專利名稱：一種藥物組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其應(yīng)用，尤其涉及延胡索總生物堿和芍藥總甙的藥物組合物及其應(yīng)用，屬于藥物制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
眾所周知，子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EM)是雌激素依賴的婦科常見病，對(duì) 于EM的發(fā)病機(jī)制存在多種學(xué)說(shuō)，且一直有較多爭(zhēng)議，影響了該疾病的臨床診斷和治療的進(jìn)展。子宮內(nèi)膜異位所致行經(jīng)前腰、腹部重墜脹痛、行經(jīng)期經(jīng)行不暢、經(jīng)量或多或少。目 前對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥的治療主要有口服西藥，手術(shù)治療和中醫(yī)治療。口服西藥西醫(yī)一般采 用激素療法，但是，激素療法副作用太大，治療有其局限性，而手術(shù)治療對(duì)生育年齡的婦女 來(lái)說(shuō)，很難接受。一般手術(shù)的復(fù)發(fā)率在80%以上，而且手術(shù)本身的創(chuàng)傷，就容易使子宮內(nèi)膜 產(chǎn)生異位，對(duì)腹部手術(shù)后腸粘連、皮膚斑痕，慢性闌尾炎等癥是臨床多見癥狀。中藥治療，中 藥治療歷史已經(jīng)很久，常采取活血破結(jié)、行瘀止痛、理氣化積的手段對(duì)其進(jìn)行治療，且療效 顯著。由于中藥獨(dú)有的用藥安全性、無(wú)創(chuàng)傷性和治療效果好而受到患者的歡迎。申請(qǐng)?zhí)枮?200410024553. 7的中國(guó)專利申請(qǐng)公開了治療子宮內(nèi)膜異位的中藥，所述中藥的組份按重量 比為杜仲10 15G、山茱萸10 15G、桃仁10 15G、益母草10 15G、紅花10 15G、烏 藥3 5G、小茴香3 5G、敗醬草15 20G、桂枝9 12G、鱉甲10 15G、田三七粉9 12G、土鱉蟲9 12G、甘草3 6G，上述諸藥配伍使用對(duì)有效治療子宮內(nèi)膜異位有獨(dú)特功 效，治療時(shí)間短，效果顯著，而且無(wú)任何副作用。申請(qǐng)?zhí)枮?00610165484. 0的中國(guó)專利申請(qǐng)涉及一種中藥組合物，特別涉及一種 用于子宮內(nèi)膜異位、卵巢囊腫等疾病的中藥組合物，按照重量配比，它由三棱7. 5 30份， 莪術(shù)7. 5 30份，炮山甲5 20份，山慈菇5 20份，乳香5 20份，沒(méi)藥5 20份，川 芎7. 5 30份，紅花7. 5 30份。申請(qǐng)?zhí)枮?00510054682. 5的中國(guó)專利申請(qǐng)涉及一種治療婦女子宮內(nèi)膜異位癥的 藥物及其制備工藝。其主要原料由制香附、肉桂粉、莪術(shù)、赤芍、川彎、陳皮組成，各組分嚴(yán)格 按照重量配比組合，經(jīng)煎煮取汁，噴霧干燥，填入硬膠囊而成。但在實(shí)踐中，發(fā)現(xiàn)由于許多中藥具有起效慢、療程長(zhǎng)等缺點(diǎn)，嚴(yán)重影響其臨床應(yīng) 用。且上述中藥組合物所用中藥成分多，組配復(fù)雜，制備工藝復(fù)雜。延胡索，又名元胡，收載于《中華人民共和國(guó)藥典》(2005版)一部，為罌栗科植物 延胡索Corydalis yanhusuo W. T. Wang的干燥塊莖。夏初莖葉枯萎時(shí)采挖，除去須根，洗凈， 置沸水中煮至恰無(wú)白心時(shí)，取出，曬干。味辛、苦，性溫。歸肝、脾經(jīng)?；钛?，利氣，止痛。用 于胸脅、腕腹疼痛，經(jīng)閉痛經(jīng)，產(chǎn)后瘀阻，跌撲腫痛，為止痛良藥。現(xiàn)代研究表明，延胡索具有 鎮(zhèn)痛、抗心肌缺血、抗心律失常、降壓、抗血栓、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈流量、該曬心機(jī)供氧 等藥理作用，具有治療冠心病、心絞痛的功效。(綠清文，叢雅勤，延胡索藥理作用及臨床應(yīng) 用淺議，內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2005年第1期，p26)。
延胡索中主要含有生物堿類化合物，其中屬叔胺類者含量約0.65%，屬季胺類者 約0. 3%，已分離得到近20個(gè)生物堿。芍藥(Paeonia Lactflora Pall)分為白芍和赤芍兩種，始于宋《太平圣慧方》。其 主要有效成分為芍藥甙，芍藥內(nèi)酯甙，羥基芍藥甙，苯甲酰芍藥甙等單萜類化合物，簡(jiǎn)稱芍 藥總甙?，F(xiàn)代植物化學(xué)認(rèn)為，芍藥總苷是芍藥中的活性成分，主要存在于芍藥的根皮部。傳 統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，赤芍能夠清熱涼血，散瘀止痛，臨床上，以赤芍或以赤芍為君藥組方治療缺血 性心腦血管等疾病。藥效學(xué)研究表明，其具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、解痙、抗炎、抗?jié)?、擴(kuò)張冠狀動(dòng) 脈、對(duì)抗急性心肌缺血，以及抑制血小板凝聚等諸多方面的藥效，且安全范圍大。檢索與延胡索和芍藥有關(guān)已申請(qǐng)的專利及相關(guān)文獻(xiàn)資料中，還沒(méi)有提及用從延胡 索中提取的總生物堿和從芍藥中提取的芍藥總甙組成的藥物組合物，藥效試驗(yàn)證明，含有 延胡索總生物堿和芍藥總甙的藥物組合物能夠明顯縮小異位內(nèi)膜體積，對(duì)子宮內(nèi)膜異位、 痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)、月經(jīng)異常、盆腔疼痛、急性腹痛、盆腔外內(nèi)異癥、卵巢囊腫等婦科疾病都有 一定的療效。有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一目的在于提供一種藥物組合物，該藥物組合物能夠明顯縮小異位內(nèi) 膜體積，對(duì)子宮內(nèi)膜異位、痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)、月經(jīng)異常、盆腔疼痛、急性腹痛、盆腔外內(nèi)異癥、 卵巢囊腫等婦科疾病都有一定的療效。本發(fā)明的第二目的在于提供一種含有本發(fā)明的藥物組合物的藥物制劑，該藥物制 劑能夠明顯縮小異位內(nèi)膜體積，對(duì)子宮內(nèi)膜異位、痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)、月經(jīng)異常、盆腔疼痛、急 性腹痛、盆腔外內(nèi)異癥、卵巢囊腫等婦科疾病都有一定的療效。本發(fā)明的第三目的在于提供本發(fā)明所述的藥物組合物或藥物制劑在制備治療婦 科疾病，包括子宮內(nèi)膜異位、痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)、月經(jīng)異常、盆腔疼痛、急性腹痛、盆腔外內(nèi)異 癥、卵巢囊腫等婦科疾病的藥物中的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第一目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種藥物組合物，其中，所述的藥物組合物包括總生物堿和總甙。