專利名稱：一種負載季銨化殼聚糖和質(zhì)粒dna復合粒子的皮膚再生材料的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種基因增強型皮膚再生材料及其制備方法，具體說涉及一種復合季 銨化殼聚糖/質(zhì)粒DNA粒子的膠原-殼聚糖/硅橡膠雙層皮膚再生材料及其制備方法。
背景技術(shù)：
皮膚是人體最大的器官，主要由表皮層、真皮層和皮下組織構(gòu)成，同時含有豐富的 血管和神經(jīng)。日常生活中由于各種原因如創(chuàng)傷、燒傷、潰瘍、手術(shù)及先天性畸形等很容易造 成皮膚的缺損。皮膚組織雖然具有較強的再生能力，但是對于大面積的全層皮膚缺損，由于 真皮層的缺失，皮膚的再生能力明顯不足。治療全層皮膚缺損的關(guān)鍵是重建和再生真皮組 織，促進創(chuàng)面盡早封閉，避免微生物入侵等并發(fā)癥。迄今為止，自體皮移植仍然是臨床治療 全層皮膚缺損最有效的方法。但是該方法面臨著自體皮供應不足的缺點，如III度燒傷面積 超過30%時供皮部位就已不足。另一個常用的治療方法就是采用人工皮膚。目前國際市場 上人工皮膚有 Apligraf、Integra、Transcyte、AlloDerm 禾口 Dermagraft 等。膠原-殼聚糖/硅橡膠皮膚再生材料是由膠原/殼聚糖多孔支架和硅橡膠薄膜組 成的雙層結(jié)構(gòu)材料，其中膠原/殼聚糖多孔支架可以有效誘導缺損組織處細胞的遷移、增 殖和分化，原位誘導缺損真皮組織的再生；硅橡膠薄膜則起到了臨時表皮層的作用，可以有 效控制水分的揮發(fā)和防止細菌的侵入等，對創(chuàng)面起到了臨時保護作用。該皮膚再生材料所 采用的膠原和殼聚糖是具有良好生物相容性、低免疫原性和可降解性的天然高分子材料。皮膚再生材料血管化速度是影響其再生性能、決定材料移植成活率的關(guān)鍵。由于 皮膚再生材料中缺乏相互連通的血管網(wǎng)絡，難以實現(xiàn)與創(chuàng)面區(qū)血管的快速連接。在移植初 期，皮膚再生材料中的細胞所需要的營養(yǎng)物質(zhì)主要依靠擴散作用來實現(xiàn)。在血供實現(xiàn)以前， 皮膚再生材料中細胞的增殖和分化等功能常因營養(yǎng)成分的缺乏而受限，甚至導致細胞調(diào) 亡，從而影響其再生速度和存活率。目前的皮膚再生產(chǎn)品的血管化速率較慢，植入物完全血 管化一般需要幾周0 4周)的時間，增加了病人的住院時間和感染風險。因此，如何促 進皮膚再生材料的血管化速度，進而縮短創(chuàng)面缺血時間，提高移植存活率，是皮膚再生與修 復研究中亟待解決的關(guān)鍵問題。為了提高皮膚再生材料的血管化速度，采用在植入物上負載血管化因子如內(nèi)皮 細胞生長因子(VEGF)、血小板源性生長因子(PDGF)等方法，取得了積極的效果。但由于生 長因子不穩(wěn)定，容易降解，而且直接注射生長因子需要多次重復操作，帶來了極大的不便。 隨著基因治療技術(shù)的發(fā)展，用表達生長因子的基因代替生長因子成為一個可行的選擇。本發(fā)明結(jié)合基因治療與再生醫(yī)學的方法和技術(shù)，選擇具有良好生物相容性和生物 降解性能的天然生物大分子一季胺化殼聚糖為基因載體材料，與可表達促血管生成因子的 質(zhì)粒DNA復合，形成季胺化殼聚糖/DNA納米粒子；進一步將該粒子與膠原/殼聚糖組織工 程皮膚支架復合，利用該粒子對創(chuàng)面細胞進行原位轉(zhuǎn)染，實現(xiàn)促血管生成因子的可控持續(xù) 分泌，促進皮膚再生材料的血管化，最終獲得具有高移植成活率和良好再生修復效果的皮膚再生材料。