專利名稱：虎眼萬年青總黃酮的制備方法及在抗腫瘤和抗炎止痛藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及從中藥虎眼萬年青中提取制備總黃酮的方法，虎 眼萬年青中提取制備總黃酮在治療各種癌癥和人體各系統(tǒng)、器官、組織各種炎性病變的抗 炎鎮(zhèn)痛及創(chuàng)傷，手術(shù)，骨折，癌癥疼痛藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
虎眼萬年青(Omithogalum caudatum Ait)又名珍珠草、胡連萬年青、海蔥、葫蘆 蘭，為百合科虎眼萬年青屬多年生草木植物。主要分布于東半球溫帶地區(qū)，原產(chǎn)于非洲南 部，我國(guó)北方有栽培。該藥味甘、微寒，歸肝、脾經(jīng)。具有清熱解毒，消堅(jiān)散結(jié)的功能。主要 用于抗炎消毒，治療肝病、肝癌、膽囊炎癥等，具有極高的藥用價(jià)值，民間用其全草或球莖入 藥。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，該植物內(nèi)含虎眼萬年青皂苷，生物堿、黃酮、多糖、香豆素、苯甲酸、單 糖、多種氨基酸，大量微量元素及低聚糖高級(jí)烷烴混合物等各類化學(xué)成分。其中虎眼萬年青 皂苷、生物堿、黃酮既是抗腫瘤的藥效成分，又有較強(qiáng)的抗炎作用；其中的多糖組分能增強(qiáng) 人體體液免疫和細(xì)胞免疫功能，與人參皂苷Rgl相近。目前，抗炎鎮(zhèn)痛藥品種繁多，是臨床應(yīng)最多的一類藥。而其中多數(shù)為化學(xué)藥劑，雖 然看炎鎮(zhèn)痛作用明顯，但可引起多種不良反應(yīng)，具有較強(qiáng)的副作用。因此應(yīng)用具有較強(qiáng)抗炎 鎮(zhèn)痛作用，而無毒副作用的虎眼萬年青總黃酮為原料的中藥制劑，為臨床抗炎陣痛提供了 一種新的選擇。癌癥是危害人類健康的重大疾病之一，在各種類型的癌癥當(dāng)中以肺癌、胃癌、肝癌 等發(fā)病率較高。而闡明內(nèi)源性低分子抑瘤物的化學(xué)本質(zhì)是這一領(lǐng)域研究的核心問題。首 先，從植物中篩選出的活性化成分可作為化學(xué)治療的補(bǔ)充，其次，小分子抑瘤物作用機(jī)理的 研究有助于對(duì)腫瘤本質(zhì)認(rèn)識(shí)的深入及加強(qiáng)抗腫瘤活性物質(zhì)篩選的針對(duì)性。在采用現(xiàn)代藥效學(xué)研究方法對(duì)虎眼萬年青的有效成分進(jìn)行篩選中，確定了具有抗 腫瘤和抗炎止痛活性的有效部位我虎眼萬年青總黃酮，以往虎眼萬年青的活性成分制備方 法多為有機(jī)溶劑直接冷浸、回流、超臨界萃取等，尚未有對(duì)虎眼萬年青中黃酮類有效成分有 針對(duì)性制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供了一種虎眼萬年青總黃酮的制備方法，克服現(xiàn)有的虎眼萬年 青活性成分提取方法總黃酮所占提取物成分比例低的不足。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供虎眼萬年青總黃酮的藥用用途。本發(fā)明的虎眼萬年青總黃酮的制備方法包括以下步驟(1)將虎眼萬年青干燥粉碎；(2)將步驟(1)得到的粗粉用濃度為濃度為10% -90%，乙醇或甲醇回流提取或浸漬提取或滲漉提取，合并提取液，減壓濃縮；(3)將步驟(2)得到的濃縮液加水沉淀后離心，上清液備用(4)將步驟(3)得到的上清液上大孔吸附樹脂或聚酰胺柱；(5)用水或稀乙醇洗脫步驟(4)大孔吸附樹脂或聚酰胺柱，去雜后，用乙醇梯度洗 脫，乙醇梯度洗脫范同為20% -80%。(6)收集步驟(5)得到的乙醇洗脫液，減壓，濃縮，干燥，粉碎后得到虎眼萬年青總 黃酮提取物?