專利名稱：防治腎炎的藥物制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種防治腎炎的藥物制劑及其制備方法，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
腎炎是一種與感染有關(guān)的免疫反應(yīng)性疾病，腎炎屬于常見(jiàn)病、多發(fā)病，它沒(méi)有年齡 限制，既可發(fā)生于兒童，又可發(fā)生于成年人，尤其以兒童及青壯年比較多見(jiàn)。據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì) 兒科腎臟學(xué)組統(tǒng)計(jì)全國(guó)21省市2歲 10歲兒童為9. 84%，原發(fā)性腎小球腎炎是我國(guó)最常 見(jiàn)的腎小球疾病，青壯年為原發(fā)性和繼發(fā)性腎小球腎炎的高發(fā)人群。尤以25歲 34歲年齡 階段發(fā)病率最高，結(jié)締組織病的高發(fā)年齡也為25歲 34歲。原發(fā)性腎小球腎炎占26. 8%， 繼發(fā)件腎小球腎炎占72. 8%，遺傳性腎炎占0. 4%。原發(fā)性腎炎男女比例為1. 81:1，繼發(fā)性 腎炎男女之比為0.46:1。臨床上分為急性腎炎和慢性腎炎。急性腎炎病前及1 3周多 有上呼吸道感染，起病后有浮腫血尿、高血壓三大癥狀，慢性腎炎發(fā)病年齡多在青壯年期， 具有水腫、蛋白尿、血尿、管型尿，高血壓以及不同程度的腎功能減退。中醫(yī)認(rèn)為急慢性腎炎 的發(fā)生系由外邪侵襲，脾腎虧損所致。急性腎小球腎炎(簡(jiǎn)稱急性腎炎)是一種常見(jiàn)病，多數(shù) 發(fā)生在感染后，尤其是溶血性鏈球菌感染后，也可見(jiàn)于其他感染。急性腎小球腎炎的臨床表 現(xiàn)主要有多在上呼吸道感染、猩紅熱感染、皮膚化膿性感染2 3周后出現(xiàn)癥狀，如發(fā)熱， 頭痛，惡心，嘔吐，食欲不振，疲乏無(wú)力等，繼而出現(xiàn)血尿，以肉眼血尿?yàn)槎嘁?jiàn)。水腫，多先出 現(xiàn)在面部，特別是以眼瞼為甚，面部及眼瞼腫脹，色蒼白，呈現(xiàn)所謂的腎炎面容。下肢及明囊 水腫較甚，水腫進(jìn)展較快。相當(dāng)多的人出現(xiàn)高血壓，成年人一般為18. 7kPa 22. 7kPa / 12. OkPa 14. 7kPa，血壓增高往往與水腫同時(shí)出現(xiàn)，伴隨出現(xiàn)相應(yīng)的癥狀和體征。尿液檢 查可見(jiàn)蛋白尿，管型尿，紅細(xì)胞，肌研清除率下降?？规湣?”陽(yáng)性，血沉加快等。慢性腎小 球腎炎(簡(jiǎn)稱慢性腎炎)是一組病因不同，病理變化多樣的慢性腎小球疾病。臨床特點(diǎn)為病 程長(zhǎng)，病情逐漸發(fā)展，有蛋白尿、血尿及不同程度高血壓和腎功能損害，于患病2 3年或 20 30年后，終將出現(xiàn)腎功能衰竭。慢性腎小球腎炎簡(jiǎn)稱慢性腎炎，是以蛋白尿、血尿、高 血壓、水腫為基本臨床表現(xiàn)，病情遷延，緩慢進(jìn)展，可有不同程度的腎功能減退，嚴(yán)重者將發(fā) 展為慢性腎衰竭的一但腎小球病而危及生命。筆者根據(jù)西醫(yī)臨床研究及病癥常見(jiàn)表現(xiàn)，結(jié) 合中醫(yī)的基礎(chǔ)理論認(rèn)為慢性腎炎的中醫(yī)基本病機(jī)應(yīng)為本虛標(biāo)實(shí)——脾腎虧損，外邪侵襲， 臟腑功能不足，導(dǎo)致濕濁停滯，瘀血內(nèi)阻，而濕熱瘀毒又反過(guò)來(lái)加重對(duì)正氣的損傷，正虛邪 實(shí)，互為因果夾雜致病，使疾病纏綿難愈。隨著人口老齡化和人們生活方式的改變，傳統(tǒng)的感染性疾病正在減少，慢性免疫 性疾病正在成為威脅人類健康的第一因素。相對(duì)于其他慢性疾病，慢性腎臟病已經(jīng)成為威 脅人類健康的最常見(jiàn)的疾病之一?；加新阅I臟病，如果得不到滿意的控制終將進(jìn)入慢性 腎功能不全和尿毒癥。為此，現(xiàn)在醫(yī)學(xué)界已普遍認(rèn)同慢性腎臟病已成為人類健康生命的“沉 默殺手”，其原因是除了腎病綜合征外，其他慢性腎病很少有自覺(jué)癥狀，也就是說(shuō)，大多數(shù)慢 性腎病早期只有尿的改變，而無(wú)其他癥狀，故在患病早期多被忽視。一旦在尿改變的基礎(chǔ)上 出現(xiàn)高血壓、貧血、消化道反應(yīng)(如惡心、嘔吐等)，則大多數(shù)患者就已經(jīng)進(jìn)入了慢性腎功能不全或尿毒癥期。到目前為止，腎炎，尤其是慢性腎炎尚無(wú)很好的治療藥物，臨床上多用利 尿劑、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑等，這類藥品也只是對(duì)癥治療，治標(biāo)不治本，同時(shí)該類藥品 毒副作用較大，長(zhǎng)期服用，會(huì)誘發(fā)其他疾病，肝腎功能損害作用。中醫(yī)認(rèn)為腎炎病是風(fēng)、熱、 火、濕、燥、淤、毒等兼夾客于血中，侵犯腎臟。如感冒發(fā)燒咽炎、生瘡癤等感染，都對(duì)腎臟血 流過(guò)濾有影響，還有就是其它病引起既發(fā)性腎炎。腎炎要是單火熱炎癥，用西藥有可能治 愈，如腎炎被風(fēng)和熱、濕和熱、濕和毒、燥熱和血淤等夾雜纏繞腎時(shí)，西藥只能緩解癥狀，不 能痊愈。這時(shí)中醫(yī)有全方位的治療方案，并能益氣養(yǎng)血固本，因此效果非常明顯。為了開(kāi)發(fā) 出能安全、有效防治腎炎的中藥，申請(qǐng)人進(jìn)行了大量的探索和研究。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種能安全、有效防治腎炎的藥物制劑及其制 備方法，本發(fā)明的藥物藥效快、無(wú)毒副作用，是一種安全、有效、質(zhì)量可控的防治腎炎的中藥 新藥。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案防治腎炎的藥物制劑，它主 要是由下列重量百分比的原料藥制成茅莓10% 40%、車前草25% 35%、魚(yú)腥草20% 30%、腎茶 15% 25%。上述防治腎炎的藥物制劑中，各原料藥的用量按照重量百分比計(jì)算，優(yōu)選為茅莓 25%、車前草30%、魚(yú)腥草25%、腎茶20%。上述防治腎炎的藥物制劑的制備方法為取茅莓、車前草、魚(yú)腥草、腎茶四味，加處 方總量的5 10倍水煎煮1 3次，每次煎煮1 3小時(shí)，濾過(guò)，濾液濃縮至60°C相對(duì)密度 為1. 25 1. 35的浸膏，然后按常規(guī)制劑工藝制成不同的藥物制劑。上述防治腎炎的藥物制劑的制備方法中，所述的藥物制劑為口服制劑或外用制 劑，其中口服制劑包括湯劑、顆粒劑、散劑、口服液、糖漿劑、膏滋、丸劑、片劑、硬膠囊或軟膠 囊等。前述防治腎炎的藥物制劑中，為了達(dá)到更好的治療效果，還可以加入原料藥玉米 須、枸杞子、益智仁，各原料藥的重量百分比例為茅莓5% 20%、車前草14% 16%、魚(yú)腥草 11% 14%、腎茶9% 11%、玉米須24% 26%、枸杞子11% 14%、益智仁11% 14%。上述防治腎炎的藥物制劑中，各組分的用量?jī)?yōu)選為茅莓12. 5%、車前草15%、魚(yú)腥 草12. 5%、腎茶10%、玉米須25%、枸杞子12. 5%、益智仁12. 5%。上述防治腎炎的藥物制劑的制備方法為取茅莓、車前草、魚(yú)腥草、腎茶、玉米須、 枸杞子、益智仁七味藥材，加處方總量的5 10倍水煎煮1 3次，每次煎煮1 3小時(shí)， 濾過(guò)，濾液濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 25 1. 35的浸膏，然后按常規(guī)制劑工藝制成不同的藥 物制劑。上述防治腎炎的藥物制劑的制備方法中，所述的藥物可以制備成口服制劑或外用 制劑，其中口服制劑包括湯劑、顆粒劑、散劑、口服液、糖漿劑、膏滋、丸劑、片劑、硬膠囊或軟
膠囊等。本發(fā)明的組方藥物特性茅莓苦、澀，涼。清熱涼血，散結(jié)止痛，利尿消腫。用于感 冒發(fā)熱，痢疾，腸炎，肝炎，肝脾腫大，腎炎水腫，泌尿系感染，結(jié)石，月經(jīng)不調(diào)，白帶。車前草 寒；甘；歸肝、腎、肺、小腸經(jīng)。清熱利尿，祛痰，涼血，解毒。用于水腫尿少，熱淋澀痛，暑濕瀉痢，痰熱咳嗽。魚(yú)腥草辛；寒。肝；肺經(jīng)。清熱解毒，排膿消癰，利尿通淋。主治肺癰吐膿， 痰熱喘咳，熱痢，熱淋。枸杞子甘，平。歸肝、腎經(jīng)。補(bǔ)腎益精，養(yǎng)肝明目，補(bǔ)血安神，生津止 渴，潤(rùn)肺止咳。治肝腎陰虧，腰膝酸軟，頭暈，目眩，目昏多淚，虛勞咳嗽，消渴，遺精。益智仁 辛，溫。入脾，腎經(jīng)。溫脾，暖腎，固氣，澀精。治冷氣腹痛，中寒吐瀉，多唾，遺精，小便余浙， 夜多小便。玉米須甘，平。歸腎、肝、膽經(jīng)。利尿，泄熱，平肝，利膽。治腎炎水腫，腳氣，黃 疸肝炎，高血壓，膽囊炎，膽結(jié)石，糖尿病。腎茶，性涼、味微苦、歸腎、膀胱經(jīng)、具有清熱除濕、 排石化石、利尿通淋、排毒抗菌、抑制慢性腎衰竭之功能，有很強(qiáng)的藥效，長(zhǎng)期飲用可改善并 增強(qiáng)腎功能。本發(fā)明的方解中醫(yī)理論講，腎是人體水液代謝的重要器官，納氣、生髓、藏精。人 體生命活動(dòng)的基礎(chǔ)物質(zhì)是氣、血、體液，心與腎、肝與腎、脾與腎，才能相互支配。所以，當(dāng)腎 臟發(fā)生炎癥時(shí)，便會(huì)引起人體水腫、尿急、尿頻、尿不出、尿血等癥狀。依據(jù)大量的醫(yī)學(xué)資料 證明，腎臟具有促進(jìn)尿液生成，排泄機(jī)體代謝產(chǎn)物的功能，保持機(jī)體內(nèi)環(huán)境凈化因素的相對(duì) 穩(wěn)定，維持酸堿平衡，調(diào)節(jié)血壓，因而腎臟的負(fù)擔(dān)很重。