專利名稱：無梗五加葉提取物的制備工藝及抗氧化活性的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及無梗五加葉提取物的制備工藝及抗氧化活性。本發(fā)明產(chǎn)品具有抗氧化活性。

背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及無梗五加葉提取物的制備工藝及抗氧化活性。無梗五加Acanthopanaxsessiliflorus(Rupr.et Maxim.)Seem.為五加科五加屬植物，分布于東北、華北、陜西等地，在山地、溪流兩岸、丘陵坡地、林緣及灌木叢中也有生長(zhǎng)。性溫，味辛，無毒，藥理研究表明無梗五加葉具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯、祛風(fēng)除濕等功效?，F(xiàn)在人們用無梗五加制劑治療白細(xì)胞減少癥、眩暈癥及婦女更年期綜合征。隨著對(duì)無梗五加的進(jìn)一步開發(fā)和利用，市場(chǎng)上已開發(fā)出無梗五加苦茶，具有減肥、降血糖、鎮(zhèn)靜安神之功效。然而對(duì)無梗五加葉的抗氧化作用鮮有報(bào)道。
人體在生命活動(dòng)的氧化代謝過程中會(huì)不斷產(chǎn)生各種自由基，體內(nèi)過多自由基對(duì)生物大分子造成損傷，導(dǎo)致細(xì)胞和組織的結(jié)構(gòu)和功能減退，并對(duì)機(jī)體的衰老過程產(chǎn)生影響，最終導(dǎo)致疾病的發(fā)生。而人工合成的抗氧化劑具有一定的毒性和致癌作用。所以評(píng)價(jià)和篩選具有強(qiáng)抗氧化活性的天然植物已成為醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和食品科學(xué)研究的新趨勢(shì)。
采用典型的體外抗氧化體系，以抗壞血酸為對(duì)照，評(píng)價(jià)無梗五加葉提取物的抗氧化活性，為更好的開發(fā)利用無梗五加食用資源提供理論依據(jù)。


發(fā)明內(nèi)容
1.本發(fā)明涉及無梗五加葉提取物的制備工藝及抗氧化活性，其特征在于制備無梗五加葉提取物的工藝包括以下過程 步驟(一)將無梗五加葉加入8-10倍量70％乙醇室溫下浸提8-10h，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70％的乙醇重復(fù)以上步驟各一次，得到濾液； 步驟(二)將步驟(一)中的濾液合并，回收乙醇，得無梗五加葉提取物； 步驟(三)將步驟(二)中的無梗五加葉提取物加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，溫度為30℃，功率為80W，待其溶解完全后，進(jìn)行抗氧化試驗(yàn)，無梗五加葉提取物具有抗氧化作用。
2.根據(jù)本發(fā)明所述的制備無梗五加葉提取物的原料為無梗五加Acanthopanaxsessiliflorus(Rupr.et Maxim.)Seem.的葉。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中的“％”是重量百分比。

