專利名稱：異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑及其制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥制劑技術(shù)領域，涉及一種治療癌癥的異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉 針劑和異長春花堿隱形脂質(zhì)體可工業(yè)化制備技術(shù)。本發(fā)明通過親水基修飾脂質(zhì)體給藥，提 高藥物的靶向性能，增大治療指數(shù)、降低藥物的毒性及對血管的刺激性。
背景技術(shù)：
異長春花堿(Vinorelbine，VRB)是一個半合成的二聚吲哚類生物堿，可以通過作 用于腫瘤細胞微管蛋白而干擾腫瘤細胞代謝，臨床主要用于治療非小細胞肺癌、急性淋巴 細胞白血病、轉(zhuǎn)移性乳腺癌，也用于何杰金及非何杰金淋巴瘤，軟組織肉瘤及神經(jīng)母細胞瘤 等。異長春花堿水溶性差、口服生物利用度低，需靜脈注射，靜脈注射后能迅速分布全身。 其注射后對神經(jīng)系統(tǒng)及注射局部正常組織的刺激性較大，正常劑量時表現(xiàn)出明顯的毒副作 用，從而限制了藥物的臨床應用。這樣就迫切需要改變異長春花堿的劑型，以增加溶解度， 提高治療指數(shù)，降低藥物在治療范圍內(nèi)所引起的毒副作用，提高藥物的臨床治療范圍。脂質(zhì)體產(chǎn)品在世界范圍首次上市的是美國Sequus公司的楷萊(Doxil，阿霉素脂 質(zhì)體，1995年上市)。由于本身所具有的機體親和性能、靶向特性以及克服抗癌藥物的毒副 作用，脂質(zhì)體制劑在癌癥治療方面受到越來越多的關(guān)注。對脂質(zhì)體表面進行PEG層的結(jié)構(gòu) 修飾，其體內(nèi)外穩(wěn)定性將發(fā)生很大改變。從脂質(zhì)體形態(tài)學上觀察，聚乙二醇在脂質(zhì)體表面交 錯覆蓋，形成有效的空間位阻和血流屏障，這種厚的立體位阻層，阻礙了 apoA-1的結(jié)合和 破壞，延長了在體循環(huán)中的時間，提高了半衰期，使脂質(zhì)體有充分時間能夠被腫瘤組織和炎 癥部位所充分吸收；減少了被RES攝取的速度和程度，達到“隱形”效果。從上世紀90年代開始長春花屬生物堿的脂質(zhì)體制劑研究。目前國內(nèi)已有將長春 花屬生物堿制成靜脈注射用微乳新制劑、普通脂質(zhì)體以及納米膠束的專利。目前未發(fā)現(xiàn)有 采用注入法將異長春花堿制備成隱性脂質(zhì)體凍干粉針劑的專利。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷而提供異長春花堿隱形脂質(zhì)體 凍干粉針劑及其可工業(yè)化制備方法，特別是提供毒副作用低、作用時間長、趨靶性好的給藥 載體。通過靜脈注射給藥，有效保證異長春花堿進入血管通透性大的腫瘤部位，更好發(fā)揮其 癌變部位靶向作用，降低藥物的毒副作用。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)異長春花堿隱形指質(zhì)體凍干粉針劑，是由異長春花堿、磷脂材料、膽固醇、脂質(zhì)雙 層膜修飾材料配制成，其配料比為異長春花堿10g 磷質(zhì)材料20_100g 膽固醇10_60g 脂質(zhì)雙層膜修材料l_6g 凍干保護劑10_500g。上述配料比可優(yōu)選為10 40-60 20-30 40-60 2-4 20-300。上述磷脂材料包括天然磷脂或者合成磷脂，其中天然磷脂選用蛋黃卵磷脂、大豆 卵磷脂，合成磷脂選用二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油，氫化卵磷脂(如HSPC等)、十六烷基磷脂酰膽 堿的一種或多種，優(yōu)選所述磷脂材料包括大豆卵磷脂和氫化卵磷脂的其中一種或兩者的混 合物。上述脂質(zhì)雙層膜修飾材料可以是PEG2Q(i(i-DSPE(二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的聚乙 二醇衍生物)、GM-1 (神經(jīng)節(jié)苷脂)、PEG2_-DPPC(聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰膽堿)、 PEG2_-PE (磷脂酰乙醇胺的聚乙二醇衍生物)、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、泊洛沙姆188的 一種或多種，優(yōu)選所述脂質(zhì)雙層膜修飾材料包括PEG2_-DSPE和PEG2_-PE的其中一種或兩 者的混合物。