/z :380· 0 [M+H]+.實(shí)施例104-(4-氰基芐基)-3，4-二氫-2-苯基苯并[f] [1,4]噻氮_5(2H)_雜萆酮(HZkck) 的制備
將實(shí)施例1步驟1. 6中的溴芐替換成對氰基溴芐，其余所需原料試劑及制備方法 同實(shí)施例1，得產(chǎn)物4-(4-氰基芐基)-3，4_ 二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜 罩酮，白色砂晶，收率91.4%。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.81(dd，lH，J = 1. 83Hz,7. 33Hz, PhH) ；7. 66 (d, 2H, J = 7.94Hz，PhH) ；7. 58-7. 48 (m，5H，PhH) ；7. 29-7. 25 (m，3H，PhH) ；7. 11-7. 09 (m，2H， PhH) ；5.01 (d，lH，J = 15.58Hz，PhCH2) ；4. 81(d, 1H,J = 15. 58Hz, PhCH2) ；4. 32 (dd, 1H, J = 4. 88Hz, 10. 99Hz, CH-CH2) ；3. 66-3. 44(m，2H，CH-CH2) · MS (+ESI) m/z :371. 2 [M+H]+.實(shí)施例114-(4-(四氮唑-5-基)芐基)-3，4-二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜 罩酮(HZkcl)的制備 將實(shí)施例7中的HZkcg替換成HZkck，其余所需原料試劑及制備方法同實(shí)施例7， 得產(chǎn)物4-(4-(四氮唑-5-基)芐基)-3，4-二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜 萆酮，白色片狀固體，收率89. 5%。1HNMR(400MHz, d6-DMS0) δ ppm 16. 80 (bs, ΙΗ,ΝΗ) ；8· 02 (d，2Η，J = 8. 05Hz，PhH)； 7. 71-7. 55 (m, 6Η, PhH) ；7. 28-7. 15 (m, 5Η, PhH) ；4. 99 (d, 1H, J = 15. 36Hz, PhCE,) ；4. 86 (d, 1H, J = 15.37Hz，PhCE,) ；4. 74 (dd, 1H, J = 4. 76Hz, 11. 71Hz, CH-CH2) ；3. 64-3. 46 (m，2H， CH-CH2) .MS (+ESI) m/z :414. 1[M+H]+ ；436. 1[M+Na]+.實(shí)施例124-(4_酰胺基芐基)-3，4_ 二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜萆酮 (HZkcm)的制備
將實(shí)施例8中的HZkcg替換成HZkck，其余所需原料試劑及制備方法同實(shí)施例8， 得產(chǎn)物4-(4-酰胺基芐基)-3，4-二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮-5(2H)_雜萆酮，白色 粉末狀固體，收率91.5%。1HNMR (400MHz, d6_DMS0) δ ppm 7. 96-7. 15 (m, 15H, PhH, CONE,) ；4. 96 (d, 1H, J = 15.25Hz，PhCE,) ；4. 84 (d, 1H, J = 15. 25Hz, PhCE,) ；4. 70 (dd, 1H, J = 5. 09Hz, 11. 74Hz, CH-CH2) ；3. 61-3. 44(m，2H，CH-CH2). MS (+ESI)m/z :389. 2[M+H]+ ；411. 1[M+Na]+.實(shí)施例134-(3-氰基芐基)-3，4-二氫-2-苯基苯并[f] [1,4]噻氮 _5(2H)_ 雜罩酮(HZkcn) 的制備 將實(shí)施例1步驟1. 6中的溴芐替換成間氰基溴芐，其余所需原料試劑及制備方法 同實(shí)施例1，得產(chǎn)物4-(3_氰基芐基)-3，4_ 二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜 罩酮，白色砂晶，收率93. 1%。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7. 83—7. 46 (m，8H，PhH) ；7. 31-7. 25 (m，3H，PhH)； 7. 13-7. ll(m，2H，PhH) ；4. 93 (d, 1H, J = 15. 26Hz, PhCH2) ；4. 83 (d, 1H, J = 15. 26Hz, PhCH2)； 4. 35 (dd, 1H, J = 5. 09Hz, 11. 35Hz, CH-CH2) ；3· 65—3. 44 (m，2H，CH-CH2) ；MS (+ESI)m/z 371. 2[M+H]+.實(shí)施例144-(3-(四氮唑-5-基)芐基)-3，4-二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜 罩酮(HZkco)的制備將實(shí)施例7中的HZkcg替換成HZkcn，其余所需原料試劑及制備方法同實(shí)施例7， 得產(chǎn)物4-(3-(四氮唑-5-基)芐基)-3，4-二氫-2-苯基苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜 罩酮，白色片狀固體，收率91.4%。1HNMR(400MHz, d6_DMS0) δ ppm 8. 08 (s, 1H, PhH) ；7. 96 (d, 1H, J = 7. 04Hz, PhH)； 7. 73-7. 56 (m, 6H, PhH) ；7. 30-7. 17 (m, 5H, PhH) ；5. 07 (d, 1H, J = 14. 