專利名稱：使用青蒿素樣化合物預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過(guò)對(duì)受試者給予自由基發(fā)生劑來(lái)預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的方法。
背景技術(shù)：
青蒿素是從植物黃花蒿(Artemisia annua L.)中分離的倍半萜內(nèi)酯類，該植物 的提取物已經(jīng)用于治療瘧疾至少1600年。青蒿素分子含有內(nèi)過(guò)氧化橋，它與鐵原子反應(yīng) 形成自由基。青蒿素的抗瘧作用是因其與寄生蟲(chóng)內(nèi)的血紅素發(fā)生反應(yīng)形成自由基而使細(xì) 胞死亡所導(dǎo)致的。癌細(xì)胞具有顯著高于正常細(xì)胞的鐵流入。因此，已經(jīng)證實(shí)青蒿素和青 蒿素類似物對(duì)建立的腫瘤和腫瘤細(xì)胞系具有細(xì)胞毒性(例如，參見(jiàn)Woerdenbag等(1993) 《天然產(chǎn)物雜志》(J.Nat. Prod.) 56 (6) 849-56 ；Lai &Singh(1995)《癌癥通訊》(Cancer Lett.) 91 41-6 ；Efferth 等(2001)《國(guó)際腫瘤學(xué)雜志》(Int. J. Oncol.) 18 :767_73 ；Li 等 (2001)《生物有機(jī)藥物化學(xué)通訊》(Bioorg. Med. Chem. Lett.) 11 :5_8 ；Singh& Lai (2001) 《生命科學(xué)》(Life Sci.) 70 49-56 ；Efferth ^ (2002)《生物化學(xué)與藥理學(xué)》(Biochem. Pharmacol.)64 :617_23 ；Efferth等(2002)《血細(xì)胞、分子和疾病》(Blood Cells,Molecules & Diseases) 28 (2) 160-8 ；Sadava 等(2002)《癌癥通訊》(Cancer Lett. ) 179 :151_6)。已經(jīng)描述了青蒿素的許多類似物和其它具有生物活性的含有內(nèi)過(guò)氧化 橋(endoperoxide bridge)的化合物(例如，參見(jiàn)美國(guó)專利US5，180，840 ；美國(guó)專利 US5, 216，175 ；美國(guó)專利 US5, 225，427 ；Cumming 等(1998)《藥物化學(xué)雜志》(J Med. Chem.) 41 (6) :952_64 ；Posner 等(1999)《藥物化學(xué)雜志》(J Med. Chem.) 42 300-4 ；Li 等 (2001)《生物有機(jī)藥物化學(xué)通訊》(Bioorg. Med. Chem. Lett.) 11 :5_8 ；Wu等(2001)《歐洲 藥物化學(xué)雜志》(Eur. J. Med. Chem.) 36 :469_79 ；Posner等(2003)《藥物化學(xué)雜志》(J Med. Chem.) 46 1060-5)。已經(jīng)用于治療瘧疾的青蒿素類似物包括二氫青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥 酯、蒿乙醚、二氫青蒿素丙基碳酸酯和阿替林酸(artelinic acid)。青蒿素是相對(duì)安全的藥物，甚至在高劑量下也只有極少且極低微的副作用。已經(jīng) 將6天70mg/kg/天的口服劑量用于治療人瘧疾。在用青蒿琥酯治療癌癥患者后，沒(méi)有觀 察到明顯的不良副作用(口服劑量50mg/天；肌內(nèi)劑量60mg/天；為期9個(gè)月)(Singh & Verma (2002)《腫瘤學(xué)學(xué)報(bào)》(Arch. Oncol.) 10 (4) :279_80)。還已將青蒿素和青蒿素類似物 用于治療皮膚病，諸如銀屑病、起泡性皮膚病、病毒疣、上皮軟疣(mulluscum contagiosum) 和痔(例如，參見(jiàn)美國(guó)專利US4，978，676 ；美國(guó)專利US5，219，880)。還將青蒿素和青蒿素類 似物用于預(yù)防瘧疾。癌癥一般是因單細(xì)胞易于以無(wú)法控制的方式增殖而發(fā)生。本領(lǐng)域中需要抑制易于發(fā)展成癌癥的細(xì)胞的方法，以預(yù)防或延緩癌癥發(fā)作。本發(fā)明滿足了這一需求。發(fā)明概述本發(fā)明提供了用于預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的方法。