專利名稱：：一種具有抗腫瘤作用的組合物及其在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種藥物，具體設(shè)計(jì)一種以蟾蜍留烯類化合物為活性成分的抗腫瘤組合物及其該組合物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：惡性腫瘤是死亡率較高的疾病，據(jù)統(tǒng)計(jì)我國(guó)癌癥每年新發(fā)病例為200萬，因癌癥死亡人數(shù)為140萬，我國(guó)居民死亡5人中，即有1人死于癌癥。目前腫瘤治療的主要手段有手術(shù)、放療、化療和生物治療，以及內(nèi)分泌治療等，但是西醫(yī)治療存在較嚴(yán)重的不良反應(yīng)，且價(jià)格昂貴。中藥蟾酥是蟾蜍科動(dòng)物中華大蟾蜍或黑眶蟾蜍的耳后腺及皮膚腺分泌的白色漿液，經(jīng)加工干燥而成。蟾皮為蟾蜍科動(dòng)物中華大蟾蜍或黑眶蟾蜍等的皮，異名為蛤鈀皮，癩蟆皮，蟾蜍衣，簡(jiǎn)稱蟾衣，又名蟾殼、蟾蛻，即由二棲動(dòng)物類脫下之表皮衣。大量的臨床實(shí)踐和國(guó)內(nèi)外的科學(xué)研究均表明，中藥蟾酥或蟾皮或蟾衣具有確切的抗腫瘤作用，具有良好的新藥開發(fā)前景，但蟾酥類中藥有毒，時(shí)有不慎過量使用導(dǎo)致中毒、死亡的報(bào)道。蟾酥中含大量的蟾蜍毒素類物質(zhì)，此類物質(zhì)屬于留族化合物，為蟾蜍留烯類(蟾蜍二烯內(nèi)酯，bufadienolide)，是一類在C-17的β位連接六元不飽和內(nèi)酯環(huán)(α-吡喃酮環(huán))的強(qiáng)心留類化合物，包括脂蟾毒配基(resibufogenin)、華蟾蜍精(Cinobufagin)、蟾毒靈(Bufalin)、羥基華蟾毒精(cinobufotalin)、蟾毒它靈(Bufotalin)、遠(yuǎn)華蟾蜍精(Teloeinobufagin)、去乙酰華蟾蜍它靈(Desacetylcinobufotalin)、蟾蜍它里寧(Bufotalinin)、沙蟾蜍精(Arenobufagin)、嚏根草甙元(Hellebrigenin)、日蟾蜍它靈(Gamabufotalin)，蟾蜍二烯內(nèi)酯化合物與氨基酸或辛二酸或糖分子形成的蟾蜍毒素的一種或幾種組成的混合物。蟾蜍留烯類化合物既是抗腫瘤活性成分同時(shí)也是心臟毒性成分。臨床和實(shí)驗(yàn)表明蟾酥具有心臟和神經(jīng)系統(tǒng)毒性，以誘發(fā)室性心律失常的心臟毒性為主。現(xiàn)代毒理研究表明，蟾酥大劑量則使麻醉貓心率減慢不齊，傳導(dǎo)阻滯，心臟停止于收縮期，中毒量蟾蜍留烯還通過興奮交感神經(jīng)系統(tǒng)影響心肌自律性，加劇鈣超載，導(dǎo)致瞬間性內(nèi)向離子流，在動(dòng)作電位4相期產(chǎn)生“遲后除極”和觸發(fā)活動(dòng)，以致心律失常。因此，心臟毒性嚴(yán)重制約著蟾酥類制劑的臨床用藥安全和新藥開發(fā)。中國(guó)專禾丨」，申請(qǐng)?zhí)枮?2135923.7、02135926.1、02114028.6、01128204.5、01128205.3,92102701.X,93104343.3,94105789.5,94114881.5,94110281.5,96121433.3、98114410.1,98100693.0,97111973.2,00110369.5,00110461.6,98112624.3,99121442.O、98125018.1,2007101984718,200710193175.9,200810050571.0,200310116881.5,03150213.X,02144901.5,200510071081.5,200610042484.1,200610066458.1、200610018348.9,200610043412.9,200810107563.5的專利申請(qǐng)有公開含有蟾酥藥材的抗腫瘤組合物，但是上述專利保護(hù)了含有多達(dá)幾十余味藥材為特征的用于腫瘤疾病的大處方，并未解決組方中既有活性又有毒性的蟾酥所帶來的致命性心臟毒性問題，尤其是上述專利組方中大量使用其它有毒藥物，如馬錢子、藤黃、斑蝥、雄黃等可進(jìn)一步加劇了蟾酥的心臟毒性。
