專利名稱：一種恒河猴脈絡(luò)膜血管新生模型的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種恒河猴脈絡(luò)膜血管新生模型的制備方法。
背景技術(shù)：
脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)，是指產(chǎn)生于視網(wǎng)膜下脈絡(luò)膜上的不正常血管，并由于其結(jié)構(gòu)缺陷能滲漏血漿和血液，導(dǎo)致瘢痕組織的生成，從而破壞視網(wǎng)膜功能，尤其是位于黃斑區(qū)的新生血管，破壞了中心視力，是導(dǎo)致患者失明的主要原因之一。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)是刺激形成新生血管的主要因子之一，在視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜新生血管發(fā)生中起著核心而關(guān)鍵的作用。盡管臨床上已經(jīng)開(kāi)展了激光治療、手術(shù)治療、放射治療及藥物治療等多種治療新生血管的治療技術(shù)，但效果并不理想。近年來(lái)，抗新生血管藥物的研究非常活躍，理論上任何滅活VEGF 或降低VEGF作用的藥物都具有抑制新生血管形成的作用。(夏慶杰，等，KH902抑制猴激光致脈絡(luò)膜新生血管，中華現(xiàn)代眼耳鼻喉科雜志，2006年第3卷第5期)李筱榮，等，VEGF抑制劑在眼內(nèi)新生血管疾病中的應(yīng)用，眼外傷職業(yè)眼病雜志，2007年29卷8期，眼內(nèi)新生血管形成是老年黃斑變性、糖尿病視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜靜脈阻塞、新生血管性青光眼等疾病共有的病理改變。其相伴的滲出、出血、增生等一系列病理改變可嚴(yán)重破壞眼的結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致患者不同程度的視力障礙。研究證實(shí)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在新生血管形成過(guò)程中起關(guān)鍵性刺激作用。宋清雪，等，VEGF抑制劑在眼部新生血管性疾病中的應(yīng)用進(jìn)展，《廣東醫(yī)學(xué)》，2009年30卷3期，對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和新生血管、VEGF抑制劑在眼部新生血管性疾病中的治療進(jìn)展及安全性進(jìn)行了綜述。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種恒河猴脈絡(luò)膜血管新生模型的制備方法，本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了 VEGF抑制劑的新用途。本發(fā)明提供了一種恒河猴脈絡(luò)膜血管新生模型的制備方法，它包括如下步驟將恒河猴麻醉，滴眼散瞳，以240mW，50mS進(jìn)行激光眼底照射Bruch膜和覆蓋其上的視網(wǎng)膜色素上皮，擊穿Bruch膜，燒出至少6-9個(gè)直徑50um損傷點(diǎn)，即成恒河猴脈絡(luò)膜血管新生模型。其中，采用VISULAS 532S固體激光器進(jìn)行激光眼底照射。采用3%戊巴比妥麻醉恒河猴本發(fā)明還提供了所述的方法制備的恒河猴脈絡(luò)膜血管新生模型。本發(fā)明還提供了 VEGF抑制劑在制備抑制脈絡(luò)膜新生血管的藥物中的用途。其中，所述的VEGF抑制劑的給藥方法為玻璃體給藥，給藥劑量為640ug/40ul。本發(fā)明通過(guò)激光致脈絡(luò)膜血管新生建立恒河猴模型，將VEGF抑制劑用于恒河猴激光致脈絡(luò)膜新生血管，試驗(yàn)結(jié)果表明VEGF抑制劑具有抑制脈絡(luò)膜新生血管的作用。


圖1模型組給藥后IOmin恒河猴眼底造影圖片圖2VEGF抑制劑對(duì)恒河猴激光致脈絡(luò)膜血管新生治療作用治療組給藥后IOmin 恒河猴眼底造影圖片(給藥方式為造模當(dāng)天，以后一周一次)圖3VEGF抑制劑對(duì)恒河猴激光致脈絡(luò)膜血管新生治療作用治療組給藥后IOmin 恒河猴眼底造影圖片(給藥方式為造模當(dāng)天，及第14天，以后兩周一次)
具體實(shí)施方式