該方法包括對(duì)受試者給予有效預(yù) 防或延緩癌癥顯現(xiàn)的用量的自由基發(fā)生劑。在某些實(shí)施方案中，所述的自由基發(fā)生劑為含 有內(nèi)過(guò)氧橋的化合物。一般來(lái)說(shuō)，所述的內(nèi)過(guò)氧化物化合物選自倍半萜內(nèi)酯類及其醇類、 碳酸酯類、酯類、醚類和磺酸酯類、阿替夫林、1，2，4-三噁烷類和1，2，4，5_四噁烷類組成的 組。所述的內(nèi)過(guò)氧化物化合物(endoperoxide compound)可以為下列通式的化合物或其藥 物上可接受的鹽 其中R為
或
，R1為氫、羥基、烷基或具有下列通式
或 其中R2為烷基或芳基且η為1-6?？捎糜趯?shí)施本發(fā)明的代表性內(nèi)過(guò)氧化物化合物包括、但不限于青蒿素、二氫青蒿 素、蒿甲醚、蒿乙醚、青蒿琥酯、阿替林酸和二氫青蒿素丙基碳酸酯。自由基發(fā)生劑還包括不含內(nèi)過(guò)氧橋、但可以與鐵反應(yīng)形成自由基、例如基于碳的 自由基的化合物。自由基發(fā)生劑的來(lái)源可以是天然(例如分離自植物)、合成或半合成的。 例如，可以通過(guò)在微生物宿主中表達(dá)相關(guān)合成途經(jīng)中的酶而產(chǎn)生自由基發(fā)生劑(例如，參 見(jiàn)Martin等(2003)《天然生物技術(shù)》(Nature Biotechnol.)，在線公開(kāi):2003年6月1日， doi 10.1038/nbt833)。在某些實(shí)施方案中，所述的方法進(jìn)一步包括對(duì)受試者給予有效量的胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑 (iron-enhancing agent)的步驟。典型的胞內(nèi)鐵強(qiáng)化化合物為鐵鹽和復(fù)合物，包括鐵膽鹽、 硫酸亞鐵甘氨酸(ferroglycinesulfate)、葡聚糖鐵復(fù)合物(dextran iron complex)、胨化 鐵、山梨醇鐵、氧化鐵、含糖鐵、全鐵蛋白和全運(yùn)鐵蛋白。本發(fā)明的方法適用于任意哺乳動(dòng)物受試者，諸如人體受試者。因此，在某些實(shí)施方 案中，按照本發(fā)明方法用自由基發(fā)生劑治療的接觸致癌物的受試者保持不發(fā)生癌癥的時(shí)間 是不使用自由基發(fā)生劑治療的對(duì)照組動(dòng)物的2倍。此外，本發(fā)明的方法使癌癥顯現(xiàn)的可能性降低。因此，在某些實(shí)施方案中，按照本 發(fā)明方法用自由基發(fā)生劑治療的接觸致癌物的受試者中無(wú)一發(fā)生癌癥，而不使用自由基發(fā) 生劑治療的對(duì)照組動(dòng)物中有43%發(fā)生癌癥。
本發(fā)明在另一個(gè)方面中提供了試劑盒，它包括自由基_發(fā)生劑和使用該自由基發(fā) 生劑來(lái)延緩或預(yù)防受試者中癌癥顯現(xiàn)的技術(shù)說(shuō)明書(shū)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑盒 可以進(jìn)一步包括鐵強(qiáng)化劑。附圖簡(jiǎn)述 當(dāng)結(jié)合附圖考慮時(shí)，本發(fā)明的上述方面和許多附加優(yōu)點(diǎn)更為顯而易見(jiàn)，正如參照 下列詳細(xì)描述中同樣可以更好地得到理解，其中附

圖1表示如實(shí)施例1中所述從接觸致癌物，但不進(jìn)行治療1-38周后(表示 為" “)或每周口服給予青蒿素后(表示為"■“)發(fā)生腫瘤的動(dòng)物百分比的圖解表示 法。附圖2表示如實(shí)施例2中所述從接觸致癌物，但不進(jìn)行治療1-10周后(表示 為" “)或用混合在食物中的青蒿素治療后(表示為"■“)發(fā)生腫瘤的動(dòng)物百分比的 圖解表示法。優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述本發(fā)明在一個(gè)方面中提供了預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的方法，該方法包括對(duì)受試者給 予有效預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的用量的自由基發(fā)生劑。本發(fā)明的方法適用于任意的哺乳動(dòng)物 受試者，諸如人體受試者或動(dòng)物受試者。