根據(jù)前述的藥物組合物，其中，所述的總生物堿是從植物延胡索中提取的，所述的 總甙是從植物芍藥中提取的。根據(jù)前述的藥物組合物，其中所述的芍藥為白芍或赤芍等本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的 植物芍藥。根據(jù)前述的藥物組合物，其中，所述的延胡索總生物堿與芍藥總甙的重量比為 1 50——10 1，優(yōu)選所述的延胡索總生物堿與芍藥總甙的重量比為1 2.2—— 1 35. 2，更優(yōu)選所述的延胡索總生物堿與芍藥總甙的重量比為1 2.2——1 17. 6，最 優(yōu)選所述的延胡索總生物堿與芍藥總甙的重量比為1 2.2——1 8. 8，以所述的延胡索 總生物堿與芍藥總甙的重量比為1 4. 4時(shí)最佳。根據(jù)前述的藥物組合物，其中，所述的藥物組合物與相應(yīng)的輔料制成臨床上可接 受的藥物劑型，包括針劑、粉針劑、輸液劑、脂肪乳劑、丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體制劑、膏 劑或膠囊劑。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第二目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案
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一種含有本發(fā)明所述的藥物組合物的藥物制劑，其中，該藥物制劑是由本發(fā)明所 提供的藥物組合物與藥學(xué)上可接受的藥用輔料制成臨床上可接受的藥物劑型。 根據(jù)前述的藥物制劑，其中所述的藥物劑型為針劑、粉針劑、輸液劑、脂肪乳劑、丸 齊 、片劑、顆粒劑、口服液體制劑、膏劑或膠囊劑。本發(fā)明所述的藥物制劑是采用本領(lǐng)域技術(shù)人員常用的方法制備的。根據(jù)前述的藥物制劑，其中所述的藥物組合物中包括總生物堿和總甙。根據(jù)前述的藥物制劑，其中，所述的總生物堿是從植物延胡索中提取的，所述的總 甙是從植物芍藥中提取的。根據(jù)前述的藥物制劑，其中所述的芍藥為白芍或赤芍等本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的植 物芍藥。根據(jù)前述的藥物制劑，其中，所述的延胡索總生物堿與芍藥總甙的重量比為 1 50——10 1，優(yōu)選所述的延胡索總生物堿與芍藥總甙的重量比為1 2.2—— 1 35. 2，更優(yōu)選所述的延胡索總生物堿與芍藥總甙的重量比為1 2.2——1 17. 6，最 優(yōu)選所述的延胡索總生物堿與芍藥總甙的重量比為1 2.2——1 8. 8，其中以所述的延 胡索總生物堿與芍藥總甙的重量比為1 4. 4時(shí)最佳。為實(shí)現(xiàn)上述本發(fā)明的第三目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種本發(fā)明所述的藥物組合物或上述的藥物制劑在制備治療婦科疾病的藥物中 的應(yīng)用。根據(jù)前述的應(yīng)用，其中，所述的婦科疾病包括子宮內(nèi)膜異位、痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)、月經(jīng) 異常、盆腔疼痛、急性腹痛、盆腔外內(nèi)異癥或卵巢囊腫。本發(fā)明人將大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型進(jìn)行復(fù)制，取內(nèi)異癥模型大鼠90只，隨機(jī)等 分為十二組。根據(jù)本發(fā)明中得出的延胡索總生物堿和芍藥總皂苷最佳作用劑量范圍，利用 四因素三水平正交設(shè)計(jì)表，設(shè)計(jì)二因素三水平正交實(shí)驗(yàn)，從而制定出延胡索總生物堿和芍 藥總皂苷一系列不同的配比，發(fā)現(xiàn)相同劑量下，延胡索總生物堿和芍藥總皂苷的不同配比 可明顯縮小異位內(nèi)膜體積，且尤以1 4.4配比作用最佳。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明所提供的藥物組合物可明顯縮小異位內(nèi)膜體積，從而能夠應(yīng)用在制備子宮 內(nèi)膜異位、痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)、月經(jīng)異常、盆腔疼痛、急性腹痛、盆腔外內(nèi)異癥、卵巢囊腫等婦科 疾病的藥物中，為這些疾病的治療提供了新的藥物選擇。下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。


圖1為模型對(duì)照組(子宮內(nèi)膜生長(zhǎng)狀態(tài)良好，間質(zhì)比較多，可見多個(gè)腺體)；圖2為丹莪婦康膏(子宮內(nèi)膜生長(zhǎng)狀態(tài)欠佳，間質(zhì)明顯減少，只見一個(gè)擴(kuò)張的腺 腔)；圖3為1:4.4組(未見明顯內(nèi)膜組織，腺體消失)；圖4為1:2. 2組(子宮內(nèi)膜呈萎縮狀態(tài)，間質(zhì)少，只有一個(gè)擴(kuò)張的腺腔)；圖5為1 8. 8組(子宮內(nèi)膜生長(zhǎng)狀態(tài)欠佳，間質(zhì)明顯減少，只見一個(gè)擴(kuò)張的腺腔)。
具體實(shí)施例方式以下為本發(fā)明的具體實(shí)施方式
，所述的實(shí)施例是為了進(jìn)一步描述本發(fā)明，而不是 限制本發(fā)明。實(shí)施例1制備延胡索總生物堿和芍藥總皂苷水針劑。將延胡索總生物堿和芍藥總皂苷按照1 50的質(zhì)量比混合后溶于100L注射用水 中，配成溶液，調(diào)節(jié)PH值至6. 5。經(jīng)微孔濾膜超濾后，補(bǔ)充注射用水至規(guī)定量，灌裝于安瓿瓶 中，熔封滅菌，經(jīng)檢驗(yàn)合格后，包裝即得。實(shí)施例2制備延胡索總生物堿和芍藥總甙粉針劑。將延胡索總生物堿和芍藥總甙按照10 1的質(zhì)量比溶于100L注射用水中，加入 計(jì)量的藥用輔料，配成溶液，調(diào)節(jié)PH值至7. 0，經(jīng)微孔濾膜超濾后，真空干燥得延胡索總生 物堿和芍藥總甙無(wú)菌粉，無(wú)菌粉分裝于西林瓶中，軋蓋，經(jīng)檢驗(yàn)合格后，包裝即得。實(shí)施例3將延胡索總生物堿和芍藥總皂苷按照質(zhì)量比為1 2. 2的質(zhì)量比混合后溶于5倍 量注射用水中，加入計(jì)量的注射液用水溶性藥用輔料，配成溶液，調(diào)節(jié)PH值至6. 0，裝于安 瓿瓶中，每支10ml，經(jīng)冷凍干燥后，熔封，檢驗(yàn)合格后，包裝即得。實(shí)施例4制備延胡索總生物堿和芍藥總皂苷脂肪乳劑。將延胡索總生物堿和芍藥總皂苷按照1 4. 4的質(zhì)量比混合后溶于100L注射用 脂肪溶劑(由注射用水和乳化劑組成)中，配成溶液，調(diào)節(jié)PH值至7.2。經(jīng)微孔濾膜超濾 后，分裝于安瓿中，檢驗(yàn)合格后，包裝即得。實(shí)施例5制備延胡索總堿和芍藥總甙片劑。取lg延胡索總堿和35. 2g芍藥總甙，加入藥用淀粉27. 8g，糖粉7. 2g，微粉硅膠 4.8g，過(guò)16目篩混合制粒，干燥，過(guò)12目篩整粒，加入2. 4g硬脂酸鎂混合壓片，制成1000 片。實(shí)施例6制備延胡索總生物堿和芍藥總皂苷口服液。取4g延胡索總生物堿，加入注射用水2. 5L注射用水，調(diào)節(jié)pH值至4. 5，加入吐溫 80-100ml，加入35. 2g芍藥總皂苷，混合均勻，過(guò)濾，灌裝，滅菌，制成1000支口服液。實(shí)施例7制備延胡索總生物堿和芍藥總皂苷膠囊。取2g延胡索總生物堿和35. 2g芍藥總皂苷，加入藥用淀粉26. 8g，糖粉6. 0g，羧甲 基纖維素鈉4. 5g，混合均勻，加入淀粉漿，混合，過(guò)14目篩混合制粒，干燥，過(guò)12目篩整粒， 裝囊，制成1000粒。以下涉及本發(fā)明的藥效學(xué)試驗(yàn)。試驗(yàn)例1延胡索總生物堿急性毒性試驗(yàn)