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有快速血管化，可廣泛應用于創(chuàng)傷和燒傷等全層皮膚 缺損修復與再生的負載季銨化殼聚糖和質(zhì)粒DNA復合粒子的皮膚再生材料的制備方法。本發(fā)明提供的負載季銨化殼聚糖和質(zhì)粒DNA復合粒子的皮膚再生材料的制備方 法，包括如下步驟1)用磷酸鹽緩沖液或三蒸水分別配制濃度為1 20mg/mL的季銨化殼聚糖溶液和 濃度為0. 1 5mg/mL的質(zhì)粒DNA溶液；將季銨化殼聚糖溶液與質(zhì)粒DNA溶液等比混合，震 蕩均勻，靜置，制得季銨化殼聚糖/質(zhì)粒DNA粒子溶液；2)用質(zhì)量濃度為0. 3% 5%的乙酸溶液分別配制質(zhì)量濃度為0. !^ ！^的膠原 溶液和質(zhì)量濃度為0. 的殼聚糖溶液，將殼聚糖溶液滴入膠原溶液中，攪拌均勻、 真空脫泡，得到膠原-殼聚糖混合溶液，其中殼聚糖和膠原的質(zhì)量比為1 9 5 5;將 膠原-殼聚糖共混液注入模具中，采用冷凍-干燥法，在_5°C _50°C溫度下冷凍干燥，獲 得膠原-殼聚糖三維多孔支架；將膠原-殼聚糖三維多孔支架于質(zhì)量濃度為0. 05% 的戊二醛溶液中交聯(lián)1 48小時，反復清洗后，再次在_5°C _50°C溫度下冷凍干燥；3)將醫(yī)用膠粘劑以0. 05 0. 5mg/cm2的量均勻涂覆在厚度為0. 05 0. 2mm的硅 橡膠薄膜表面，然后將步驟幻制備好的膠原-殼聚糖三維多孔支架放在涂覆膠粘劑的硅橡 膠薄膜表面上，獲得膠原-殼聚糖/硅橡膠雙層支架。4)將步驟1)的季銨化殼聚糖/質(zhì)粒DNA粒子溶液逐滴加到膠原-殼聚糖/硅橡 膠雙層支架上，其中質(zhì)粒DNA與支架的重量比為0.5 100 10 100，室溫下孵化0. 2 2小時，在-5°C _50°C溫度下冷凍干燥，得到負載復合季銨化殼聚糖和質(zhì)粒DNA粒子的皮 膚再生材料。上述的醫(yī)用膠粘劑可以是α -氰基丙烯酸酯類膠粘劑或有機硅膠粘劑。所說的質(zhì) 粒DNA可以是表達血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)、血小板源性生長因子(PDGF)、酸性成纖 維細胞生長因子(aFGF)或堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的質(zhì)粒DNA。本發(fā)明制備的負載季銨化殼聚糖和質(zhì)粒DNA復合粒子的皮膚再生材料，其突出特 點是以可生物降解的膠原蛋白為主要原料，添加殼聚糖起促進交聯(lián)、增強與耐降解作用；通 過控制冷凍干燥條件，得到具有特定微結(jié)構(gòu)(孔徑、孔隙率等)的多孔支架。通過改變DNA 的種類和負載量，得到具有不同血管化速度的皮膚再生支架。結(jié)果表明該支架能夠有效促 進內(nèi)皮細胞的遷移、增殖和分化，促進成纖維細胞的浸入，具有良好的組織相容性。豬全層 創(chuàng)傷缺損實驗發(fā)現(xiàn)能夠快速血管化(10天)，超薄皮片移植后能較好成活；豬全層燒傷缺損 實驗發(fā)現(xiàn)14天即能充分血管化，超薄皮片移植后能較好成活。