本文所用的術(shù)語(yǔ)"預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)"指的是 預(yù)防或延緩在不給予本發(fā)明自由基發(fā)生劑的情況下將發(fā)生的癌癥出現(xiàn)。術(shù)語(yǔ)"癌癥顯現(xiàn)" 指的是癌癥在臨床上有表現(xiàn)或可通過(guò)適合于檢測(cè)和診斷癌癥的任意方法檢測(cè)到的時(shí)間點(diǎn)。 因此，可以將癌癥顯現(xiàn)推遲確定的一段時(shí)間或?qū)⑵錈o(wú)限期延遲。例如，可以通過(guò)殺傷癌前細(xì) 胞或者遺傳性或環(huán)境性傾向于異常或無(wú)法控制的細(xì)胞增殖的細(xì)胞、通過(guò)防止這些細(xì)胞分裂 或通過(guò)防止這些細(xì)胞異?；驘o(wú)法控制的分裂來(lái)預(yù)防或延緩癌癥的顯現(xiàn)。通過(guò)預(yù)防或延緩癌 癥的顯現(xiàn)，自由基發(fā)生劑可以延長(zhǎng)癌癥顯現(xiàn)前的時(shí)間和/或減少癌癥顯現(xiàn)的可能性。術(shù)語(yǔ)"自由基發(fā)生劑"指的是可以與鐵或含鐵的化合物反應(yīng)而生成自由基、諸如 基于碳的自由基的任意試劑。在某些實(shí)施方案中，所述的自由基發(fā)生劑為內(nèi)過(guò)氧化物化合 物。術(shù)語(yǔ)"內(nèi)過(guò)氧化物化合物"指的是含有在有鐵和含鐵的化合物存在下可發(fā)生反應(yīng)而生 成自由基的內(nèi)過(guò)氧橋的化合物。內(nèi)過(guò)氧化物化合物還可以在有銅和錳存在的情況下形成自 由基。有代表性的內(nèi)過(guò)氧化物化合物如上所述，不過(guò)，顯然其它內(nèi)過(guò)氧化物化合物也可用于 這一目的?？捎糜趯?shí)施本發(fā)明的典型內(nèi)過(guò)氧化物化合物為青蒿素及其類似物，以及含有可與 鐵和含鐵化合物反應(yīng)而形成自由基的內(nèi)過(guò)氧化橋的其它化合物。因此，合適的內(nèi)過(guò)氧化物 化合物包括倍半萜內(nèi)酯類及其醇類、碳酸酯類、酯類、醚類和磺酸酯類、阿替夫林、1，2，4_三 噁烷類和1，2，4，5_四噁烷類。合適的含有內(nèi)過(guò)氧化物的本發(fā)明倍半萜化合物包括下式化 合物及其藥物上可接受的鹽 其中R為
或
，Ri為氫、羥基、烷基或具有下列通式
,或 其中R2為烷基或芳基，且η為1-6。本文所用的術(shù)語(yǔ)"烷基"指的是含有1_6個(gè) 碳原子、優(yōu)選1-4個(gè)碳原子的低級(jí)烷基。本發(fā)明的烷基可以為直鏈或支鏈基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)"芳 基"指的是含有4-14個(gè)主鏈碳或雜原子的單環(huán)和多環(huán)芳族基團(tuán)，包括碳環(huán)芳基和雜環(huán)芳 基。碳環(huán)芳基是所有的環(huán)原子均為碳的芳基。雜環(huán)芳基含有1-4個(gè)雜原子作為環(huán)原子，剩 余的環(huán)原子為碳。有代表性的芳基包括例如苯基和芐基。藥物上可接受的鹽包括堿金屬或 堿土金屬鹽，優(yōu)選鈉或鉀鹽。例如，本發(fā)明的內(nèi)過(guò)氧化物化合物包括青蒿素，其中R為
；二氫青蒿素(R1 = -0Η) ；BrtesunicacicKR1 = -OCO(CH2)2CO2H)；以及青蒿琥酯；蒿甲醚(R1 = -OCH3)；禾口 蒿乙醚(R1 = -OC2H5)。本發(fā)明其它有代表性的內(nèi)過(guò)氧化物化合物包括阿替林酸、二氫青蒿 素丙基碳酸酯、阿替夫林(Ro. 42-1611)及其類似物(Biirgen等(1994) Sixth Int. Cong. Infect. Dis.Abst. 427，p. 152，Prague)、1，2，4-三噁燒類(Peters 等(1993) Ann. Trop. Med. Parasit. 87(1) :9_16)和 1，2，4，5_ 四噁烷類(Vennerstrom 等(1992)《藥物化學(xué)雜志》(J Med Chem.)35(16) =3023-3027) 0青蒿素的其它合適的結(jié)構(gòu)類似物描述在例如美國(guó)專利 US5, 216，175 和 US5, 180，840、Cumming 等(1998)《藥物化學(xué)雜志》(J Med Chem.) 41 (6) 952-64 和 PCT 專利申請(qǐng) W097/01548、W099/33461 和 W000/42046 中。