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明目的本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)中蟾酥存在致命性心臟毒性問題的不足，提供一種抗腫瘤活性強(qiáng)，且沒有心臟毒性的以蟾蜍留烯類為主要活性物質(zhì)的組合物。本發(fā)明所述的蟾蜍甾烯類化合物的結(jié)構(gòu)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式中Rl為CHO或CH3；R2為OH或H;R3為OH;R4為H；或R3和R4形成環(huán)氧橋；R5為H或OAc。技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為一種具有抗腫瘤作用的組合物，它由下列重量份數(shù)的原料制成含有蟾蜍甾烯類化合物的物質(zhì)0.0110份，具有抗心律失常作用的藥物0.0199.9份。作為優(yōu)選方案，以上所述的具有抗腫瘤作用的組合物，是由下列重量份數(shù)的原料制成含有蟾蜍留烯類化合物的物質(zhì)110份，具有抗心律失常作用的藥物199.9份。作為更優(yōu)的方案，以上所述的具有抗腫瘤作用的組合物，是由下列重量份數(shù)的原料制成含有蟾蜍留烯類化合物的物質(zhì)110份，具有抗心律失常作用的藥物1090份。作為優(yōu)選方案，以上所述的含有蟾蜍留烯類化合物的物質(zhì)可為純蟾蜍留烯類化合物、富含蟾蜍留烯類化合物的提取物、蟾酥或蟾皮。本發(fā)明所述的具有抗腫瘤作用的組合物，其中所述的具有抗心律失常作用的藥物為具有抗心律失常作用的中藥、中藥提取物、中藥復(fù)方、天然產(chǎn)物或化學(xué)藥品中的一種或多種混合物。作為優(yōu)選方案，所述的具有抗心律失常作用的中藥為人參、西洋參、黃芪、紅景天、靈芝、山楂、薤白或黃楊等補(bǔ)氣理氣類中藥中的一種或幾種的混合物或者為人參芍藥湯(組方紅參、黃芪、麥冬、五味子、甘草、白芍、當(dāng)歸)、補(bǔ)中益氣湯、甘麥大棗湯、瓜蔞薤白半夏湯、逍遙散等補(bǔ)氣理氣類中藥復(fù)方中的一種或幾種的混合物，以上藥物和蟾蜍留烯類化合物、富含蟾蜍留烯類化合物的提取物、蟾酥或蟾皮配伍組合后，抗腫瘤活性仍然較強(qiáng)，但心臟毒性的不良反應(yīng)明顯降低。作為另一優(yōu)選方案，所述的具有抗心律失常作用的中藥也可為麥冬、薯蕷、五味子、山茱萸、桑寄生或熟地等滋陰類中藥中的一種或幾種的混合物或者為復(fù)脈湯(組方為炙甘草、生姜、桂枝、人參、生地黃、阿膠、麥門冬、麻仁、大棗)加減方、生脈散加減方、五味子湯或六味地黃湯等滋陰類中藥復(fù)方，經(jīng)抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)篩選和心臟毒性實(shí)驗(yàn)研究表明，以上藥物和蟾蜍留烯類化合物、富含蟾蜍留烯類化合物的提取物、蟾酥或蟾皮配伍組合后，抗腫瘤活性不變甚至有增強(qiáng)趨勢(shì)，但心臟毒性明顯降低。作為另一優(yōu)選方案，以上所述的具有抗心律失常作用的藥物也可以為當(dāng)歸、酸棗仁、丹參、三七、赤芍、葛根或銀杏等補(bǔ)血、活血類中藥中的一種或幾種的混合物或者為當(dāng)歸補(bǔ)血湯、歸脾湯、酸棗仁湯(組方為酸棗仁、甘草、知母、茯苓、川芎)、龍骨牡蠣湯加味或血府逐瘀湯等補(bǔ)血、活血類中藥復(fù)方，經(jīng)抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)篩選和心臟毒性實(shí)驗(yàn)研究表明，以上藥物和蟾蜍留烯類化合物、富含蟾蜍留烯類化合物的提取物、蟾酥或蟾皮配伍組合后，抗腫瘤活性仍然較強(qiáng)，但心臟毒性的不良反應(yīng)明顯降低。