專利名稱：：抗雞新城疫病毒的中藥組合物及制備方法
技術(shù)領域：
：本發(fā)明涉及獸藥制備
技術(shù)領域：
，具體說是涉及一種天然綠色的中藥組合物及其制備方法。該組合物對新城疫病毒具有明顯的抑殺作用、能調(diào)節(jié)機體免疫、提高整體抗病性能。
背景技術(shù)：
：新城疫是由新城疫病毒引起的、以感染禽類為主的一種急性、高度接觸性、烈性傳染病，是威脅世界養(yǎng)禽業(yè)的主要疾病之一，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為A類傳染病。目前主要采用疫苗接種預防該病的發(fā)生，基本控制了典型性新城疫的流行，但病毒變異、野毒感染、疫苗保管或使用不當、其它疾病對抗體產(chǎn)生的干擾等等因素都會造成免疫不全或失敗，致使非典型性新城疫經(jīng)常發(fā)生，嚴重影響產(chǎn)蛋、增加生產(chǎn)成本、污染周圍環(huán)境造成惡性循環(huán)，給養(yǎng)雞業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。對新城疫疾病的治療藥物主要是化療藥鹽酸金剛烷胺和利巴韋林，動物試驗表明兩種藥物均有致畸作用，且鹽酸金剛烷胺還可誘導耐藥毒株的產(chǎn)生，長期應用使病毒產(chǎn)生抗藥性而影響療效。中草藥在世界范圍內(nèi)被大家所公認和大量使用，試驗表明中草藥在發(fā)揮其臨床療效時，體現(xiàn)的是“藥食同補”的原則，不僅提供相應的植物營養(yǎng)素，同時，多層次、多靶點地發(fā)揮抑殺病毒、提高免疫力的作用，且病原微生物對其不易產(chǎn)生耐藥性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的正是針對上述現(xiàn)有技術(shù)中所存在的不足之處而提供一種主要以抗禽類新城疫病毒為主的抗雞新城疫病毒的中藥組合物及制備方法。該中藥組合物也可用于其它動物抗病毒性疾病。本發(fā)明的目的可通過下述技術(shù)措施來實現(xiàn)本發(fā)明的抗雞新城疫病毒的中藥組合物包括下述重量份數(shù)比的原料，其中板藍根525份、金銀花525份、柴胡320份、貫眾515份、白茅根420份、黃芩520份、丹皮515份、藿香412份、茯苓319份、苦參412份。本發(fā)明的制備方法包括下述步驟a、按重量份數(shù)比稱取藿香，采用超臨界萃取技術(shù)提取揮發(fā)油，并用體積份數(shù)比為13的乙醇溶解備用；b、將a步驟已提取過取揮發(fā)油的藿香藥渣同其它中藥原料一起進行水提取，首先浸泡l_2h，用水量以原料藥材被水浸沒即可，再用熱回流提取5-8h，之后進行過濾，取濾液濃縮至原浸提液的1/100成流浸膏狀；C、對水提過的藥渣進行2次醇沉，首先在殘渣中加入3-5倍體積比的乙醇含量為70%的乙醇進行醇沉12-15h，然后再加入3-5倍體積比的乙醇含量為80%的乙醇進行再次醇沉12-15h；過濾去殘渣，濾液進行減壓回收乙醇；d、合并步驟a、b、c所制備出的三種提取液，用純化水稀釋至處方量lg/mL，4°C保存?zhèn)溆谩Ｖ嗅t(yī)理論認為新城疫等病毒性疾病為疫癘之邪，屬于瘟病范疇。中草藥的清熱藥、解表藥及其所組成的方劑，抗病毒的基本原理在于“扶正祛邪”，多層次、多靶點地阻斷病毒吸附、穿入、復制、成熟等過程的某一或某些環(huán)節(jié)而抑殺病毒，并通過促進機體的特異性和非特異性免疫功能而提高機體的免疫功能，達到防治新城疫疾病的療效。