這種皮膚再生材料可作為組 織生長的臨時支架，促進創(chuàng)面的血管化，肉芽組織、內(nèi)皮細胞和成纖維細胞在多孔支架內(nèi)的 生長。這些長入的組織或細胞會分泌出相應的細胞外基質(zhì)進而分化成新的皮膚組織，促進 受損皮膚的再生。與此同時，外源性的膠原一殼聚糖多孔支架會隨著新生組織的不斷生長 而逐漸降解，并被機體吸收，最終得到的是與人體自身完全相似的皮膚組織。本發(fā)明選擇硅橡膠薄膜作為表皮層的模擬物，因為硅橡膠具有良好的生物相容 性，高的透氣性和可控透濕性能，同時具有良好的彈性和臨床易操作性等。這些特點賦予了硅橡膠薄膜的隔離功能、阻止細菌侵入功能、防止水分蒸發(fā)功能等，因此可以起到臨時表皮 層的作用，從而保證雙層皮膚支架的實用性。本發(fā)明為創(chuàng)傷、燒傷等深度皮膚缺損和慢性皮膚潰瘍的治療提供了一種性能良好 的皮膚替代物，可以顯著促進創(chuàng)面的愈合，減少瘢痕的增生，進而減輕病人的痛苦?？梢詮V 泛應用于創(chuàng)傷、燒傷和外科整形等方面。本發(fā)明制備方法簡單，材料來源廣泛，生產(chǎn)效率高， 適用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。與國外同類產(chǎn)品相比，本發(fā)明產(chǎn)品成本方面具有很大優(yōu)勢。


圖1是季銨化殼聚糖/質(zhì)粒DNA粒子的透射電鏡圖。圖2是膠原-殼聚糖支架表面形貌的掃描電鏡圖。圖3是負載了季銨化殼聚糖/質(zhì)粒DNA粒子的膠原-殼聚糖支架掃描電鏡圖。圖4是內(nèi)皮細胞在季銨化殼聚糖/質(zhì)粒DNA粒子的膠原-殼聚糖支架上培養(yǎng)3天 后的掃描電鏡圖。圖fe、5b、5c分別是負載了季銨化殼聚糖/pDNA-VEGF粒子的膠原-殼聚糖支架植 入創(chuàng)傷全層皮膚缺損7、10、14天后的大體觀察圖。圖6a、6b、6c分別是負載了季銨化殼聚糖/pDNA_PDGF粒子的膠原-殼聚糖支架植 入創(chuàng)傷全層皮膚缺損7、10、14天后的大體H&E圖。圖7分別是負載了季銨化殼聚糖/pDNA-PDGF粒子的膠原-殼聚糖支架植入創(chuàng)傷 全層皮膚缺損10天后超薄皮片移植42天后的H&E圖。圖fe、8b、8c分別是負載了季銨化殼聚糖/pDNA-aFGF粒子的膠原-殼聚糖支架植 入燒傷全層皮膚缺損7、14、21天后的大體觀察圖。圖9a、9b、9c分別是季銨化殼聚糖/pDNA_bFGF粒子的膠原-殼聚糖支架植入燒傷 全層皮膚缺損7、14、21天后的H&E圖。圖10分別是負載了季銨化殼聚糖/pDNA-bFGF粒子的膠原-殼聚糖支架植入創(chuàng)傷 全層皮膚缺損14天后超薄皮片移植98天后的H&E圖。
具體實施例方式將季銨化的殼聚糖溶解在磷酸鹽緩沖液中，配制成20mg/mL的季銨化殼聚糖溶 液，經(jīng)0. 22 μ m濾膜過濾除菌；將pDNA-VEGF溶解在磷酸鹽緩沖液中配成5mg/mL的溶液； 將pDNA-VEGF溶液與季銨化殼聚糖溶液等比混合，劇烈震蕩混合均勻，靜置，制備得到季銨 化殼聚糖/pDNA-VEGF復合粒子溶液。TEM觀察粒子的粒徑和形貌結(jié)果如圖1所示。