87Hz, PhCE,) ；4. 87 (d, 1H, J = 14.87Hz，PhCE,) ；4. 79(dd，lH，J = 5. 08Hz, 11. 73Hz, CH-CH2) ；3. 67-3. 48 (m, 2H, CH-CH2). MS (+ESI) m/z ；414. 1[M+H]+ ；827. 3 [2M+H]+·實(shí)施例154-(3_羧基芐基)-3，4_二氫-2-苯基苯并[f] [1,4]噻氮_5(2H)_雜罩酮(HZkcp) 的制備HZkcn 0. 37g (Immol)、濃HCl 2ml，加入封管中，120°C反應(yīng)5小時。反應(yīng)完畢，室溫 冷卻，加水稀釋，析出固體，抽濾，得白色粉末，收率75. 5 %。1HNMR (400MHz, d6_DMS0) δ ppm 13. 01(s,lH, C00H) ;8.01(s，lH，PhH) ；7. 87 (d, 1H, J = 7.94Hz，PhH) ；7. 69-7. 47 (m，6H，PhH) ；7. 28-7. 13(m，5H，PhH) ；4. 98 (d, 1H, J = 14.97Hz，PhCE,) ；4. 84 (d, 1H, J = 14. 97Hz, PhCH2) ；4. 69 (dd, 1H, J = 4. 58Hz, 11. 61Hz,
CH-CH2)；3. 61-3. 41(m，2H，CH-CH2). MS (+ESI)m/z :390· 1[Μ+Η]+ ；779. 2 [2Μ+Η]+·實(shí)施例164-(2_氨基芐基)-3，4_二氫-2-苯基苯并[f] [1,4]噻氮_5(2H)_雜萆酮(HZkcq)
的制備 活性炭0. 36g(30mmol)，F(xiàn)eCl315mg(0. 12mmol)，乙醇 5ml，加入到三頸瓶，回流 30 分鐘，然后加入HZkcc 0. 39g (Immol)，回流30分鐘。停止加熱，反應(yīng)液稍冷卻后加入水合胼 0. IOg,回流反應(yīng)2小時。反應(yīng)完畢，抽濾，濾液減壓蒸去溶劑，室溫冷卻，得淺黃針狀晶體， 收率92. 5%01HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7. 80 (d, 1H, J = 7. 80Hz, PhH) ；7. 56-7. 42 (m, 3H, PhH) ；7. 27-7. 22(m，5H，PhH) ；7. 05 (d，2H，J = 7. 31Hz，PhH) ；6. 69 (d，2H，J = 6. 82Hz，PhH)； 5. 05 (d, 1H, J= 14. 13Hz，PhC迅)；4. 49 (d, 1H, J= 14. 14Hz，PhC迅)；4. 14 (t，1H，J = 7. 80Hz， CH-CH2) ；3. 52-3. 44(m,2H, CH-CE2) ；3. 20(bs,2H, PhNHa). MS (+ESI) m/z :361. 1 [M+H]+ ； 721. 3[2M+H]+.實(shí)施例174-芐基-3，4_ 二氫-2_(4-氨基苯基)苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜罩酮 (HZkj08a)的制備17. 1 β -硝基-(4-硝基苯基)乙烯(HZkjOl)的制備 將實(shí)施例1步驟1. 1中的苯甲醛替換成對硝基苯甲醛，其余所需原料試劑及制備 方法同實(shí)施例1.1，得產(chǎn)物β-硝基-(4-硝基苯基)乙烯，黃色針晶，收率72%。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8. 31 (d, 2H, J = 8. 60Hz, PhH) ,8. 05 (d, 1H, J = 14. IOHz，-CH = C),7. 74 (d, 2H, J = 8. 60Hz，PhH)，7. 65 (d, 1H, J= 14. 10Hz, = CHzNO2).17. 22-(2-硝基_1-(4_硝基苯基)乙基硫代)苯甲酸(HZkj02)的制備將實(shí)施例1步驟1. 2中的HZkcOl替換成HZkjOl，其余所需原料試劑及制備方法同 實(shí)施例1.2，得產(chǎn)物2-(2-硝基-1-(4-硝基苯基)乙基硫代)苯甲酸。類白色砂晶，收率 81%, m. ρ· 124. 2°C -127. 9°C。17. 32-(2-硝基-1-(4-硝基苯基)乙基硫代)苯甲酸甲酯(HZkj03)的制備 將實(shí)施例1步驟1. 3中的HZkc02替換成HZkj02，其余所需原料試劑及制備方法同 實(shí)施例1.3，得產(chǎn)物2-(2-硝基-1-(4-硝基苯基)乙基硫代)苯甲酸甲酯。桔黃色糖漿狀 物，收率85%。產(chǎn)物未進(jìn)一步純化，可直接用于下一步反應(yīng)。17. 42-(2-氨基-1-(4-氨基苯基)乙基硫代)苯甲酸甲酯(HZkj04)的制備 將實(shí)施例1步驟1. 4中的HZkc03替換成HZkj03，其余所需原料試劑及制備方法同 實(shí)施例1.4，得產(chǎn)物2-(2-氨基-1-(4-氨基苯基)乙基硫代)苯甲酸甲酯。淺黃色粉末，收 率 70%，m. ρ· 148. 4°C -149. 2°C。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7. 86 (m, 1H, PhH) , 7. 35-7. 28 (m, 2H, PhH), 7. 24-7. 21 (m, 2Η, PhH)，7. 13 (m, 1Η, PhH)，6. 66-6. 62 (m, 2H, PhH)，4. 26 (t, 1H, J = 7. OOHz, CH-CH2)，3. 92 (s，3H, COOCH3)，3. 70 (bs, 2H, CH2-NH2)，3. 18-3. 08 (m, 2H, CH-CH2)，1. 46 (bs, 2H, Ph-NH2). MS (+ESI) m/z 303. l[M+H]+，325. 1[M+Na]+.17. 