該試驗(yàn)例中給小鼠一次灌胃15. 00%,12. 00%,9. 60%,7. 70%,6. 15%,4. 90、3. 95 %濃度的延胡索總生物堿溶液20ml/kg,劑量分別為3. 00、2. 40、1. 92、1. 54、1. 23、 0. 98,0. 79g/kg，給藥后動(dòng)物的死亡率分別為100%、70%、50%、40%、10%、10%、0%。采用 SPSSl 1. 0軟件，按概率單位法計(jì)算，其LD5tl為1. 893g/Kg，LD5(1的95%平均可信限為1. 664 2. 183g/Kg。其目的是根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，觀察動(dòng)物一次給予延胡索總生物堿，所產(chǎn)生的毒性 反應(yīng)和死亡情況，并計(jì)算LD5tlt5(1)實(shí)驗(yàn)材料(1. 1)藥物延胡索總生物堿，由北京大學(xué)天然藥物和仿生藥物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，批號(hào) 060320。試驗(yàn)前用蒸餾水配制成 15. 00%U2. 00%,9. 60%,7. 70%,6. 15%,4. 90,3. 95%等 一系列濃度的溶液備用。(1. 2)動(dòng)物昆明種小白鼠，體重19 21g，雌雄各半，購(gòu)自長(zhǎng)春生物制品所，合格證號(hào) 2006-0001。(2)方法與結(jié)果取小鼠70只，禁食不禁水16小時(shí)，給小鼠一次灌胃15. 00 %U2. 00%,9. 60%, 7. 70 %、6. 15 %、4. 90、3. 95 %濃度的延胡索總生物堿溶液20ml/kg,劑量分別為3. 00、 2. 40、1. 92、1. 54、1. 23,0. 98,0. 79g/kg。觀察給藥后2周內(nèi)動(dòng)物的飲食、活動(dòng)、糞便、體重、
皮毛光澤度及存亡情況，同時(shí)觀察鼻、眼、口腔有無(wú)異常分泌物，并對(duì)死亡動(dòng)物及時(shí)解剖，肉 眼觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器的病理變化情況，如有異常須做病理組織學(xué)檢查。結(jié)果 見表1。表1.延胡索總生物堿LD5tl的測(cè)定 由表1結(jié)果可見，動(dòng)物于給藥5分鐘后，開始出現(xiàn)中毒癥狀并陸續(xù)死亡，給藥后豎 毛，死亡前掙扎、跳躍，直至呼吸停止，心跳停止于呼吸停止之后。解剖死亡動(dòng)物，肉眼觀察 心、肝、脾、肺、腎均未見明顯病理改變。存活小鼠飲食、活動(dòng)、糞便、皮毛光澤度均正常。2周 后處死，解剖，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎均無(wú)異常變化。采用SPSS11. 0軟件，按概率單位法 計(jì)算，其 LD5tl 為 1. 893g/Kg，LD50 的 95%平均可信限為 1. 664 2. 183g/Kg。(3)結(jié)論 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，給小鼠一次灌胃延胡索總生物堿溶液20ml/kg，劑量分別為 3. 000,2. 400、1. 920、1. 540、1. 230,0. 980,0. 790g/kg。給藥后動(dòng)物死亡率分別為 100%, 70%、50%、40%、10%、10%、0%。存活小鼠飲食、活動(dòng)、糞便、皮毛光澤度均正常，2周后處 死、解剖，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎均未見明顯病理改變。采用SPSS11.0軟件，按概率單位 法計(jì)算，其LD5tl為1. 893g/Kg，LD50的95%平均可信限為1. 664 2. 183g/Kg。試驗(yàn)例2芍藥總皂苷急性毒性試驗(yàn)該試驗(yàn)例中給小鼠一次灌胃39. 7 %、34. 9 %、30. 7 %、27. 0 %、23. 8 %、20. 9 % 濃度 的芍藥總皂苷溶液30ml/kg，劑量分別為11. 9、10. 5,9. 24,8. 13,7. 15,6. 29g/kg。給藥后動(dòng) 物的死亡率分別為100%、90%、80%、40%、20%、0%。采用SPSS11. 0軟件，按概率單位法 計(jì)算，其LD50為8. 8869g/Kg，LD50的95%平均可信限為8. 2457 9. 5931g/Kg。其目的是 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，觀察動(dòng)物一次給予芍藥總皂苷后，所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況，并計(jì)算 LD500(1)實(shí)驗(yàn)材料(1. 1)藥物芍藥總皂苷，由北京大學(xué)天然藥物和仿生藥物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，批號(hào) 060927。試驗(yàn)前用蒸餾水配制成 39. 7%,34. 9%,30. 7%,27. 0%,23. 8%,20. 9%等一系列 濃度的溶液備用。(1. 2)動(dòng)物昆明種小白鼠，體重19 21g，雌雄各半，購(gòu)自吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中 心,合格證號(hào)2003-0001。(2)方法與結(jié)果取小鼠60只，禁食不禁水16小時(shí)，給小鼠一次灌胃39. 7 %、34. 9 %、30. 7 %、 27. 0 %、23· 8%,20. 9 %濃度的芍藥總皂苷溶液30ml/kg,劑量分別為11. 9,10. 5,9. 24、 8. 13,7. 15,6. 29g/kg。觀察給藥后2周內(nèi)動(dòng)物的飲食、活動(dòng)、糞便、體重、皮毛光澤度及存亡 情況，同時(shí)觀察鼻、眼、口腔有無(wú)異常分泌物，并對(duì)死亡動(dòng)物及時(shí)解剖，肉眼觀察心、肝、脾、 肺、腎等主要臟器的病理變化情況，如有異常須做病理組織學(xué)檢查。結(jié)果見表2。表2.芍藥總皂苷LD5tl的測(cè)定 由表1結(jié)果可見，動(dòng)物于給藥30分鐘后，開始出現(xiàn)中毒癥狀并陸續(xù)死亡給藥后多 數(shù)動(dòng)物安靜少動(dòng)，死亡前翻正反射消失，呼吸停止，心跳停止于呼吸之后。動(dòng)物死亡率分別 為100%、80%、60%、30%、20%、0%。解剖死亡動(dòng)物，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎均未見明顯 病理改變。存活小鼠飲食、活動(dòng)、糞便、皮毛光澤度均正常，2周后處死，解剖，肉眼觀察心、 肝、脾、肺、腎均無(wú)異常變化。采用SPSS11. 0軟件，按概率單位法計(jì)算，其LD5(i為8. 8869g/ Kg, LD50 的 95%平均可信限為 8. 