上述的凍干保護劑包括蔗糖、海藻糖、甘露糖、氯化鈉、葡萄糖、乳糖、山梨醇的其 中一種或一種以上混合物。異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑的制備方法，包括下述工藝步驟1、取異長春花堿10g用乙醚或氯仿溶解，加入20_100g磷質(zhì)材料、10-60膽固醇、 l_6g脂質(zhì)雙層膜修材料，攪拌使溶解，成澄明溶液；2、上述溶液40°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機溶劑，保持水化溫度40°C，將形成的 均勻白色薄膜加入20-300g緩沖液中，水化30min，呈乳白色混懸液后，加入凍干保護劑 10-500g，超聲 20min(50KHz)；3、通入N2去除有機溶劑；4、所得脂質(zhì)體混懸液通過高壓乳勻3 6次，操作壓力5 20kpsi，0. 22 y m微孔 濾膜濾過，充N2，分裝于容器內(nèi)，鈷-60輻射滅菌，冷凍干燥，即得。異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑的制備方法，其特征在于采用逆相蒸發(fā)法，具 體步驟1)將異長春花堿10g、磷脂材料20_100g、膽固醇10_60g、脂質(zhì)雙層膜修飾材料 l_6g，用有機溶劑(乙醚或氯仿)溶解，并加熱至50°C，制備有機相。2)取緩沖液加熱至50°C，制備水相，將有機相加入水相中，超聲30min(50KHz)混 合成乳劑。3)上述乳劑40°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機溶劑，得乳白色脂質(zhì)體混懸液，加入 凍干保護劑，超聲20min(50KHZ)使其溶解。4)所得脂質(zhì)體混懸液通過高壓乳勻3 6次，操作壓力5 20kpsi，0. 22 y m微孔 濾膜濾過，充N2，分裝于容器內(nèi)，鈷-60輻射滅菌，冷凍干燥，即得。異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑的可工業(yè)化制備技術(shù)，其特征在于，采用注入 法，具體步驟1)將異長春花堿10g用有機溶劑(乙醚或氯仿)溶解，加入磷脂材料20_100g、膽 固醇10-60g、脂質(zhì)雙層膜修飾材料l_6g，攪拌使溶解，成澄明溶液，50-60°C保存。2)通過具有細孔徑的針頭或管道以液流方式注入到緩沖溶液(50-60°C水浴) 中，控制注入速度，同時磁力或機械攪拌，控制攪拌速度，所得混懸液加入凍干保護劑，超聲 20min(50KHz)使其溶解。3)通入N2去除有機溶劑。4)所得混懸液高壓乳勻3 6次，0. 22 ii m微孔濾膜濾過，充N2，分裝于容器內(nèi)， 鈷-60輻射滅菌，冷凍干燥，即得。
上述制得的異長春花堿隱形脂質(zhì)體粒徑為50 220nm。異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑的制備過程中水化介質(zhì)所采用的緩沖液可以 為檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液、磷酸鹽緩沖液(PH6. 8)、磷酸鹽緩沖液(pH7. 6)、醋酸鹽緩沖 液的其中一種。優(yōu)選磷酸鹽緩沖液(PH7. 6)。異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑的制備過程可以采用高壓乳勻1-6次，優(yōu)選 2-4次，最優(yōu)選3次。異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑的制備可以采用薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、注 入法，優(yōu)選注入法作為工業(yè)大生產(chǎn)的制備方法。本發(fā)明制劑可用生理鹽水或葡萄糖注射液進行分散，臨床應用時用介質(zhì)分散后以 供病人靜脈滴注。本發(fā)明提供的異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑和其可工業(yè)化制備技術(shù)具有以 下優(yōu)點1)、脂質(zhì)體包封率高，放置過程粒徑穩(wěn)定、不易沉降聚集。2)、制劑治療指數(shù)大，安全 指數(shù)高。與市場上現(xiàn)售的異長春花堿注射液相比，降低毒副作用，同時療效有提高。3)、制 備技術(shù)可工業(yè)化實施，制成的脂質(zhì)體溶液粒徑適宜，靶向性能好，符合藥典要求。