53，4-二氫-2-(4-氨基苯基)苯并[f][l，4]噻氮 _5(2H)_ 雜萆酮(HZkj05) 的制備將實(shí)施例1步驟1. 5中的HZkc04替換成HZkj04，其余所需原料試劑及制備方法 同實(shí)施例1.5，得產(chǎn)物3，4-二氫-2-(4-氨基苯基)苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜萆酮。 淺黃色粉末，收率 59%，m. ρ· 235. 5 °C -237. 4°C。1HNMR (400MHz，DMS0-d6) δ ppm 8. 48 (t，1H，J = 6. 3 IHz，PhH)，7. 58-7. 48 (m, 3H, PhH)，6. 91(d，2H，J = 8. 62Hz, PhH), 6. 45(d，2H，J = 8. 20Hz, PhH), 5. 07(bs，2H，PhNH2), 4. 48 (dd, 1Η, J = 4. 7Ηζ，8· 62Hz, CH2CH), 3. 30-3. 25 (m, 1Η, CH2CH), 3. 12-3. 04 (m, 1Η, CH2CH). MS (+ESI) m/z :271. 1 [Μ+Η]+，541. 2 [2Μ+Η]+.17. 63，4-二氫-2-(4-(N-叔丁氧酰氨基)苯基)苯并[f][l，4]噻氮 _5(2H)_ 雜 萆酮(HZkjoe)的制備 取HZkj05 0. 54g(2mmol), (Boc)2O 1. 6g(8mmol)，加 DMF 8ml, Et3N 0.9ml，50°C反 應(yīng)12小時。反應(yīng)完畢，加水稀釋，EtOAc萃取。萃取液用brine洗滌，無水Na2SO4干燥，減 壓蒸去溶劑，粗品硅膠柱層析，PE/EA/Me0H(10 6 1)洗脫，得目標(biāo)產(chǎn)物，經(jīng)甲醇重結(jié)晶 得類白色針晶，收率 72%，m. ρ· 214. 9°C -216. 0°C。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7. 78 (d, 1H, J = 5. 82Hz, PhH)，7· 59 (d，1H，J = 6. 81Hz, PhH)，7. 51-7. 48 (m, 2H, PhH)，7. 34-7. 23(m，4H，PhH)，6. 72 (bs, 1H, NH), 6. 52 (bs, 1H, NH), 4. 58 (dd, 1H, J = 5. 41Hz，9. 30Hz, CHCH2), 3. 59-3. 51 (m, 1H, CHCH2), 3. 40-3. 34 (m, 1H, CHCE,), 1. 52 (s, 9H, 3CHS). MS (+ESI) m/z :393. 1 [M+Na]+，741. 2 [2M+H]+·17.74-芐基-3，4-二氫-2-(4_(^叔丁氧酰氨基)苯基)苯并[f][l，4]噻 氮-5(2H)_雜罩酮(HZkj07a)的制備 取HZkj06 0. 15g，加叔丁醇鉀0. 09g, THF 1. 5ml，冰水浴反應(yīng)半小時，然后加入溴
芐，繼續(xù)反應(yīng)2小時。反應(yīng)完畢，加水，析出固體，加EtOAc萃取，萃取液brine洗滌，無水 Na2SO4干燥，減壓蒸去溶劑，所得產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。17. 84-芐基-3，4-二氫-2-(4-氨基苯基)苯并[f] [1，4]噻氮-5 (2H)-雜罩酮 (HZkj08a)的制備 HZkj07a 0. 067g溶于2ml CH2Cl2，加入TFA 0. 2ml，室溫攪拌6小時。反應(yīng)完畢，減 壓蒸去溶劑，粗品硅膠柱層析，PE/EA/Me0H/Et3N(10 6 1 0. 05)洗脫，得4-芐基-3， 4-二氫-2-(4-氨基苯基)苯并[f][l，4]噻氮-5(2H)_雜罩酮，黃色固體，收率87 %， m. ρ· 82. 5 0C -85. 3°C。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7. 81 (d, 1H, J = 7. 30Hz，PhH)，7· 54-7. 30 (m， 8Η, PhH)，6. 87(d,2H, J = 8. 30Hz, PhH)，6. 65(d,2H, J = 8. 30Hz, PhH)，5. 05(d,1H, J =14.61Hz，PhCH2) ,4. 70 (d, 1H, J = 14. 11Hz, PhCH2) ,4. 15 (dd, 1H, J = 5. 4Hz, 10. 20Hz, CH-CH2) ,3. 87(bs,2H, PhNH2) ,3. 52-3. 40(m,2H, CH-CH2). 13C NMR(400MHz, CDCl3) δ ppm 170. 1，140. 4，137. 1，134. 3，131. 4，129. 9，129. 2，129. 1，128. 8，128. 5，127. 9，116. 4,53. 6， 53. 0,50. 3. MS (+ESI) m/z :361. 1 [M+H]+，721. 3 [2M+H]+.實(shí)施例184-(4_硝基芐基)-3，4_ 二氫-2_(4-氨基苯基)苯并[f][l，4]噻氮雜萆 -5(2H)_ 酮(HZkj08b)的制備