有效抑制易發(fā)展成癌癥的細(xì)胞的自由基發(fā)生劑的用量最高可達(dá)最大耐受劑量，但 該濃度并非關(guān)鍵，而且可以廣泛改變。當(dāng)然，其精確量隨化合物、給藥途徑、患者的身體情況 和其它因素而改變?？梢詫⒚咳談┝孔鳛閱蝿┝拷o藥或可以將其分成多次劑量給藥。實(shí)際給予的自由基發(fā)生劑的用量可以是預(yù)防有效量，本文中該術(shù)語(yǔ)用于表示對(duì)癌 癥顯現(xiàn)產(chǎn)生實(shí)質(zhì)性的預(yù)防或延緩作用所需的用量?？梢愿鶕?jù)來(lái)源于體外或動(dòng)物模型試驗(yàn)系 統(tǒng)的劑量_反應(yīng)曲線外推出有效劑量。一般將動(dòng)物模型用于測(cè)定理想的劑量范圍和給藥途 徑。這類信息可用于確定用于人或其它哺乳動(dòng)物給藥的有用劑量和給藥途徑。有效劑量的 測(cè)定完全屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍。因此，實(shí)際給予的用量取決于具體受試者，優(yōu)選 是優(yōu)化用量，以便獲得所需效果，并且沒(méi)有顯著副作用?？梢酝ㄟ^(guò)標(biāo)準(zhǔn)制藥步驟在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中測(cè)定自由基發(fā)生劑、諸如內(nèi)過(guò) 氧化物化合物的預(yù)防功效和可能的毒性(例如ED5tl，即有效治療50%群體的劑量；和LD5tl，即使50%群體致死的劑量)。治療與毒性效果之間的劑量比是治療指數(shù)，可以將其表示為 LD50與ED5tl之比。表現(xiàn)出高治療指數(shù)、例如治療指數(shù)至少約為60的自由基發(fā)生劑特別適合 于實(shí)施本發(fā)明的方法?？梢詫募?xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)和動(dòng)物研究中獲得的數(shù)據(jù)用于確定用于人或 其它哺乳動(dòng)物的劑量范圍。自由基發(fā)生劑的劑量?jī)?yōu)選屬于包括幾乎沒(méi)有或完全沒(méi)有毒性的 ED50的循環(huán)濃度范圍。劑量一般在該范圍內(nèi)變化，這取決于所用的劑型、受試者的敏感性和 給藥途徑。因此，最佳用量可以根據(jù)給藥方法的不同而改變，并且一般是以相同或相似形式 給藥的常用藥劑的用量。例如，對(duì)于局部或口服給藥，一般可以每天進(jìn)行1-3次。 就諸如青蒿素及其類似物這類內(nèi)過(guò)氧化物化合物而言，可以以約0. 1-約20mg/千 克體重/天、諸如約0. 5-約15mg/千克體重/天、例如約1-約IOmg/千克體重/天的水平 使用包括所述化合物的制劑獲得良好的結(jié)果。就成年人受試者而言，內(nèi)過(guò)氧化物、諸如青蒿 素、蒿甲醚或蒿乙醚的典型每日口服劑量約為20mg-約200mg，諸如約40mg-約180mg或約 SOmg-約160mg。對(duì)于其它自由基發(fā)生劑可以使用類似的劑量?？梢匀鐚?shí)施例1和2中所述，通過(guò)任意有效途經(jīng)、例如通過(guò)口服給予本發(fā)明的自由 基發(fā)生劑。還可以通過(guò)非腸道途徑給予自由基發(fā)生劑。給藥方法包括局部、吸入、口含、動(dòng) 脈內(nèi)、皮下、髓內(nèi)、靜脈內(nèi)、鼻內(nèi)、直腸內(nèi)、眼內(nèi)給藥和其它常用方式?？梢詫⒆杂苫l(fā)生劑配 制成組合物，該組合物中另外含有合適的藥物上可接受的載體，包括賦形劑和其它有利于 對(duì)哺乳動(dòng)物受試者給予所述自由基發(fā)生劑的其它化合物。有關(guān)配制和給藥的更具體的技術(shù) 可以在最新版《Remington 氏藥物科學(xué)》(〃 Remington' s Pharmaceutical Sciences") (Maack Publishing Co, Easton PA)中找到。可以如實(shí)施例1和2中所述使用本領(lǐng)域中眾所周知的藥物上可接受的載體配制用 于口服給藥的自由基發(fā)生劑，其劑量適合于口服給藥。這類載體使自由基發(fā)生劑能夠被配 制成適合于受試者攝取的片劑、丸劑、錠劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿劑、漿液、混懸液等。