慢性腎炎的發(fā)生主要責(zé)之于脾腎，與 肺、肝等臟腑密切相關(guān)。蓋腎主藏精，主水，司前后二陰，為人身陰陽(yáng)之根本。若腎虛不固， 不能分清別濁，精微物質(zhì)外泄，則出現(xiàn)蛋白尿；腎虛氣化不利，水液潴留，則可出現(xiàn)水腫。脾 為后天之本，主運(yùn)化水谷精微，為制水之臟。若脾虛不能運(yùn)化水谷，導(dǎo)致水濕停聚，泛濫肌膚 而發(fā)為水腫；脾虛不能固攝精微，清氣不升，精微物質(zhì)反而下注，故而出現(xiàn)蛋白尿。肺為水之 上源，主通調(diào)水道。若外邪侵襲，肺衛(wèi)失和，郁閉肺氣，水道閉塞，水液內(nèi)停而為水腫。肝主 疏泄，若七情傷肝、肝氣郁結(jié)，導(dǎo)致三焦氣機(jī)不暢，水液運(yùn)行障礙，停聚力水腫。誠(chéng)如《景岳 全書(shū) 腫脹》所說(shuō)凡水腫等證，乃肺脾腎三臟相干之病。蓋水為至陰，故其本在腎；水化于 氣，故其標(biāo)在肺；水惟畏土，故其制在脾。治法多為清熱利濕為主，兼以補(bǔ)腎健脾，宣肺益氣 固表等。本方主治肺失宣蕭、脾腎虧虛所致的腎炎水腫、頭昏、耳鳴、咳嗽、神疲乏力、少氣 懶言、面色萎黃、脘腹?jié)M悶、時(shí)有惡心、腰膝酸軟、納差食少、陽(yáng)萎早泄、舌質(zhì)胖、脈沉細(xì)，方中 以茅莓清熱利尿、涼血散結(jié)為主，是為君藥；以車前草、腎茶、玉米須為臣藥，助君藥清熱利 尿之力；以魚(yú)腥草清熱解毒；排膿消癰；利尿通淋；以枸杞子、益智仁補(bǔ)肝腎、健脾胃；諸藥 合用，共收清熱利濕，宣肺益腎，健脾消腫之功。本發(fā)明的功能主治本發(fā)明藥物具有清熱利濕，宣肺益腎，健脾消腫。用于用于肺 失宣蕭、脾腎虧虛所致的腎炎水腫、頭昏、耳鳴、咳嗽、神疲乏力、少氣懶言、面色萎黃、脘腹 滿悶、時(shí)有惡心、腰膝酸軟、納差食少、陽(yáng)萎早泄、舌質(zhì)胖、脈沉細(xì)。為了驗(yàn)證本發(fā)明藥物具有良好的治療效果，申請(qǐng)人進(jìn)行了一系列試驗(yàn)研究，具體 如下
一、臨床應(yīng)用
1、一般資料臨床共收治患者120例，男性78例，女性42例，年齡大者65歲，最小者14 歲，病程最長(zhǎng)者7年，最短者15天。本臨床隨機(jī)分成治療組80例，對(duì)照組40例，兩組無(wú)明
顯差異。2、治療方法治療組按《中醫(yī)病癥診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》施治，證候肺失宣蕭、脾腎虧虛 所致的腎炎水腫、頭昏、耳鳴、咳嗽、神疲乏力、少氣懶言、面色萎黃、脘腹?jié)M悶、時(shí)有惡心、腰 膝酸軟、納差食少、陽(yáng)萎早泄、舌質(zhì)胖、脈沉細(xì)。臨床檢查早期出現(xiàn)蛋白尿，亦可見(jiàn)血尿，可出現(xiàn)透明管型，上皮細(xì)胞。治以清熱利濕，宣肺益腎，健脾消腫。服藥方法以茅莓15g、車前 草18g、魚(yú)腥草15g、腎茶12g、枸杞子15g、益智仁15g、玉米須30g。煎湯內(nèi)服，一日1劑，15 天為一療程。對(duì)照組用地塞米松，每天20mg至40mg，15天為一療程。3、療效觀察
3. 1觀察項(xiàng)目治療前后全部患者均作血常規(guī)、尿常規(guī)、尿素氮、血壓檢測(cè)。3. 2療效標(biāo)準(zhǔn)有效水腫全部消退，其他癥狀消失，實(shí)驗(yàn)室檢查恢復(fù)正常；顯效 水腫及其他癥狀減輕，實(shí)驗(yàn)室檢查有改善 ’無(wú)效水腫及其他癥狀實(shí)驗(yàn)室檢查無(wú)變化。
3. 3結(jié)果:治療組80例，有效32例，顯效43例，無(wú)效5例，總有效率為93. 75% ；對(duì) 照組40例，有效12例，顯效22例，無(wú)效6例，總有效率為85%。治療組療效明顯高于對(duì)照 組。見(jiàn)下表。 4、討論慢性腎炎為內(nèi)科難治疾病，西藥療效不夠滿意，且副作用大。中藥在治療 慢性腎炎療效滿意，該方有清熱利濕，宣肺益腎，健脾消腫等功效，值得臨床推廣應(yīng)用。二、初步藥效學(xué)試驗(yàn)及配方對(duì)比試驗(yàn)研究
采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，對(duì)本發(fā)明制劑體外抗菌、抗炎作用及大鼠實(shí)驗(yàn)性腎炎模型的作用進(jìn)行 了藥效學(xué)初篩及配方對(duì)比研究，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。1、實(shí)驗(yàn)材料
1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，清潔級(jí)，體重18-22g，大鼠，體重180-220g，由重慶中藥研 究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1. 2藥品與試劑受試藥本發(fā)明制劑腎炎1號(hào)和腎炎2號(hào)，為貴陽(yáng)春科藥業(yè)研發(fā) 有限公司提供，規(guī)格各4包X 100g,臨床用法與用量一日3次，0. 75g/次，臨用時(shí)用蒸餾 水配成混懸液備用；陽(yáng)性對(duì)照藥中藥雷公藤多甙片，黃石飛云制藥有限公司，規(guī)格10mg/ 片，每日每千克體重1 1. 5mg，分3次飯后服；化藥醋酸潑尼松片，天津藥業(yè)焦作有限公 司，國(guó)藥準(zhǔn)字H41020636，規(guī)格0. 5mg/片，一日10_60mg。二甲苯為重慶化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，批 號(hào)20060104。1. 3實(shí)驗(yàn)器材BS110S精密電子天平(北京賽多利斯股份公司)，SHA-C控溫水浴 震蕩器(深圳天南海北實(shí)業(yè)公司)，計(jì)時(shí)器(貴陽(yáng)恒因生物公司)。2、方法與結(jié)果
2.1體外抗菌試驗(yàn)
2. 1. 1方法采用體外抗菌試驗(yàn)，測(cè)定受試藥對(duì)金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌、新 生隱球菌、糞鏈球菌的最低抗菌濃度(minimalinhibitoryconcentration，MIC)。(1)根據(jù) 不同菌種選用不同培養(yǎng)基。(2)將本發(fā)明制劑稀釋制成不同藥物濃度的培養(yǎng)基。(3)分別 定量接種不同的試驗(yàn)菌進(jìn)行培養(yǎng)，觀察測(cè)定管內(nèi)能抑制該菌生長(zhǎng)的MIC。2. 1. 2結(jié)果體外抑菌試驗(yàn)顯示，本發(fā)明制劑1號(hào)在較低濃度(2mg/ml-5mg/ml)和配 方2號(hào)在較低濃度(lmg/ml-3mg/ml)對(duì)變形桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有顯著的抑
6菌作用，配方2號(hào)優(yōu)于配方1號(hào)。
表1本發(fā)明制劑的抑菌作用
2. 2對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響
2. 2. 1方法取小鼠80只，體重為20 22g，隨機(jī)分為8組，每組10只，分別為空白對(duì) 照組、本發(fā)明制劑配方1號(hào)和2號(hào)(低劑量、中劑量、高劑量)組，陽(yáng)性藥組。灌胃給予生理 鹽水，不同濃度受試藥本發(fā)明制劑(0. 375g/kg、0. 75g/kg、l. 5g/kg)和陽(yáng)性藥(雷公藤多甙 片0. 015g/kg)，給藥容積10ml/kg，連續(xù)給藥5d，每天一次，末次給藥lh后，將動(dòng)物右耳前 后兩面涂二甲苯0. 02ml/只，左耳不做任何處理。4h后將動(dòng)物斷椎處死，剪下雙耳，用9mm 直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，精密電子天平稱重，每鼠右耳重量減去左耳重量 為腫脹程度，并按公式計(jì)算腫脹抑制率。試驗(yàn)結(jié)果以平均值標(biāo)準(zhǔn)差表示，結(jié)果采用t檢驗(yàn)， P<S). 05顯示具有顯著性。2. 2. 2結(jié)果表2結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，本發(fā)明制劑配方1號(hào)和配方2號(hào) 1.5g/kg組對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹均有明顯抑制作用，腫脹度明顯減少，抑制率為95. 8% OK0. 05);本發(fā)明制劑配方1號(hào)和配方2號(hào)0. 375g/kg，0. 75g/kg組對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹 均有一定的抑制作用趨勢(shì)，但與對(duì)照組比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，不同配方之間其配方2號(hào) 約優(yōu)于配方1號(hào)，但無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表2本發(fā)明制劑對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響