18. 14-(4-硝基芐基)-3，4-二氫-2-(4-(N-叔丁氧酰氨基)苯基)苯并[f] [1， 4]噻氮雜罩-5(2H)_酮(HZkj07b)的制備 將實(shí)施例17步驟17. 7中的溴芐替換成對硝基溴芐，其余所需原料試劑及制備方 法同實(shí)施例17. 7，得產(chǎn)物4-(4-硝基芐基)-3，4-二氫-2-(4-(N-叔丁氧酰氨基)苯基)苯 并[f][l，4]噻氮雜罩-5(2H)_酮。類白色粉末，收率50%。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8. 18(d，2H，J = 8. 30Hz, PhH)，7· 80 (d，1H，J = 8. 30Hz, PhH)，7. 57-7. 44 (m, 5H, PhH)，7. 27 (d, 2H, J = 8. 30Hz, PhH)，7. 01 (d, 2H, J = 8. 30Hz, PhH), 6. 82 (s, 1H, NH), 5. 03 (d, 1Η, J = 15. 60Hz, PhCE,), 4. 83 (d, 1Η, J = 15. 60Ηζ, PhCE,) ,4. 35 (dd, 1Η, J = 4. 90Ηζ, 10. 70Hz, CHCH2), 3. 63-3. 44 (m, 2Η, CHCH2), 1. 48(s,9H, 3CHs).MS (+ESI)m/z 450. 1 [M_tBu]+，528. 1[M+Na]+. 18. 24-(4_硝基芐基)-3，4_ 二氫-2_(4-氨基苯基)苯并[f][l，4]噻氮雜罩 -5(2H)_ 酮(HZkj08b)的制備將實(shí)施例17步驟17. 8中的HZkj07a替換成HZkj07b，其余所需原料試劑及制備 方法同實(shí)施例17. 8，得產(chǎn)物4-(4-硝基芐基)-3，4-二氫-2-(4-氨基苯基)苯并[f][l，4] 噻氮雜萆-5(2H)_ 酮(瓜100813)，黃色針晶，收率88%，111. . 191. 8°C -193. 0°Co1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8.22(d，2H，J = 8. 72Hz, PhH) ；7. 80 (dd, 1H, J = 1.98Hz，7. 13Hz, PhH) ；7. 58—7. 44 (m，5H，PhH) ；6. 89(d，2H，J = 8. 32Hz, PhH) ；6.57 (d， 2H, J = 8.32Hz，PhH) ；5. 05 (d, 1H, J = 15. 46Hz, PhCH2) ；4. 71 (d, 1H, J = 15. 46Hz, PhCH2) ；4. 30 (dd, 1H, J = 4. 76Hz, 10. 70Hz, CH-CH2) ;3.77(bs，2H，PhNH2) ；3. 63-3. 42 (m, 2H, CH-CH2). 13C NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 170. 3,147. 5,145. 9,145. 0,140. 1,134. 4, 131. 7，131. 0，130. 0，129. 3，129. 2，128. 7，124. 0,115. 4,53. 8,53. 6,50. 3. MS (+ESI) m/ζ 406. 1[M+H]+ ；811. 3[2M+H]+.實(shí)施例194-芐基-3，4_ 二氫-2_(3-氨基苯基)苯并[f][l，4]噻氮-5(2H)_雜罩酮 (HZkf08a)的制備19. 1 β -硝基-(3-硝基苯基)乙烯(HZkfOl)的制備 將實(shí)施例1步驟1. 1中的苯甲醛替換成間硝基苯甲醛，其余所需原料試劑及制 備方法同實(shí)施例1.1，得產(chǎn)物β-硝基-(3-硝基苯基)乙烯，黃色針狀晶體，收率75%， m. ρ· 126. 20C -127. 0°C。1HNMR(400MHz, CDCl3) δ ppm 8. 43 (t, 1H, J = 2. OOHz，PhH)，8. 36 (m, 1H, PhH)， 8. 05 (d, 1H, J = 13. 70Hz, -CH = C),7. 88 (d, 1H, J = 7. 80Hz, PhH)，7. 71-7. 67 (m, 2H, PhH and = CH-NO2) ·19. 22-(2-硝基+(3-硝基苯基)乙基硫代)苯甲酸(HZkf02)的制備 將實(shí)施例1步驟1. 2中的HZkcOl替換成HZkfOl，其余所需原料試劑及制備方法同 實(shí)施例1.2，得產(chǎn)物2-(2_硝基-l-(3-硝基苯基)乙基硫代)苯甲酸。類白色砂晶，收率 79%, m. ρ· 153. 6°C -156. 0°C。1HNMR(400MHz, DMS0_d6) δ ppm 13. 25 (s, 1H, C00H) ,8. 51 (t, 1H, J = 2. 01Hz, PhH), 8. 16 (m, 1H, PhH), 8. 06 (d, 1Η, J = 8. 21Hz, PhH), 7. 84 (dd, 1Η, J=L 60Ηζ，7· 90Ηζ, PhH)，7. 68-7. 64 (m, 2Η, PhH)，7. 53 (td, 1Η, J=L 20Ηζ,7. 90Hz, PhH)，7. 29 (td, 1Η, J =1. 20Ηζ，7. 80Hz，PhH)，5. 56(dd，1Η，J = 6. 70Ηζ, 9. 0 IHz, CH-CE,), 5. 43-5. 37 (m, 1Η, CH-CH2)，5. 18-5. 13 (m, 1Η, CH-CH2).19. 32-(2-硝基-1_(3_硝基苯基)乙基硫代)苯甲酸甲酯(HZkf03)的制備將實(shí)施例1步驟1. 3中的HZkc02替換成HZkf02，其余所需原料試劑及制備方法 同實(shí)施例1.3，得產(chǎn)物2-(2-硝基-1-(3-硝基苯基)乙基硫代)苯甲酸甲酯。類白色針晶 (MeOH)，收率90%，m. p. 127. 4°C -129. 0°C。產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。19. 42-(2-氨基-1-(3-氨基苯基)乙基硫代)苯甲酸甲酯(HZkf04) 將實(shí)施例1步驟1. 4中的HZkc03替換成HZkf03，其余所需原料試劑及制備方法同 實(shí)施例1.4，得產(chǎn)物2-(2_氨基-l-(3-氨基苯基)乙基硫代)苯甲酸甲酯，桔黃色糖漿狀 物，收率64%。產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。