具體實(shí)施例方式 本發(fā)明所述的涉及無梗五加葉提取物的制備工藝及抗氧化活性包括以下實(shí)施例，下面的實(shí)施例可進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1 步驟(一)將無梗五加葉加入10倍量70％乙醇室溫下浸提8h，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70％的乙醇重復(fù)以上步驟各一次，得到濾液； 步驟(二)將步驟(一)中的濾液合并，回收乙醇，得無梗五加葉提取物； 步驟(三)將步驟(二)中的無梗五加葉提取物加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，溫度為30℃，功率為80W，待其溶解完全后，進(jìn)行抗氧化試驗(yàn)，無梗五加葉提取物具有抗氧化作用。
實(shí)施例2 步驟(一)將無梗五加葉加入8倍量70％乙醇室溫下浸提10h，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70％的乙醇重復(fù)以上步驟各一次，得到濾液； 步驟(二)將步驟(一)中的濾液合并，回收乙醇，得無梗五加葉提取物； 步驟(三)將步驟(二)中的無梗五加葉提取物加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，溫度為30℃，功率為80W，待其溶解完全后，進(jìn)行抗氧化試驗(yàn)，無梗五加葉提取物具有抗氧化作用。
無梗五加葉提取物的抗氧化試驗(yàn) 1無梗五加葉提取物對(duì)DPPH清除率的測(cè)定 1.1DPPH溶液的制備 精密稱定DPPH樣品0.01g，加入無水乙醇定容至250ml容量瓶中，得到DPPH溶液，濃度為0.04mg/ml。
1.2樣品溶液的制備 精密稱取無梗五加葉提取物0.4g置于50ml具塞容量瓶中，加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，待其溶解完全后，再加入蒸餾水定容至50ml，得到樣品母溶液，濃度為8mg/ml，備用。在樣品母溶液中，用移液槍精密移取體積為0.003125，0.00625，0.0125，0.025，0.05，0.1，0.2，0.4ml的樣品母液，用蒸餾水定容于10ml容量瓶中得到濃度為0.0025，0.005，0.01，0.02，0.04，0.08，0.16，0.32mg/ml的樣品溶液。
1.3樣品對(duì)DPPH的清除作用 準(zhǔn)確移取不同濃度的樣品溶液分別與DPPH溶液和無水乙醇溶液等體積混合于不同試管中，搖勻，在黑暗中放置30min，在515nm下測(cè)定其吸光度值分別為Ai和Aj。另取蒸餾水與DPPH溶液等體積混合于試管中，測(cè)得吸光度值為A。其中以蒸餾水和無水乙醇混合為空白對(duì)照試驗(yàn)。并按下面公式計(jì)算清除率。
清除率＝(A-Ai+Aj)/A×100％ 1.4 50％(IC50)抑制濃度的計(jì)算 利用SPSS16.0軟件分析，得出IC50值。
2無梗五加葉提取物對(duì)羥自由基清除率的測(cè)定 2.1樣品溶液的制備 精密稱取無梗五加葉提取物0.25g置于50ml具塞容量瓶中，加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，待其溶解完全后，定容至刻度，得到樣品母溶液，備用。在樣品母溶液中，用移液槍精密移取體積為5μl，10μl，20μl，40μl，80μl，160μl，320μl，640μl的樣品母液，用蒸餾水定容于10ml容量瓶中得到濃度為0.0025，0.005，0.01，0.02，0.04，0.08，0.16，0.32mg/ml的樣品溶液。
2.2試劑的制備 稱取0.2032g甲基紫用去離子水定容于100ml容量瓶中，備用。用鹽酸調(diào)Tris緩沖溶液PH為5，備用。取30％的H2O2溶液1.0mL，用去離子水定容于100mL容量瓶中，備用。稱取0.0695gFeSO4·7H2O用水定容于50mL容量瓶中，備用(現(xiàn)用現(xiàn)配)。
2.3羥自由基·OH的產(chǎn)生及測(cè)定 取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液1mL，按順序放入10mL的刻度管中。并用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘，記為A578。
取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液1mL，F(xiàn)e2+溶液1mL，H2O2溶液1mL按順序放入10mL的刻度管中。并用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘，記為A0。
取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液1mL，不同濃度梯度的待測(cè)液2mL，F(xiàn)e2+溶液1mL，H2O2溶液1mL按順序放入10mL的刻度管中。并用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘。平行三次，記為As。
以去離子水做空白實(shí)驗(yàn)，用721紫外分光光度計(jì)在578的波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度。
2.4羥自由基·OH清除率的計(jì)算 利用公式清除率％＝(As-A0)/(A578-A0)×100％，得出樣品提取液對(duì)羥自由基的清除率。
2.5 50％抑制濃度(IC50)的計(jì)算 利用SPSS16.0軟件分析，得出IC50值。
3無梗五加葉提取物抗氧化結(jié)果 3.1無梗五加葉提取物對(duì)DPPH和羥自由基的清除率 見表1。
表1樣品溶液對(duì)DPPH和羥自由基的清除率結(jié)果
3.2維生素C(VC)對(duì)DPPH和羥自由基的清除率 見表2。
表2VC對(duì)DPPH和羥自由基的清除率結(jié)果
3.3利用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析3.1和3.2中的數(shù)據(jù) 見表3。
表3無梗五加葉和VC清除DPPH·的EC50值及·OH的IC50值

權(quán)利要求
1.本發(fā)明涉及無梗五加葉提取物的制備工藝及抗氧化活性，其特征在于制備無梗五加葉提取物的工藝包括以下過程
步驟(一)將無梗五加葉加入8-10倍量70％乙醇室溫下浸提8-10h，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70％的乙醇重復(fù)以上步驟各一次，得到濾液；
步驟(二)將步驟(一)中的濾液合并，回收乙醇，得無梗五加葉提取物；
步驟(三)將步驟(二)中的無梗五加葉提取物加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，待其溶解完全后，進(jìn)行抗氧化試驗(yàn)，無梗五加葉提取物具有抗氧化作用。
2.根據(jù)本發(fā)明所述的制備無梗五加葉提取物的原料為無梗五加Acanthopanaxsessiliflorus(Rupr.et Maxim.)Seem.的葉。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及無梗五加葉提取物的制備工藝及抗氧化活性。將無梗五加葉加入6-8倍量70％乙醇室溫下浸提8-10h，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70％的乙醇重復(fù)以上步驟各一次，合并三次濾液，回收乙醇，得無梗五加葉提取物，無梗五加葉提取物加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，溫度為30℃，功率為80W，待其溶解完全后，進(jìn)行抗氧化試驗(yàn)，本發(fā)明產(chǎn)品具有抗氧化活性。
文檔編號(hào)A61K127/00GK101810655SQ201010163028
公開日2010年8月25日 申請(qǐng)日期2010年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月2日
發(fā)明者張崇禧, 鄭友蘭, 孫麗, 陳曉芳, 楊淑超, 張騰 申請(qǐng)人:山東大學(xué)威海分校