組方的君藥主要包括板藍根、金銀花、柴胡、貫眾，為清熱解毒類藥物，發(fā)揮抗病毒、抗菌、促進白細胞吞噬作用、解熱等作用，能有效地減少病毒在體內(nèi)的數(shù)量、阻斷新城疫病毒的入侵，提高機體的免疫功能；臣藥主要包括白茅根、黃芩、丹皮，在清熱燥濕的基礎上，瀉火利尿、止血化瘀，消除病毒對宿主細胞的損害作用，抑制病毒的合成、組裝和釋放，抑制病毒的增殖；輔佐藥主要有藿香、茯苓、苦參，具有芳香化濕、行氣化滯、健脾寧心、調(diào)和藥性等功效，促進機體的消化吸收、促進機體恢復、減少藥物的毒副作用，從而達到全面抗新城疫疾病、提高機體素質(zhì)的療效。本發(fā)明的有益效果如下本發(fā)明的中藥組合物不僅有效地防治動物性疾病、潔凈生態(tài)環(huán)境，且能提供天然綠色的生態(tài)食品，更好地為人類健康、畜牧業(yè)生產(chǎn)服務，該中藥組合物具有巨大的抗病、提高免疫力的優(yōu)勢。圖1雞胚尿囊液NDV的HA效價。圖2“預防+治療”組發(fā)病保護率。圖3“治療”組發(fā)病保護率。具體實施例方式本發(fā)明將結(jié)合以下實施例作進一步說明實施例1a、按重量份數(shù)比稱取藿香4份，采用超臨界萃取技術(shù)提取揮發(fā)油，并用體積份數(shù)比為13的乙醇溶解備用；b、將a步驟已提取過取揮發(fā)油的藿香藥渣同按重量份數(shù)比稱取的板藍根5份、金銀花25份、白茅根20份、茯苓10份、丹皮15份、貫眾7份、黃芩5份、苦參6份、柴胡3份一起進行水提取，用水量以原料藥材被水浸沒即可。首先浸泡l_2h，再用熱回流提取5-8h，之后進行過濾，取濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行濃縮至原浸提液的1/100成流浸膏狀；C、對水提過的藥渣進行2次醇沉，首先在殘渣中加入3-5倍體積比的乙醇含量為70%的乙醇進行醇沉12-15h，然后再加入3-5倍體積比的乙醇含量為80%的乙醇進行再次醇沉12-15h；過濾去殘渣，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行進行減壓回收乙醇；d、合并步驟a、b、c所制備出的三種提取液，用純化水稀釋至處方量lg/mL，4°C保存?zhèn)溆?。實施?a、按重量份數(shù)比稱取藿香6份，采用超臨界萃取技術(shù)提取揮發(fā)油，并用體積份數(shù)比為13的乙醇溶解備用；b、將a步驟已提取過取揮發(fā)油的藿香藥渣同按重量份數(shù)比稱取的板藍根25份、柴胡20份、黃芩20份、丹皮8份、金銀花5份、貫眾5份、白茅根4份、茯苓3份、苦參4份一起進行水提取，首先浸泡l_2h，用水量以原料藥材被水浸沒即可，再用熱回流提取5-8h，之后進行過濾，取濾液濃縮至原浸提液的1/100成流浸膏狀；C、對水提過的藥渣進行2次醇沉，首先在殘渣中加入3-5倍體積比的乙醇含量為70%的乙醇進行醇沉12-15h，然后再加入3-5倍體積比的乙醇含量為80%的乙醇進行再次醇沉12-15h；過濾去殘渣，濾液進行減壓回收乙醇；d、合并步驟a、b、c所制備出的三種提取液，用純化水稀釋至處方量lg/mL，4°C保存?zhèn)溆?。實施?a、按重量份數(shù)比稱取藿香12份，采用超臨界萃取技術(shù)提取揮發(fā)油，并用體積份數(shù)比為13的乙醇溶解備用；b、將a步驟已提取過取揮發(fā)油的藿香藥渣同按重量份數(shù)比稱取的板藍根10份、貫眾15份、茯苓19份、黃芩12份、苦參12份、丹皮5份、金銀花5份、白茅根5份、柴胡5份一起進行水提取，用水量以原料藥材被水浸沒即可。