19. 53，4-二氫-2-(3-氨基苯基)苯并[f][l，4]噻氮 _5(2H)_ 雜罩酮(HZkf05)
的制備
同實(shí)施例1.5，得產(chǎn)物3，4-二氫-2-(3-氨基苯基)苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜萆酮。 淺黃色粉末，收率58%，m.p. 231. 9°C -233. 1°C。產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。19. 63，4-二氫-2-(3-(N-叔丁氧酰氨基)苯基)苯并[f][l，4]噻氮 _5(2H)_ 雜 罩酮(HZkfO6)的制備 將實(shí)施例17步驟17. 6中的HZkj05替換成HZkf05，其余所需原料試劑及制備方 法同實(shí)施例17.6，得產(chǎn)物3，4_ 二氫-2-(3-(N-叔丁氧酰氨基)苯基)苯并[f][l，4]噻 氮-5(2H)_雜罩酮。白色針晶，收率83%，m.p. 128.0°C-131. 1°C。產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化， 直接用于下一步反應(yīng)。19.74-芐基-3，4-二氫-2-(3_(^叔丁氧酰氨基)苯基)苯并[f][l，4]噻 氮-5(2H)_雜罩酮(HZkf07a)的制備 取HZkf060. 15g，加叔丁醇鉀0. 09g, THF 1. 5ml，冰水浴反應(yīng)半小時，然后加入溴 芐，繼續(xù)反應(yīng)2小時。反應(yīng)完畢，加水，析出固體，加EtOAc萃取，萃取液brine洗滌，無水 Na2SO4干燥，減壓蒸去溶劑，產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。19. 84-芐基-3，4-二氫-2-(3-氨基苯基)苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜罩酮 (HZkf08a)的制備 將實(shí)施例17步驟17. 8中的HZkj07a替換成HZkf07a，其余所需原料試劑及制備方法同實(shí)施例17.8，得產(chǎn)物4-芐基-3，4-二氫-2-(3-氨基苯基)苯并[f][l，4]噻 氮-5(2H)_ 雜萆酮(擬1^08&)，黃色固體，收率55%，111.口. 59. 5°C -63. 20C01HwrGOOMHz, CDCl3) δ ppm 7.81(d，lH，J = 7. 5 IHz, PhH), 7. 56-7. 26 (m, 8Η, PhH)，7. 01(td，lH，J = 2. 40，7. 50Hz，PhH)，6. 54 (d, 1H, J = 7. 9IHz，PhH)，6. 42 (d, 1H, J = 7. 51Hz，PhH)，6· 38 (s, lH，PhH)，5· 04 (d, 1H, J = 14. 60Hz, PhCH2), 4. 71 (d, 1H, J = 14. 31Hz, PhCE,) ,4. 12 (dd, 1H, J = 5. 60Hz, 13. 50Hz, CH-CH2), 3. 55-3. 42 (m, 2H, CH-CH2), 2. 94 (bs, 2H, PhNH2). 13C NMR (400MHz, CDCl3) δ ppml69. 9，146. 6，142. 7，140. 7，137. 3，134. 2， 131. 3，130. 0，129. 7，129. 2，129. 1，128. 7，128. 5，127. 8,116. 9,114. 6,113. 3,53. 9,52. 8， 50. 2. MS (+ESI)m/z :361. 1 [M+H]+，721. 3 [2M+H]+.實(shí)施例204-(4-硝基芐基)-3，4-二氫-2-(3-氨基苯基)苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜 萆酮(HZkf08b)的制備20. 14-(4-硝基芐基)-3，4-二氫-2-(4-(N-叔丁氧酰氨基)苯基)苯并[f] [1， 4]噻氮-5(2H)_雜萆酮(HZkj07b)的制備 將實(shí)施例19步驟19. 7中的溴芐替換成對硝基溴芐，其余所需原料試劑及制備方 法同實(shí)施例19. 7，得產(chǎn)物4-(4-硝基芐基)-3，4-二氫-2-(3-(N-叔丁氧酰氨基)苯基)苯 并[f][l，4]噻氮-5(2H)_雜罩酮，類白色粉末，收率52%。產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化，直接用 于下一步反應(yīng)。。20. 24-(4-硝基芐基)_3，4_ 二 氫 _2-(3_ 氨基苯基)苯并[f] [1,4]噻 氮-5(2H)_雜罩酮(HZkfOSb)的制備
將實(shí)施例17步驟17. 8中的HZkj07a換成HZkf07b，其余所需原料試劑及制備方法 同實(shí)施例17.8，得產(chǎn)物4-(4_硝基芐基)-3，4_ 二氫-2-(3-氨基苯基)苯并[f][l，4]噻 氮-5(2H)_ 雜罩酮(瓜1^0813)，黃色針晶，收率89%，111. . 162. 4°C-163. 7°C。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8.78(d，2H，J = 8. 78Hz, PhH) ；7. 82 (dd, 1H, J = 1. 95Hz，7. 32Hz，PhH) ；7. 59-50 (m，5H，PhH) ；7. 06 (t, 1H, J = 7. 80Hz, PhH) ；6. 58 (dd, 1H, J=L 46Hz,7. 80Hz, PhH) ；6. 50 (d, 1H, J = 7. 80Hz, PhH) ；6. 46 (s, 1H, PhH) ；5. 07 (d, 1H, J =15. 60Hz, PhCH2) ；4. 82 (d, 1H, J = 15. 