用質(zhì)量 濃度為5%的乙酸溶液將殼聚糖和膠原均配制成質(zhì)量濃度為的溶液，殼聚糖和膠原的 質(zhì)量比為1 9，將膠原-殼聚糖共混液注入模具中，-50°C冷凍凍干得到膠原-殼聚糖三 維多孔支架，經(jīng)1 %戊二醛交聯(lián)Ih后用三蒸水多次洗滌，-50°C冷凍凍干，其微觀結(jié)構(gòu)如圖2 所示，孔徑在100 200 μ m，孔隙率大于90%。將生物相容性良好的α -氰基丙烯酸辛酯 以0. 05mg/cm2的量均勻涂覆在厚度為0. 05mm的硅橡膠薄膜表面，然后將制備好的膠原-殼 聚糖三維多孔支架放在涂覆α -氰基丙烯酸辛酯的硅橡膠薄膜表面上，獲得膠原-殼聚 糖/硅橡膠雙層支架，紫外輻照池滅菌。把季銨化殼聚糖/pDNA-VEGF復合粒子負載到膠 原-殼聚糖支架上，用SEM觀察如圖3所示，季銨化殼聚糖/pDNA-VEGF復合粒子通過物理 吸附或靜電作用粘附在膠原-殼聚糖支架的孔壁上。將膠原-殼聚糖支架紫外輻照池滅菌，然后把季銨化殼聚糖/pDNA-VEGF復合粒子滴加到滅菌后的支架上，室溫下孵化2小時， pDNA-VEGF與支架的重量比為10 100，在負載季銨化殼聚糖/pDNA-VEGF粒子支架上種植 內(nèi)皮細胞，以添加了 20%胎牛血清、100單位/毫升青霉素和100單位/毫升的鏈霉素的 RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)3天后，用中性福爾馬林固定，梯度脫水、超臨界干燥后SEM觀察，如 圖4所示。內(nèi)皮細胞可以在負載季銨化殼聚糖/pDNA-VEGF復合粒子的支架上較好地粘附 并保持其形態(tài)。將季銨化殼聚糖/pDNA-VEGF復合粒子負載到滅菌后的膠原-殼聚糖/硅 橡膠雙層支架上得到負載季銨化殼聚糖和質(zhì)粒DNA復合粒子的皮膚再生材料。在巴馬小型 豬背上制備全層創(chuàng)傷缺損創(chuàng)面，移植負載季銨化殼聚糖/pDNA-VEGF復合粒子的皮膚再生 支架。圖fe、5b、5c分別是負載了季銨化殼聚糖/pDNA-VEGF復合粒子的膠原-殼聚糖/硅 橡膠支架植入創(chuàng)傷全層皮膚缺損7、10、14天后的大體觀察圖。從圖中可以看出7天的時候 支架還有剩余，創(chuàng)面紅潤，10天的時候支架幾乎全部降解，14天支架完全降解，肉芽組織顏 色很紅，說明血管較豐富。實施例2將季銨化的殼聚糖溶解在磷酸鹽緩沖液中，配制成lmg/mL的季銨化殼聚糖溶液， 經(jīng)0. 22 μ m濾膜過濾除菌；將pDNA-PDGF溶解在磷酸鹽緩沖液中配成0. lmg/mL的溶液；將 pDNA-PDGF溶液與季銨化殼聚糖溶液等比混合，劇烈震蕩混合均勻，靜置，制備得到季銨化 殼聚糖/pDNA-PDGF復合粒子溶液。用質(zhì)量濃度為0. 3 %的乙酸溶液將殼聚糖和膠原均配 制成質(zhì)量濃度為0.1%的溶液，殼聚糖和膠原的質(zhì)量比為5 5，將膠原-殼聚糖共混液注 入模具中，_5°C冷凍凍干得到膠原-殼聚糖三維多孔支架，經(jīng)0. 戊二醛交聯(lián)4 后用三 蒸水多次洗滌，_5°C冷凍凍干。將生物相容性良好的α-氰基丙烯酸辛酯以0.5mg/cm2的 量均勻涂覆在厚度為0. 2mm的硅橡膠薄膜表面，然后將制備好的膠原-殼聚糖三維多孔支 架放在涂覆α -氰基丙烯酸辛酯的硅橡膠薄膜表面上，獲得膠原-殼聚糖/硅橡膠雙層支 架，紫外輻照池滅菌。將季銨化殼聚糖/pDNA-PDGF復合粒子負載到滅菌后的膠原-殼聚 糖/硅橡膠雙層支架上得到負載季銨化殼聚糖和/pDNA-PDGF復合粒子的皮膚再生材料，其 中pDNA-PDGF與支架的重量比為0.5 100。