作為另一優(yōu)選方案，以上所述的具有抗心律失常作用的藥物也可以選用金銀花、黃連、苦參、山豆根、菊花、黃連解毒湯中的清熱解毒類藥物或者也可以選用桂枝、肉桂、淫羊藿、桂枝甘草湯中的溫陽類藥物，經(jīng)抗腫瘤活性篩選和心臟毒性實(shí)驗(yàn)研究，以上藥物和蟾蜍甾烯類化合物、富含蟾蜍留烯類化合物的提取物、蟾酥或蟾皮配伍組合后，抗腫瘤活性不變甚至有增強(qiáng)趨勢(shì)，但心臟毒性明顯降低。作為其它優(yōu)選方案，以上所述的具有抗心律失常作用的藥物為膽紅素、牛磺酸、小檗堿、槲皮素、蘆丁、薯蕷皂苷元、薯蕷皂苷、環(huán)維黃楊星D、黃芪皂苷、關(guān)附甲素、芍藥苷、葛根素、丹參酚酸、銀杏內(nèi)酯、苦參堿、槐果堿、番茄紅素、茶多酚等天然產(chǎn)物，經(jīng)抗腫瘤活性篩選和心臟毒性實(shí)驗(yàn)研究，以上藥物和蟾蜍留烯類化合物、富含蟾蜍留烯類化合物的提取物、蟾酥或蟾皮配伍組合后，抗腫瘤活性不變甚至有更強(qiáng)，但心臟毒性的不良反應(yīng)明顯降低。作為進(jìn)一步優(yōu)選方案，所述的具有抗心律失常作用的藥物為β受體阻斷劑、奎尼丁、氯化鉀、硫酸鎂、苯妥英鈉、維拉帕米、尼莫地平、阿托品、利多卡因、普魯卡因酰胺、異搏停、莫索尼定、西酞普蘭、利血平、奧扎格雷化學(xué)藥品中的一種或多種混合物，經(jīng)抗腫瘤活性篩選和心臟毒性實(shí)驗(yàn)研究，以上藥物和蟾蜍留烯類化合物、富含蟾蜍留烯類化合物的提取物、蟾酥或蟾皮配伍組合后，抗腫瘤活性不變或進(jìn)一步提高，但心臟毒性的不良反應(yīng)明顯降低。本發(fā)明所述的具有抗腫瘤作用的組合物在制備治療抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。作為優(yōu)選方案，本發(fā)明所述的具有抗腫瘤作用的組合物在制備治療肝癌、胃癌、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、白血病或肺癌藥物中的應(yīng)用。以上所述的組合物在制備治療抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，具體是將本發(fā)明提供的組合物和藥學(xué)上可接受的載體如稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等，必要時(shí)還可以加入香味劑、甜味劑等制備成注射液、片齊、粉針劑、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、霜?jiǎng)┑榷喾N劑型。本發(fā)明提供的組合物制成片劑時(shí)，把組合物和載體乳糖或玉米淀粉，需要時(shí)加入潤(rùn)滑劑硬脂酸鎂，混合均勻，然后壓片制成片劑。本發(fā)明提供的組合物制成膠囊劑時(shí)把組合物和載體乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，然后裝膠囊制成膠囊劑。本發(fā)明提供的組合物制成顆粒劑時(shí)，把組合物和稀釋劑乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，干燥，制成顆粒劑。如把本發(fā)明提供的組合物制成注射液時(shí)，取組合物提取液加入增溶劑，攪拌均勻，80°C加熱30分鐘，過濾，調(diào)節(jié)PH值，用垂熔玻璃漏斗或其它濾器過濾至澄明，灌裝，在100至115°C滅菌30分鐘制成注射液。有益效果本發(fā)明提供的蟾蜍留烯類化合物、富含蟾蜍留烯類化合物的提取物、蟾酥或蟾皮和具有抗心律失常作用的藥物的組合物和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明提供的具有抗腫瘤作用的組合物，組成成分的配比經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)篩選得至IJ，組分之間配比科學(xué)合理，且經(jīng)過多種腫瘤細(xì)胞毒性和在體抑瘤實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提供的組合物不但具有很好的抗腫瘤效果，且部分組合物的抗腫瘤效果明顯比原來單獨(dú)使用蟾蜍甾烯類化合物、蟾酥或蟾皮的抗腫瘤效果更強(qiáng)，組合后起到了協(xié)同增效的作用；并且通過心臟毒性實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提供的組合物的心臟毒性明顯比原來單獨(dú)使用蟾蜍留烯類化合物、蟾酥或蟾皮的心臟毒性低，因此，經(jīng)組合后可以降低原來單獨(dú)使用蟾蜍留烯類化合物、蟾酥或蟾皮的心臟毒性，起到解毒增效的作用，使用更安全。