2457 9. 5931g/Kg。(3)結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，給小鼠一次灌胃芍藥總皂苷溶液30ml/kg，劑量分別為11.9、 10. 5,9. 24,8. 13,7. 15,6. 29g/kg。給藥后動(dòng)物死亡率分別為 100% ,80% ,60% ,30% ,20%, 0%。存活小鼠飲食、活動(dòng)、糞便、皮毛光澤度均正常，2周后處死、解剖，肉眼觀察心、肝、脾、 肺、腎均未見明顯病理改變。采用SPSS11. 0軟件，按概率單位法計(jì)算，其LD50為8. 8869g/ Kg, LD50 的 95%平均可信限為 8. 2457 9. 5931g/Kg。試驗(yàn)例3延胡索總生物堿和芍藥總皂苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的影響該試驗(yàn)例通過(guò)制備“大鼠子宮內(nèi)膜移位癥模型”，觀察了延胡索總堿和芍藥總苷及 其在有效劑量范圍內(nèi)不同配比對(duì)內(nèi)移癥的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，延胡索總堿和芍藥總苷均 能明顯減小大鼠異位內(nèi)膜組織的體積，抑制內(nèi)膜組織生長(zhǎng)。病理組織學(xué)檢查各給藥組可見 腺體數(shù)目明顯減少、上皮細(xì)胞萎縮，其對(duì)大鼠內(nèi)異癥有顯著的治療作用。其有效劑量范圍分 別為芍藥總皂苷為220-880mg/Kg、延胡索總堿為25-100mg/Kg。同時(shí)采用四因素三水平正 交設(shè)計(jì)表，設(shè)計(jì)二因素三水平正交實(shí)驗(yàn)證明，在相同劑量下，二者1 4. 4配比作用最佳，考 慮實(shí)際生產(chǎn)投料方便，將其最佳配比定為1 5。芍藥總皂苷220、110mg/Kg和丹莪婦康煎膏 對(duì)血清E2含量均有一定的降低作用，由此初步推測(cè)二者可能通過(guò)抑制卵巢合成或分泌E2 而達(dá)到抑制移位內(nèi)膜增生的，芍藥總皂苷作用機(jī)制擬與丹莪婦康煎膏相似。延胡索總堿尚 能顯著減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，延長(zhǎng)熱刺激疼痛反應(yīng)時(shí)間，兼有明顯的鎮(zhèn)痛作用。 預(yù)示二者聯(lián)用可起到相互協(xié)同或作用相加的綜合作用，可達(dá)到“標(biāo)本兼治”的目的，對(duì)治療“內(nèi)異癥”具有良好前景。實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖前凑罩兴幮滤幯芯恐改弦?，根?jù)延胡索總生物堿和芍藥總皂苷的功 能主治，選擇適當(dāng)?shù)膭?dòng)物模型和試驗(yàn)方法，對(duì)該藥的有效性做出科學(xué)的評(píng)價(jià)，為其臨床研究 提供藥理學(xué)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)材料藥物延胡索總生物堿，含量82%，315. lg生藥/g;芍藥總皂苷，含量83%， 23. 3g生藥/g，由北京大學(xué)天然藥物和仿生藥物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，批號(hào)060320。實(shí)驗(yàn) 前用蒸餾水配制成不同濃度的溶液，置4°C冰箱保存?zhèn)溆?。孕三烯酮膠囊，2. 5mg/粒，由北 京紫竹藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)53080101。實(shí)驗(yàn)前用0.5%羧甲纖維素鈉配制成所需濃 度；丹莪婦康煎膏，100g/瓶，昆明滇虹藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)070902。實(shí)驗(yàn)前加適量蒸 餾水配制成所需濃度的溶液，置4°C冰箱保存?zhèn)溆谩＜合┐品樱?.5mg/片，合肥久聯(lián)制藥有 限公司產(chǎn)品，批號(hào)070303;慶大霉素，8萬(wàn)單位/2ml，天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司產(chǎn) 品，批號(hào)070816 ；阿司匹林腸溶片，批號(hào)0712231，神威藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。試劑E2放射免疫分析藥盒購(gòu)自北京市福瑞生物工程公司，批號(hào)20080401。動(dòng)物 Wistar大鼠，體重180 200g，雌性；KM小鼠，體重19 21g，雌性，均購(gòu)自 吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。小鼠合格證號(hào)SCXK 2003-0001大鼠合格證號(hào)。儀器 GC-2010r放射免疫計(jì)數(shù)器，科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司生產(chǎn)。 GJ-8402型熱板測(cè)痛儀，浙江寧海白石電子醫(yī)療儀器廠。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SpSS13. 0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用秩和 檢驗(yàn)。方法與結(jié)果一、延胡索總堿和芍藥總皂苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的影響取健康雌性未孕大鼠120只，按文獻(xiàn)方法，取其中110只于造模前24h，ig己烯雌 酚0. 2mg/100g(20ml/Kg)，在無(wú)菌條件下，ip2%戊巴比妥鈉40mg/kg麻醉，固定大鼠四肢及 頭部于鼠板上，下腹部剪毛并以碘酒、酒精常規(guī)消毒皮膚。于下腹正中線剪開腹壁，開口長(zhǎng) 約1. 5cm，暴露腹腔，找出左側(cè)子宮，在距離卵巢1cm處結(jié)扎1. 5-2cm長(zhǎng)中段子宮兩端，剪取 中間約1cm—段子宮。將子宮置盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿上，將子宮上皮層與肌層分離，切取 5mmX5mm大小子宮內(nèi)膜組織片斷，上皮層對(duì)著腹腔用縫線固定與大鼠右前腹壁內(nèi)側(cè)面。術(shù) 后分層縫合肌肉與皮膚，連續(xù)7天ip慶大霉素注射液，每只0. 1ml。另取10只動(dòng)物做假手 術(shù)(不移植子宮內(nèi)膜，其它手術(shù)過(guò)程相同)。所有動(dòng)物在24-28°C，通風(fēng)良好的條件下常規(guī) 飼養(yǎng)，每周稱體重一次。4周后開腹檢查，選取出現(xiàn)移植物體積增大、液體積聚、可見白色透 明或暗紅色小囊腫的動(dòng)物，做為“子宮內(nèi)膜異位癥(簡(jiǎn)稱內(nèi)異癥)”模型復(fù)制成功動(dòng)物用于 試驗(yàn)。取內(nèi)異癥模型大鼠110只，隨機(jī)等為分十一組，第一組為假手術(shù)組，第二組為內(nèi)異 癥模型組，第三、四組分別為陽(yáng)性對(duì)照藥孕三烯酮o. 5mg/Kg、丹莪婦康煎膏5. 4g/Kg，第五、 六、七、八組分別為延胡索總堿200、100、50、25mg/Kg，第九、十、^^一、十二組分別為芍藥總 皂苷880、440、220、110mg/Kg。ig給藥，體積均為20ml/kg，模型組及假手術(shù)組均給予蒸餾 水，每日1次，連續(xù)4周。每天觀察給藥后動(dòng)物外觀、行為活動(dòng)、排便情況，每周稱體重一次 記錄體重變化。末次給藥后24h，以3%水合氯醛300mg/kg腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血，分離