；⒀廴f年青總黃酮的含量測(cè)定方法及其質(zhì)量要求采用紫外分光光度法，以NaNO2-Al (NO)3-NaOH顯色測(cè)定總黃酮含量，以蘆丁計(jì)，黃 酮類化合物的總含量不低于50%。以上提取方法得到的總黃酮主要用于制備抗腫瘤和抗炎止痛藥物。本發(fā)明的有益效果是采用現(xiàn)代藥效學(xué)研究方法對(duì)虎眼萬年青的有效成分進(jìn)行篩 選，確定了具有抗腫瘤和抗炎止痛活性的有效部位，進(jìn)而經(jīng)過工藝研究確定了虎眼萬年青 總黃酮的制備方法。得到無毒副作用的虎眼萬年青總黃酮為原料的中藥制劑，為臨床抗腫 瘤和抗炎陣痛提供了一種新的選擇。本發(fā)明提取物的藥效試驗(yàn)1、虎眼萬年青總黃酮對(duì)醋酸所致小鼠扭體的影響用ICR小鼠50只，雄性，體重20_22g，按體重隨機(jī)均分為5組，S卩模型組，灌胃給 予同體積蒸餾水；陽(yáng)性藥(阿司匹林)組，灌胃給予阿司匹林0. 2g/kg ；虎眼萬年青總黃酮 5g/kg、10g/kg、20g/kg，灌胃給藥。各組給藥容積均為0. 2ml/10g。每天給藥1次，連續(xù)5 天。末次給藥后lh，各組小鼠腹腔注射0. 6%冰醋酸0. lml/10g，觀察15min內(nèi)小鼠的扭體 次數(shù)，計(jì)算抑制率。抑制率(％ )=(對(duì)照組小鼠平均扭體次數(shù)-給藥組小鼠平均扭體次數(shù))/對(duì)照組 小鼠平均扭體次數(shù)X100%實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用組間t檢驗(yàn)，比較各組間的差異，計(jì)算均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差(元士 s )。鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果虎眼萬年青總黃酮提取物20g/kg、10g/kg劑量組對(duì)醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)有 明顯抑制作用，與模型組相比有顯著性差異(P <0.001或P <0.05)。結(jié)果見表1。表1 虎眼萬年青總黃酮對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響
權(quán)利要求
虎眼萬年青總黃酮的制備方法，其特征是包括以下步驟(1)將虎眼萬年青干燥粉碎；(2)將步驟(1)得到的粗粉用濃度為濃度為10％ 90％，乙醇或甲醇回流提取或浸漬提取或滲漉提取，合并提取液，減壓濃縮；(3)將步驟(2)得到的濃縮液加水沉淀后離心，上清液備用(4)將步驟(3)得到的上清液上大孔吸附樹脂或聚酰胺柱；(5)用水或稀乙醇洗脫步驟(4)大孔吸附樹脂或聚酰胺柱，去雜后，用乙醇梯度洗脫，乙醇梯度洗脫范同為20％ 80％；(6)收集步驟(5)得到的乙醇洗脫液，減壓，濃縮，干燥，粉碎后得到虎眼萬年青總黃酮提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的虎眼萬年青總黃酮的制備方法，其特征是在用乙醇浸漬法提取時(shí)，虎眼萬年青粉碎至20-60目，所用乙醇體積比濃度80 %，冷浸 兩次，每次15天，合并浸漬液，減壓濃縮至，70°C時(shí)相對(duì)密度1. 2的稠膏，按每1. Okg原料所 得稠膏加600-800毫升水的比例加水?dāng)嚢?