2. 3對(duì)小牛血清白蛋白所致大鼠實(shí)驗(yàn)性腎炎模型的防治作用
2. 3. 1方法清潔級(jí)SD大鼠(全雄)，隨機(jī)分為9組，每組10只，即正常組、模型組、 陽(yáng)性藥醋酸潑尼松組(0. 005g/kg)、本發(fā)明制配方1號(hào)和配方2號(hào)劑高劑量(1. Og/kg)、中 (0. 5g/kg)、低劑量組(0. 25g/kg)。各組大鼠給藥35天，正常組及模型組均灌胃給予同體積 的蒸餾水。于第14天，除正常組外，其余大鼠均一次性尾靜脈注射小牛血清白蛋白lg/kg。 給藥35天后，將大鼠置于代謝籠，收集24小時(shí)尿，并測(cè)定尿蛋白含量。最后將大鼠處死，解剖取兩側(cè)。腎臟固定于10%甲醛中，作病理組織學(xué)檢驗(yàn)。2. 3. 2結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組大鼠24小時(shí)尿蛋白排出量明顯高于正常組，而 24小時(shí)尿量未見(jiàn)明顯變化。治療慢性腎炎的中藥給藥組大鼠24尿蛋白排出量比模型組 明顯減少。病理檢查結(jié)果表明，模型組與正常對(duì)照組比較，其腎小球數(shù)無(wú)明顯變化，但蛋白 管型及出血灶明顯高于正常對(duì)照組，而本發(fā)明制劑各給藥組蛋白管型明顯減少，高劑量組 (1.0g/kg)及中劑量組(0. 5g/kg)與模型組相比，其出血灶明顯減少，且效果優(yōu)于本實(shí)驗(yàn)所 用的陽(yáng)性藥。表明本發(fā)明制劑對(duì)小牛血清白蛋白引起的大鼠腎炎有明顯的防治作用。配方 2號(hào)約優(yōu)于配方2號(hào)，但無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表3本發(fā)明制劑對(duì)大鼠腎炎尿蛋白總量的影響(X士SD)
=P<0. 001 (各組造型后及模型里抬癥后與正常對(duì)照組比較)， * p<0. 05, ** p<0. 01, p<0. 001 (給藥組與模型對(duì)照組比較)
3、結(jié)論
3. 1本發(fā)明制劑在體外抗菌實(shí)驗(yàn)中，對(duì)生殖道等常見(jiàn)致病菌大腸桿菌、變形桿菌、金 黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣桿菌、糞鏈球菌有抗菌作用，提示本發(fā)明制劑對(duì)上述致病菌所致泌尿道 感染等能產(chǎn)生防治作用。3. 2本發(fā)明制劑1. 5g/kg對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹產(chǎn)生明顯的抑制作用，提示 該藥有抑制急性炎癥滲出作用。3. 3本發(fā)明制劑1.0g/kg對(duì)小牛血清白蛋白引起的大鼠腎炎有明顯的防治作用， 提示本發(fā)明制劑對(duì)腎炎能產(chǎn)生防治作用。3. 4本發(fā)明制劑配方2號(hào)(茅莓12. 5%、車前草15%、魚(yú)腥草12. 5%、腎茶10%、玉米須 25%、枸杞子12. 5%、益智仁12. 5%)在不同試驗(yàn)中約優(yōu)于配方1號(hào)(茅莓25%、車前草30%、魚(yú) 腥草25%、腎茶20%)。提示本發(fā)明制劑配方2號(hào)對(duì)腎炎具有更好的防治作用。三、制劑制備工藝研究
1、處方茅莓262. 5g、車前草315g、魚(yú)腥草262. 5g、腎茶210g、枸杞子262. 5g、益智仁 262. 5g、玉米須 525g。2、制法取處方藥藥材，加水煎煮兩次，每次加水10倍，每次煎煮3小時(shí)，濾過(guò)，合 并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 25 1. 35 (60°C)的浸膏，加入輔料適量，混勻，制粒，干 燥，灌裝，制成1000粒，即得。4、工藝研究4. 1提取工藝確定 4. 1. 1處方分析
(1)茅莓性平，味甘、酸。具有散瘀，止痛，解毒，殺蟲(chóng)。用于吐血、跌打刀傷、產(chǎn)后瘀滯 腹痛、痢疾、痔瘡、疥瘡。本品葉含鞣質(zhì)；預(yù)試莖含酚類、鞣質(zhì)。在體內(nèi)顯抗腫瘤的治療作用。(2)車前草甘，寒，具有利水，清熱，明目，祛痰，用于小便不通，淋池，帶下，尿血， 黃疸，水腫，熱痢泄瀉，鼻衄，目赤腫痛，喉痛，咳嗽，皮膚潰瘍。含車前甙、桃葉珊瑚甙、烏蘇 酸、B —谷留醇、正三十一烷、棕櫚酸B —谷留酸酯、棕酸豆留醇酯、維生素B、維生素C、以及 車前果膠。蛋白質(zhì)、琥珀酸、腺嘌呤、膽鹼、梓醇、硬質(zhì)酸、花生酸、亞麻酸、亞沒(méi)酸等脂肪酸。 有利尿作用，并能增加尿素尿酸的排泄。能作用支氣管分泌物增加呼吸運(yùn)動(dòng)變緩而有卻化 痰止咳作用。(3)魚(yú)腥草辛、微寒。具有清熱解毒；排膿消癰；利尿通淋。主肺癰吐膿；痰熱喘 咳；喉哦；熱痢；癰腫瘡毒；熱淋。地上部分含揮發(fā)油、內(nèi)含抗菌有效成分癸酰乙醛，月桂醛， a_菔烯)和芳樟醇。有抗菌的作用、抗病毒作用。(4)腎茶性涼、味微苦、歸腎、膀胱經(jīng)、具有清熱除濕、排石化石、利尿通淋、排毒抗 菌、抑制慢性腎衰竭之功能，有很強(qiáng)的藥效，長(zhǎng)期飲用可改善并增強(qiáng)腎功能。(5)枸杞子甘，平。具有滋補(bǔ)肝腎，益精明目。用于虛勞精虧，腰膝酸痛，眩暈耳 鳴，內(nèi)熱消渴，血虛萎黃，目昏不明。含枸杞多糖、單糖、甜菜堿、脂肪酸、蛋白質(zhì)和多肽、維生 素B1、維生素B2、維生素C、18種氨基酸(含8種必需氨基酸)、微量元素(鈣、鋅、鎂、鐵、錳、 磷等)。具有延緩衰老作用、抗肝損傷、降血糖、補(bǔ)腎功能。(6)益智仁味辛；性溫。具有功溫脾止瀉攝涎；暖腎縮尿固精。主治脾胃虛寒；嘔 吐；泄瀉；腹中冷育；口多唾涎；腎虛遺尿；尿頻；遺精；白濁。含揮發(fā)油1%_2%，油中含桉油 精55%以及姜烯、姜醇、并含豐富的B族維生素及維生素C，以及微量元素錳、鋅、鉀、鈉、鈣、 鎂、磷、鐵、銅等。具有拮抗鈣活性的作用、強(qiáng)心作用抗癌、控制回腸收縮等作用。(7)玉米須性味甘，平。具有利尿，泄熱，平肝，利膽。治腎炎水腫，腳氣，黃疸肝 炎，高血壓，膽囊炎，膽結(jié)石，糖尿病，吐血衄血，鼻淵，乳癰。含脂肪油2. 5%、揮發(fā)油0. 12%、 樹(shù)膠樣物質(zhì)3. 8%、樹(shù)脂2. 7%、苦味糖甙1. 15%、皂甙3. 18%、生物堿0. 05%。還含隱黃素、抗壞 血酸、泛酸、肌醇、維生素K、谷留醇、豆留醇、蘋果酸、檸檬酸、酒石酸、草酸等。治療慢性腎 炎、腎病綜合征、急性溶血性貧血并發(fā)血紅蛋白尿。4. 1. 2綜上所述，結(jié)合處方中各藥材的性質(zhì)特點(diǎn)，本制劑決定采用水提法，現(xiàn)將其 實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。4. 2煎煮工藝研究
4. 2. 1因素水平確立影響煎煮的因素主要有以下幾個(gè)方面加水量、煎煮時(shí)間、煎煮 次數(shù)等。因此我們對(duì)這三個(gè)主要因素進(jìn)行了 3因素3水平的正交考察，以優(yōu)選最佳工藝參 數(shù)。正交試驗(yàn)的因素水平表見(jiàn)表4。表4煎煮正交試驗(yàn)因素水平表
4. 2. 2指標(biāo)選擇試驗(yàn)擬采用綜合評(píng)分法進(jìn)行工藝條件優(yōu)選，由于干膏收率與效量不 成正比關(guān)系，規(guī)定其權(quán)衡分為30分；60%乙醇浸出物權(quán)衡分為30分；處方中有效成分總黃 酮，能直接反映提取效果，故規(guī)定這個(gè)指標(biāo)的權(quán)衡分均為40分。4. 2. 3樣品制備取1處方量藥材，共計(jì)120g，按表4各正交試驗(yàn)條件進(jìn)行水提，藥 液用300目濾布過(guò)濾后，濃縮并定容至100ml。備用。4. 2. 4干膏收率測(cè)定精密取各正交試驗(yàn)濃縮后的藥液25ml，分別置已干燥至恒 重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)?05°C干燥3小時(shí)，取出，置干燥器中放置30分鐘，稱重，計(jì) 算干膏收率。4. 2. 560%乙醇浸出物測(cè)定精密取各正交試驗(yàn)濃縮后的藥液50ml，分別加乙醇 使含醇量達(dá)60 %，靜置冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，濾液水浴蒸干，殘?jiān)?05°C干燥3小時(shí)，取出， 置于干燥器中放置30分鐘，稱重，計(jì)算浸出物收率。4. 2. 6處方有效成分的測(cè)定
對(duì)照品的制備精密稱取在120°C干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品適量，置25ml量瓶中，加甲 醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取10ml，置100ml量瓶中， 加水至刻度，搖勻，制成每1ml中含蘆丁 0. 20192mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml，分別置25ml量瓶 中，各加水至6. 0ml，加5%亞硝酸鈉溶液lml，搖勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液lml，放 置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應(yīng)試劑為空白；照 紫外-可見(jiàn)分光光度法，在510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪 制標(biāo)準(zhǔn)曲線.