10血清，采用放免法測(cè)定雌二醇(E2)含量。剝離腹壁移植內(nèi)膜組織，在光學(xué)顯微鏡下以卡尺 測(cè)量其長(zhǎng)、寬、高并計(jì)算體積，同時(shí)用10%福爾馬林固定，做病理組織學(xué)檢查。(一 )、對(duì)內(nèi)移癥大鼠異位內(nèi)膜體積的影響表3.對(duì)大鼠異位內(nèi)膜體積的影響(Y 士S;n = 9) 注與模型組比較*P < 0. 05 ；**P <0.01。由表1結(jié)果可見，各給藥組病灶體積與模型組比較均明顯減小，且具有一定的量 效關(guān)系，藥物能明顯減小異位內(nèi)膜體積有效劑量范圍芍藥總皂苷為220-880mg/Kg、延胡 索總堿為25-100mg/Kg。芍藥總皂苷880mg/Kg和延胡索總堿為200mg/Kg作用強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì) 照藥孕三烯酮和丹莪婦康煎膏，表明芍藥總皂苷和延胡索總堿對(duì)內(nèi)異癥均有明顯的抑制作用。( 二)、對(duì)內(nèi)異癥大鼠異位子宮內(nèi)膜形態(tài)學(xué)的影響肉眼可見異位內(nèi)膜組織為隆起的小囊腫，給藥后囊腫減小，并且粘連比模型組輕。 光鏡下，假手術(shù)組可見粘膜上皮完整，上皮細(xì)胞為柱狀上皮，可見腺體、血管、間質(zhì)等正常組 織。子宮內(nèi)膜異位模型組，可見移植的內(nèi)膜組織生長(zhǎng)，其被覆柱狀上皮結(jié)構(gòu)清晰，可見腺體， 間質(zhì)有中性粒細(xì)胞。各給藥組異位內(nèi)膜組織成抑制狀態(tài)，與模型組比較可見腺體及間質(zhì) 有不同程度的減少，上皮細(xì)胞呈萎縮狀態(tài)。其中延胡索總堿200、100、50mg/kg和芍藥總苷880、440、220mg/kg組最明顯，抑制作用較強(qiáng)，多數(shù)動(dòng)物腺體消失，間質(zhì)明顯減少，上皮細(xì)胞 成萎縮狀態(tài)。其作用優(yōu)于孕三烯酮組和丹娥婦康煎膏。表4.病理檢查各組大致情況
用放免法測(cè)定雌二醇(E2)含量，結(jié)果見表5。表5、對(duì)內(nèi)異癥大鼠雌二醇含量的影響(Y±S;n = 9) 由表5結(jié)果可見，芍藥總皂苷220、110mg/Kg組和丹莪婦康煎膏對(duì)E2均有一定的 抑制作用。由此初步推測(cè)二者可能通過(guò)抑制卵巢合成或分泌E2而達(dá)到抑制移位內(nèi)膜增生 的。其他各組對(duì)內(nèi)異癥大鼠雌二醇含量影響則無(wú)規(guī)律變化，此可能與雌性大鼠性周期性變 化有關(guān)。二、延胡索總堿與芍藥總皂苷不同配比對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的影響大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的復(fù)制同前，取內(nèi)異癥模型大鼠90只，隨機(jī)等為分十二 組。根據(jù)上述延胡索總堿和芍藥總皂苷最佳作用劑量范圍，利用四因素三水平正交設(shè)計(jì)表， 設(shè)計(jì)二因素三水平正交實(shí)驗(yàn)，從而制定出延胡索總堿和芍藥總皂苷一系列不同的配比為 1 35.2,1 17.6,1 8.8,1 4.4,1 2.2。并增設(shè)芍藥總皂苷、延胡索總堿組及丹莪 婦康煎膏5. 4g/Kg組。按表2所示劑量分組ig給藥，劑量均為300mg/kg，體積均為20ml/ kg，模型組給予等體積蒸餾水，每日1次，連續(xù)4周。每天觀察給藥后動(dòng)物外觀、行為活動(dòng)、 排便情況，每周稱體重一次記錄體重變化。于末次給藥后24h，以3%水合氯醛300mg/kg腹 腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，采用放免法測(cè)定雌二醇(E2)含量。剝離腹壁移植內(nèi)膜組織，在光學(xué)顯微鏡下以卡尺測(cè)量其長(zhǎng)、寬、高并計(jì)算體積，同時(shí)用10%福爾馬林固定，做病理 組織學(xué)檢查。(一 )、對(duì)內(nèi)移癥大鼠異位內(nèi)膜體積的影響表6、對(duì)大鼠異位內(nèi)膜體積的影響(I 士S;n = 10) 注與模型組比較*P < 0. 05 ；**P < 0. 01。由表6可見，在相同劑量下，延胡索總堿和芍藥總皂苷的不同配比及單用芍藥總 皂苷均可明顯縮小異位內(nèi)膜體積，且尤以1 4.4配比作用最佳。延胡索總堿雖有一定的 作用，但無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能是由于其用藥劑量超出有效劑量范圍所致。( 二)、對(duì)內(nèi)異癥大鼠異位子宮內(nèi)膜形態(tài)學(xué)的影響肉眼可見異位內(nèi)膜組織為隆起的小囊腫，給藥后囊腫減小，并且粘連比模型組輕。 光鏡下，假手術(shù)組可見粘膜上皮完整，上皮細(xì)胞為柱狀上皮，可見腺體、血管、間質(zhì)等正常組 織。子宮內(nèi)膜異位模型組，可見移植的內(nèi)膜組織生長(zhǎng)，其被覆柱狀上皮結(jié)構(gòu)清晰，可見腺體， 間質(zhì)有中性粒細(xì)胞?？梢姼鹘o藥組異位內(nèi)膜組織成抑制狀態(tài)，與模型組比較可見腺體及間 質(zhì)有不同程度的減少或消失，上皮細(xì)胞變薄或成萎縮狀態(tài)。其中1 4.4作用最佳，抑制作 用較強(qiáng)，多數(shù)動(dòng)物腺體消失，間質(zhì)明顯減少，上皮細(xì)胞成萎縮狀態(tài)，其作用優(yōu)于丹娥婦康煎 膏。病理檢查分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)+++表示異位生長(zhǎng)的子宮內(nèi)膜生長(zhǎng)狀態(tài)良好，間質(zhì)比較多，可見多個(gè)腺體；++表示 異位生長(zhǎng)的子宮內(nèi)膜生長(zhǎng)狀態(tài)欠佳，間質(zhì)明顯減少，只見一個(gè)擴(kuò)張的腺腔；+表示異位生長(zhǎng) 的子宮內(nèi)膜呈萎縮狀態(tài)，間質(zhì)少(只有++的1/2左右)，只有一個(gè)擴(kuò)張的腺腔；-表示未見 明顯內(nèi)膜組織，腺體消失。結(jié)果見表7及病理照片。
表7.病理等級(jí)資料統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果
136< 0. 01由表7結(jié)果可見，延胡索總堿和芍藥總皂苷1 4. 4比例減輕異位內(nèi)膜病理改變 作用最佳，其中10只動(dòng)物有6只內(nèi)膜組織、腺體消失，3只為輕度，1只為中度，此結(jié)果于病 灶體積測(cè)定結(jié)果基本一致。同時(shí)考慮實(shí)際生產(chǎn)投料方便，將其最佳配比定為1 5。二、延胡索總堿的鎮(zhèn)痛作用(一 )對(duì)醋酸所至小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)的影響取小鼠60只，隨機(jī)等分為六組，每組10只，第一組為正常對(duì)照組，第二組為陽(yáng)性藥 阿司匹林20mg/Kg，第三、四、五、六組分別為延胡索總堿192、96、48、24mg/Kg。灌胃給藥，體 積均為20ml/kg，每日1次，連續(xù)3日，正常對(duì)照組給予等體積蒸餾水。于末次給藥后1小 時(shí)，腹腔注射0. 6%冰醋酸，觀察并記錄注射冰醋酸5分鐘后10分鐘內(nèi)的扭體次數(shù)。結(jié)果見