60Hz, PhCH2) ；4. 26 (dd, 1H, J = 4. 88Hz, 10. 73Hz, CH-CH2) ；3. 67-3. 46 (m, 2H, CH-CH2). 13C NMR(400MHz, CDCl3) δ ppm 170. 2，147. 5，146. 5， 144. 9，142. 1，140. 1，134. 4，131. 7，130. 0，129. 9，129. 3，129. 2，128. 7，124. 0，117. 0，114. 9，113. 3,53. 8,53. 6,50. 2. MS (+ESI) 406. 1[M+H]+ ；811. 3 [2M+H]+.實(shí)施例214-芐基-3，4_ 二氫-2-(2_甲氧基苯基)苯并[f][l，4]噻氮-5(2H)_雜萆酮 (HZkka)的制備21. 1 β -硝基-(2-甲氧基苯基)乙烯(HZkkOl)的制備 鄰甲氧基苯甲醛13. 6g (IOOmmol)，硝基甲烷 12g (20(kimol)，NH4Ac 7.7g(100mmOl)，冰醋酸85ml，一同加入三頸瓶，加熱回流3小時。反應(yīng)完畢，反應(yīng)液中 加飽和食鹽水200 ml，用EtOAc萃取。萃取液水洗，無水MgSO4干燥，減壓蒸去溶劑，得 褐色糖漿狀物粗品。粗品加甲醇稀釋，室溫放置，析出晶體，抽濾，甲醇洗滌，得黃色針晶 7. 7g(43mmol)，收率 43%, m. p. 47. 6°C -47. 9°C。1HNMR(400MHz, CDCl3) δ ppm 8. 15 (d, 1H, J = 13. 60Hz,CH = C)，7· 88 (d, 1H, J = 13. 70Hz, = CHNO2)，7. 48-7. 44 (m, 2H, PhH)，7. 02 (td, 1H，J = 1. OOHz，7. 80Hz，PhH)，6. 98 (d, 1Η, J = 7. 80Hz, PhH), 3. 95(s，3H，OCH3). MS (+ESI)m/z :180· l[M+H]+，202. 1[M+Na]+.21. 22-(2-硝基+(2-甲氧基苯基)乙基硫代)苯甲酸(HZkk02)的制備 將實(shí)施例1步驟1. 2中的HZkcOl替換成HZkkOl，其余所需原料試劑及制備方法同 實(shí)施例1.2，得產(chǎn)物2-(2-硝基-1-(2-甲氧基苯基)乙基硫代)苯甲酸。類白色針晶，收率 88%, m. ρ· 139. 3°C -140. 3°C。1HwrGOOMHz, DMS0_d6) δ ppm 13. 15 (bs, 1H, C00H), 7. 83 (dd, 1H, J=L IHz, 7. 70Hz，PhH)，7. 56-7. 47 (m, 3Η, PhH)，7. 32-7. 23 (m, 2Η, PhH)，7. 04 (m, 1H, PhH)，6. 93 (t, 1H, J = 7. 30Hz, PhH), 5. 48 (dd, 1H, J = 7. OOHz，8· 50Hz, CH-CH2), 5. 25-5. 19 (m, 1Η, CH-CH2)， 5. 05-5. 00 (m, 1Η, CH-CH2)，3. 85 (s, 3Η, OCH3) ·21·32-(2-硝基-1_(2-甲氧基苯基)乙基硫代)苯甲酸甲酯(HZkk03)的制備 將實(shí)施例1步驟1. 3中的HZkc02替換成HZkk02，其余所需原料試劑及制備方法 同實(shí)施例1.3，得產(chǎn)物2-(2-硝基-1-(2-甲氧基苯基)乙基硫代)苯甲酸甲酯。類白色針 晶，收率88%，m. p. 114. 90C -117. 8°C。產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。
21. 42-(2-氨基-1-(2-甲氧基苯基)乙基硫代)苯甲酸甲酯(HZkk04)的制備將實(shí)施例1步驟1. 4中的HZkc03替換成HZkk03，其余所需原料試劑及制備方法同 實(shí)施例1.4，得產(chǎn)物2-(2-氨基-1-(2-甲氧基苯基)乙基硫代)苯甲酸甲酯。桔黃色糖漿 狀物，收率67%。產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。。21.53，4-二氫-2-(2-甲氧基苯基)苯并[幻[1，4]噻氮_5(2!1)-雜罩酮(HZkk05) 的制備將實(shí)施例1步驟1. 5中的HZkc04替換成HZkk04，其余所需原料試劑及制備方法同 實(shí)施例1.5，得產(chǎn)物3，4-二氫-2-(2-甲氧基苯基)苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜萆酮。 類白色針晶，收率 62%，m. p. 176. 7°C -180. 1°C。1HwrGOOMHz, CDCl3) δ ppm 7. 76 (m, 1H, PhH)，7. 61 (m, 1H, PhH)，7. 49-7. 43 (m, 2H, PhH)，7. 27-7. 23 (m, 1H, PhH)，6. 92 (td, 1H, J = O. 80Hz,7. 51Hz, PhH)，6. 86 (d, 1H, J = 8.21Hz，PhH)，6. 71(t，lH，J = 6. 40Hz, PhH)，5. 12 (dd, 1H, J = 5. 11Ηζ，9. 41Hz，CHCH2), 3. 81 (s,3H, OCfl3)，3. 59-3. 53 (m，1H，CHCH2) ,3. 38-3. 30 (m, 1H, CHCH2). 13C NMR(400MHz, CDCl3) δ ppm :172. 4，156. 0，139. 8，134. 4，131. 5，130. 6，129. 8，129. 0，128. 8，128. 1， 120. 7，110. 4,55. 3,49. 1,45. 9. MS (+ESI)m/z :286. 1 [M+H]+，571. 2 [2M+H]+·21. 