供試品溶液的制備混勻，取0. 2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇 25ml，稱重，超聲lOmin，放置室溫，用70%乙醇補(bǔ)足減失重量，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液lml至 25ml容量瓶中，加水至5ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至6. Oml”起同法操作 制得供試品溶液，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含無(wú)水蘆丁的重量，計(jì) 算，即得。4. 2. 7繪制正交表分析優(yōu)選最佳提取工藝 表5煎煮正交試驗(yàn)結(jié)果表
注干膏收率評(píng)分=(干膏收率/最大干膏收率)X30 60%乙醇浸出物評(píng)分=(浸出物收率/最大浸出物收率)X30 有效成分評(píng)分=(提取量/最大提取量)X40 綜合評(píng)分=干膏收率評(píng)分+60%乙醇浸出物評(píng)分+有效成分評(píng)分。
表6煎煮方差分析表
分析結(jié)果可知，各因素作用主次為A > C > B ；A、B、C因素均有顯著性差異，A因素中A3 > A2 > Ai，所以選擇A3 ；B因素中B3 > Bi > B2，所以選擇B3 ；C因素中C2 > C3 > Q，所以選 擇C2。因此最佳工藝為A3B3C2。即加10倍量水，每次煎煮3小時(shí)，煎煮兩次。4. 3最佳煎煮工藝驗(yàn)證由于優(yōu)選的最佳工藝未包括在正交設(shè)計(jì)表的9次試驗(yàn)中， 故對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。取正交試驗(yàn)同一批藥材，按最佳工藝進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，共驗(yàn)證3批，驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn) 表7。表7煎煮最佳工藝驗(yàn)證結(jié)果
驗(yàn)證結(jié)果表明，該工藝浸膏收率、60%乙醇浸出物含量和總黃酮提取量都較穩(wěn)定，可作為提取的最佳工藝。4. 4濃縮工藝考察生產(chǎn)車間常用的濃縮方法有常壓濃縮和減壓濃縮。減壓濃縮具 有耗時(shí)少、濃縮溫度低的特點(diǎn)，因此對(duì)熱敏成分破壞較小，隨著制藥設(shè)備制造技術(shù)的不斷提 高，現(xiàn)在的中藥生產(chǎn)車間已多采用減壓濃縮為主。為了與生產(chǎn)實(shí)際緊密結(jié)合，本品的濃縮方 式采用減壓濃縮法。取2倍處方量藥材，按最佳煎煮工藝提取，煎煮液減壓濃縮(-0. 06 -0. 08Mpa, 80°C)至稠浸膏，測(cè)得此時(shí)浸膏相對(duì)密度約為1.25 (60°C)，取浸膏適量，同上法測(cè)定其中總 黃酮含量，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表8。表8濃縮浸膏中總黃酮含量測(cè)定結(jié)果
試驗(yàn)結(jié)果表明采用減壓方式對(duì)本品提取液進(jìn)行濃縮，處方中總黃酮含量穩(wěn)定，說(shuō)明方 法可行。4. 5干燥工藝我們分別采用常壓和減壓干燥兩種方式對(duì)干燥工藝進(jìn)行了考察 將濃縮工藝考察中的稠浸膏混勻，分成3份，分別按常壓、減壓、溫度行干燥，以所得浸膏粉 中有效成分的含量、色澤、干燥時(shí)間為考察對(duì)象，以此對(duì)干燥方式進(jìn)行優(yōu)選。表9不同干燥方式考察表
上表試驗(yàn)結(jié)果表明，干燥方式和干燥條件對(duì)總黃酮含量無(wú)明顯影響，但常壓干燥浸膏 色澤較深、所需時(shí)間長(zhǎng)，相比之下，采用減壓70°C為干燥工藝參數(shù)較合適。4. 6制劑浸膏特性研究
(1)浸膏粉的性質(zhì)本品浸膏粉為經(jīng)減壓干燥后制備得的黑褐色粉末，為了掌握浸膏粉 的性質(zhì)，便于制劑研究，我們測(cè)定了浸膏粉的吸濕百分率和流動(dòng)性。(2)吸濕百分率測(cè)定取適量干浸膏，粉碎，過(guò)80目篩，置P205干燥器內(nèi)干燥48小 時(shí)，同時(shí)將底部盛有NaCl過(guò)飽和溶液的玻璃干燥器放入25°C的恒溫箱中24小時(shí)，其內(nèi)部相 對(duì)濕度(RH)為75%。在已干燥恒重的稱量瓶中加入適量浸膏粉，厚度約2mm，精密稱重后置 于上述玻璃干燥器中，打開(kāi)稱量瓶蓋；定時(shí)稱量，計(jì)算吸濕百分率
表10浸膏粉吸濕百分率測(cè)定結(jié)果表
(3)休止角測(cè)定采用固定漏斗法測(cè)定浸膏粉(80目)休止角將3只漏斗串聯(lián)并固定 于水平放置的坐標(biāo)紙上適宜的高度(3cm)，小心將浸膏粉沿漏斗壁倒入最上面的漏斗中，直 到坐標(biāo)紙上形成的浸膏粉錐體尖端接觸到最下面漏斗口為止，測(cè)出圓錐底部直徑，計(jì)算出休止角a
表11浸膏粉休止角測(cè)定結(jié)果
浸膏粉吸濕百分率和休止角測(cè)定結(jié)果表明，浸膏粉抗潮能力差，流動(dòng)性不好，不適于直 接制粒，應(yīng)加入適量輔料進(jìn)行調(diào)整。4. 7輔料篩選
4. 7. 1輔料種類篩選輔料的種類直接決定顆粒的吸濕性和流動(dòng)性。常用來(lái)改善顆粒 吸濕性和流動(dòng)性的輔料有乳糖、淀粉和糊精等。按表12分別取上述3種輔料加入浸膏粉中， 混勻，用75%乙醇制軟材，過(guò)10目制成顆粒，65°C干燥15min，過(guò)10目篩整粒后，再于65°C 干燥。按前述方法測(cè)定顆粒的吸濕百分率和休止角。表12不同輔料與浸膏粉配伍表
表13不同輔料制得顆粒的指標(biāo)檢查
表14不同輔料配比制得顆粒的吸濕百分率
由表可知，不同輔料與干膏粉以不同比例混合后，3組樣品吸濕率順序?yàn)? > 3 > 2。其 中1號(hào)處方(單用乳糖)的吸濕率最低(60h)，但3號(hào)處方(單用糊精)制粒較容易但味較苦， 而單用可溶性淀粉易制粒，溶化性好。綜合考慮下選擇2號(hào)處方。4. 7. 2輔料用量篩選輔料的用量應(yīng)在滿足制劑要求的前提下，盡量降低用量為 原則。按表15取淀粉加入浸膏粉中，按前述方法制粒后測(cè)定顆粒的吸濕百分率和休止角。表15輔料用量配伍表
上述試驗(yàn)結(jié)果表明，加入輔料量越多，顆粒的抗吸濕能力和流動(dòng)性越好，其中每20g浸 膏加入輔料20g與加入25g效果相當(dāng)，為了節(jié)約生產(chǎn)成本，我們選擇每20g浸膏粉加入輔料 20g為輔料用量參數(shù)。4. 8制劑成型工藝研究
(1)制劑處方中各味藥量原處方比例為茅莓1. 5、車前草1. 8、魚(yú)腥草1. 5、腎茶1. 2、枸 杞子1. 5、益智仁1. 5、玉米須3. 0，按此比例計(jì)算本品制劑處方中各藥材量為茅莓262. 5g、 車前草315g、魚(yú)腥草262. 5g、腎茶210g、枸杞子262. 5g、益智仁262. 5g、玉米須525g。即制 劑處方含生藥總量為2100g。(2)每包顆粒含生藥總量每包顆粒含生藥總量=生藥總量+制劑單位。即每 粒含生藥總量=2100g+1000=2. lg
(3)制劑過(guò)程中加入輔料量
①每處方干浸膏收量制劑處方含生藥總量為2100g，若根據(jù)干膏收率約為10%計(jì)算， 則每處方干浸膏收量為每處方干浸膏收量=處方含生藥總量X干膏收率。即每處方干 浸膏收量=2100gX 10%=210g
②輔料用量確定由前試驗(yàn)可知，本品制劑過(guò)程中干浸膏和加入淀粉的比例為 20 20，由此計(jì)算得淀粉用量為每處方淀粉用量=每處方干膏收量X20 + 20。S卩淀粉 用量=2100gX 10 + 20=210g
每處方制得內(nèi)容物量為干浸膏收量與淀粉用量之和，由①、②可知，本品制得內(nèi)容物 420g?？紤]到藥材采收季節(jié)和產(chǎn)地不同，以及生產(chǎn)工藝的影響，干浸膏收量會(huì)略有波動(dòng)，我 們將輔料用量描述為加入輔料適量，使內(nèi)容物制得量為450g。(4)成品裝量確定成品裝量=內(nèi)容物制得量+制成量；S卩成品裝量 =450g+1000 粒=0. 45g/ 粒
4. 9中試研究取20倍處方量藥材，按所制訂得工藝路線進(jìn)行中試生產(chǎn)，對(duì)生產(chǎn)工藝指 標(biāo)進(jìn)行全面考核，對(duì)藥材和成品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)定，結(jié)果見(jiàn)表18。
14
表18中試試驗(yàn)結(jié)果 四、制劑主要藥效學(xué)試驗(yàn)
1、實(shí)驗(yàn)材料
1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，清潔級(jí)，體重18-22g，大鼠，體重180-220g，由重慶中藥研 究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；家兔，清潔級(jí)。1. 2藥品與試劑受試藥本發(fā)明制劑半成品(藥粉)，為貴陽(yáng)春科藥業(yè)研發(fā)有限公 司提供，規(guī)格各10kg，臨床用法與用量一日3次，1.35g/次，臨用時(shí)用蒸餾水配成混懸 液備用；陽(yáng)性對(duì)照藥中藥雷公藤多甙片，黃石飛云制藥有限公司，規(guī)格10mg/片，每日每千 克體重1 1. 5mg，分3次飯后服；化藥醋酸潑尼松片，天津藥業(yè)焦作有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 H41020636，規(guī)格0. 5mg/片，一日10_60mg。氫氯噻嗪，蕪湖市博英制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 H34023353，規(guī)格25mg/片。二甲苯為重慶化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，批號(hào)20060104。腎炎康復(fù)片， 天津同仁堂集團(tuán)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z10940034，規(guī)格每片重0. 48g。口服，一次5片， 一日3次。2、方法與結(jié)果
2.1對(duì)牛血清白蛋白致家兔慢性腎炎的防治作用
2. 1. 1試驗(yàn)方法取家兔70只，試驗(yàn)前于恒溫觀察室24-27°C予飼養(yǎng)4周，取血測(cè)定血 清肌酐、尿素氮、白蛋白，取尿測(cè)定24小時(shí)尿蛋白定量。隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、 雷公藤多甙組(0. 006g/kg)、醋酸潑尼松組(0. 004g/kg)、本發(fā)明制劑低劑量組0. 3g/kg、中 劑量組0. 6g/kg、高劑量組1. 2g、kg劑量組，共7組，每組10只。除正常對(duì)照組外，每日耳靜 脈注射C-BSA. 10mg/只，共5周，第6周劑量加倍，從免疫二周后開(kāi)始口服給藥，連續(xù)6周。2. 1. 2試驗(yàn)結(jié)果