表80表8.對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)的影響(I 士S; n = 10) 注與正常對(duì)照組比較*P < 0. 05 ；< 0. 01 ；< 0. 001。由表8結(jié)果可見，延胡索總堿各給藥組及阿司匹林組均可明顯減少小鼠扭體反應(yīng) 次數(shù)，且有一定的量效關(guān)系。表明延胡索總堿對(duì)小鼠扭體反應(yīng)具有明顯的抑制作用。( 二)對(duì)小鼠熱板痛閾值的影響選取合格(痛閾值在5-30s范圍內(nèi))雌性小鼠60只，隨機(jī)等分六組，每組10只， 第一組為正常對(duì)照組，第二組為陽(yáng)性藥阿司匹林20mg/Kg，第三、四、五、六組分別為延胡索 總堿192、96、48、24mg/Kg。灌胃給藥，體積均為20ml/kg，每日1次，連續(xù)3日，正常對(duì)照組 給予等體積蒸餾水。于末次給藥后l、2、3h各測(cè)小鼠痛閾值一次。結(jié)果見表9。表9.對(duì)小鼠熱板痛閾值的影響(I 士S; n = 10) 注與正常對(duì)照組比較*P < 0. 05。由表9結(jié)果可見，延胡索總堿192、96mg/Kg，于給藥后1、2、3小時(shí)均可明顯延長(zhǎng)熱 刺激所致小鼠疼痛反應(yīng)時(shí)間，其作用強(qiáng)度與陽(yáng)性藥阿司匹林20mg/Kg相似；48mg/Kg于藥后 2、3小時(shí)亦具明顯作用；而24mg/Kg痛閾值雖有所延長(zhǎng)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明延胡索總堿 在48-192mg/kg劑量范圍內(nèi)對(duì)熱刺激所致疼痛反應(yīng)有明顯抑制作用。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功復(fù)制出“大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型”，并利用該模型觀察了延胡索總 堿和芍藥總苷及其在有效劑量范圍內(nèi)不同配比對(duì)異位內(nèi)膜體積、病理組織學(xué)改變和血清 E2含量的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，延胡索總堿和芍藥總苷均能明顯減小大鼠異位內(nèi)膜組織 的體積，抑制內(nèi)膜組織生長(zhǎng)，其有效劑量范圍芍藥總皂苷為220-880mg/Kg、延胡索總堿為
1625-100mg/Kg，且芍藥總皂苷880mg/Kg和延胡索總堿為200mg/Kg作用強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照藥孕三烯酮和丹莪婦康煎膏。病理組織學(xué)檢查各給藥組可見腺體數(shù)目明顯減少、上皮細(xì)胞萎縮，其 對(duì)大鼠內(nèi)異癥有顯著的治療作用。同時(shí)采用四因素三水平正交設(shè)計(jì)表，設(shè)計(jì)二因素三水平 正交實(shí)驗(yàn)證明，在相同劑量下，二者不同配比及單用延胡索總堿和芍藥總苷均能明顯縮小 異位內(nèi)膜體積，減輕移位內(nèi)膜病理組織學(xué)改變，尤以1 4. 4配比作用最佳，其中有60%動(dòng) 物內(nèi)膜組織、腺體消失?？紤]實(shí)際生產(chǎn)投料方便，將其最佳配比定為1 5。芍藥總皂苷220、 110mg/Kg和丹莪婦康煎膏對(duì)血清E2含量均有一定的降低作用，由此初步推測(cè)二者可能通 過(guò)抑制卵巢合成或分泌E2而達(dá)到抑制移位內(nèi)膜增生的，芍藥總皂苷作用機(jī)制擬與丹莪婦 康煎膏相似。延胡索總堿尚能顯著減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，延長(zhǎng)熱刺激疼痛反應(yīng) 時(shí)間，具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，這對(duì)內(nèi)移癥時(shí)的痛經(jīng)具有良好的改善癥狀作用。由此可見，將 二者有機(jī)結(jié)合研制成藥物，其不僅具有治療內(nèi)移癥的作用，同時(shí)兼有減輕疼痛的效果，最終 達(dá)到“標(biāo)本兼治”的目的。(1)本組方體現(xiàn)了中醫(yī)復(fù)方用藥的優(yōu)勢(shì)，即二藥合用，具有“協(xié)同作用”或“相加作 用”。同時(shí)采用現(xiàn)代藥理學(xué)進(jìn)行藥效評(píng)價(jià)的有效部位的組合，藥理作用明確。(2)同時(shí)處方原料藥為有效部位，主要成分明確，質(zhì)量可控，有利于保證藥品質(zhì)量， 也符合中藥現(xiàn)代化的要求，促進(jìn)中醫(yī)藥走向國(guó)際市場(chǎng)，創(chuàng)造更大的經(jīng)濟(jì)效益。試驗(yàn)例4延胡索總生物堿和白芍總苷膠囊治療實(shí)驗(yàn)性痛經(jīng)的研究摘要延胡索總生物堿和白芍總苷膠囊中延胡索總生物堿50 300mg/kg與白芍 總苷50 600mg/kg對(duì)縮宮素所致小鼠“痛經(jīng)”的扭體反應(yīng)有明顯的抑制作用，明顯延長(zhǎng)小 鼠扭體潛伏期，最佳劑量為延胡索總堿200、100、50mg/kg與白芍總苷100、50mg/kg ；延胡索 總堿25 300mg/kg與白芍總苷50 600mg/kg可明顯延長(zhǎng)小鼠熱疼痛反應(yīng)時(shí)間，顯著提 高小鼠痛閾值，起效最快的是延胡索總堿50、25mg/kg與白芍總苷100、50mg/kg ；延胡索總 堿100 300mg/kg與白芍總苷50 200mg/kg能明顯減輕醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)，作用最 好的是延胡索總堿200mg/kg與白芍總苷100mg/kg ；延胡索總堿50 200mg/kg與白芍總 苷200 400mg/kg對(duì)二甲苯所致的小鼠耳腫脹有良好的抑制作用，作用最強(qiáng)的是延胡索總 堿100mg/kg與白芍總苷400mg/kg ；延胡索總堿20 100ug/ml與白芍總苷400 IOOOug/ ml對(duì)正常大鼠離體子宮平滑肌收縮幅度抑制明顯，且延胡索總堿有良好的量效關(guān)系。結(jié)果 表明，延胡索總生物堿200、100、50mg/kg和白芍總苷200、100、50mg/kg在最佳口服劑量可 選配比范圍內(nèi)。說(shuō)明延胡索總生物堿與白芍總苷有較好的抗炎和鎮(zhèn)痛作用。試驗(yàn)?zāi)康母鶕?jù)中藥新藥研究指南要求，研究延胡索總生物堿和白芍總苷膠囊中 的延胡索總生物堿和白芍總苷的主要藥理作用，明確其有效劑量范圍，篩選二者最佳配比， 為確定延胡索總生物堿和白芍總苷膠囊處方提供科學(xué)依據(jù)。材料藥物延胡索總生物堿(總堿彡78%)，批號(hào)070601 ；白芍總苷(總苷彡80%)， 批號(hào)070301。