2、本發(fā)明提供的具有抗腫瘤作用的組合物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明對(duì)多種腫瘤都具有較強(qiáng)的抑制作用，應(yīng)用范圍廣泛，且其中減毒增效的組分可以選用具有抗心律失常作用的中藥、中藥提取物、中藥復(fù)方、天然產(chǎn)物或化學(xué)藥品中的一種或多種混合物，因此本發(fā)明提供的組合物，原料易得，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià)形式的修改均落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求所限定的范圍。實(shí)施例1蟾酥與減毒輔藥提取物組合對(duì)多種腫瘤細(xì)胞增殖的抑制活性采用MTT法檢測(cè)蟾酥和蟾酥與不同藥物的組合物對(duì)人胃癌細(xì)胞MGC803、人肝癌細(xì)胞SMMC7721、人肺癌細(xì)胞A549、人白血病細(xì)胞HL-60、人宮頸癌細(xì)胞SiHa、人卵巢癌細(xì)胞A2780、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、人前列腺癌細(xì)胞PC-3的增殖影響，并以二甲基亞砜作為陰性對(duì)照組，以紫杉醇作為陽性對(duì)照組，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1和表2。表1蟾酥與不同藥物的組合物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表2蟾酥與不同藥物的組合物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>如表1和表2所示，蟾酥在10μg/ml的劑量下，能夠顯著抑制人胃癌細(xì)胞MGC803、人肝癌細(xì)胞SMMC7721、人肺癌細(xì)胞A549、人白血病細(xì)胞HL-60、人宮頸癌細(xì)胞SiHa、人卵巢癌細(xì)胞A2780、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、人前列腺癌細(xì)胞PC-3的增殖，其抑制率分別為73.8%、82.6%、62.4%、70.8%、80.7%、86.8%、66.7%、58.4%。蟾酥與不同藥物的組合物的抗腫瘤活性與蟾酥單獨(dú)比較，有不同程度的增加，尤其是蟾酥(lOwg/ml)與薯蕷提取物(100μg/ml)的組合，對(duì)上述人胃癌細(xì)胞MGC803、人肝癌細(xì)胞SMMC7721、人肺癌細(xì)胞A549、人白血病細(xì)胞HL-60、人宮頸癌細(xì)胞SiHa、人卵巢癌細(xì)胞A2780、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、人前列腺癌細(xì)胞PC-3的抑制率達(dá)到了97.4%.90.5%.95.3%.95.0%、98·2%.98.6%.96.3%和95.9%，其抗腫瘤效果顯著優(yōu)于蟾酥，并且優(yōu)于對(duì)照藥物紫杉醇(10μg/ml)的抗癌活性；其它多種單味中藥或復(fù)方與蟾酥組合后，其抗腫瘤活性在不同瘤株上均有不同程度增力口，以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蟾酥與當(dāng)歸、酸棗仁等中藥提取液或者人參芍藥湯、瓜蔞薤白半夏湯、復(fù)脈湯等具有抗心率失常的復(fù)方組合后，抗腫瘤效果更好，表明組合物各成分之間具有協(xié)同增效的作用。