(1)24小時(shí)尿蛋白定量免疫前所有家兔尿蛋白定性為(一)，個(gè)別(士)水平，24小 時(shí)尿蛋白定量各組之間無(wú)明顯差異，免疫二周后，尿蛋白定性逐漸增強(qiáng)，各組均不同程度地 處于(+)。(++)水平，正常對(duì)照組始終為(一)，個(gè)別為(士)水平。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，24小時(shí)尿蛋白定量顯示，本發(fā)明制劑高、中、低劑量組與模型對(duì)照組比較，均有明顯降低尿蛋白的作 用，并隨劑量增加，作用增強(qiáng)，陽(yáng)性藥醋酸潑尼松組和雷公藤多甙組亦有類似作用。見(jiàn)表19。(2)生化學(xué)檢查未免疫前，各組生化學(xué)檢查，各項(xiàng)指標(biāo)各組間未見(jiàn)有明顯差異。 試驗(yàn)結(jié)束后，各生化指標(biāo)見(jiàn)表20。肌酐給藥6周后，模型組肌酐值明顯高于正常組，本發(fā) 明制劑高劑量組、醋酸潑尼松組、雷公藤多甙組，與模型組比較具有明顯的降低作用。尿素 氮給藥6周后，模型組尿素氮明顯高于正常組，本發(fā)明制劑高、中、低劑量組及醋酸潑尼松 組、雷公藤多甙組與模型組比較，具有明顯的抑制尿素氮升高的作用。以上試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明制劑高、中劑量組對(duì)用陽(yáng)離子化牛血清白蛋白(C一 BSA)造成家兔慢性腎小球腎炎模型具有明顯的防治作用，并隨劑量增加，作用增強(qiáng)。陽(yáng)性藥 醋酸潑尼松、雷公藤多甙有類似作用。表19對(duì)家兔所致慢性腎炎尿蛋白的影響(X士SD)
*P<0. 05 **P<0. 01 (與模型組比較) 表20對(duì)家兔(C.BSA)所致慢性腎炎的影響(X士SD)
*P<0. 05 **P<0. 01 ***P<0. 001 (與摸型組比較)
2. 2對(duì)大鼠腎炎的影響試驗(yàn)
2. 2. 1選取Wistar種大鼠，雌雄兼用，體重180_220g，除正常對(duì)照組外，其余均腹腔 注射同種免疫復(fù)合物(同種免疫復(fù)合物的制備，取Wistar種大鼠，擊昏后打開(kāi)腹腔，自腎動(dòng) 脈插入針頭，用生理鹽水反復(fù)沖洗至腎色轉(zhuǎn)白后，摘下腎臟，取腎皮質(zhì)5克研成勻菜，與弗 氏完全佐劑混勻成10ml，加生理鹽水20ml混合制成)，兩周1次，每次2ml/只，約3_6次，直至出現(xiàn)蛋白尿，表明腎炎模型形成。參照大鼠24小時(shí)尿蛋白定量，分為模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥 對(duì)照醋酸潑尼松組(0. 006g/kg)、雷公藤多甙組(0. 009g/kg)；本發(fā)明制劑低劑量組(0. 4g/ kg)、中劑量組(0. 8g/kg)、高劑量組(1. 6g/kg);連同正常對(duì)照組共7組，每組10只，開(kāi)始灌 胃給藥，每天一次，連續(xù)四周，給藥容積均為lml/100g體重，模型對(duì)照組給予等容量0.5% CMC (羧甲基纖維素鈉)。2. 2. 2試驗(yàn)結(jié)果
(1)24小時(shí)尿蛋白定量表21結(jié)果表明，造型前各劑量組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量無(wú)明 顯差異。造型后各劑量組24小時(shí)尿蛋白定量均明顯升高(與正常對(duì)照組比較)，表明造型 成功，并且尿蛋白持續(xù)升高4周以上。經(jīng)本發(fā)明制劑灌胃給藥四周治療后，24小時(shí)尿蛋白定 量的作用與模型對(duì)照組比較，本發(fā)明制劑高、中、低劑量組均有明顯降低24小時(shí)尿蛋白定 量的作用，并隨劑量增加，作用增強(qiáng)。陽(yáng)性對(duì)照藥醋酸潑尼松和雷公藤多甙亦有類似作用。(2)生化學(xué)檢查表21和表22結(jié)果表明，造型后大鼠血清尿素氮比造型前明顯升 高，肌酐無(wú)明顯影響。本發(fā)明制劑治療后對(duì)尿素氮和肌酐未有明顯影響(與模型對(duì)照組比 較)。以上結(jié)果表明，本發(fā)明制劑對(duì)大鼠Heymarm腎炎模型有明顯的治療作用，并隨劑量增 加，作用增強(qiáng)，但對(duì)血清肌酐、尿素氮無(wú)明顯影響。陽(yáng)性對(duì)照藥雷公藤多甙、醋酸潑尼松亦有 類似作用。表21對(duì)大鼠腎炎尿蛋白總量的影響(X士SD)
表22對(duì)大鼠腎炎血清肌酐的影響(X士SD)
表23對(duì)大鼠腎炎尿素氮的影響(X士SD)
AAP<0. 01, AAAp<0. 001 (制摸后與制摸前比較)*p<0. 05, **p<0. 01,
***p<0. 001 (給藥組與模型對(duì)照組比較) 2. 3對(duì)利尿的影響試驗(yàn)
2.3. 1對(duì)水負(fù)荷大鼠利尿的影響選用經(jīng)過(guò)預(yù)選的合格Wistar種大鼠(2小時(shí)內(nèi)的 排尿量超過(guò)所給水負(fù)荷的40% )，雌雄兼用，體重180-220g，隨機(jī)分為6組，每組10只。給 藥組分別灌胃給予本發(fā)明制劑低劑量組(0. 4g/kg)、中劑量組(0. 8g/kg)、高劑量組(1. 6g/ kg)，連續(xù)3天，陽(yáng)性對(duì)照藥灌胃給予(0. 008g/kg)氫氯噻嗪一次(于試驗(yàn)前)，腎炎康復(fù)片 組(2. Og/kg)，給藥容積均為lml/100g體重，正常對(duì)照組灌胃給予等容量0. 5% CMC。試驗(yàn) 前禁食不禁水15小時(shí)后，按2ml/100g體重的體積給大鼠腹腔注射生理鹽水，并輕壓下腹使 膀胱排空，然后灌胃給予以上藥物，放于大鼠代謝籠中，收集不同時(shí)間的尿液，結(jié)果見(jiàn)表24。
表24對(duì)水負(fù)荷大鼠利尿的影響(X士 SD)
* :p<0. 05 ** :p<0. 01 (與正常對(duì)照組比較)
表24結(jié)果表明，與正常對(duì)照組比較，本發(fā)明制劑高、中劑量組均明顯增加水負(fù)荷大 鼠的尿量。陽(yáng)性藥腎炎康復(fù)片、氫氯噻嗪亦有類似作用。2. 3. 2對(duì)氯化汞致腎功能衰竭大鼠尿量、肌酐及尿素氮的影響選用合格
Wistar種大鼠，雌雄兼用，體重180 220g，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì) 照組氫氯噻嗪0. 008g/kg、本發(fā)明制劑低劑量組(0. 4g/kg)、中劑量組(0. 8g/kg)、高劑量組 (1. 6g/kg)，共7組，每組10只，開(kāi)始灌胃給藥，給藥容積均為lml/100g體重，模型對(duì)照組給予等容量0. 5% CMC，每天一次，連續(xù)2周，然后，除正常對(duì)照組外，分別肌肉注射12mg/kg的 氯化汞進(jìn)行造型(陽(yáng)性藥對(duì)照組開(kāi)始給藥，本發(fā)明中藥組合物繼續(xù)給藥)，致大鼠腎功能衰 竭，本發(fā)明中藥組合物繼續(xù)給藥，用代謝籠收集造型后大鼠24小時(shí)的尿量，第3天眼眶取血 測(cè)定肌酐、尿素氮，比較其差異，觀察本發(fā)明中藥組合物的作用，結(jié)果見(jiàn)表25結(jié)果表明，和 正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組的24小時(shí)尿量明顯減少，血清肌酐、尿素氮明顯升高，表明已 形成大鼠腎功能衰竭；和模型對(duì)照組比較，本發(fā)明制劑高劑量組能明顯增加大鼠造型后24 小時(shí)尿量，各劑量組對(duì)血清肌酐、尿素氮均無(wú)明顯影響。
表25對(duì)氯化汞致腎功能衰竭大鼠尿量、肌酐及尿素氮的影響(X士SD)
1><0.05(與模型對(duì)照組比較)
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明中藥組合物明顯增加水負(fù)荷大鼠的尿量、明顯增加氯化汞 致腎功能衰竭大鼠24小時(shí)的尿量，表明本發(fā)明中藥組合物具有明顯的利水滲濕作用，并隨 劑量增加，作用增強(qiáng)。2. 4抗炎實(shí)驗(yàn)
2. 4. 1對(duì)巴豆油致小鼠耳腫脹的影響選取雄性小鼠，體重24士2g，隨機(jī)分組，每組 10只，試驗(yàn)分為對(duì)照組，腎炎康復(fù)片組(3. Og/kg),醋酸潑尼松組(0. 01g/kg)，本發(fā)明制劑 低劑量組(0. 6g/kg)、中劑量組(1.2g/kg)、高劑量組(2. 4g/kg)，共5組，每天灌胃給藥一 次，連續(xù)10天，給藥容量為0. 2ml/10g體重，對(duì)照組給予等容量0.5% CMC，末次給藥后半 小時(shí)，將巴豆油致炎劑0. 05ml滴于右耳，150分鐘后將小鼠處死，沿耳廓剪下兩耳，用直徑 8. 5mm打孔器分別在左右耳相同部位打下圓耳片，稱重，用左右耳重量之差，作為腫脹度，比 較其差異，觀察本發(fā)明中藥組合物的作用，結(jié)果見(jiàn)表26。結(jié)果表明和對(duì)照組比較，本發(fā)明 制劑灌胃給藥10天，對(duì)巴油致小鼠耳腫脹，具有明顯的抑制作用，表明本發(fā)明制劑具有明 顯的抗巴豆油致小鼠耳腫作用。表26對(duì)巴豆油致小鼠耳腫的影響(X士SD)
19
*= P<0. 05 , <0. 01 (與對(duì)照組比較)
2. 4. 2對(duì)雞蛋清致大鼠足跖腫脹的影響選用Wistar種大鼠，體重180_220g，隨機(jī)分 為6組，每組10只，雌雄各半。給藥組分別灌胃給予本發(fā)明制劑低劑量組(0. 4g/kg)、中劑 量組(0. 8g/kg)、高劑量組(1. 6g/kg)，連續(xù)7天，陽(yáng)性對(duì)照藥灌胃給予阿司匹林(0. 2g/kg) 和腎炎康復(fù)片組(2. Og/kg)，連續(xù)3天，給藥容積均為lml/100g體重，模型對(duì)照組給予等容 量0. 5% CMC。末次給藥后1小時(shí)，分別在大鼠左后肢足跖皮下注射10%雞蛋清生理鹽水 0. 06ml/只進(jìn)行致炎，用容積法測(cè)定大鼠左后肢足跖致炎前后的體積，計(jì)算腫脹度(足跖致 炎后體積減去致炎前體積)，比較其差異，觀察本發(fā)明中藥組合物的作用，結(jié)果見(jiàn)表27。結(jié) 果表明，連續(xù)灌胃給藥7天，與對(duì)照組比較，本發(fā)明制劑高、中、低劑量組均能明顯減少大鼠 足跖腫脹度，并隨劑量增加，作用增強(qiáng)，陽(yáng)性藥阿司匹林亦有類似作用。表明本發(fā)明制劑具 有明顯的抗雞蛋清致大鼠足跖腫脹作用。
表27對(duì)雞蛋清致大鼠足跖腫脹的影響(X士SD，n)
*P<0. 05 , **P<0. 01, ***P<0. 001 (與對(duì)照組比較)
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明制劑對(duì)巴豆油致小鼠耳腫脹、對(duì)雞蛋清致大鼠足跖腫脹 均具有明顯的抑制作用，表明本發(fā)明制劑具有明顯的抗炎作用，并隨劑量增加，作用增強(qiáng)。3、結(jié)論
3. 1本發(fā)明制劑高、中劑量組對(duì)用陽(yáng)離子化牛血清白蛋白造成家兔慢性腎小球腎炎模 型具有明顯的抑制作用，提示本發(fā)明制劑對(duì)腎炎有一定防治作用。3. 2本發(fā)明制劑高、中、低劑量組均有明顯降低24小時(shí)尿蛋白定量的作用，并隨劑 量增加，作用增強(qiáng)。提示本發(fā)明制劑對(duì)腎炎有明顯的治療作用。3. 3本發(fā)明制劑高、中劑量組均明顯增加水負(fù)荷大鼠的尿量，提示本發(fā)明制劑具有明顯的利水滲濕作用。3. 4本發(fā)明制劑高、中、低劑量均能抑制巴豆油致小鼠耳腫脹和雞蛋清致大鼠足跖 腫脹，提示本發(fā)明制劑具有明顯的抗炎作用。3. 5通過(guò)以上主要藥效學(xué)試驗(yàn)，提示本發(fā)明制劑對(duì)腎炎有很好的防治作用，為臨床 用藥提供參考依據(jù)。五、制劑毒性實(shí)驗(yàn)研究
1、急性毒性試驗(yàn)該制劑為膠囊劑，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)情況，分組給藥后高劑量組動(dòng)物未見(jiàn)死 亡，無(wú)法找出最大致死劑量，故無(wú)法進(jìn)行動(dòng)物半數(shù)致死量測(cè)定。改為動(dòng)物口服給藥的最大給 藥量測(cè)定。本發(fā)明制劑給藥量為成品藥4. 05g/日(相當(dāng)于生藥18. 9g)，相當(dāng)于(60公斤) 每公斤體重0. 0675g/kg (折合生藥量0. 315g/kg)。本試驗(yàn)選取用成品給藥。試驗(yàn)中小鼠按最大灌胃容量(40ml/kg體重)給予最 大濃度40%給藥，因受藥物濃度及灌胃體積所限給藥劑量已無(wú)法再增加，故給藥劑量已達(dá) 最大給藥劑量，結(jié)果受試動(dòng)物24小時(shí)內(nèi)給藥劑量累積為12. 15g/kg(折合生藥量為56. 7g/ kg)。經(jīng)計(jì)算最大給藥量已達(dá)成人每日用量(折合生藥量0.315g/kg)的200倍。給 藥后連續(xù)觀察14天，所有受試小鼠均未見(jiàn)有異常表現(xiàn)，無(wú)一死亡。根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)Wlright化法則，可以推測(cè)出口服給藥的日最大給藥量必大于 12. 15g/kg (折合生藥折合生藥量為56. 7g/kg)。表28本發(fā)明藥物最大給藥量實(shí)驗(yàn)小鼠體重的比較