二者均由北京大學(xué)天然藥物和仿生藥物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。實(shí)驗(yàn)前以適宜 溶劑配成相應(yīng)濃度備用。己烯雌酚，由合肥久聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20090316。苯甲酸 雌二醇注射液，由上海通用藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)090601?？s宮素注射液，由上海禾 豐制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)081203。氯化鈉注射液，由長(zhǎng)春豪邦藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)08121806。氯化鈉，由北京化工廠生產(chǎn)，批號(hào)20071220。氯化鉀，由北京化工廠生產(chǎn)，批號(hào) 20070716。碳酸氫鈉，由北京化工廠生產(chǎn)，批號(hào)20090425。無(wú)水葡萄糖，由廣東汕頭市西隴 化工廠生產(chǎn)，批號(hào)060111。二水合氯化鈣，由廣東汕頭市西隴化工廠生產(chǎn)，批號(hào)080107。 冰醋酸，由北京化工廠生產(chǎn)，批號(hào)20070728。二甲苯，由北京化工廠生產(chǎn)，批號(hào)20000330。動(dòng)物昆明種小白鼠，體重19 21g或20 22g，雌性。由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中 心提供，合格證號(hào)2008-0005。ffistar大鼠，體重200 250g，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提 供，合格證號(hào)2008-0005。儀器BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司。HW-400SE恒溫平滑 肌槽，成都泰盟科技有限公司。GJ-8402型熱板測(cè)痛儀。方法與結(jié)果一、對(duì)縮宮素所致小鼠“痛經(jīng)模型”的影響取130只雌性小鼠，隨機(jī)等分為13組。按表1所示劑量ig或sc給藥。除正常對(duì) 照組外，其余各組動(dòng)物均每日上午ig乙烯雌酚2mg/kg，連續(xù)12天(苯甲酸雌二醇模型組 上午sc苯甲酸雌二醇，連續(xù)10天，第1、10天每天scO. 5mg/d，其余8天每天均0. 2mg/d)。 于ig乙烯雌酚第6日或sc苯甲酸雌二醇第4日開始，各組動(dòng)物均每日下午ig給藥，連續(xù) 7天，正常對(duì)照組與模型對(duì)照組ig蒸餾水，體積均為20ml/kg。第13日ig相應(yīng)藥物lh后， 各組均ip縮宮素20U/kg，記錄30min內(nèi)扭體次數(shù)和扭體反應(yīng)潛伏期，30min內(nèi)無(wú)扭體反應(yīng) 的潛伏期以30min計(jì)算。結(jié)果見表10。表10、對(duì)小鼠痛經(jīng)模型的影響(n= 10，J 土S) 注與己烯雌酚模型對(duì)照組比較*p > 0. 05，**p > 0. 01，#*p > 0. 001 (下表同)。由表10結(jié)果可見，延胡索總堿200、100、50mg/kg與白芍總苷100、50mg/kg作用最 強(qiáng)，可明顯減少縮宮素所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)、延長(zhǎng)扭體潛伏期，對(duì)小鼠痛經(jīng)模型有明顯抑 制作用，與模型組比較有顯著差異。有效劑量范圍延胡索總堿為50 300mg/kg，白芍總苷 為 50 600mg/kg。二、鎮(zhèn)痛作用1、對(duì)熱刺激所致小鼠痛閾值的影響采用“熱板法”，選取合格(痛域值< 5s或> 30s或易跳躍者剔除)雌性小鼠110 只，，隨機(jī)等分為11組，按表2所示劑量ig給藥，正常對(duì)照組給予蒸餾水，體積均為20ml/ kg，每日1次，連續(xù)7天。于末次給藥后l、2、4h各測(cè)痛閾值一次。以動(dòng)物投入熱板至出現(xiàn) 舔后足的時(shí)間為該鼠的痛閾值，超過(guò)60秒以60秒計(jì)算。結(jié)果見表11。表11、對(duì)熱刺激所致小鼠痛閾值的影響(n = 10，X 土S) 由表11結(jié)果可見，延胡索總堿與白芍總苷各劑量在給藥后均可明顯延長(zhǎng)小鼠熱 刺激引起的疼痛反應(yīng)時(shí)間，并可持續(xù)4h以上，與模型對(duì)照組比較有顯著差異。其中延胡索 總堿50、25mg/kg與白芍總苷100、50mg/kg于藥后Ih即可明顯延長(zhǎng)小鼠熱刺激引起的疼痛 反應(yīng)時(shí)間，起效最快。有效劑量范圍延胡索總堿為25 300mg/kg，白芍總苷為50 600mg/
kg ο三、對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響采用“醋酸扭體法”，取雌性小鼠110只，隨機(jī)等分為11組，按表3所示劑量ig給 藥，模型對(duì)照組給予蒸餾水，體積均為20ml/kg，每日1次，連續(xù)7日。于末次給藥后1小時(shí)， 每只鼠ipO. 7%冰醋酸溶液0. lml/10g，記錄注射后5 15分鐘內(nèi)的扭體反應(yīng)次數(shù)。結(jié)果 見表12。表12、對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響(η = 10，χ 士S) 由表3結(jié)果可見，延胡索總堿300、200、100mg/kg與白芍總苷200、100、50mg/kg均 可明顯減少小鼠扭體次數(shù)，對(duì)醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)有顯著的抑制作用。其中延胡索總 堿200mg/kg與白芍總苷100mg/kg作用最強(qiáng)。有效劑量范圍延胡索總堿為100 300mg/ kg,白芍總苷為50 200mg/kg。四、對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響小鼠90只，雌性，隨機(jī)分9組，如表4所示劑量ig給藥，模型組給予蒸餾水，每日 一次，體積均為20ml/kg，連續(xù)10日。末次給藥后1小時(shí)，將二甲苯0. 05ml均勻涂于小鼠左 耳前后兩面，涂后2小時(shí)將小鼠處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用9mm直徑打孔器，分別在同一 部位打下圓耳片，電子天平稱重，左耳重量減去右耳重量即為腫脹程度。結(jié)果見表13。表13、對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響(n = 10，無(wú)士S) 由表13結(jié)果可見，延胡索總堿200、100、5011^/1^與白芍總苷400、20011^/1^均可 明顯減輕小鼠耳腫脹程度，對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹有顯著的抑制作用。其中延胡索總堿 100mg/kg與白芍總苷400mg/kg作用最強(qiáng)。有效劑量范圍延胡索總堿為50 200mg/kg，白 芍總苷為200 400mg/kg。