首先浸泡l_2h，再用熱回流提取5-8h，之后進行過濾，取濾液濃縮至原浸提液的1/100成流浸膏狀；C、對水提過的藥渣進行2次醇沉，首先在殘渣中加入3-5倍體積比的乙醇含量為70%的乙醇進行醇沉12-15h，然后再加入3-5倍體積比的乙醇含量為80%的乙醇進行再次醇沉12-15h；過濾去殘渣，濾液進行減壓回收乙醇；d、合并步驟a、b、c所制備出的三種提取液，用純化水稀釋至處方量lg/mL，4°C保存?zhèn)溆谩１景l(fā)明的試驗效果如下(1)藥物的毒性試驗試驗方法將3組實施例的組合物用生理鹽水分別進行0、5、10、50、100倍稀釋，分別注入9日齡的SPF雞胚尿囊腔內(nèi)，0.2mL/只，隔12h再注一次，共注射2次，每個處理4個平行實驗，設生理鹽水對照組，共用72枚雞胚。注射后，于37°C恒溫培養(yǎng)箱孵育72h，每天觀察雞胚成活狀態(tài)，72h未死亡的雞胚繼續(xù)孵化直至出雛。以雞胚出現(xiàn)死亡的最小用藥濃度為該藥液的最小致死濃度。試驗結(jié)果所有濃度藥液接種雞胚無一死亡，孵化出雛的雛雞正常。因此，藥液對雞胚的最小致死量大于lg/mL，毒性極小或無毒。(2)抗新城疫病毒的雞胚試驗試驗方法將組合物與病毒采用不同的方式進行作用。以注入組合物2_4h后再注入新城疫病毒為“預防”方式；以組合物和新城疫病毒在體外37°C恒溫下作用2-4h后再注入雞胚為“直接殺毒”方式；以先注入病毒2-4h后加入組合物為“治療”方式。同時，將病毒和生理鹽水注入雞胚設為陽性和陰性對照，以雞胚新城疫病毒滴度的變化和雞胚的成活率作為衡量指標，計算組合物對雞胚的保護率保護率=(總雞胚數(shù)_死亡雞胚數(shù))/總雞胚數(shù)X100%。注入組合物的濃度為lg/mL，以9-11日齡的SPF雞胚為實驗材料，病毒選用雞新城疫中等毒力活疫苗(I系)，注射量均劑量為0.2mL/枚，每種處理設3個重復，每個重復10枚雞胚，共用330枚SPF雞胚。37°C恒溫箱培養(yǎng)。棄去24h以內(nèi)死亡雞胚，收集24_72h存活雞胚的尿囊液，采用血凝實驗測定尿囊液病毒的滴度。試驗結(jié)果AHA效價(參見圖1)圖中所示的新城疫病毒效價均為平均效價。為了便于與陽性病毒效價對照，將陽性病毒效價按三種作用方式連接成線，以突出顯示；陰性生理鹽水對照的病毒滴度為零。3個實施例的3種作用方式都能不同程度地抑殺新城疫病毒在雞胚中的生長，以“預防”的作用方式對病毒的抑殺作用較強，“預防”的方式能有效地抑殺(即降低)病毒3.5-4個滴度，存活病毒總量減少47-53%;“直接”作用方式能有效地抑殺病毒2.9-3.1個滴度，存活病毒總量減少39-41%；“治療”作用方式能有效地抑殺病毒2-2.6個滴度，存活病毒總量減少27-35%。B雞胚的保護率藥液對雞胚的保護率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>試驗各組在24h內(nèi)均無雞胚死亡。60h內(nèi)，3個實施例雞胚無一死亡，保護率為100%;病毒對照組死亡9枚雞胚(共30枚)，死亡率30%，保護率降為70%。86h時，各實施例試驗組開始出現(xiàn)1-2枚雞胚死亡，保護率下降到93.3%-96.7%，而此時病毒對照組死亡雞胚已有21枚，死亡高達70%，保護率僅為30%，實施例比陽性對照增加63.3以上的保護率。結(jié)論3個實施例的三種作用方式都能不同程度地抑殺新城疫病毒在雞胚中的生長，有效地保護雞胚免受新城疫病毒侵害，提高雞胚的成活率。(3)防治新城疫疾病的臨床試驗試驗方法1.致病性試驗靜脈致病指數(shù)(IVPI)的測定將血凝效價高于4Log2的新城疫活毒疫苗用滅菌生理鹽水110稀釋，靜脈接種6周齡的SPF雞10只，每只接種O.lmL。每天觀察，共計10天。將每天觀察的結(jié)果記分，病雞和重病雞的記分主要依據(jù)臨床表現(xiàn)。“病雞”表現(xiàn)有下述一種癥狀，而“重病雞”則表現(xiàn)下述多個癥狀，如呼吸癥狀、沉郁、腹瀉、雞冠或肉髯發(fā)紺、臉或頭部腫脹、神經(jīng)癥狀。正常雞記作0，病雞記作1，癱瘓雞記作2，死亡雞在其死后的每次觀察都記為3。