2、長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)SD大鼠連續(xù)灌胃給予本發(fā)明制劑2. 0g/kgU0. 0g/kg、20. 0g/kg，6個(gè) 月，觀測(cè)給藥期間和停藥恢復(fù)期2周的毒性。每天觀察給藥后大鼠的飲食、活動(dòng)、體重、攝食 量。于給藥6個(gè)月和停藥2周(恢復(fù)期)定期測(cè)定動(dòng)物的血液學(xué)、血清生化學(xué)，并進(jìn)行剖檢和 組織病理學(xué)檢查。結(jié)果表明，本發(fā)明制劑1. 15g/kg、5.75g/kg、11.5g/kg灌胃給藥3個(gè)月對(duì) 大鼠無(wú)明顯的毒性。(1)動(dòng)物SD大鼠，級(jí)別清潔級(jí)。動(dòng)物數(shù)SD大鼠80只。體重給藥前1周的體 重范圍220士20g。健康狀況給藥前1周，觀察大鼠一般狀況，未見(jiàn)異常。飼養(yǎng)條件清潔 級(jí)動(dòng)物房，溫度22士3°C，每籠飼養(yǎng)5只大鼠。飼料鈷6(1放射滅菌大鼠用顆粒飼料。喂食 每日自由攝食。飲用水自來(lái)水經(jīng)滅菌后，動(dòng)物從飲水瓶中自由攝取。(2)分組和給藥分組按體重80只大鼠分為4組，分別為對(duì)照組、高劑量組、中劑 量組、低劑量組，每組20只。分組方法按體重均衡分組。給藥期每周6天，連續(xù)給藥6個(gè) 月。給藥方式灌胃給藥，20ml/kg，每天一次(早上8點(diǎn))。恢復(fù)期停止給藥后，每天觀測(cè) 一次，連續(xù)2周。(3)劑量劑量組別低劑量組2. Og/kg (相當(dāng)于臨床用量5倍)，中劑量組10. 0g/ kg (相當(dāng)于臨床用量的25倍)，高劑量組20. Og/kg (相當(dāng)于臨床用量的50倍)，空白對(duì)照組
21給予同體積蒸餾水。設(shè)計(jì)依據(jù)本發(fā)明制劑小鼠灌胃未測(cè)出小鼠LD5(I，采用最大容積給藥。(4)設(shè)計(jì)依據(jù)本發(fā)明制劑小鼠灌胃未測(cè)出小鼠LD5(I，采用最大容積給藥。本發(fā)明 制劑對(duì)大鼠作用的有效劑量為0. 4g/kg。根據(jù)研發(fā)者提供的臨床人擬給藥量每人每天為 4. 05g，按公斤體重計(jì)算為0. 0675g/kg. d。本發(fā)明制劑6個(gè)月長(zhǎng)期毒性給藥劑量計(jì)算根 據(jù)體表面積折算，大鼠劑量為2. 0g/kgU0. 0g/kg、20. Og/kg，分別為臨床給藥量的5、25、50 倍。(5)觀察內(nèi)容
一般狀態(tài)的觀察從購(gòu)入動(dòng)物日起到停藥恢復(fù)期結(jié)束，通常每天觀察一次，但給藥期間 每天觀察2-3次。給藥前、后全部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。體重測(cè)定給藥前、給藥開(kāi)始直至停藥恢復(fù)期結(jié)束，每周測(cè)定體重1次。另外，在解 剖前先測(cè)定動(dòng)物的體重。給藥前和給藥后全部動(dòng)物。攝食量測(cè)定給藥前1周、給藥開(kāi)始，直至停藥恢復(fù)期結(jié)束，每周1次測(cè)定攝食量 (24小時(shí)食物消耗量)。每周二上午9時(shí)將每籠(5只大鼠)的飼料取出，并放入500克飼料。 周三上午9時(shí)將每籠(5只大鼠)剩余飼料取出，稱量并計(jì)算每天平均每只大鼠攝食量(g/ rat/d)。給藥前和給藥后全部動(dòng)物。采血和標(biāo)本制備給藥后6個(gè)月和恢復(fù)期結(jié)束的每次剖檢前摘單眼球法采血，進(jìn) 行凝血時(shí)間、血液學(xué)、血清生化等標(biāo)本制備和檢查。血液學(xué)檢查進(jìn)行11項(xiàng)指標(biāo)，白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板、網(wǎng)織紅細(xì)胞、淋 巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、凝血時(shí)間，血細(xì)胞檢查。血清生化檢查采用全血經(jīng)離心所得血清，進(jìn)行11項(xiàng)生化指標(biāo)(AST，ALT, ALP, GLU, BUN, TCHO, TBIL, CRE, TP, ALB, A/G)的測(cè)定。尸檢試驗(yàn)全部實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物(包括實(shí)驗(yàn)期間死亡動(dòng)物)進(jìn)行剖檢。尸檢試驗(yàn)在給藥 3個(gè)月和停藥2周時(shí)進(jìn)行，采用切斷頸動(dòng)脈放血處死大鼠。解剖肉眼檢查和稱臟器重量解剖時(shí)肉眼仔細(xì)觀察各臟器和組織的異常變化。稱 重的器官心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、腦、腎上腺、胸腺、甲狀腺(含甲狀旁腺)，并計(jì)算臟器 重量系數(shù)(臟器重/體重X100%)。組織和器官的固定固定的組織器官如下腦、心、肝、脾、肺、腎、胰腺、腎上腺、甲 狀腺、胸腺、淋巴結(jié)、膀胱、胸骨、脊髓、視神經(jīng)、腦垂體、食道、胃、十二指腸、空腸、回腸和結(jié) 腸及病變部位等。組織病理學(xué)檢查臟器和組織經(jīng)福爾馬林固定12小時(shí)后，換新福爾馬林繼續(xù)固定 48小時(shí)，胃組織修塊為沿胃小彎縱行分別修4 6塊約2cm長(zhǎng)的組織，包括噴門、胃小彎、胃 大彎、幽門、十二指腸及前胃。組織經(jīng)常規(guī)脫水，石蠟包埋，切5 y M薄片，HE染色，光鏡檢查。(6)試驗(yàn)結(jié)果
①一般狀況對(duì)照組在6個(gè)月的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)照組20只大鼠進(jìn)食與活動(dòng)狀況正常， 未發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象。低劑量組(2. Og/kg)在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，20只大鼠進(jìn)食與活動(dòng)狀況正 常，未發(fā)現(xiàn)呼吸、嘔吐、流涎、腹瀉等異?，F(xiàn)象。中劑量組(10. Og/kg)僅4號(hào)大鼠6周時(shí)發(fā) 現(xiàn)鼻紅色分泌物，三天后自行恢復(fù)正常，其余大鼠無(wú)異常。高劑量組(20. Og/kg) 1號(hào)大鼠 于給藥后第2周發(fā)現(xiàn)腹瀉，二天后自行恢復(fù)正常，其它均未出現(xiàn)異常。②體重在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，各給藥組大鼠的體重增長(zhǎng)均正常。與對(duì)照組比較，未見(jiàn)明顯差異，未發(fā)現(xiàn)與藥物相關(guān)的體重變化。③攝食量在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，大鼠的攝食量與對(duì)照組比較，未見(jiàn)明顯差異，未發(fā) 現(xiàn)與藥物相關(guān)的攝食量變化。④對(duì)血液學(xué)的影響
給藥6個(gè)月血液學(xué)檢查給藥6個(gè)月血液學(xué)11項(xiàng)指標(biāo)(白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小 板、網(wǎng)織紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和凝血 時(shí)間)檢查結(jié)果。白細(xì)胞總數(shù)本發(fā)明高劑量組白細(xì)胞總數(shù)為5. 26X10VL,比對(duì)照組5. 72X 109/L 有所減少，但無(wú)顯著差異。PLT 本發(fā)明高劑量組的血小板數(shù)為987. 69X10VL,比對(duì)照組1142. 17X 109/L明 顯減少(P<0. 05)；中劑量、低劑量組與對(duì)照組比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其它血液學(xué)指標(biāo)，給藥組與對(duì)照組比較未見(jiàn)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。停藥恢復(fù)期血液學(xué)檢查停止給藥后2周，血液學(xué)上述11項(xiàng)指標(biāo)檢查結(jié)果。給藥 組與對(duì)照組比較未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異。⑤對(duì)血清生化的影響
給藥6個(gè)月血清生化變化給藥3個(gè)月(12周)檢查血清生化11項(xiàng)指標(biāo)(AST，ALT，ALP， GLU, BUN, TCHO, TBIL, CRE, TP, ALB, A/G)。Na+ 本發(fā)明高劑量(20. Og/kg)組的血清 Na+ 為 186. 47mmol/L、中劑量(10. Og/kg) 組的Na+為181. 34mmol/L,明顯高于對(duì)照組141. 72mmol/L (P<0. 05)，低劑量組與對(duì)照組比
較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。TBLL 本發(fā)明高劑量組(20. Og/kg)的總膽紅素為2. 86umol/L,明顯低于對(duì)照組 (5. 84umol/L, P<0. 05)；中、低劑量組與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。GLU 本發(fā)明低劑量組(2. Og/kg)的血糖為8. 26mmol/L,明顯高于對(duì)照組 6. 23mmol/L (P<0. 05)，但中、高劑量組未見(jiàn)明顯變化。其它項(xiàng)血清生化指標(biāo)，給藥組與對(duì)照組比較未見(jiàn)明顯差異。停藥恢復(fù)期血清生化檢察停止給藥后2周，檢查血清生化11項(xiàng)指標(biāo)(AST，ALT, ALP, GLU, BUN, TCHO, TBIL, CRE, TP, ALB, A/G)。TBLL 本發(fā)明高劑量組TBLL為6. 35士0. 56、中劑量組為5. 68士0. 83，均明顯高于 比對(duì)照組的 3. 89士0.74 (P<0. 05)。TG 本發(fā)明高劑量組TG含量為1. 12mmol/L、中劑量組為1. 14mmol/L，均略高于對(duì) 照組(0. 98mmol/L)，但無(wú)顯著差異(P > 0. 05)。其它血清生化指標(biāo)，給藥組與對(duì)照組比較未見(jiàn)明顯差異。⑥系統(tǒng)尸解解剖時(shí)肉眼檢查各個(gè)階段(6個(gè)月、恢復(fù)期)的所有動(dòng)物的組織、器官 的異常情況。給藥6個(gè)月系統(tǒng)尸解對(duì)照組12只大鼠被毛光滑，頭部器官、會(huì)陰部均未見(jiàn)異常， 心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、腦、睪丸、附睪、前列腺、甲狀腺、胸腺、腸系膜淋巴結(jié)、膀胱、胸骨、 脊髓、視神經(jīng)、腦垂體、氣管、胃、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、胸腔及腹腔均未發(fā)現(xiàn)肉眼可見(jiàn) 的病變?？瞻讓?duì)照組12只大鼠中1只動(dòng)物見(jiàn)肝囊腫，其余未見(jiàn)異常。高劑量組(20.0g/ kg) :12只大鼠中僅1只脾大外，其余各臟器和組織未見(jiàn)異常。中劑量組(10. Og/kg) 12只