可以 將口服應(yīng)用的自由基發(fā)生劑與例如固體賦形劑一起配制，任選研磨所得混合物，并且，如果 需要，則在加入合適的其它化合物后將該顆?；旌衔锛庸ぃ灾瞥善瑒┗蝈V劑藥芯。合適的 賦形劑包括碳水化合物或蛋白質(zhì)填料。它們包括、但不限于糖類，包括乳糖、蔗糖、甘露糖 醇或山梨醇；來(lái)自玉米、小麥、稻、馬鈴薯或其它植物的淀粉；纖維素，諸如甲基纖維素、羥 丙基甲基纖維素或羧甲基纖維素鈉；和樹(shù)膠，諸如阿拉伯膠和黃耆膠；以及蛋白質(zhì)，諸如明 膠和膠原蛋白。如果需要，可以加入崩解劑或加溶劑，諸如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、藻酸 或其鹽，諸如藻酸鈉。給錠芯包上合適的包衣層，諸如濃糖溶液，其中還可以含有阿拉伯樹(shù)膠、滑石、聚 乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆用溶液和合適的有機(jī)溶劑或溶劑 混合物?？梢韵蚱瑒┗蝈V劑包衣層中加入染料或色素以用于產(chǎn)品識(shí)別或表征活性化合物用 量(即劑量)。例如，可以將用于口服給藥的自由基發(fā)生劑配制成由明膠制成的推入配合式膠囊 以及由明膠和諸如甘油或山梨醇這類包衣材料組成的密封軟膠囊。推入配合式膠囊可以含 有內(nèi)過(guò)氧化物化合物，其中混有填充劑或粘合劑，諸如乳糖或淀粉；潤(rùn)滑劑，諸如滑石或 硬脂酸鎂；和任選的穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，可以將自由基發(fā)生劑溶于或懸浮于合適的含有或 不含穩(wěn)定劑的液體中，諸如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。例如，可以將自由基發(fā)生劑， 諸如內(nèi)過(guò)氧化物化合物、如蒿甲醚、蒿乙醚、青蒿素或其它青蒿素類似物溶于油，諸如大豆油、橄欖油或花生油中。合適的大豆油包括、但不限于來(lái)自大豆Glycine Soya Bentham(例 如 Shanghai Number 2 Oil Factory, cat. no. 91102)的大豆油。 用于非腸道給藥的組合物包括一種或多種自由基發(fā)生劑的水溶液。為了進(jìn)行 注射，可以將本發(fā)明的內(nèi)過(guò)氧化物化合物配制在水溶液中，諸如生理上相容的緩沖液，如 Hank' s溶液、林格液或生理緩沖鹽水。含水的注射混懸液可以含有增加該混懸液粘度的 物質(zhì)，諸如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或葡聚糖。另外，可以將自由基發(fā)生劑的混懸液制備成 適宜的油類注射混懸液。合適的親脂性溶劑或載體包括脂肪油，諸如芝麻油；或合成的脂 肪酸酯類，諸如油酸乙酯或甘油三酯類；或脂質(zhì)體。該混懸液還可以任選含有合適的穩(wěn)定劑 或能增加自由基發(fā)生劑的溶解度以便制備高濃度溶液的試劑。為了進(jìn)行局部或鼻部給藥，一般將適合于透入特定屏障的滲透劑用于制劑中。它 們的實(shí)例為2-吡咯烷酮、N-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇、 甲醇或異丙醇、二甲亞砜和月桂氮革酮。還可以包括其它試劑以使該制劑在美容上可 接受。它們的實(shí)例為脂肪、蠟、油、染料、香料、防腐劑、穩(wěn)定劑和表面活性劑。還可以包 括諸如本領(lǐng)域中公知的那些角質(zhì)分解劑。實(shí)例為水楊酸和硫。為了進(jìn)行局部給藥，組合 物可以是經(jīng)皮軟膏或貼劑的形式以便全身投遞所述化合物，并且可以按照常規(guī)方式制備 (例如，參見(jiàn) Barry,〈〈皮膚病用制齊[J〉〉(Dermatological Formulations) (Drugs and the PharmaceuticalSciences—Dekker) ；Harrys Cosmeticology(Leonard Hill Books)。為了進(jìn)行直腸給藥，可以以栓劑或滯留型灌腸劑的形式給予組合物?？梢酝ㄟ^(guò)將 自由基發(fā)生劑與合適的無(wú)刺激性賦形劑混合來(lái)制備這類組合物，所述的無(wú)刺激性賦形劑在 常溫下為固體，而在直腸溫度下為液體，由此可在直腸中熔化而釋放藥物。合適的賦形劑包 括、但不限于可可脂和聚乙二醇類。這些不同類型的添加劑各自的用量對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的，最佳用 量與針對(duì)相同類型給藥所設(shè)計(jì)的其它已知制劑相同。