具體實施例方式實施例1 異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑，是由異長春花堿lOOmg，蛋黃卵磷脂500mg， 膽固醇 200mg，PEG2000-DSPE 30mg，海藻糖 lOOOmg 制備成。制備方法將異長春花堿100mg溶于乙醚中，加入磷脂材料蛋黃卵磷脂500mg、膽固醇200mg、 PEG2_-DSPE30mg，攪拌使溶解，成澄明溶液。上述溶液40°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去乙醚，保 持水化溫度40°C，將形成的均勻白色薄膜加入磷酸鹽緩沖液(pH7.6)中，水化30min，呈乳 白色混懸液后，加入海藻糖lOOOrng，超聲20min(50KHz)使其溶解。超聲完成后通入隊去除 有機溶劑。所得混懸液通過高壓乳勻3次，操作壓力5 20kpsi，0. 22 ym微孔濾膜濾過， 充N2，分裝于西林瓶內(nèi)，鈷-60輻射滅菌，冷凍干燥，即得。實施例2 異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑，是由異長春花堿100mg，氫化卵磷脂500mg， 膽固醇200mg，PEG2000-PE30mg和海藻糖lOOOmg制備成。制備方法將異長春花堿溶于氯仿中，加入氫化卵磷脂500mg、膽固醇200mg、PEG2__PE30mg， 攪拌使溶解，成澄明溶液。上述溶液40°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去氯仿，保持水化溫度40°C， 將形成的均勻白色薄膜加入磷酸鹽緩沖液(PH7.6)中，水化30min，呈乳白色混懸液后，加 入海藻糖lOOOmg，超聲20min(50KHZ)使其溶解。超聲完成后通入N2去除有機溶劑。所得 混懸液通過高壓乳勻3次，操作壓力5 20kpsi，0.22um微孔濾膜濾過，充N2，分裝于西林 瓶內(nèi)，鈷-60輻射滅菌，冷凍干燥，即得。實施例3:異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑，是由異長春花堿100mg，蛋黃卵磷脂300mg， 氫化卵磷脂300mg，膽固醇300mg，PEG2000-DSPE30mg和海藻糖500mg，蔗糖400mg制備成。
制備方法將異長春花堿lOOmg溶于氯仿中，加入蛋黃卵磷脂300mg、氫化卵磷脂300mg、膽固 醇、PEG2_-DSPE30mg，攪拌使溶解，成澄明溶液。上述溶液40°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去氯仿， 保持水化溫度40°C，將形成的均勻白色薄膜加入磷酸鹽緩沖液(pH7.6)中，水化30min，呈 乳白色混懸液后，加入蔗糖400mg，超聲20min(50KHz)使其溶解。超聲完成后通入N2去除 有機溶劑。所得混懸液通過高壓乳勻3次，操作壓力5 20kpsi，0. 22 ym微孔濾膜濾過， 充N2，分裝于西林瓶內(nèi)，鈷-60輻射滅菌，冷凍干燥，即得。實施例4 異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑，是由異長春花堿lOOmg，氫化卵磷脂300mg， 蛋黃卵磷脂200mg，膽固醇200mg，PEG2000-PE 30mg,甘露糖400gm和蔗糖400mg制備成。制備方法將異長春花堿lOOmg、磷脂材料300g、膽固醇200mg、PEG2000-PE30mg用乙醚溶解， 并加熱至50°C，制備有機相；取緩沖鹽溶液加熱至50°C，制備水相，將有機相加入水相中， 超聲30min(50KHZ)混合成乳劑。上述乳劑40°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機溶劑，得乳白色 脂質(zhì)體混懸液，加入甘露糖和蔗糖400mg，超聲20min(50KHZ)使其溶解。再通過高壓乳勻3 次，操作壓力5 20kpsi，0. 22 um微孔濾膜濾過，充N2，分裝于西林瓶內(nèi)，鈷_60輻射滅菌， 冷凍干燥，即得。實施例5 異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑，是由異長春花堿lOOmg，蛋黃卵磷脂500mg， 膽固醇200mg，PEG2000-DSPE 30mg和海藻糖lOOOmg制備成。制備方法將異長春花堿用乙醚溶解，加入磷脂材料、膽固醇、PEG2_-DSPE并加熱至50°C，攪 拌使其溶解，制備有機相；取緩沖鹽溶液加熱至50°C，制備水相，將有機相加入水相中，超 聲30min(50KHZ)混合成乳劑。上述乳劑40°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機溶劑，得乳白色脂 質(zhì)體混懸液，加入海藻糖，攪拌使其溶解。