實(shí)施例2蟾蜍留烯與不同藥物組合后對(duì)多種腫瘤細(xì)胞增殖的抑制活性釆用MTT法檢測(cè)蟾酥留烯(脂蟾毒配基、日蟾蜍它靈華蟾蜍精、蟾毒靈、羥基華蟾毒精、蟾毒它靈、遠(yuǎn)華蟾蜍精、去乙酰華蟾蜍它靈、蟾蜍它里寧、沙蟾蜍精、嚏根草甙元的混合物，下同)和蟾酥甾烯與不同藥物的組合物對(duì)人胃癌細(xì)胞MGC803、人肝癌細(xì)胞S匪C7721、人肺癌細(xì)胞A549、人白血病細(xì)胞HL-60、人宮頸癌細(xì)胞SiHa、人卵巢癌細(xì)胞A2780、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、人前列腺癌細(xì)胞PC-3的增殖影響，并以二甲基亞砜作為陰性對(duì)照組，以紫杉醇作為陽性對(duì)照組，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示。表3蟾蜍留烯與不同藥物的組合物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由表3抗腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蟾蜍甾烯(2.5wg/ml)具有與蟾酥(10pg/ml)類似的抗腫瘤作用，能夠顯著抑制MGC803、SMMC7721、A549、HL-60、SiHa、A2780、MCF-7和PC-3細(xì)胞的增殖，其抑制率分別為71.5%、84.3%、64.5%、79.6%、71.1%、89.5%、63.5%、70.1%。蟾蜍留烯與不同減毒物質(zhì)組合后抗腫瘤活性有不同程度增加。尤其是蟾蜍甾烯(2.5μg/ml)與薯蕷皂苷(10μg/ml)的組合，對(duì)上述腫瘤細(xì)胞抑制率分別達(dá)到了94.3%、93.3%.84.9%.82.3%.91.4%.95.6%.87.5%和90.3%，抗腫瘤效果顯著優(yōu)于蟾蜍甾烯，且通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該組合物的抗腫瘤效果優(yōu)于對(duì)照藥物紫杉醇(10μg/ml)，因此，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也進(jìn)一步表明蟾蜍留烯類化合物和不同藥物組合后具有協(xié)同增效的作用，抗腫瘤活性更強(qiáng)。實(shí)施例3蟾蜍與中藥復(fù)方的組合物對(duì)H22荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用取小鼠60只，分為6組，每組10只，每只小鼠接種H22荷瘤稀釋液0.2ml，然后每天給與蟾酥25mg/kg、蟾酥+當(dāng)歸補(bǔ)血湯25+600mg/kg，蟾酥+人參芍藥湯25+1600mg/kg、蟾酥+生脈湯25+500mg/kg、蟾酥+復(fù)脈湯25+1000mg/kg，連續(xù)給藥七天后，處死小鼠剝離各組小鼠H22荷瘤，稱量瘤重，計(jì)算抑瘤率，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4所示。表4、蟾酥與中藥復(fù)方的組合物對(duì)H22荷瘤小鼠腫瘤抑制情況<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明提供的蟾蜍與中藥復(fù)方組合后，具有更好的抗腫瘤效果，蟾酥在25mg/kg的劑量下，對(duì)H22荷瘤小鼠的抑瘤率為45.4%；而蟾酥+當(dāng)歸補(bǔ)血湯、蟾酥+人參芍藥湯、蟾酥+生脈湯、蟾酥+復(fù)脈湯組對(duì)H22荷瘤小鼠的抑瘤率分別為60.7%、75.5%,55.8%和70.4%，均高于較蟾酥組的抑瘤率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也說明蟾蜍與中藥復(fù)方組合后同樣也可以起到協(xié)同增效抗腫瘤的作用。