64-芐基-3，4-二氫-2-(2-甲氧基苯基)苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜萆 酮(HZkka)的制備將實(shí)施例1步驟1. 6中的HZkc05替換成HZkk05，其余所需原料試劑及制備方法同 實(shí)施例1，得產(chǎn)物4-芐基-3，4-二氫-2-(2-甲氧基苯基)苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜 萆酮，白色片狀晶體，收率92. 4%。1HnmrgoomHzADCI3) δ ppm 7. 82-7. 26 (m, 10H，PhH) ；7. 20 (td, 1H, J = 0. 98 Hz, 7. 31Hz，PhH) ；6. 86 (t, 1H, J = 7. 31Hz，PhH) ；6. 80 (d, 1H, J = 8. 29Hz, PhH) ；4. 91-4. 87 (m, 3H, CH2-Ph, CH-CH2) ；3. 75 (s, 3H, OCH3) ；3. 51-3. 45 (m, 2H, CH-CH2). MS (+ESI) :376· 1 [Μ+Η]+ ；
751. 3[2M+H]+.實(shí)施例224-(4-硝基芐基)-3，4-二氫-2-(2-甲氧基苯基)苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜 罩酮(HZkkc)的制備 將實(shí)施例1步驟1. 6中的HZkc05換成HZkk05，溴芐替換成對硝基溴芐，其余所需 原料試劑及制備方法同實(shí)施例1，得產(chǎn)物4-(4-硝基芐基)-3，4-二氫-2-(2-甲氧基苯基) 苯并[f][l，4]噻氮-5(2H)_雜罩酮。淺黃色針狀晶體，收率89.6%。1HNMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 8.23(d，2H，J = 8. 32Hz, PhH) ；7. 80 (dd, 1H, J = 1. 99Hz，6. 73Hz，PhH) ；7. 61 (d，3H，J = 8. 32Hz，PhH) ；7. 51-7. 45 (m，2H，PhH) ；7. 29 (d, 1H, J = 7. 92Hz, PhH) ；7. 22 (t, 1H, J = 7. 53Hz, PhH) ；6. 87 (t, 1H, J = 7. 53Hz, PhH) ；6. 82 (d, 1H, J = 7. 93Hz, PhH) ；5. 05 (d, 1H, J = 15. 45Hz, PhCH2) ；4. 88 (d, 1H, J = 15. 45Hz, PhCH2)； 5. 07-4. 86 (m, 1H, CH-CH2) ;3.75(s，3H，OCH3) ；3. 58-3. 46 (m,2H, CH-CH2). MS (+ESI) m/ζ 421. 1[M+H]+ ；841. 3[2M+H]+.實(shí)施例234-芐基-3，4_ 二氫-2_(2-羥基苯基)苯并[f][l，4]噻氮_5(2H)_雜萆酮 (HZkkb)的制備HZkka 0. 37g，氫溴酸2ml，加入三頸瓶，回流12小時。反應(yīng)完畢，反應(yīng)液室溫置冷， 析出固體，抽濾，得白色針狀晶體，收率91.6%。1HNMR(400MHz, d6_DMS0) δ ppm 9. 69 (s, 1H, PhOH) ；7. 66-7. 25(m,9H, PhH)； 7. 03 (m, 2H, PhH) ；6. 74 (d，1H，J = 7. 82Hz，PhH) ；6· 65 (t，1H，J = 7. 82Hz，PhH) ；4. 88 (dd, 1H, J = 4. 25Hz, 10. 70Hz, CH-CH2) ；4. 83 (d, 1H, J = 14. 87Hz, PhCH2) ； 4. 75 (d, 1H, J = 14. 87Hz, PhCH2) ；3. 55-3. 41(m，2H，CH-CH2). MS (+ESI) :362. 2[M+H]+ ；723. 2 [2M+H]+·實(shí)施例243，4- 二氫苯并[f] [1,4]噻氮雜罩類化合物體外對GSK-3 β的生物活 性評價①體外酶抑制活性測試采用[γ -32PJATP作為標(biāo)記試劑，通過檢測GSK-3 β的磷酸化底物pGSM的放射計 數(shù)來反映酶的活性水平。計算該濃度下化合物的抑制率，進(jìn)而測量不同濃度下的抑制率得
到化合物的半抑制濃度(IC5tl值)。實(shí)驗(yàn)中采用的陽性對照物為ATP競爭型的GSK-3i3小 分子抑制劑 SB 216763 (Sigma S3442)。所用的主要試劑如下GSK-3 β (upstate，產(chǎn)品號 H-3O6) ;GSM(upstate，產(chǎn)品號 14_533)； ATP · 2Na (Roche) ；P81 紙(upstate, 20-134) ； [ Y-32P] ATP (北京市福瑞生物工程公司核酸 研究室)；SB216763 (sigma-RBI)按如下步驟(1)、依次加入 5 X buffer 8. 5uL, GSK-3 β 溶液(4ng/uL) 2. 5uL, GSM 溶液(20ng/ uL)2. 5uL，待測化合物溶液 1. 25uL(終濃度 100uM，)，[ Y-32P] ATP溶液(luCi/uL) IOuL030°C 水浴中孵育10分鐘后，加入EDTA · 2Na溶液(IOOmM) 5uL，終止反應(yīng)。(2)、取20uL反應(yīng)液滴加到P81紙上，放置2分鐘。(3)、將上述P81紙轉(zhuǎn)移到25mL錐形瓶，加0. 75%磷酸溶液20mL，振搖(220r/m) 5 分鐘。重復(fù)洗滌共3次(4)、加入丙酮 20mL，振搖(220r/m) 5 分鐘。(5)、將P81紙轉(zhuǎn)移到托盤，烘箱40°C烘烤10分鐘。(6)、將P81紙轉(zhuǎn)移到閃爍瓶，加3mL閃爍液，讀取放射計數(shù)?