通過高壓乳勻3次，操作壓力5 20kpsi，0. 22um 微孔濾膜濾過，充N2，分裝于西林瓶內(nèi)，鈷-60輻射滅菌，冷凍干燥，即得。實施例6 異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑，是由異長春花堿lOOmg，氫化卵磷脂500mg， 膽固醇200mg，PEG2000-PE30mg和海藻糖lOOOmg制備成。制備方法將異長春花堿、磷脂材料、膽固醇、PEG2_-PE，用氯仿溶解，并加熱至50°C，制備有 機相；取緩沖液加熱至50°C，制備水相，將有機相加入水相中，超聲30min (50KHz)混合成乳 劑。上述乳劑40°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機溶劑，得乳白色脂質(zhì)體混懸液，加入海藻糖。 通過高壓乳勻2 4次，操作壓力5 20kpsi，0.22um微孔濾膜濾過，充N2，分裝于西林瓶 內(nèi)，鈷-60輻射滅菌，冷凍干燥，即得。實施例7 異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑，是由異長春花堿100g，蛋黃卵磷脂600g，膽 固醇300g，PEG2(1(1(1-DSPE30g，海藻糖500g和蔗糖300g制備成。制備方法
將處方量異長春花堿、蛋黃卵磷脂、膽固醇、PEG2_-PE加入乙醚，攪拌使溶解，成 澄明溶液。通過具有細孔徑的管道以液流方式注入到磷酸鹽緩沖液中，控制注入速度為 10%體積每分鐘，同時400rpm機械攪拌，通入N2去除有機溶劑。所得乳白色脂質(zhì)體混懸液 加入海藻糖攪拌使溶解，再通過高壓乳勻5次，操作壓力5 20kpsi，0. 22um微孔濾膜濾 過，充N2，包裝，鈷-60輻射滅菌，冷凍干燥，即得。實施例8:異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑，是由異長春花堿100g，蛋黃卵磷脂600g，膽 固醇300g，PEG2000-PE30g,甘露糖500g和蔗糖500g制備成。制備方法將異長春花堿用乙醚溶解，加入蛋黃卵磷脂、膽固醇、PEG2_-DSPE，攪拌使溶解，成 澄明溶液，50-60°C保溫。通過具有細孔徑的管道以液流方式注入到緩沖液(50-60°C水浴) 中，速度5%體積每分鐘，同時以300rpm速度機械攪拌，通入N2去除有機溶劑。所得乳白色 脂質(zhì)體混懸液加入甘露糖和蔗糖，再通過高壓乳勻3次，操作壓力5 20kpsi，0. 22um微 孔濾膜濾過，充N2，包裝，鈷-60輻射滅菌，冷凍干燥，即得。實施例9 異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑，是由異長春花堿100g，氫化卵磷脂300g，蛋 黃卵磷脂200g，膽固醇200g，PEG2_-PE 30g，甘露糖400g和蔗糖400g制備成。制備方法將異長春花堿用乙醚溶解，加入蛋黃卵磷脂、膽固醇、PEG2_-DSPE，攪拌使溶解，成 澄明溶液，50-60°C保溫。通過具有細孔徑的管道以液流方式注入到緩沖液(50-60°C水浴) 中，速度5%體積每分鐘，同時以300rpm速度機械攪拌。通入隊去除有機溶劑。所得乳白 色脂質(zhì)體混懸液加入甘露糖和蔗糖，再通過高壓乳勻3次，操作壓力5 20kpsi，0. 22um 微孔濾膜濾過，充N2，包裝，鈷-60輻射滅菌，冷凍干燥，即得。
權(quán)利要求
異長春花堿隱形指質(zhì)體凍干粉針劑，其特征在于是由異長春花堿、磷脂材料、膽固醇、脂質(zhì)雙層膜修飾材料配制成，其配料比為異長春花堿10g磷質(zhì)材料20-100g膽固醇10-60g脂質(zhì)雙層膜修材料1-6g凍干保護劑10-500g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的異長春花堿隱形指質(zhì)體凍干粉針劑，其特征在于所述磷脂材 料包括天然磷脂或者合成磷脂，其中天然磷脂選用蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂，合成磷脂選用 二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、 二硬脂酰磷脂酰甘油，氫化卵磷脂、十六烷基磷脂酰膽堿中的一種或多種混合物；所述脂質(zhì) 雙層膜修飾材料為PEG2(1(1(1-DSPE、GM-1、PEG2(1(1(1-DPPC、PEG2Q(1(1-PE、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、 泊洛沙姆188中的一種或多種混合物；所述的凍干保護劑包括蔗糖、海藻糖、甘露糖、氯化 