實(shí)施例4蟾蜍留烯與不同減毒物質(zhì)組合后對(duì)H22荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用取小鼠80只，分為8組，每組10只，每只小鼠接種H22荷瘤稀釋液0.2ml，然后每天給與蟾酥留烯5mg/kg、蟾蜍留烯+黃芪皂苷5+100mg/kg，蟾蜍留烯+薯蕷皂苷5+100mg/kg,蟾蜍留烯+?；撬?+200mg/kg，蟾蜍留烯+小檗堿5+100mg/kg，蟾蜍留烯+苯妥英鈉5+40mg/kg,蟾蜍留烯+薯蕷皂苷+?；撬?+100+200mg/kg，連續(xù)給藥七天后，處死小鼠剝離各組小鼠H22荷瘤，稱量瘤重，計(jì)算抑瘤率，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表5所示。表5、蟾蜍留烯與不同天然產(chǎn)物組合后對(duì)H22荷瘤小鼠腫瘤重量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由以上表5的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蟾蜍甾烯(5mg/kg)與蟾酥(20mg/kg)具有類似的抗腫瘤效果，對(duì)H22荷瘤小鼠腫瘤的抑瘤率為51.8%；而蟾蜍留烯+黃芪皂苷、蟾蜍留烯+薯蕷皂苷、蟾蜍留烯+牛磺酸、蟾蜍留烯+小檗堿和蟾蜍留烯+薯蕷皂苷+?；撬峤M的抑瘤率均高于蟾蜍留烯組，說明這些組合物的抗腫瘤效果優(yōu)于蟾蜍留烯，并且蟾蜍留烯+薯蕷皂苷+?；撬岬慕M合物具有更強(qiáng)的抗腫瘤效果。實(shí)施例5蟾皮提取物與減毒物質(zhì)的組合物對(duì)H22荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用取小鼠40只，分為4組，每組10只，每只小鼠接種H22荷瘤稀釋液0.2ml，然后每天給與蟾皮提取物50mg/kg、蟾皮+薯蕷提取物50+300mg/kg、蟾皮+黃芪提取物50+300mg/kg,連續(xù)給藥七天后，處死小鼠剝離各組小鼠H22荷瘤，稱量瘤重，計(jì)算抑瘤率，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表6所示。表6蟾皮提取物與減毒物質(zhì)組合對(duì)H22荷瘤小鼠腫瘤重量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由以上表6的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蟾皮提取物(50mg/kg)較蟾酥(20mg/kg)的抗腫瘤效果弱，抑瘤率為37.4%；而蟾皮提取物+薯蕷提取物、蟾皮提取物+黃芪提取物的抑瘤率達(dá)到61.9%和53.(表5)，說明這些組合物可以起到協(xié)同增效的作用，抗腫瘤效果優(yōu)于蟾皮提取物。實(shí)施例6蟾酥與不同減毒物質(zhì)組合后對(duì)豚鼠離體心臟的毒性影響如表7所示，蟾酥誘導(dǎo)豚鼠離體心臟產(chǎn)生心律異常，以蟾蜍留烯計(jì)算(25%得率)，產(chǎn)生致死性心律失常所需的量為32.5士5.0μg；蟾酥與減毒物質(zhì)共同給予灌流的豚鼠心臟，產(chǎn)生致死性心律失常所需蟾酥的累積劑量顯著提高，表明組合物的心臟毒性顯著降低，尤其是蟾酥與薯蕷提取物、黃芪提取物、黃連提取物、復(fù)脈湯、人參芍藥湯、當(dāng)歸補(bǔ)血湯組合后，心臟毒性下降23倍，蟾酥與其它減毒物質(zhì)組合后，心臟毒性均有不同程度降低，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明蟾酥和薯蕷、西洋參、黃芪、金銀花、山茱萸、黃連提取物、復(fù)脈湯、人參芍藥湯等藥物組合后可以大大降低蟾酥的心臟毒性，組合后可以起到減毒的作用，在保證相同或更好的抗腫瘤活性的條件下，心臟毒性更低，更安全。