靜脈致病指數(shù)是指10天每次觀察記錄的平均數(shù)。IVPI值=每只雞在10天內(nèi)所有數(shù)字之和/(10只雞X10天)測定雞新城疫中等毒力(I系)疫苗IVPI指數(shù)為1.04。新城疫疾病的病理模型采用靜脈致病指數(shù)(IVPI)測定方法，使用測定的IVPI指數(shù)為1.04的雞新城疫中等毒力(I系)疫苗、經(jīng)翅靜脈注射0.ImL/只以致SPF雞發(fā)病，對產(chǎn)生臨床新城疫疾病癥狀的SPF雞進行中藥組合物的防治試驗。防治試驗方法動物的分組<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>“預防+治療”(即感染病毒前后持續(xù)用藥)每天喂藥2次，間隔12h，每次0.2mL,喂藥3天后靜脈注射新城疫病毒，持續(xù)喂藥?！爸委煛?即感染病毒后用藥)靜脈注射新城疫病毒以制作病理模型，感染后4h開始喂藥，每天喂2次，間隔12h，每次0.2mL。陽性對照組(即感染后不用藥)僅靜脈注射病毒造成該組雞發(fā)病，不進行治療處理。其中，病毒組和治療組前3天喂生理鹽水，與“預防+治療”組的試驗操作次數(shù)一致。感染病毒第二天開始觀察SPF雞的臨床癥狀，以上述確定靜脈致病指數(shù)的臨床癥狀觀察方法確定臨床癥狀，統(tǒng)計發(fā)病率和死亡率，計算各中藥組合物對雞群的發(fā)病保護率。治療實驗持續(xù)13d。發(fā)病率=發(fā)病雞數(shù)/總雞數(shù)X100%死亡率=死亡雞數(shù)/總雞數(shù)X100%發(fā)病保護率=(總雞數(shù)-發(fā)病雞數(shù))/總雞數(shù)X100%試驗結(jié)果A=SPF雞的發(fā)病和死亡率SPF雞的發(fā)病、死亡情況<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>3組實施例“預防+治療”組的發(fā)病雞的只數(shù)為14-16只，發(fā)病率為35_40%，經(jīng)治療無死亡；3組實施例的治療組的發(fā)病只數(shù)為16-26只，發(fā)病率為40-65%，死亡只數(shù)為1_3只，死亡率為2.5-7.5%；病毒對照組發(fā)病率為100%，死亡率為40%。B.發(fā)病保護率(參見圖2、3)發(fā)病保護率即為保護雞只不發(fā)病的百分率，如果發(fā)病保護率不為100%，即有發(fā)病的雞，當治療后，發(fā)病雞只逐漸好轉(zhuǎn)，保護率也隨之升高。“預防+治療”組通過前期飼喂，具有一定的抗病能力，比“治療”組的發(fā)病保護率高出5%，“治療”組稍低于“預防+治療”組。“預防+治療”組和“治療”組的發(fā)病保護率在試驗的前9d，隨著新城疫病毒的感染，雞只發(fā)病的臨床癥狀不斷明顯，發(fā)病保護率也呈下降趨勢。9d以后，隨著中藥組合物治療效果的提高，發(fā)病雞只的臨床癥狀開始好轉(zhuǎn)，保護率也開始逐漸呈上升趨勢，實際發(fā)病保護率要高于表中早期統(tǒng)計的數(shù)據(jù)。結(jié)論3組實施例均可有效的降低雞群對新城疫疾病的發(fā)病率和死亡率。以“預防+治療”的防治效果好于“治療”的效果。5中藥組合物臨床療效實例一河南某養(yǎng)殖場45日齡雛雞、約1000只雞發(fā)病，病雞精神沉郁，食欲減退，不喜走路，羽毛松亂無光澤，垂頭縮頸，冠和肉髯發(fā)紺，眼半閉，有的病雞出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，兩腿麻痹、站立不穩(wěn)，經(jīng)診斷為新城疫感染。應用本發(fā)明實施例一制備的中藥組合物進行治療，采用飲水給藥的方式集中給藥，治療前后對圈舍進行嚴格消毒處理。