例如，對(duì)于角質(zhì)層滲透促進(jìn)劑來(lái)說(shuō)，一 般包括約0. -約15%濃度?？梢园凑张c本領(lǐng)域中已知類似的方式制備含有本發(fā)明自由基發(fā)生劑的組合物 (例如，通過(guò)常規(guī)的混合、溶解、成粒、制錠、研磨、乳化、包囊、包埋或凍干法)。還可以通過(guò) 常規(guī)方式(例如包衣)改變組合物以提供適當(dāng)釋放特性，例如緩釋或靶向釋放?？梢詫⒑凶杂苫l(fā)生劑的組合物制成鹽的形式，并且可以與許多酸成鹽，包括、 但不限于鹽酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、蘋(píng)果酸、琥珀酸等。鹽比相應(yīng)的游離堿形式更易溶 于水性或其它質(zhì)子溶劑中。在制備了配制成含有自由基發(fā)生劑和可接受的載體的這類組合物后，可以將它們 放入合適的容器并標(biāo)記使用?？梢詥为?dú)或與一種或多種其它治療活性劑一起給予本發(fā)明的自由基發(fā)生劑。例 如，通過(guò)增加氧的張力、減少抗氧化劑的攝取和使用諸如咪康唑這類藥物阻斷過(guò)氧化物酶 和過(guò)氧化氫酶，可以獲得內(nèi)過(guò)氧化物化合物的較高功效。還可以通過(guò)給予胞內(nèi)鐵強(qiáng)化化合 物來(lái)提高自由基發(fā)生劑的有效性。因此，本發(fā)明的某些實(shí)施方案還包括胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑。自 由基發(fā)生劑，諸如內(nèi)過(guò)氧化物化合物，會(huì)與鐵反應(yīng)形成自由基。已經(jīng)證實(shí)給予鐵鹽或攜帶鐵 的蛋白質(zhì)全運(yùn)鐵蛋白增加了癌細(xì)胞對(duì)青蒿素或二氫青蒿素的敏感性(Lai & Singh(1995) 《癌癥通訊》(Cancer Lett.) 91 :41_46 ；Moore 等(1995)《癌癥通訊》(Cancer Lett.) 98 83-7 ；Singh & Lai (2001)《生命科學(xué)》(Life Sci.) 70 :49_56 ;Sadava 等(2002)《癌癥通 訊》(Cancer Lett.) 1179 :151_6)。按照本發(fā)明某些實(shí)施方案的方法，給予胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑后 增加了自由基發(fā)生劑延緩或預(yù)防癌癥顯現(xiàn)的有效性。 術(shù)語(yǔ)"胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑"指的是可有效增加體內(nèi)亞鐵的胞內(nèi)濃度的任意活性劑，包 括藥物上可接受的鐵鹽和鐵復(fù)合物。可用于實(shí)施本發(fā)明的鐵鹽包括富馬酸亞鐵、硫酸亞 鐵、碳酸亞鐵、檸檬酸亞鐵、葡萄糖酸亞鐵和乳酸亞鐵?？捎糜趯?shí)施本發(fā)明的鐵復(fù)合物一 般包括含鐵的藥物上可接受的復(fù)合物，例如鐵膽鹽、硫酸亞鐵甘氨酸、葡聚糖鐵復(fù)合物、 胨化鐵、山梨醇鐵、氧化鐵和含糖鐵；以及與鐵結(jié)合蛋白和糖蛋白復(fù)合的鐵，諸如全鐵蛋白 (holoferritin)禾口全運(yùn)鐵蛋白(holotransferrin)。對(duì)特定受試者和活性劑而言，用于本發(fā)明的胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑的濃度一般可高達(dá)最大 耐受劑量，如上所述，它將隨活性劑、受試者、疾病情況和其它因素的不同而改變。約ι-約 20mg鐵/千克受試者體重/天的劑量范圍一般用于該目的。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以在給 予自由基發(fā)生劑前給予胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑。本發(fā)明的方法對(duì)受試者的癌癥顯現(xiàn)提供了顯著的延緩作用。因此，在某些實(shí)施方 案中，如實(shí)施例1中所述，按照本發(fā)明方法用自由基發(fā)生劑治療的接觸致癌物的受試者保 持無(wú)癌狀態(tài)的時(shí)間至少是不使用自由基發(fā)生劑治療的對(duì)照組動(dòng)物的大約2倍。此外，本發(fā)明的方法降低了癌癥顯現(xiàn)的可能性。