；钚院Y選結(jié)果表明3，4_二氫苯并[f] [1,4]噻氮雜萆類系列化合物對GSK_3i3具 有微摩爾濃度級的抑制作用。表1為部分化合物的活性數(shù)據(jù)。表 1 ②酶動力學(xué)測試確定本發(fā)明所述化合物對GSK-3 β的作用模式測試一定濃度化合物在一系列不同ATP濃度時GSK-3 β的活性，計算出反應(yīng)速率。 通過反應(yīng)速率的倒數(shù)(1/ν)對ATP濃度的倒數(shù)(1/[ΑΤΡ])作圖得到Lineweaver-Burk圖。 根據(jù)直線的相交點(diǎn)，確定3，4_ 二氫苯并[f][l，4]噻氮雜萆類化合物的作用類型。已知的 GSK-3 β的ATP競爭型小分子抑制劑SB216763(Sigma S3442)作為參照品進(jìn)行平行測試以 驗(yàn)證測試體系的可靠性。先將[γ-32PlATP 儲備液(10uCi/uL)用 cocktail 緩沖液稀釋到 1. 5uCi/uL，此時 非標(biāo)記ATP濃度為250uM。然后用高純水稀釋成一系列ATP濃度100 μ M，70 μ M，50 μ M， 30 μ Μ, 20 μ Μ, 15 μ Μ。配制一定濃度的待測化合物，運(yùn)用上述體外酶抑制活性測試方法測試 其在該系列濃度ATP中酶的活性。計算反應(yīng)速率并對ATP濃度進(jìn)行雙倒數(shù)作圖，判斷酶抑 制劑是ATP競爭型還是非ATP競爭型。通過雙倒數(shù)圖證明本發(fā)明所述的3，4_ 二氫苯并[f][l，4]噻氮雜罩化合物對 GSK-3 β的抑制為非ATP競爭抑制(如圖1和圖2所示)。本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引 用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員基于 常識有能力對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所
25限定的范圍。
權(quán)利要求
3，4 二氫苯并[f][1，4]噻氮雜類化合物或其鹽，其特征在于，具有如下的結(jié)構(gòu)通式其中，X任選地為氧、硫或氮原子；m取自1～3，且為整數(shù)；n取自0～2，且為整數(shù)；R1、R2、R3、R4各自獨(dú)立地選自氫、鹵素、硝基、羥基、甲基、羥甲基、甲氧基、三氟甲氧基、乙?；蛘咭阴Ｑ趸?；R5和R6分別取自芳香基；所述的芳香基包括苯基，取代苯基，取代和未取代的5 7元芳雜環(huán)；其中所述苯基上的取代基可以是1 5個，該取代基選自鹵素、硝基、氨基、氰基、羥基、羧基、硼酸基、(C1 C4)烷基、(C1 C4)烷氧基、三氟甲氧基、?；蛘啧Ｑ趸凰龅? 7元芳雜環(huán)含有1 3個取自氧、硫和氮的雜原子；取代的芳雜環(huán)上含有1個或多個選自鹵素、硝基、氨基、氰基、羥基、(C1 C4)烷基、(C1 C4)烷氧基、三氟甲氧基、?；蛘啧Ｑ趸娜〈?。FSA00000081542100011.tif,FSA00000081542100012.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽，其特征在于，X為氧原子時，R5為5-7元芳香 基，m為1 3 ;R6為5-7元芳香基，n為0 2。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物或其鹽，其特征在于，R5選自苯基或取代苯基，R6選自 呋喃基、吡啶基、苯基或取代苯基；其中所述取代基數(shù)為1-5個，該取代基任意選自于鹵素、 硝基、羥基、甲基，甲氧基、三氟甲氧基、乙?；蛘咭阴Ｑ趸?。
4.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的化合物或其鹽，其特征在于，所述的鹽為藥學(xué)上可接 受的鹽，選自與鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、硝酸或磷酸形成的鹽，或與甲酸、乙酸，甲磺酸 或乙磺酸形成的鹽。
5.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備預(yù)防或治療與 GSK-3 0相關(guān)疾病的藥物中的用途。
6.一種藥物組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上 可接受的鹽。
7.權(quán)利要求5的藥物組合物在制備預(yù)防或治療與GSK-30相關(guān)疾病的藥物中的用途。
8.根據(jù)權(quán)利要求4或6所述的用途，其中所述與GSK-30相關(guān)的疾病是糖尿病、阿耳茨 海默氏病或腫瘤。
全文摘要
本發(fā)明屬藥物化學(xué)領(lǐng)域。涉及式I結(jié)構(gòu)通式的3，4-二氫苯并[f][1，4]噻氮雜類化合物或其鹽及其藥物用途。該3，4-二氫苯并[f][1，4]噻氮雜類化合物能抑制糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)，可作為GSK-3β的非ATP競爭的小分子抑制劑用于制備預(yù)防或治療與GSK-3β相關(guān)疾病的藥物。本發(fā)明還包括這類化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽組成的藥物組合物在制備預(yù)防或治療與GSK-3β相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。所述與GSK-3β相關(guān)的疾病包括糖尿病，阿耳茨海默氏病和腫瘤。
文檔編號A61P25/28GK101891706SQ201010144779
公開日2010年11月24日 申請日期2010年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月9日
發(fā)明者葉德泳, 楚勇, 胡海榮, 黃朝輝 申請人:復(fù)旦大學(xué)