專利名稱：：一種用于非酒精性脂肪性肝炎的中藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥組合物，特別是涉及一種用于治療非酒精性脂肪性肝炎的中藥組合物及制備方法。
背景技術(shù)：
：隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們飲食結(jié)構(gòu)、生活方式的改變，與肥胖、高血脂癥和糖尿病密切相關(guān)的非酒精性脂肪性肝病的發(fā)病率明顯上升，目前已成為臨床常見的肝病之一，研究表明，氧應(yīng)激及脂質(zhì)過氧化在非酒精性脂肪性肝炎的發(fā)病及病情進(jìn)展中可能發(fā)揮著重要的作用，而至今非酒精性脂肪性肝炎的臨床治療尚無特效藥物，我們?cè)谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)，應(yīng)用該藥物組合物的制劑治療后，各治療組呈現(xiàn)血清肝功能、SOD、血清和肝勻漿中的學(xué)制有所好轉(zhuǎn)，肝臟脂變成都、炎癥表現(xiàn)及纖維化成都均有所減輕，說明該藥物組合物制劑可以改善非酒精性脂肪性肝炎的的血脂紊亂，減輕脂肪在肝臟的沉積，促進(jìn)肝功能和組織學(xué)的恢復(fù)，并可提高機(jī)體清除氧自由基的能力，在抗氧化、調(diào)節(jié)血脂、抗炎、抗肝纖維化等方面具有獨(dú)特的療效。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于為臨床提供一種有效的治療非酒精性脂肪性肝炎的的中藥組合物及其制備方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成及配比如下(按重量份)丹參5-15份、虎杖10-30份、靈芝4-12份、垂盆草17-51份。優(yōu)選配比為丹參10份、虎杖20份、靈芝8份、垂盆草34份。上述藥物的制備方法為垂盆草部分粉碎成細(xì)粉，剩余的垂盆草加水煎煮二次，合并煎液，濾過、濃縮成的稠膏；另取靈芝，加乙醇浸漬三次，各傾取上清液，最后壓榨殘?jiān)?，收集壓出液，與三次上清液合并，濾過，回收乙醇并濃縮成稠膏，備用；丹參及虎杖用乙醇作溶劑緩緩滲漉，俟可溶性成分完全漉出，滲漉液回收乙醇并濃縮成稠膏；丹參、虎杖和靈芝的藥渣加水煎煮二次，濾過，濾液濃縮成的稠膏，取上述四種稠膏，加入剩余的垂盆草細(xì)粉混勻，干燥，粉碎，加入適宜的輔料，按照常規(guī)工序制成膠囊劑、片劑、滴劑、顆粒劑。本發(fā)明藥物臨床上可有效治療非酒精性脂肪性肝炎的患者，且無毒副作用。實(shí)驗(yàn)例一藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)本發(fā)明藥物組合物制劑主要藥效學(xué)研究結(jié)果證實(shí)了該藥物組合物具有較強(qiáng)的治療非酒精性脂肪性肝炎癥的作用。1資料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SD大鼠，清潔級(jí)，由貴州信邦制藥藥物研究中心提供，體重137g-197g，每籠3-5只分籠飼養(yǎng)。1.2飼料標(biāo)準(zhǔn)飼料由貴州信邦制藥藥物研究中心提供。高脂飼料由北京科澳協(xié)力飼料有限公司新鮮配料，許可證號(hào)SCXK(京)2005-2007，配方為(77.5%標(biāo)準(zhǔn)飼料，15%豬油，5%蛋黃粉，2%膽固醇，0.5%膽酸鈉)。飼料配好后用塑料袋密封包裝，于4°C冰箱保存。1.3藥物中藥組合物制劑由貴州信邦制藥藥物研究中心提供(膠囊劑)，臨用前用研磨將內(nèi)容物研磨成粉狀，使其藥粉溶于蒸餾水中制成所需要濃度的混懸液，4°C保鮮冷藏，每次用前搖勻。1.4儀器和試劑日立7600及日立7170全自動(dòng)生化分析儀，SHH-W21-420恒溫水浴箱。1.5血清丙二醇(MDA)試劑購自南京建成生物工程研究所，采用硫化代巴比妥酸(TBA)比色分析法，嚴(yán)格按試劑盒說明書檢測(cè)。血清超氧化物歧化酶(SOD)試劑采用英國郎道(Randox)試劑，由北京九強(qiáng)公司提供，嚴(yán)格按照試劑盒說明書檢測(cè)。2試驗(yàn)方法2.INASH模型的建立SD大鼠39只，正常喂養(yǎng)IW后，按照體重層次隨機(jī)分為2組正常對(duì)照組(9只)及實(shí)驗(yàn)組(30只)。正常對(duì)照組以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組以高脂飼料喂養(yǎng)。