試驗(yàn)例1本發(fā)明VEGF抑制劑具有抑制脈絡(luò)膜新生血管產(chǎn)生的作用的試驗(yàn)1、試驗(yàn)材料1.1受試物生理狀況下血管生成促進(jìn)因子和血管生成抑制因子之間維持平衡，新生血管的形成歸因于此平衡的破壞，其中VEGF是重要的始動(dòng)因素。VEGF通過(guò)結(jié)合血管內(nèi)皮細(xì)胞 (vascular endothelial cell,VEC)高特異性酪氨酸激酶受體，包括fms樣酪氨酸激酶受體 (Fltl)和胎肝激酶1受體(Flkl)/激酶插入結(jié)構(gòu)域受體(KDR)，使磷脂酶C等蛋白磷酸化， 形成甘油二酯(DAG)，活化蛋白激酶C (protein kinase C，PKC)，從而誘導(dǎo)VEC生長(zhǎng)，增加血管通透性。VEGF亦可誘導(dǎo)纖溶酶原激活物(plaminogen activator, PA)以及基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloprOteinase，MMPs)，共同促進(jìn)局部的細(xì)胞基質(zhì)降解，為VEC遷移提供條件，故VEGF在新生血管的形成中發(fā)揮重要作用。Avastin是全長(zhǎng)的VEGF單克隆抗體，分子量約149kDa，與VEGF有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，能結(jié)合和阻斷所有VEGF的異構(gòu)體。其抗新生血管的主要機(jī)制為阻止VEGF與內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGFRl和VEGFR2受體結(jié)合，使內(nèi)源化VEGF的生物活性失效，抑制內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂，減少血管通透性，從而阻斷新生血管的形成。1.2陰性對(duì)照藥物PBS 0. IM 磷酸緩沖液，0. 15M 氯化鈉(NaOH 調(diào)至 pH7. 2)。1.3試驗(yàn)動(dòng)物恒河猴6只，雌雄各半。購(gòu)于平安動(dòng)物飼養(yǎng)中心，均單獨(dú)飼養(yǎng)于(80*90*100) cm猴籠中，每日飼喂2次，輔以蔬菜、水果，自動(dòng)飲水器飲水，室內(nèi)平均溫度(21. 1 士 13.6)°C，相對(duì)濕度87. 5士 12. 6，用同于實(shí)驗(yàn)前均有3周的適應(yīng)時(shí)間。2試驗(yàn)方法2. 1分組與劑量設(shè)計(jì)將激光致脈絡(luò)膜血管新生的動(dòng)物分為3個(gè)試驗(yàn)組，對(duì)照組，VEGF抑制劑同一劑量?jī)煞N給藥方式2個(gè)給藥組。安慰劑對(duì)照組按造模當(dāng)天，及第14天，以后兩周一次的給藥方式，而VEGF抑制劑給藥組分別按造模當(dāng)天，以后一周一次以及造模當(dāng)天，及第14天，以后兩周一次的給藥方式。分組及劑量設(shè)計(jì)詳見(jiàn)表1。表1分組及劑量設(shè)計(jì)情況表
權(quán)利要求
1.一種恒河猴脈絡(luò)膜血管新生模型的制備方法，它包括如下步驟將恒河猴麻醉，滴眼散瞳，以240mW，50mS進(jìn)行激光眼底照射Bruch膜和覆蓋其上的視網(wǎng)膜色素上皮，擊穿 Bruch膜，燒出6-9個(gè)直徑50um損傷點(diǎn)，即成恒河猴脈絡(luò)膜血管新生模型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的恒河猴脈絡(luò)膜血管新生模型的制備方法，其特征在于采用 VISULAS 532S固體激光器進(jìn)行激光眼底照射。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用恒河猴脈絡(luò)膜血管新生模型的制備方法，其特征在于采用3%戊巴比妥麻醉恒河猴。
4.權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的方法制備的恒河猴脈絡(luò)膜血管新生模型。
5.VEGF抑制劑在制備抑制脈絡(luò)膜新生血管的藥物中的用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于所述的VEGF抑制劑的給藥方法為玻璃體給藥，給藥劑量為640ug/40ul。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種恒河猴脈絡(luò)膜血管新生模型的制備方法，本發(fā)明還提供了該方法制備的動(dòng)物模型，以及VEGF抑制劑在制備具有抑制脈絡(luò)膜新生血管產(chǎn)生作用的藥物中的用途。本發(fā)明通過(guò)激光致脈絡(luò)膜血管新生建立恒河猴模型，將VEGF抑制劑用于恒河猴激光致脈絡(luò)膜新生血管，試驗(yàn)結(jié)果表明VEGF抑制劑具有抑制脈絡(luò)膜新生血管產(chǎn)生的作用。
文檔編號(hào)A61K45/00GK102217980SQ20101014975
公開(kāi)日2011年10月19日 申請(qǐng)日期2010年4月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月16日
發(fā)明者劉斌, 匡林峰, 張明, 扈正桃, 李尤, 楊迅寧, 段嘉川, 王莉, 許可 申請(qǐng)人:四川大學(xué)華西醫(yī)院, 國(guó)家成都中藥安全性評(píng)價(jià)中心, 成都華西海圻醫(yī)藥科技有限公司