，冷卻沉淀，置離心機(jī)中，在1200-1600rad/min條 件下沉降離心15-30分鐘，取上清液備用，在用大孔吸附樹脂或聚酰胺柱步驟中，按與所用 虎眼萬年青原料重量比1 2的比例裝柱，將上一步驟所得上清液上樣，先用2-4倍柱體積 去離子水洗脫，再用4-6倍柱體積20% -60%乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇洗脫液，50-700C 減壓濃縮，50-70°C干燥，得虎眼萬年青總黃酮提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的虎眼萬年青總黃酮的制備方法，其特征是在采用用乙醇加熱回流提取方法中，虎眼萬年青粉碎粉碎至20-60目，所用乙醇體積 比濃度80 %，加熱回流提取2次，合并提取液，減壓濃縮至，700C時(shí)相對(duì)密度1. 2的稠膏， 按每1.0kg原料所得稠膏加600-800毫升水的比例加水?dāng)嚢瑁鋮s沉淀，置離心機(jī)中在 1200-1600rad/min條件下沉降離心15-30分鐘，取上清液備用，在用大孔吸附樹脂或聚酰 胺柱步驟中，按與所用虎眼萬年青原料重量比1 1的比例裝柱，將上一步驟所得的上清液 上樣，先用2-4倍柱體積去離子水洗脫，再用4-6倍柱體積20% -70%乙醇進(jìn)行梯度洗脫， 收集乙醇洗脫液，50-70°C減壓濃縮，50-70°C干燥，得虎眼萬年青總黃酮提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的虎眼萬年青總黃酮的制備方法，其特征是在采用乙醇滲漉提取方法中，虎眼萬年青粉碎粉碎至20-60目，乙醇體積比濃度60%， 浸漬48小時(shí)后，滲漉提取，滲漉至流出液色淺，黃酮反應(yīng)不明顯為止，減壓濃縮至，70°C時(shí) 相對(duì)密度1. 2的稠膏，按每1. Okg原料所得稠膏加600-800毫升水的比例加水?dāng)嚢瑁鋮s沉 淀，置離心機(jī)中在1200-1600rad/min條件下沉降離心15-30分鐘，取上清液備用；在使用大 孔吸附樹脂或聚酰胺柱步驟中，按與所用虎眼萬年青原料重量比1 1的比例裝柱，將上一 步驟所得上清液上樣，先用2-4倍柱體積去離子水洗脫，再用4-6倍柱體積30% -80%乙醇 進(jìn)行梯度洗脫.收集乙醇洗脫液，50-70°C減壓濃縮，50-70°C干燥，得虎眼萬年青總黃酮提 取物。
5.虎眼萬年青總黃酮在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
6.虎眼萬年青總黃酮在制備抗炎止痛藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
虎眼萬年青總黃酮的制備方法及在抗腫瘤和抗炎止痛藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，克服現(xiàn)有的提取方法總黃酮所占提取物成分比例低的不足。包括以下步驟將虎眼萬年青干燥粉碎；乙醇或甲醇回流提取或浸漬提取或滲漉提取，合并提取液，減壓濃縮；濃縮液加水沉淀后離心，大孔吸附樹脂或聚酰胺柱；用水或稀乙醇洗脫，去雜，用乙醇梯度洗脫，收集洗脫液，減壓，濃縮，干燥，粉碎后得到虎眼萬年青總黃酮提取物。本發(fā)明的有益效果是對(duì)虎眼萬年青的有效成分進(jìn)行篩選，確定了具有抗腫瘤和抗炎止痛活性的有效部位，確定了虎眼萬年青總黃酮的制備方法。得到無毒副作用的虎眼萬年青總黃酮為原料的中藥制劑，為臨床抗腫瘤和抗炎陣痛提供了一種新的選擇。
文檔編號(hào)A61K36/896GK101972385SQ20101017734
公開日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2010年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月20日
發(fā)明者修淶貴, 孫佳明, 高陸 申請(qǐng)人:修正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司