兩組大鼠均自由獲取食物和飲水，飼養(yǎng)室為清潔級(jí)，以80W日光燈照明，實(shí)行12h光/暗循環(huán)，室溫設(shè)置為22°C-28°C。第IlW未從正常對(duì)照組隨機(jī)抽取5只大鼠，5%戊巴比妥納溶液進(jìn)行腹腔麻醉，處死大鼠，留取腹主動(dòng)脈血5ml，并留取肝組織作病理切片，炎癥造模成功；同時(shí)對(duì)剩余大鼠留取眶靜脈血1ml，分離血清以備測(cè)各生化指標(biāo)。2.2實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)第13W起，剩余的正常對(duì)照組大鼠(X組)為5只，將剩余的25只實(shí)驗(yàn)組大鼠稱重，按體重層次再隨機(jī)分為5組Z組為高脂組，5只；Y組為飲食治療組，5只；A組為藥物制劑高劑量治療組，6只；B組為藥物制劑低劑量治療組，5只。飲食方面除Z組繼續(xù)飼以高脂飼料外，其余各組均以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。在實(shí)驗(yàn)大鼠自由飲水及進(jìn)食的條件下，于每日上午對(duì)各組大鼠進(jìn)行灌胃治療一次，其中X組、Y組、Z組每日灌服等容量的生理鹽水，而A組、、B組、C組則予以藥物制劑的混懸液灌胃一次，劑量分別為700mg/kg/d、175mg/kg/d,藥物劑量按“藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)”計(jì)算，每次用藥體積按0.5ml/100g計(jì)算，每周稱量大鼠一次，據(jù)此調(diào)整劑量。實(shí)驗(yàn)時(shí)間共4W。2.3標(biāo)本采集及處理于最后一次用藥后，全部大鼠禁食不禁水12h后，予5%戊巴比妥納溶液按0.lml/100g體重/只進(jìn)行腹腔麻醉。將麻醉后大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，打開腹腔，腹主動(dòng)脈穿刺取血5ml，分離血清以備各生化指標(biāo)。處死大鼠，立即完整摘除大鼠肝臟及腹腔脂肪組織(包括附睪、腎周及大網(wǎng)膜的脂肪)，將其分別置于4°C冰鹽水中反復(fù)漂洗，濾紙吸干水分后觀察肝臟外觀，并稱量肝濕重及腹腔脂肪組織重量。在肝右葉相同部位稱取0.5g肝組織與0.9冰鹽水按1；9比例勻漿為10%肝勻漿，3000rpm離心15分鐘。提取上清液待測(cè)各生化指標(biāo)。在肝左葉取0.5cmXlcmXO.5cm肝組織置于10%福爾馬林液中固定，擇期石蠟包埋并制作病理切片。2.4主要觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法(1)試驗(yàn)期間全部大鼠于每周的固定時(shí)間稱量并記錄一次，觀察食欲、行為、糞便、毛發(fā)及動(dòng)物死亡情況；(2)常規(guī)分離血清，待測(cè)血清ALT、AST、TC、TG、LDLC,GLU,SOD、MDA,由我研究中心專人采用全自動(dòng)化分析儀測(cè)定；其中ALT、AST、TC、TG、LDLC、GLU在日立7600全自動(dòng)化分析儀上測(cè)定，SOD、MDA在日立7170全自動(dòng)生化分析以上測(cè)定；(3)稱量肝濕重及腹腔脂肪組織重量，將上述三種來源的腹腔脂肪組織中重量作為內(nèi)臟脂肪含量，可計(jì)算肝指數(shù)(肝濕重/體重X100%)及體脂比(內(nèi)臟脂肪含量/體重X100%)；(4)肝勻漿上清液待測(cè)幾36、0^(、10^，方法與血清中相應(yīng)指標(biāo)的測(cè)定方法相同；(5)每一份大鼠肝臟標(biāo)本分別進(jìn)行常規(guī)HE染色、Masson染色及網(wǎng)狀纖維染色，進(jìn)行分級(jí)和評(píng)分，其中F(脂肪變性成都)分為0-3級(jí)，G(炎癥程度)分為0-3級(jí)，S(纖維化程度)分為0-4級(jí)。2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)算資料用多組間數(shù)據(jù)處理用方差分析，兩組間數(shù)據(jù)處理用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用等級(jí)分組資料的秩和檢驗(yàn)。3結(jié)果3.1各組大鼠一般情況實(shí)驗(yàn)過程中，各組大鼠生長發(fā)育良好，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)無大鼠死亡。