23大鼠中2只脾大外，其余各臟器和組織未見(jiàn)異常。低劑量組(2. 0g/kg):12只大鼠中1只動(dòng) 物雙腎囊腫外，其余各臟器和組織未見(jiàn)異常?；謴?fù)期系統(tǒng)尸解對(duì)照組8只大鼠被毛光滑，頭部器官、會(huì)陰部均未見(jiàn)異常，心、 肝、脾、肺、腎、腎上腺、腦、睪丸、附睪、前列腺、甲狀腺、胸腺、腸系膜淋巴結(jié)、膀胱、胸骨、脊 髓、視神經(jīng)、腦垂體、氣管、胃、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、胸腔及腹腔均未發(fā)現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的 病變。高劑量組(20.0g/kg) :8只大鼠被毛光滑，頭部器官、會(huì)陰部均未見(jiàn)異常，心、肝、脾、 肺、腎、腎上腺、腦、睪丸、附睪、前列腺、甲狀腺、胸腺、腸系膜淋巴結(jié)、膀胱、胸骨、脊髓、視神 經(jīng)、腦垂體、氣管、胃、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、胸腔及腹腔均未均未發(fā)現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的病 變。中劑量組(10.0g/kg):8只大鼠中1例見(jiàn)胸腺較小。8只大鼠被毛光滑，頭部器官、會(huì) 陰部均未見(jiàn)異常，心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、腦、睪丸、附睪、前列腺、甲狀腺、胸腺、腸系膜淋 巴結(jié)、膀胱、胸骨、脊髓、視神經(jīng)、腦垂體、氣管、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、胸腔及腹腔均未 見(jiàn)到肉眼病變。低劑量組(2. 0g/kg):8只大鼠被毛光滑，頭部器官、會(huì)陰部均未見(jiàn)異常，心、 肝、脾、肺、腎、腎上腺、腦、睪丸、附睪、前列腺、甲狀腺、胸腺、腸系膜淋巴結(jié)、膀胱、胸骨、脊 髓、視神經(jīng)、腦垂體、氣管、胃、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、胸腔及腹腔均未見(jiàn)到肉眼病變。⑦對(duì)臟器重量的影響給藥6個(gè)月臟器重量變化脾臟本發(fā)明中劑量組(10. 0g/ kg)平均脾臟重量為1.26士0.43 (g)，比對(duì)照組0.58士0.24 (g)明顯增加(P<0.05)；高劑 量組、低劑量組與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。胸腺本發(fā)明中劑量組(10. Og/kg組)平均胸腺 重量為0. 24g，比對(duì)照組(0. 38g)明顯減少(P<0. 05)。給藥各組的其它臟器(心臟、肺、腦、肝 臟、腎臟、腎上腺、甲狀腺、睪丸、附睪、前列腺)重量與對(duì)照組無(wú)明顯差異。停藥恢復(fù)期臟器 重量的檢測(cè)本發(fā)明制劑給藥各組停藥2周，大鼠臟器重量與對(duì)照組無(wú)明顯差異。(7)本發(fā)明制劑用藥6個(gè)月對(duì)SD大鼠的毒性作用
①對(duì)攝食量和體重增長(zhǎng)的影響大鼠分別灌胃本發(fā)明制劑2. 0g/kgU0. Og/kg,20. 0g/ kg連續(xù)6個(gè)月，其體重增長(zhǎng)率和攝食量與空白對(duì)照組比較均未見(jiàn)明顯差異，說(shuō)明本發(fā)明制 劑在2. 0g 10. 0g/kg范圍內(nèi)對(duì)攝食和體重增長(zhǎng)無(wú)明顯影響。②對(duì)血液學(xué)的影響在給藥6個(gè)月(24周)的血液學(xué)11項(xiàng)指標(biāo)(白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血 紅蛋白、血小板、網(wǎng)織紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、單核 細(xì)胞和凝血時(shí)間)檢查結(jié)果和分析如下
白細(xì)胞總數(shù)本發(fā)明高劑量組的白細(xì)胞總數(shù)為5. 656X10VL,比對(duì)照組6. 36X 109/L有 所減少，但無(wú)顯著差異(P > 0.05)。PLT 本發(fā)明高劑量組的血小板數(shù)為813. 65X10VL,比對(duì)照組1132. 26X 109/L明 顯減少(P<0. 05);而本發(fā)明中劑量、低劑量組與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異?；謴?fù)期高劑量組血 小板數(shù)為708. 68X 109/L,比對(duì)照組968. 44X 109/L仍明顯減少(P<0. 05)。③對(duì)血清學(xué)的影響GLU 給藥24周，本發(fā)明低劑量組的血糖為8. 27mmol/L,比對(duì) 照組6. 45mmol/L明顯升高；而本發(fā)明高劑量組、中劑量組與空白對(duì)照均無(wú)明顯差異，推測(cè) 低劑量組血糖的升高可能與個(gè)別動(dòng)物食量過(guò)大有關(guān)，且在停藥恢復(fù)期未見(jiàn)升高，故推測(cè)非 藥物所致。④對(duì)臟器重量的影響給藥24周，本發(fā)明中劑量組脾臟的重量1. 43g,比對(duì)照組 0. 72g明顯增加；胸腺臟器的重量為0. 22g，比對(duì)照組0. 28g明顯減少，但高劑量組脾和胸 腺?zèng)]有發(fā)現(xiàn)明顯變化?；謴?fù)期各給藥組與空白對(duì)照組比較，各臟器指數(shù)均未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示，本發(fā)明中劑量組脾和胸腺重量的變化與藥物的毒性關(guān)系不大。⑤對(duì)組織病理學(xué)的影響用藥6個(gè)月，高、中劑量組可見(jiàn)A、少數(shù)動(dòng)物發(fā)生肝組織 少許脂肪變性和水樣變性，肝組織間質(zhì)內(nèi)見(jiàn)慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)。B、少數(shù)動(dòng)物發(fā)生氣管、支氣管 粘膜及肺泡輕度慢性炎癥改變。C、個(gè)別動(dòng)物淋巴結(jié)、腸粘膜及膀胱有炎癥變化。這些改變 與對(duì)照組相似，均屬二級(jí)動(dòng)物常見(jiàn)病變，與藥物的毒性關(guān)系不大。恢復(fù)期未見(jiàn)特殊改變。(5)結(jié)論大鼠灌胃給予本發(fā)明制劑2. 0g/kgU0. Og/kg及20. Og/kg，(分別相當(dāng)于 臨床用量的5、25、50倍)，連續(xù)6個(gè)月的毒性研究結(jié)果表明，本發(fā)明制劑對(duì)主要器官和組織 未見(jiàn)明顯毒性。
圖1是本發(fā)明的工藝流程圖。
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 取茅莓15g、車前草18g、魚(yú)腥草15g、腎茶12g四味藥材，按常規(guī)方法加 水煎成湯劑服用。用法用量每日1劑，分3次服。實(shí)施例2 取茅莓15g、車前草18g、魚(yú)腥草15g、腎茶12g、枸杞子15g、益智仁15g、 玉米須30g七味藥材，按常規(guī)方法加水煎成湯劑服用。用法用量每日1劑，分3次服。實(shí)施例3 取茅莓525g、車前草630g、魚(yú)腥草525g、腎茶420g四味藥材，加水煎煮 2次，每次加處方總量的10倍水，每次煎煮3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為 1.35 (60°C)的浸膏，加入輔料適量，混勻，制粒，干燥，制成1000粒，即得本發(fā)明膠囊劑。規(guī) 格每粒裝0.45g。用法用量口服，一次3粒，一日3次。實(shí)施例4 取茅莓1050g、車前草1260g、魚(yú)腥草1050g、腎茶840g四味藥材，加水 煎煮3次，每次加水8倍，每次煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 30 (60°C)的浸膏，加入輔料適量，混勻，干燥，制成2000粒，即得本發(fā)明膠囊劑，規(guī)格每粒裝 0.45g。用法用量口服，一次3粒，一日3次。實(shí)施例5 取茅莓210g、車前草735g、魚(yú)腥草630g、腎茶525g四味藥材，加水煎煮1 次，每次加水10倍，每次煎煮3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.35 (60°C) 的浸膏，加入輔料適量，混勻，制粒，干燥，制成1000粒，即得本發(fā)明膠囊劑，規(guī)格每粒裝 0.45g。用法用量口服，一次3粒，一日3次。實(shí)施例6 取茅莓840g、車前草525g、魚(yú)腥草420g、腎茶315g四味藥材，加水煎煮2 次，每次加水10倍，每次煎煮3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.30 (60°C) 的浸膏，加入輔料適量，混勻，制粒，干燥，制成1000粒，即得本發(fā)明膠囊劑，規(guī)格每粒裝 0.45g。用法用量口服，一次3粒，一日3次。實(shí)施例7 取茅莓630g、車前草630g、魚(yú)腥草525g、腎茶315g四味藥材，加水煎煮 3次，每次加水8倍，每次煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 25 (60°C) 的浸膏，加入輔料適量，混勻，制粒，干燥，制成1000粒，即得本發(fā)明膠囊劑，規(guī)格每粒裝 0.45g。用法用量口服，一次3粒，一日3次。實(shí)施例8 取茅莓10. 5kg、車前草12. 6kg、魚(yú)腥草10. 5kg、腎茶8. 4kg四味藥材，加 水煎煮2次，每次加水10倍，每次煎煮3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 30(60°C)的浸膏，加入輔料適量，混勻，制粒，干燥，制成20000粒，即得本發(fā)明膠囊劑，規(guī)格 每粒裝0.45g。用法用量口服，一次3粒，一日3次。實(shí)施例9 取茅莓5250g、車前草6300g、魚(yú)腥草5250g、腎茶4200g四味藥材，加水 煎煮2次，每次加水10倍，每次煎煮3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 35 (60°C)的浸膏，加入輔料適量，混勻，制粒，干燥，加入適量潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，包薄膜衣，制 成10000片，即得本發(fā)明片劑，規(guī)格每片重0. 5g。用法用量口服，一次3片，一日3次。實(shí)施例10 取茅莓262. 5g、車前草315g、魚(yú)腥草262. 5g、腎茶210g四味藥材，加水 煎煮2次，每次加水10倍，每次煎煮3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 35 (60°C)的浸膏，加入無(wú)糖型輔料適量，混勻，制粒，干燥，制成500g，即得本發(fā)明顆粒劑，規(guī) 格每袋裝3g。用法用量口服，一次3g，一日3次。實(shí)施例11 取茅莓157. 5g、車前草189g、魚(yú)腥草157. 5g、腎茶126g四味藥材，加水 煎煮1次，每次加水10倍，每次煎煮3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，靜置過(guò)夜，取上清液減壓濃縮 至約800ml，加入無(wú)糖型輔料適量，混勻，加入加水制成1000ml，即得本發(fā)明口服液，規(guī)格 每瓶裝10ml。用法用量口服，一次1瓶，一日3次。實(shí)施例12 取茅莓5250g、車前草6300g、魚(yú)腥草5250g、腎茶4200g四味藥材，加水 煎煮2次，每次加水10倍，每次煎煮3小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 30(60°C) 的浸膏，干燥，粉碎成細(xì)粉，加入輔料適量，研勻，壓制成10000粒，得本發(fā)明軟膠囊，規(guī)格 每粒裝0.5g。用法用量口服，一次3粒，一日3次。實(shí)施例13 取果茅莓262.5g、車前草315g、魚(yú)腥草262.5g、腎茶210g、枸杞子 262. 5g、益智仁262. 5g、玉米須525g七味藥材，加水煎煮2次，每次加水10倍，每次煎煮3 小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.30 (60°C)的浸膏，加入輔料適量，混勻，制 粒，干燥，制成1000粒，即得本發(fā)明膠囊劑，規(guī)格每粒裝0. 45g。用法用量口服，一次3粒，