因此，在某些實(shí)施方案中，如實(shí)施 例1和2中所述，用自由基發(fā)生劑治療的接觸致癌物的受試者與不使用內(nèi)過(guò)氧化物化合物 治療的對(duì)照組動(dòng)物相比更少會(huì)發(fā)生癌癥。在某些實(shí)施方案中，如實(shí)施例2中所述，與不使用 自由基發(fā)生劑治療的對(duì)照組動(dòng)物中有43%患癌相比，按照本發(fā)明方法用自由基發(fā)生劑治療 的接觸致癌物的受試者無(wú)一發(fā)生癌癥。本發(fā)明在另一個(gè)方面中提供了試劑盒，它包括一種或多種自由基發(fā)生劑和使用自 由基發(fā)生劑延緩或預(yù)防癌癥顯現(xiàn)的技術(shù)說(shuō)明書(shū)。該技術(shù)說(shuō)明書(shū)可以指示給予自由基發(fā)生劑 可能特別有利的狀況，例如存在癌癥家族史、已有癌癥發(fā)生或接觸致癌物。該說(shuō)明書(shū)還提供 了給藥的建議，諸如劑量。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑盒可以進(jìn)一步包括鐵強(qiáng)化劑及 其與內(nèi)過(guò)氧化物化合物聯(lián)合使用的技術(shù)說(shuō)明書(shū)。下列實(shí)施例僅解釋了目前已知用于實(shí)施本發(fā)明的最佳方式，但不應(yīng)用于限制本發(fā) 明。實(shí)施例1本實(shí)施例描述了用于預(yù)防或延緩接觸致癌物的大鼠中癌癥發(fā)展的代表性方法，通 過(guò)每周口腔插管給予青蒿素來(lái)進(jìn)行。材料和方法對(duì)雌性Sprague-Dawley大鼠給予胃內(nèi)單劑量的致癌物，即懸浮于橄 欖油(Sigma Chemicals, St Louis, MO ；25mg/ml)中的 7，12-二甲基苯并[a]蒽(DMBA ； Sigma Chemicals, St Louis，MO ;50mg/kg體重)。將動(dòng)物隨機(jī)分成兩個(gè)處理組，一組每周 口腔插管接受青蒿素(Holley Pharmaceuticals, Fullerton，CA ；在 10mg/ml 的橄欖油中 10mg/kg)的或橄欖油(對(duì)照組)。在給予DMBA —周后開(kāi)始進(jìn)行青蒿素治療。每周對(duì)動(dòng)物體 內(nèi)存在的乳腺腫瘤觸摸一次。對(duì)動(dòng)物體內(nèi)存在的每個(gè)腫瘤記錄檢測(cè)時(shí)間和部位以及大小。結(jié)果致癌物處理后6周，經(jīng)青蒿素治療的動(dòng)物中沒(méi)有一只出現(xiàn)腫瘤，而對(duì)照組動(dòng) 物中有17%存在腫瘤。致癌物處理后10周，經(jīng)青蒿素治療的動(dòng)物中有9%出現(xiàn)腫瘤，而對(duì)照組動(dòng)物中有58%的動(dòng)物出現(xiàn)腫瘤。致癌物處理后20周，經(jīng)青蒿素治療的動(dòng)物中有54% 出現(xiàn)腫瘤，而對(duì)照組動(dòng)物中有83%的動(dòng)物出現(xiàn)腫瘤。致癌物處理后38周，經(jīng)青蒿素治療的 動(dòng)物中有64%出現(xiàn)腫瘤，而對(duì)照組動(dòng)物中100%的動(dòng)物出現(xiàn)腫瘤。這些結(jié)果如表1和附圖 1中所示。表1.細(xì)職籠辦白_腫_中獻(xiàn)膽兄 因此，每周使用青蒿素治療延緩了經(jīng)致癌物處理的動(dòng)物中的腫瘤表現(xiàn)。此外，出現(xiàn) 腫瘤的動(dòng)物少于對(duì)照組。實(shí)施例2本實(shí)施例描述了通過(guò)提供混在食物中的青蒿素來(lái)預(yù)防或延緩接觸致癌物的大鼠 中癌癥出現(xiàn)的有代表性的方法。材料和方法如實(shí)施例1中所述，類似地用致癌物DMBA處理雌性大鼠。將大鼠隨 機(jī)分成兩個(gè)處理組。在DMBA處理后的第二天將青蒿素(0.05%)混入一組動(dòng)物的食物中。 基于每天的攝食量估計(jì)每天攝取的青蒿素約為10mg/kg/天。對(duì)另一組動(dòng)物(對(duì)照組)定 期給予大鼠食物。結(jié)果致癌物處理后10周，用青蒿素飼喂的動(dòng)物中沒(méi)有一只出現(xiàn)腫瘤，而對(duì)照組 動(dòng)物中有43%存在腫瘤，正如表2和附圖2中所示。表2.飼喂青蒿素的動(dòng)物中腫瘤的發(fā)生