表7蟾酥及蟾酥與減毒物質(zhì)組合后對(duì)豚鼠離體心臟毒性的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實(shí)施例7蟾蜍留烯與減毒物質(zhì)組合后對(duì)豚鼠離體心臟的毒性影響如表8實(shí)驗(yàn)結(jié)果所示，蟾蜍留烯與不同減毒物質(zhì)組合后給予灌流豚鼠心臟，產(chǎn)生致死性心律失常所需蟾蜍留烯的累積劑量顯著高于蟾蜍留烯單獨(dú)灌流，表明組合物的心臟毒性顯著降低。其中，蟾蜍留烯與?；撬?、薯蕷皂苷、黃芪皂苷、小檗堿和環(huán)維黃楊星D組合后，心臟毒性顯著下降，毒性約降低2-3倍，蟾蜍留烯與其它減毒化合物組合后，心臟毒性均有不同程度降低，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，組合后減毒物質(zhì)可以明顯降低蟾蜍留烯的毒副作用，在保證相同或更好的抗腫瘤活性的條件下，心臟毒性更低。表8蟾蜍留烯及蟾蜍留烯與減毒物質(zhì)組合后對(duì)豚鼠離體心臟的毒性影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實(shí)施例8蟾蜍留烯與減毒物質(zhì)的組合物對(duì)豚鼠在體心臟毒性按表9所示劑量灌胃給予蟾蜍留烯、蟾蜍留烯與減毒物質(zhì)的組合物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明組合物誘發(fā)致死性心率失常所需要的蟾蜍留烯累積量顯著高于單獨(dú)給予蟾蜍留烯，尤其是蟾蜍留烯+薯蕷皂苷+?；撬峤M合物，其誘發(fā)致死性心率失常所需蟾蜍留烯累積量是單獨(dú)給予蟾蜍留烯的3.55倍，說明毒性下降3.55倍，因此通過在體心臟毒性研究結(jié)果表明，本發(fā)明提供的蟾蜍留烯與減毒物質(zhì)的組合后，可以顯著降低蟾蜍留烯的心臟毒性。表9蟾蜍留烯及蟾蜍留烯與減毒物質(zhì)的組合物對(duì)豚鼠在體心臟毒性情況<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>按表10所示劑量灌胃給予蟾蜍留烯與蟾蜍留烯和化學(xué)藥物的組合物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明組合物誘發(fā)致死性心率失常所需要的蟾蜍留烯累積量顯著高于單獨(dú)給予蟾蜍留烯，尤其是蟾蜍留烯+苯妥英鈉組合物，其誘發(fā)致死性心率失常所需蟾蜍留烯累積量是單獨(dú)給予蟾蜍留烯的3.2倍，即毒性下降3.2倍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步表明本發(fā)明提供的蟾蜍留烯與具有抗心律失常的化學(xué)藥物組合后，可以顯著降低蟾蜍留烯的心臟毒性，提高臨床用藥安全。表10蟾蜍留烯及蟾蜍留烯與化學(xué)藥物的組合物對(duì)豚鼠在體心臟毒性情況<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>通過以上抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的蟾蜍留烯類化合物、蟾酥或蟾皮和其提取物與不同抗心律失常作用中藥、中藥復(fù)方、天然產(chǎn)物或化學(xué)藥品組合后抗腫瘤活性不減低，甚至有協(xié)同增效的作用；且通過離體和在體心臟毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蜍留烯類化合物、蟾蜍或蟾皮和不同中藥、中藥復(fù)方、天然產(chǎn)物或化學(xué)藥品組合后，可以明顯降低單獨(dú)使用蟾蜍留烯類化合物、富含蟾蜍留烯類化合物的提取物、蟾酥或蟾皮的心臟毒性，起到解毒增效的作用，因此本發(fā)明提供的組合物，其抗腫瘤作用更強(qiáng)，心臟毒性更低，有望開發(fā)成為新一代抗腫瘤的藥物制劑。權(quán)利要求一種具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，它由下列重量份數(shù)的原料制成含有蟾蜍甾烯類化合物的物質(zhì)0.01～10份，具有抗心律失常作用的藥物0.01～99.9份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述的含有蟾蜍甾烯類化合物的物質(zhì)為純蟾蜍留烯類化合物、富含蟾蜍留烯類化合物的提取物、蟾酥或蟾皮生藥。