鈉、葡萄糖、乳糖、山梨醇的一種或一種以上混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑的制備方法，包括下述工 藝步驟①取異長春花堿IOg用乙醚或氯仿溶解，加入20-100g磷質(zhì)材料、10-60膽固醇、l-6g 脂質(zhì)雙層膜修材料，攪拌使溶解，成澄明溶液；②、上述溶液40°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機溶劑，保持水化溫度40°C，將形成的 均勻白色薄膜加入20-300g緩沖液中，水化30min，呈乳白色混懸液后，加入凍干保護劑 10-500g,50KHz 超聲 20min ；③、通入N2去除有機溶劑；④、所得脂質(zhì)體混懸液通過高壓乳勻3 6次，操作壓力5 20kpsi，0.22μπι微孔濾 膜濾過，充N2，分裝于容器內(nèi)，鈷-60輻射滅菌，冷凍干燥，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑的制備方法，其特征在于 采用逆相蒸發(fā)法，具體步驟①將異長春花堿10g、磷脂材料20-100g、膽固醇10-60g、脂質(zhì)雙層膜修飾材料l-6g，用 有機溶劑(乙醚或氯仿)溶解，并加熱至50°C，制備有機相；②取緩沖液加熱至50°C，制備水相，將有機相加入水相中，50KHz超聲30min混合成乳劑；③上述乳劑40°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機溶劑，得乳白色脂質(zhì)體混懸液，加入凍干保 護劑，超聲20min(50KHZ)使其溶解；④所得脂質(zhì)體混懸液通過高壓乳勻3 6次，操作壓力5 20kpsi，0.22 μ m微孔濾膜 濾過，充N2,分裝于容器內(nèi)，鈷-60輻射滅菌，冷凍干燥，即得；
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑的制備方法，其特征 在于，采用注入法，具體步驟①將異長春花堿IOg用有機溶劑乙醚或氯仿溶解，加入磷脂材料20-100g、膽固醇 10_60g、脂質(zhì)雙層膜修飾材料l_6g，攪拌使溶解，成澄明溶液，50-60°C保存；②通過具有細孔徑的針頭或管道以液流方式注入到緩沖溶液在50-60°C水浴中，控制 注入速度，同時磁力或機械攪拌，控制攪拌速度，所得混懸液加入凍干保護劑，50KHz超聲 20min使其溶解；③通入N2去除有機溶劑；④所得混懸液高壓乳勻3 6次，0.22 μ m微孔濾膜濾過，充N2,分裝于容器內(nèi)，鈷_60輻射滅菌，冷凍干燥，即得；上述制得的異長春花堿隱形脂質(zhì)體粒徑為50 220nm ；異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑的制備過程中水化介質(zhì)所采用的緩沖液可以為檸 檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液、磷酸鹽緩沖液(PH6. 8)、磷酸鹽緩沖液(pH7. 6)、醋酸鹽緩沖液的 其中一種；異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑的制備過程可以采用高壓乳勻1-6次；異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑的制備可以采用薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、注入法。
全文摘要
異長春花堿隱形脂質(zhì)體凍干粉針劑，其特征在于是由異長春花堿、磷脂材料、膽固醇、脂質(zhì)雙層膜修飾材料配制成，其配料比為異長春花堿10g磷質(zhì)材料20-100g膽固醇10-60g脂質(zhì)雙層膜修材料1-6g凍干保護劑10-500g。本發(fā)明具有以下優(yōu)點1)脂質(zhì)體包封率高，放置過程粒徑穩(wěn)定、不易沉降聚集。2)制劑治療指數(shù)大，安全指數(shù)高。與市場上現(xiàn)售的異長春花堿注射液相比，降低毒副作用，同時療效有提高。3)制備技術(shù)可工業(yè)化實施，制成的脂質(zhì)體溶液粒徑適宜，靶向性能好，符合藥典要求。
文檔編號A61K47/28GK101849915SQ20101018306
公開日2010年10月6日 申請日期2010年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月26日
發(fā)明者劉玉強, 呂佳, 唐凌, 李學濤, 程嵐, 袁子民, 趙琳 申請人:遼寧中醫(yī)藥大學