正常對(duì)照組大鼠行動(dòng)活躍，被毛整潔，細(xì)密柔順；實(shí)驗(yàn)組大鼠食欲好，性情比較溫順，被毛蓬亂而無光澤，活動(dòng)減少而遲鈍。3.2第IlW末兩組大鼠各項(xiàng)結(jié)果的比較以炎癥造模成功①基線時(shí)及第IlW末正常對(duì)照組大鼠(η=4)與實(shí)驗(yàn)組大鼠(η=5)體重相比差異無顯著性；第IlW末實(shí)驗(yàn)組大鼠肝濕重、肝指數(shù)較正常對(duì)照組明顯增高，差異有顯著性(P<0.05)；而實(shí)驗(yàn)組大鼠內(nèi)臟脂肪含量、體脂比較正常對(duì)照組增高，但差異無顯著性。②實(shí)驗(yàn)組大鼠的血清AST、TC、TG、LDLC、GLU、MDA水平較正常對(duì)照組增高，實(shí)驗(yàn)組大鼠的血清SOD水平較正常對(duì)照組降低，兩組間的差異有顯著性(P<0.05)。③實(shí)驗(yàn)組大鼠的肝勻漿TC、TG、MDA水平較正常對(duì)照組增高，兩組間的差異有顯著性(P<0.05)。④在光學(xué)顯微鏡下、正常對(duì)照組肝細(xì)胞素排列整齊，核大居中，無脂肪滴和炎癥細(xì)胞浸潤；實(shí)驗(yàn)組均出現(xiàn)彌漫性脂肪變性，以中央靜脈周圍最為明顯，核居邊，胞漿中有大量脂肪滴空泡，小葉內(nèi)有炎癥細(xì)胞浸潤，竇周有纖維化結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)組肝組織脂肪變、炎癥及纖維化程度較正常對(duì)照組加重，差異有顯著性(P<0.05)。3.3第16W末各組大鼠的體重、肝指數(shù)、內(nèi)臟脂肪含量及體脂比各組大鼠起始體重相比差異無顯著性，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組體重相比差異無顯著性；Z組肝濕重、肝指數(shù)較其他組顯著增高，與C組相比差異有顯著性(P<0.05)；Z組及Y組內(nèi)臟脂肪含量較B組、C組增高，但差異無顯著性；B組、C組體脂比較Y及Z組降低，差異有顯著性(P<0.05)(見表一)。表一第16周末各組大鼠的體重、肝指數(shù)、內(nèi)臟脂肪含量及體脂比(士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注X組-正常對(duì)照組，Y組飲食治療組；Z組高脂組，A組-高劑量治療組，B組-中劑量治療組，C組-低劑量治療組；與Y、Z組相比，P<0.05.3.4第16W末各組大鼠血清各生化指標(biāo)的比較(見表二)表二第16周末各組大鼠血清各生化指標(biāo)士s)組別ηALTASTTCTGLDLCGLUMDASODX組542.6±5.6103±231.47±0.370.48±0.170.40±0.226.6±0.68.44±1.350.6±3.7Y組566.2±13201±902.07±0.460.25±0.130.63±0.126.8士0.710.36土1.333±7.2Z組5101±5.6290士972.89±1310.55±0.171.12+0.666.3±0.4714.0±3.026.7±10.4A組544.8±5.4120±151.59±0.380.38士0.130.47±0.175.4±0.4410.3±1.047.4±5.8B組550.6土8165±431.77±0.540.52±0.270.71±0.176.5±0.2411.5±1.941.6±15.4CiB.584±62235±13003±0.630.48±0.240.54±0.186.4±0.810.8±2.634.8±3.0注X組-正常對(duì)照組，Y組飲食治療組；Z組高脂組，A組-高劑量治療組，B組-中劑量治療組，C組-低劑量治療組；與Y、Z組相比，P<0.05.3.4.1肝功能Z組ALT水平明顯高于A組、B組、C組，但差異無顯著性；A組AST水平低于Y組及ζ組，差異有顯著性(P<0.05)。3.4.2血脂A組TC水平明顯低于Y組及Z組，差異有顯著性P<0.05)；Z組TG水平高于A組、B組、C組，但差異無顯著性；A組LDLC水平明顯低于Y組及Z組，與Z組相比，差異有顯著性(P<0.05)。3.4.3MDA與SODA組、B組、C組MDA水平低于Z組，差異無顯著性；A組SOD水平明顯高于Y組及Z組，差異有顯著性(P<0.05)。3.4.4血糖A組血糖水平明顯低于Y組，差異有顯著性(P<0.05)。3.5第16W末各組大鼠肝勻漿各檢測(cè)指標(biāo)A組肝勻漿TC水平明顯低于Y組及Z組，差異有顯著性(P<0.05)；各組TG水平差異無顯著性；A組、B組、C組LDLC水平低于Z組，差異無顯著性；A組、C組肝勻漿MDA水平低于Z組及Y組，與Z組相比，差異有顯著性。