盡管已經(jīng)舉例說(shuō)明和描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，但是可以理解能夠?qū)ζ溥M(jìn)行 各種改變而不會(huì)脫離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍。
權(quán)利要求
自由基發(fā)生劑在制備用于預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的藥物中的用途。
2.權(quán)利要求1所述的用途，其中所述的自由基發(fā)生劑是選自下組的內(nèi)過(guò)氧化物化合 物倍半萜內(nèi)酯類及其醇類、碳酸酯類、酯類、醚類和磺酸酯類、阿替夫林、1，2，4_三噁烷類 和1,2,4,5-四噁烷類。
3.權(quán)利要求2所述的用途，其中所述的內(nèi)過(guò)氧化物化合物為下列通式的化合物及其藥 物上可接受的鹽 其中R為 其中R1為氫、羥基、烷基或具有下列通式 其中R2為烷基或芳基，且η為1-6。
4.權(quán)利要求2所述的用途，其中所述的內(nèi)過(guò)氧化物化合物為倍半萜化合物，其選自青蒿素、二氫青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚、青蒿琥酯、阿替林酸和二氫青蒿素丙基碳酸酯組成的 組。
5.權(quán)利要求4所述的用途，其中所述的內(nèi)過(guò)氧化物化合物為青蒿素。
6.權(quán)利要求4所述的用途，其中所述的內(nèi)過(guò)氧化物化合物為蒿甲醚。
7.權(quán)利要求2所述的用途，其中每天對(duì)受試者給予約0.1-約20mg/kg的內(nèi)過(guò)氧化物化 合物。
8.權(quán)利要求2所述的用途，其中通過(guò)口服或局部給予所述的內(nèi)過(guò)氧化物化合物。
9.權(quán)利要求1所述的用途，其中所述的自由基發(fā)生劑為青蒿素，并且所述藥物處于粉 齊U、片劑或膠囊形式，用于以約0. l-20mg/kg/天的劑量給藥。
10.權(quán)利要求1所述的用途，其中所述自由基發(fā)生劑可以對(duì)癌癥顯現(xiàn)提供延緩作用。
11.權(quán)利要求1所述的用途，其中所述自由基發(fā)生劑可以降低癌癥顯現(xiàn)的可能性。
12.權(quán)利要求1所述的用途，其中所述藥物中還包含胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑。
13.權(quán)利要求12所述的用途，其中所述的胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑選自鐵膽鹽、硫酸亞鐵甘氨酸、 葡聚糖鐵復(fù)合物、胨化鐵、山梨醇鐵、氧化鐵、含糖鐵、全鐵蛋白和全運(yùn)鐵蛋白組成的組。
14.一種試劑盒，其中包括自由基發(fā)生劑和使用自由基發(fā)生劑預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的 技術(shù)說(shuō)明書(shū)。
15.權(quán)利要求14所述的試劑盒，其中所述的自由基發(fā)生劑為內(nèi)過(guò)氧化物化合物，其選 自倍半萜內(nèi)酯類及其醇類、碳酸酯類、酯類、醚類和磺酸酯類、阿替夫林、1，2，4_三噁烷類和 1，2，4，5_四噁烷類組成的組。
16.權(quán)利要求15所述的試劑盒，其中所述的內(nèi)過(guò)氧化物化合物為青蒿素.
17.權(quán)利要求15所述的試劑盒，其中所述的內(nèi)過(guò)氧化物化合物為蒿甲醚.
18.權(quán)利要求14所述的試劑盒，其中進(jìn)一步包括鐵強(qiáng)化劑和使用該鐵強(qiáng)化劑的技術(shù)說(shuō) 明書(shū)。
全文摘要
本發(fā)明提供了通過(guò)對(duì)受試者給予自由基發(fā)生劑來(lái)預(yù)防或延緩癌癥發(fā)展的方法。有代表性的自由基發(fā)生劑包括內(nèi)過(guò)氧化物化合物，諸如含有內(nèi)過(guò)氧化物的倍半萜化合物，諸如青蒿素及其類似物、阿替夫林及其類似物、1，2，4-三噁烷類和1，2，4，5-四噁烷類?？梢酝ㄟ^(guò)給予鐵鹽或復(fù)合物來(lái)提高胞內(nèi)鐵濃度。
文檔編號(hào)A61K9/20GK101843904SQ20101016571
公開(kāi)日2010年9月29日 申請(qǐng)日期2003年6月6日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月6日
發(fā)明者H·C·萊, N·P·辛格 申請(qǐng)人:華盛頓大學(xué)