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述的具有抗心律失常作用的藥物為具有抗心律失常作用的中藥、中藥提取物、中藥復(fù)方、天然產(chǎn)物或化學(xué)藥品中的一種或多種混合物。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述的具有抗心律失常作用的中藥為人參、西洋參、黃芪、紅景天、靈芝、山楂、薤白或黃楊中的補(bǔ)氣理氣類中藥或人參芍藥湯、補(bǔ)中益氣湯、甘麥大棗湯、瓜蔞薤白半夏湯、逍遙散中的補(bǔ)氣理氣類中藥復(fù)方。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述的具有抗心律失常作用的中藥為麥冬、薯蕷、五味子、山茱萸、桑寄生或熟地中的滋陰類中藥或復(fù)脈湯加減方、生脈散加減方、五味子湯或六味地黃湯中的滋陰類中藥復(fù)方。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述的具有抗心律失常作用的藥物為當(dāng)歸、酸棗仁、丹參、三七、黃山藥、赤芍、葛根或銀杏中的補(bǔ)血、理血類中藥或當(dāng)歸補(bǔ)血湯、歸脾湯、酸棗仁湯、龍骨牡蠣湯加味或血府逐瘀湯中的補(bǔ)血、理血類中藥復(fù)方。7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述的具有抗心律失常作用的藥物為金銀花、黃連、苦參、山豆根、菊花、黃連解毒湯中的清熱解毒類藥物或者為桂枝、肉桂、淫羊藿、桂枝甘草湯中的溫陽類藥物。8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述的具有抗心律失常作用的藥物為膽紅素、?；撬帷⑿￠迚A、槲皮素、蘆丁、薯蕷皂苷元、薯蕷皂苷、環(huán)維黃楊星D、黃芪皂苷、黃芪甲苷、關(guān)附甲素、芍藥苷、葛根素、丹參酚酸、銀杏內(nèi)酯、苦參堿、槐果堿、番茄紅素、茶多酚中的天然產(chǎn)物。9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有抗腫瘤作用的組合物，其特征在于，所述的具有抗心律失常作用的藥物為β受體阻斷劑、奎尼丁、氯化鉀、硫酸鎂、苯妥英鈉、維拉帕米、尼莫地平、阿托品、利多卡因、普魯卡因酰胺、異搏停、莫索尼定、西酞普蘭、利血平、奧扎格雷化學(xué)藥品中的一種或多種混合物。10.權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的具有抗腫瘤作用的組合物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明提供了一種具有抗腫瘤作用的組合物及其應(yīng)用，該組合物是一類由0.01～10重量份數(shù)的純蟾蜍甾烯類化合物、富含蟾蜍甾烯類化合物的提取物、蟾酥或蟾皮生藥和0.01～99.9重量份數(shù)的具有抗心律失常作用的藥物組成。本發(fā)明提供的抗腫瘤作用的組合物，組分之間配比科學(xué)合理，且經(jīng)過多種體外腫瘤細(xì)胞毒和在體抑瘤實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提供的組合物具有很好的抗腫瘤效果，組合后起到了協(xié)同增效的作用；并且通過心臟毒性實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提供的組合物的心臟毒性明顯降低，經(jīng)組合后可以降低原來單獨(dú)使用蟾蜍甾烯類化合物、蟾酥或蟾皮所引起的心臟毒性，起到解毒的作用。因此，使用更安全、有效，有望開發(fā)成為新一代抗癌藥物。文檔編號(hào)A61K31/585GK101822832SQ20101014804公開日2010年9月8日申請(qǐng)日期2010年4月16日優(yōu)先權(quán)日2010年4月16日發(fā)明者馬宏躍申請(qǐng)人:馬宏躍