一日3次。實(shí)施例14 取果茅莓105g、車前草336g、魚(yú)腥草294g、腎茶231g、枸杞子294g、益 智仁294g、玉米須546g七味藥材，加水煎煮3次，每次加水8倍，每次煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，合 并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 30 (60°C)的浸膏，加入輔料適量，混勻，干燥，制成1000 粒，即得本發(fā)明膠囊劑，規(guī)格每粒裝0. 45g。用法用量口服，一次3粒，一日3次。實(shí)施例15 取果茅莓420g、車前草294g、魚(yú)腥草231g、腎茶189g、枸杞子231g、益 智仁231g、玉米須504g七味藥材，加水煎煮1次，每次加水10倍，每次煎煮3小時(shí)，濾過(guò)，合 并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.35 (60°C)的浸膏，加入輔料適量，混勻，制粒，干燥，制成 1000粒，即得本發(fā)明膠囊劑，規(guī)格每粒裝0. 45g。用法用量口服，一次3粒，一日3次。實(shí)施例16 取果茅莓294g、車前草315g、魚(yú)腥草252g、腎茶210g、枸杞子252g、益 智仁252g、玉米須525g七味藥材，加水煎煮2次，每次加水10倍，每次煎煮3小時(shí)，濾過(guò)，合 并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.30 (60°C)的浸膏，加入輔料適量，混勻，制粒，干燥，制成 1000粒，即得本發(fā)明膠囊劑，規(guī)格每粒裝0. 45g。用法用量口服，一次3粒，一日3次。實(shí)施例17 取果茅莓462g、車前草630g、魚(yú)腥草546g、腎茶420g、枸杞子546g、益 智仁546g、玉米須1050g七味藥材，加水煎煮3次，每次加水8倍，每次煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，合 并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.25 (60°C)的浸膏，加入輔料適量，混勻，制粒，干燥，制成 2000粒，即得本發(fā)明膠囊劑，規(guī)格每粒裝0. 45g。用法用量口服，一次3粒，一日3次。
實(shí)施例18 取果茅莓2625g、車前草3150g、魚(yú)腥草2625g、腎茶2100g、枸杞子 2625g、益智仁2625g、玉米須5250g七味藥材，加水煎煮2次，每次加水10倍，每次煎煮3小 時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 30(60°C )的浸膏，加入輔料適量，混勻，制粒， 干燥，制成10000粒，即得本發(fā)明膠囊劑，規(guī)格每粒裝0. 45g。用法用量口服，一次3粒，
一日3次。實(shí)施例19 取果茅莓2625g、車前草3150g、魚(yú)腥草2625g、腎茶2100g、枸杞子 2625g、益智仁2625g、玉米須5250g七味藥材，加水煎煮2次，每次加水10倍，每次煎煮3 小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.35 (60°C)的浸膏，加入輔料適量，混勻，制 粒，干燥，加入適量潤(rùn)滑劑，混勻，壓片，包薄膜衣，制成10000片，即得本發(fā)明片劑，規(guī)格每 片重0.5g。用法用量口服，一次3片，一日3次。實(shí)施例20 取果茅莓1312. 5g、車前草1575g、魚(yú)腥草1312. 5g、腎茶1050g、枸杞子 1312. 5g、益智仁1312. 5g、玉米須2675g七味藥材，加水煎煮2次，每次加水10倍，每次煎 煮3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 35 (60°C)的浸膏，加入無(wú)糖型輔料適 量，混勻，制粒，干燥，制成5000g，即得本發(fā)明顆粒劑，規(guī)格每袋裝3g。用法用量口服，一 次3g，一日3次。實(shí)施例21 取果茅莓787.5g、車前草945g、魚(yú)腥草787.5g、腎茶630g、枸杞子 787. 5g、益智仁787. 5g、玉米須1575g七味藥材，加水煎煮1次，每次加水10倍，每次煎煮 3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，靜置過(guò)夜，取上清液減壓濃縮至約800ml，加入無(wú)糖型輔料適量，混 勻，加入加水制成10000ml，即得本發(fā)明口服液，規(guī)格每瓶裝10ml。用法用量口服，一次1
瓶，一日3次。實(shí)施例22 取果茅莓2625g、車前草3150g、魚(yú)腥草2625g、腎茶2100g、枸杞子 2625g、益智仁2625g、玉米須5250g七味藥材，加水煎煮2次，每次加水10倍，每次煎煮3小 時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.30 (60°C)的浸膏，干燥，粉碎成細(xì)粉，加入輔料適 量，研勻，壓制成10000粒，即得本發(fā)明軟膠囊，規(guī)格每粒裝0. 5g。用法用量口服，一次3 粒，一日3次。實(shí)施例23 取果茅莓262.5g、車前草315g、魚(yú)腥草262.5g、腎茶210g、枸杞子 262. 5g、益智仁262. 5g、玉米須525g七味藥材，加水煎煮2次，每次加水10倍，每次煎煮3 小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.25 (60°C)的浸膏，加入輔料適量，混勻，加 適量水拌勻至握之成團(tuán)，壓之能散為度，切割制丸。起模，蓋面，包衣，制成1000丸，即得本 發(fā)明丸劑，規(guī)格每丸重0.2g。用法用量口服，一次6丸，一日3次。實(shí)施例24 取果茅莓1575g、車前草1890g、魚(yú)腥草1575g、腎茶1260g、枸杞子 1575g、益智仁1575g、玉米須3150g七味藥材，加水煎煮2次，每次加水8倍，每次煎煮2小 時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 20 (60°C)的浸膏，冷卻，加95%乙醇2倍量 靜置48小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加入輔料適量，0. 2%苯甲酸鈉及l(fā)ml香精，用開(kāi) 水補(bǔ)足，制成20000ml，即得本發(fā)明口服液，規(guī)格每瓶裝10ml。用法用量口服，一次1瓶， 一日3次。實(shí)施例25 取果茅莓5. 25kg、車前草6. 3kg、魚(yú)腥草5. 25kg、腎茶4. 2kg、枸杞子 5. 25kg、益智仁5. 25kg、玉米須10. 5kg七味藥材，加水煎煮2次，每次加水10倍，每次煎煮 3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 30 (60°C)的浸膏，加入輔料適量，混勻，制粒，干燥，制成20000粒，即得本發(fā)明膠囊，規(guī)格每粒裝0. 45g。用法用量口服，一次3 粒，一日3次。 本發(fā)明的實(shí)施方式不限于上述實(shí)施例，在不脫離本發(fā)明宗旨的前提下做出的各種 變化均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
一種防治腎炎的藥物制劑，其特征在于它主要是由下列重量百分比的原料藥制成茅莓10%～40%、車前草25%～35%、魚(yú)腥草20%～30%、腎茶15%～25%。
2.按照權(quán)利要求1所述防治腎炎的藥物制劑，其特征在于各原料藥的重量百分比為 茅莓25%、車前草30%、魚(yú)腥草25%、腎茶20%。
3.按照權(quán)利要求1所述防治腎炎的藥物制劑，其特征在于其中原料藥還包括玉米須、 枸杞子、益智仁，各原料藥的重量百分比為茅莓5% 20%、車前草14% 16%、魚(yú)腥草11% 14%、腎茶9% 11%、玉米須24% 26%、枸杞子11% 14%、益智仁11% 14%。
4.按照權(quán)利要求3所述防治腎炎的藥物制劑，其特征在于各原料藥的重量百分比為 茅莓12. 5%、車前草15%、魚(yú)腥草12. 5%、腎茶10%、玉米須25%、枸杞子12. 5%、益智仁12. 5%。
5.一種如權(quán)利要求1或2所述防治腎炎的藥物制劑的制備方法，其特征在于取茅莓、 車前草、魚(yú)腥草、腎茶四味藥材，加處方總量的5 10倍水煎煮1 3次，每次煎煮1 3 小時(shí)，濾過(guò)，濾液濃縮至60°C相對(duì)密度為1.25 1.35的浸膏，然后按常規(guī)制劑工藝制成不 同的藥物制劑。
6.按照權(quán)利要求5所述防治腎炎的藥物制劑的制備方法，其特征在于所述的藥物制 劑為口服制劑或外用制劑，其中口服制劑包括湯劑、顆粒劑、散劑、口服液、糖漿劑、膏滋、丸 劑、片劑、硬膠囊或軟膠囊。
7.—種如權(quán)利要求3或4所述防治腎炎的藥物制劑的制備方法，其特征在于取茅莓、 車前草、魚(yú)腥草、腎茶、玉米須、枸杞子、益智仁七味藥材，加處方總量的5 10倍水煎煮 1 3次，每次煎煮1 3小時(shí)，濾過(guò)，濾液濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 25 1. 35的浸膏，然 后按常規(guī)制劑工藝制成不同的藥物制劑。
8.按照權(quán)利要求7所述防治腎炎的藥物制劑的制備方法，其特征在于所述的藥物制 劑為口服制劑或外用制劑，其中口服制劑包括湯劑、顆粒劑、散劑、口服液、糖漿劑、膏滋、丸 劑、片劑、硬膠囊或軟膠囊等。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種防治腎炎的藥物制劑及其制備方法，它主要是由茅莓、車前草、魚(yú)腥草、腎茶為原料藥制成口服制劑或外用制劑，或者與玉米須、枸杞子、益智仁藥材中的部分或全部配伍使用。本發(fā)明提供的配方具有清熱利濕，宣肺益腎，健脾消腫之功效，對(duì)肺失宣蕭、脾腎虧虛所致的腎炎水腫、頭昏、耳鳴、咳嗽、神疲乏力、少氣懶言、面色萎黃、脘腹?jié)M悶、時(shí)有惡心、腰膝酸軟、納差食少、陽(yáng)萎早泄、舌質(zhì)胖、脈沉細(xì)有很好的療效，且其使用安全，無(wú)毒副作用，不產(chǎn)生耐藥性，是一種安全、有效、質(zhì)量可控的防治腎炎的中藥新藥。
文檔編號(hào)A61K36/9062GK101856418SQ201010155728
公開(kāi)日2010年10月13日 申請(qǐng)日期2010年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月27日
發(fā)明者周強(qiáng), 柳大勇, 皮海燕, 羅陽(yáng)洋 申請(qǐng)人:貴陽(yáng)春科藥業(yè)技術(shù)研發(fā)有限公司