用藥3天后，病雞的臨床癥狀及精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，用藥7天后，965只病雞恢復健康，臨床癥狀消失，治愈率達到96.5%，治愈一個月后進行回訪，康復的病雞沒有再復發(fā)。實例二青島某個體養(yǎng)殖戶蛋雞出現(xiàn)疫情，一棟2500只、280日齡的產(chǎn)蛋雞出現(xiàn)明顯產(chǎn)蛋下降，且軟殼蛋增多，蛋殼顏色變淺，經(jīng)診斷為非典型性新城疫感染。應用本發(fā)明實施例二制備的中藥組合物進行治療，采用飲水給藥的方式集中給藥，治療前后對雞舍及周圍環(huán)境進行嚴格消毒。用藥3天后雞群采食量上升、產(chǎn)蛋下降減緩，用藥6天后，產(chǎn)蛋開始恢復，殼蛋基本恢復正常，經(jīng)10天用藥，產(chǎn)蛋恢復至原95%，治愈率達99%，治愈后三個月回訪，康復雞群沒有再發(fā)病。6優(yōu)點通過以上實驗結(jié)果表明，本發(fā)明抗雞新城疫病毒中藥組合物，經(jīng)過雞胚、SPF雞、臨床雞群試驗，對雞胚無毒性作用，對人類安全；對典型性和非典型性新城疫疾病均有較強的抑殺作用，達到防護和治療的雙重作用，同時，增強整體免疫力，保護雞群抵抗新城疫疾病，促進動物生長發(fā)育，切實具有良好的生產(chǎn)實用效果。權(quán)利要求一種抗雞新城疫病毒的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物包括下述重量份數(shù)比的原料，其中板藍根5～25份、金銀花5～25份、柴胡3～20份、貫眾5～15份、白茅根4～20份、黃芩5～20份、丹皮5～15份、藿香4～12份、茯苓3～19份、苦參4～12份。2.一種用于權(quán)利要求1所述中藥組合物的制備方法，其特征在于該制備方法包括下述步驟a、按重量份數(shù)比稱取藿香，采用超臨界萃取技術(shù)提取揮發(fā)油，并用體積份數(shù)比為13的乙醇溶解備用；b、將a步驟已提取過取揮發(fā)油的藿香藥渣同其它中藥原料一起進行水提取，用水量以原料藥材被水浸沒即可，首先浸泡l_2h，再用熱回流提取5-8h，之后進行過濾，取濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行濃縮至原浸提液的1/100成流浸膏狀；c、對水提過的藥渣進行2次醇沉。首先在殘渣中加入3-5倍體積比的乙醇含量為70%的乙醇進行醇沉12_15h，然后再加入3-5倍體積比的乙醇含量為80%的乙醇進行再次醇沉12-15h，過濾去殘渣，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行進行減壓回收乙醇；d、合并步驟a、b、c所制備出的三種提取液，用純水稀釋至處方量lg/mL，4°C保存?zhèn)溆?。全文摘要一種抗雞新城疫病毒的中藥組合物及制備方法，其特征在于該中藥組合物包括下述重量份數(shù)比的原料，其中板藍根5～25份、金銀花5～25份、柴胡3～20份、貫眾5～15份、白茅根4～20份、黃芩5～20份、丹皮5～15份、藿香4～12份、茯苓3～19份、苦參4～12份。本發(fā)明的中藥組合物不僅有效地防治動物性疾病、潔凈生態(tài)環(huán)境，且能提供天然綠色的生態(tài)產(chǎn)品，更好地為人類健康、畜牧業(yè)生產(chǎn)服務，該中藥組合物具有巨大的抗病、提高免疫力的優(yōu)勢。文檔編號A61P31/12GK101804162SQ20101014897公開日2010年8月18日申請日期2010年4月19日優(yōu)先權(quán)日2010年4月19日發(fā)明者劉來亭,崔斕斕,張慧茹,范根成,賀秀媛,齊仁立申請人:河南工業(yè)大學