實(shí)施例1處方丹參10份、虎杖20份、靈芝8份、垂盆草34份。制法取垂盆草3.8份，粉碎成細(xì)粉，剩余的垂盆草加水煎煮二次，加水量10、8倍，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對(duì)密度為1.101.20(7080°C測(cè)定)的稠膏；取靈芝，加4倍量乙醇，浸漬24小時(shí)，傾取上清液備用，藥渣依次用75%、50%乙醇各浸漬12小時(shí)，各傾取上清液，最后壓榨殘?jiān)?，收集壓出液，與三次上清液合并，濾過，濾液回收乙醇并濃縮成相對(duì)密度為1.101.20(50°C測(cè)定)的稠膏，備用；丹參及虎杖照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(《中國藥典》一部附錄10)，用90%乙醇作溶劑緩緩滲漉，俟可溶性成分完全漉出，漉液回收乙醇并濃縮成相對(duì)密度為1.101.20(7080°C測(cè)定)的稠膏；丹參、虎杖和靈芝的藥渣加10倍量水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對(duì)密度為1.101.20(7080°C測(cè)定)的稠膏，取上述四種稠膏，加入垂盆草細(xì)粉，混勻，于80°C干燥成干浸膏，粉碎，制顆粒，壓制成1000片，包衣，即得。實(shí)施例2處方丹參15份、虎杖5份、靈芝4份、垂盆草51份。制法取垂盆草15份，粉碎成細(xì)粉，剩余的垂盆草加水煎煮二次，加水量10、8倍，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對(duì)密度為1.101.20(7080°C測(cè)定)的稠膏；取靈芝，加4倍量乙醇，浸漬24小時(shí)，傾取上清液備用，藥渣依次用75%、50%乙醇各浸漬12小時(shí)，各傾取上清液，最后壓榨殘?jiān)?，收集壓出液，與三次上清液合并，濾過，濾液回收乙醇并濃縮成相對(duì)密度為1.101.20(50°C測(cè)定)的稠膏，備用；丹參及虎杖照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(《中國藥典》一部附錄10)，用90%乙醇作溶劑緩緩滲漉，俟可溶性成分完全漉出，漉液回收乙醇并濃縮成相對(duì)密度為1.101.20(7080°C測(cè)定)的稠膏；丹參、虎杖和靈芝的藥渣加10倍量水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對(duì)密度為1.101.20(7080°C測(cè)定)的稠膏，取上述四種稠膏，加入垂盆草細(xì)粉，混勻，于80°C干燥成干浸膏，粉碎，制顆粒，裝膠囊1000粒，即得。權(quán)利要求一種用于非酒精性脂肪性肝炎的中藥組合物，其特征是包括下列重量份的原料藥丹參5-15份、虎杖10-30份、靈芝4-12份、垂盆草17-51份。2.按照權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于丹參10份、虎杖20份、靈芝8份、垂盆草34份。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物制備方法是垂盆草部分粉碎成細(xì)粉，剩余的垂盆草加水煎煮二次，合并煎液，濾過、濃縮成的稠膏；另取靈芝，加乙醇浸漬三次，各傾取上清液，最后壓榨殘?jiān)?，收集壓出液，與三次上清液合并，濾過，回收乙醇并濃縮成稠膏，備用；丹參及虎杖用乙醇作溶劑緩緩滲漉，俟可溶性成分完全漉出，滲漉液回收乙醇并濃縮成稠膏；丹參、虎杖和靈芝的藥渣加水煎煮二次，濾過，濾液濃縮成的稠膏，取上述四種稠膏，加入剩余的垂盆草細(xì)粉混勻，干燥，粉碎，加入適宜的輔料，按照常規(guī)工序制成膠囊劑、片劑、滴劑、顆粒劑。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的中藥組合物在制備治療治療非酒精性脂肪性肝炎的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明是一種用于非酒精性脂肪性肝炎的中藥組合物，屬于藥品的
技術(shù)領(lǐng)域：
。該中藥制劑是以丹參、虎杖、靈芝、垂盆草組成，臨床上可用于治療非酒精性脂肪性肝炎的患者。文檔編號(hào)A61P1/16GK101804102SQ20101015080公開日2010年8月18日申請(qǐng)日期2010年4月20日優(yōu)先權(quán)日2010年4月20日發(fā)明者張觀福申請(qǐng)人:貴州信邦制藥股份有限公司