五、對(duì)正常大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響實(shí)驗(yàn)前48、24小時(shí)按2mg/kg體重給大鼠ig乙烯雌酚，人工地促其處于動(dòng)情期或 動(dòng)情前期，以提高子宮平滑肌對(duì)藥物的敏感性。將大鼠擊斃，迅速剪開腹腔，剪取2cm長(zhǎng) 之子宮，結(jié)扎陰道端，并固定于盛有洛氏液(NaCl 9. 0、KCl 0. 42、CaCl2O. 24、NaHCO3O. 2、 Glucose 1.0g/L)的恒溫平滑肌槽的L型通氣鉤上，另一端與肌力換能器相連，浴皿內(nèi)保持 工作溫度37士0. 5°C，并不斷向營(yíng)養(yǎng)液中通入O2 (60 80個(gè)氣泡/分)。先記錄IOmin正 常收縮曲線，然后加入不同藥物，觀察lOmin，記錄給藥前后子宮平滑肌收縮變化，分別對(duì)收 縮頻率、收縮幅度的變化百分率作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理進(jìn)行比較。結(jié)果見表14、15。表14.對(duì)正常大鼠離體子宮平滑肌收縮頻率的影響(η = 6，χ 士S) 與生理鹽水組比較*p > 0. 05，> 0. 01，_p > 0. 001，下表同。由表14結(jié)果可見，延胡索總堿和白芍總苷各劑量對(duì)正常大鼠離體子宮平滑肌收 縮頻率有抑制趨勢(shì)，但無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表15.對(duì)正常大鼠離體子宮平滑肌收縮幅度的影響(n = 6，歹士S) 由表15結(jié)果可見，延胡索總堿20 100ug/ml對(duì)正常大鼠離體子宮平滑肌收縮幅 度有明顯抑制作用，并與劑量呈正相關(guān)性。白芍總苷400 lOOOug/ml對(duì)正常大鼠離體子 宮平滑肌收縮幅度亦有明顯抑制作用。結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，延胡索總生物堿和白芍總苷膠囊中延胡索總生物堿和白芍總苷均可顯著抑制縮宮素所致小鼠“痛經(jīng)”模型的扭體反應(yīng)，明顯延長(zhǎng)小鼠扭體潛伏期，有效劑量 范圍延胡索總堿為50 300mg/kg，白芍總苷為50 600mg/kg，最佳劑量為延胡索總堿 200、100、50mg/kg與白芍總苷100、50mg/kg;明顯延長(zhǎng)小鼠熱疼痛反應(yīng)時(shí)間，顯著提高小鼠 痛域值，并可持續(xù)4h以上。有效劑量范圍延胡索總堿為25 300mg/kg，白芍總苷為50 600mg/kg。其中延胡索總堿50、25mg/kg與白芍總苷100、50mg/kg于藥后Ih即可明顯起效； 可顯著抑制醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)，有效劑量范圍延胡索總堿為100 300mg/kg，白芍 總苷為50 200mg/kg。其中延胡索總堿200mg/kg與白芍總苷100mg/kg作用最佳；對(duì)二 甲苯所致的小鼠耳腫脹有良好的抑制作用，有效劑量范圍延胡索總堿為50 200mg/kg，白 芍總苷為200 400mg/kg，作用最強(qiáng)的為延胡索總堿100mg/kg與白 芍總苷400mg/kg ；延胡 索總堿對(duì)正常大鼠離體子宮平滑肌收縮幅度抑制明顯，有效劑量范圍為20 lOOug/ml，并 有良好的量效關(guān)系；白芍總苷對(duì)正常大鼠離體子宮平滑肌收縮幅度的抑制亦有顯著作用， 有效劑量范圍為400 1000ug/ml。 綜上所述，延胡索總生物堿200、100、50mg/kg和白芍總苷200、100、50mg/kg為口
服最佳有效劑量范圍；并能顯著抑制正常大鼠離體子宮平滑肌的收縮幅度。表明延胡索總 堿與白芍總苷具有明顯的鎮(zhèn)痛與抗炎作用。二者的最佳配比還有待進(jìn)一步正交實(shí)驗(yàn)研究。
權(quán)利要求
一種藥物組合物，其特征在于所述的藥物組合物包括總生物堿和總甙。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的總生物堿是從植物延胡索 中提取的，所述的總甙是從植物芍藥中提取的。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于所述的延胡索總生物堿與芍藥總 甙的重量比為1 50——10 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于所述的延胡索總生物堿與芍藥總 甙的重量比為1 2.2——1 35.2。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于所述的延胡索總生物堿與芍藥總 甙的重量比為1 2.2——1 17.6。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于所述的延胡索總生物堿與芍藥總 甙的重量比為1 2.2——1 8.8。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于所述的延胡索總生物堿與芍藥總 甙的重量比為1 4.4。
8.一種含有權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述藥物組合物的藥物制劑，其特征在于所述的 藥物制劑由所述的藥物組合物與藥學(xué)上可接受的藥用輔料制成臨床上可接受的藥物制劑， 包括針劑、粉針劑、輸液劑、脂肪乳劑、丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體制劑、膏劑或膠囊劑。
9.權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述的藥物組合物或權(quán)利要求8所述的藥物制劑在制備治療 婦科疾病的藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述的婦科疾病包括子宮內(nèi)膜異位、痛 經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)、月經(jīng)異常、盆腔疼痛、急性腹痛、盆腔外內(nèi)異癥或卵巢囊腫。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其應(yīng)用。該組合物包括總生物堿和總甙。其中總生物堿是從延胡索中提取的，所述的總甙是從芍藥中提取的。延胡索總生物堿與芍藥總甙的重量比為1∶50——10∶1，優(yōu)選1∶2.2——1∶35.2，更優(yōu)選1∶2.2——1∶17.6，最優(yōu)選1∶2.2——1∶8.8，其中以1∶4.4為最佳。該藥物組合物與相應(yīng)的輔料可制成臨床上接受的藥物劑型，包括針劑、粉針劑、輸液劑、脂肪乳劑、丸劑、片劑、顆粒劑、口服液體制劑、膏劑或膠囊劑。該藥物組合物可用于制備治療子宮內(nèi)膜異位、痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)等婦科疾病的藥物，可明顯縮小異位內(nèi)膜體積，對(duì)子宮內(nèi)膜異位、痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)等婦科疾病療效顯著，無(wú)毒副作用。
文檔編號(hào)A61K36/71GK101869608SQ20101015939
公開日2010年10月27日 申請(qǐng)日期2010年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月24日
發(fā)明者傅宏征, 徐華, 李偉 申請(qǐng)人:傅宏征;李偉;徐華