在巴馬小型豬背上制備全層創(chuàng)傷缺損創(chuàng)面， 移植負載季銨化殼聚糖/pDNA-PDGF復合粒子的膠原-殼聚糖/硅橡膠雙層皮膚再生支架。 從H&E圖中看出從7天到14天支架完全降解，炎癥細胞數(shù)量減少，血管增多。移植基因活 性真皮替代物10天后的創(chuàng)面可以進行超薄皮片移植，移植后的全層皮膚修復效果用H&E觀 察。從圖7中可以看出移植42天后，可以看到束狀膠原微纖的存在，真皮表皮有乳突狀連 接。實施例3將季銨化的殼聚糖溶解在磷酸鹽緩沖液中，配制成lOmg/mL的季銨化殼聚糖溶 液，經(jīng)0. 22 μ m濾膜過濾除菌；將pDNA-aFGF溶解在磷酸鹽緩沖液中配成aiig/mL的溶液； 將pDNA-aFGF溶液與季銨化殼聚糖溶液等比混合，劇烈震蕩混合均勻，靜置，制備得到季銨 化殼聚糖/pDNA-aFGF復合粒子溶液。用質(zhì)量濃度為0. 3%的乙酸溶液將殼聚糖和膠原均配 制成質(zhì)量濃度為0.5%的溶液，殼聚糖和膠原的質(zhì)量比為2 8，將膠原-殼聚糖共混液注 入模具中，-20°C冷凍凍干得到膠原-殼聚糖三維多孔支架，經(jīng)0. 25%戊二醛交聯(lián)24h后用 三蒸水多次洗滌，-20°C冷凍凍干。將生物相容性良好的有機硅膠粘劑以0. lmg/cm2的量均 勻涂覆在厚度為0. Imm的硅橡膠薄膜表面，然后將制備好的膠原-殼聚糖三維多孔支架放
6在涂覆有機硅膠粘劑的硅橡膠薄膜表面上，獲得膠原-殼聚糖/硅橡膠雙層支架，紫外輻照 2h滅菌。將季銨化殼聚糖/pDNA-aFGF復合粒子負載到滅菌后的膠原-殼聚糖/硅橡膠雙 層支架上得到負載季銨化殼聚糖和/pDNA-aFGF復合粒子的皮膚再生材料，其中pDNA-aFGF 與支架的重量比為5 100。把季銨化殼聚糖/pDNA-aFGF復合粒子負載到膠原-殼聚糖 /硅橡膠支架上，在豬背部造成三度燒傷創(chuàng)面，24h后切痂至有出血的正常組織(脂肪或肌 肉)，然后將材料植入。圖8a、8b、8c分別是負載了季銨化殼聚糖/pDNA-aFGF復合粒子的膠 原-殼聚糖/硅橡膠支架植入燒傷全層皮膚缺損7、14、21天后的大體觀察圖。從圖中可以 看出7天的時候支架還有剩余，創(chuàng)面紅潤，14天的時候支架幾乎全部降解，21天支架完全降 解，新生組織和正常組織幾乎齊平。實施例4將季銨化的殼聚糖溶解在磷酸鹽緩沖液中，配制成lOmg/mL的季銨化殼聚糖溶 液，經(jīng)0. 22 μ m濾膜過濾除菌；將pDNA-bFGF溶解在磷酸鹽緩沖液中配成ang/mL的溶液；將 pDNA-bFGF溶液與季銨化殼聚糖溶液等比混合，劇烈震蕩混合均勻，靜置，制備得到季銨化 殼聚糖/pDNA-bFGF復合粒子溶液。用質(zhì)量濃度為3%的乙酸溶液將殼聚糖和膠原均配制成 質(zhì)量濃度為的溶液，殼聚糖和膠原的質(zhì)量比為1 9，將膠原-殼聚糖共混液注入模具 中，-20°C冷凍凍干得到膠原-殼聚糖三維多孔支架，經(jīng)0. 5%戊二醛交聯(lián)24h后用三蒸水 多次洗滌，-20°C冷凍凍干。將生物相容性良好的有機硅膠粘劑以0. 2mg/cm2的量均勻涂覆 在厚度為0. Imm的硅橡膠薄膜表面，然后將制備好的膠原-殼聚糖三維多孔支架放在涂覆 有機硅膠粘劑的硅橡膠薄膜表面上，獲得膠原-殼聚糖/硅橡膠雙層支架，紫外輻照池滅 菌。將季銨化殼聚糖/pDNA-bFGF復合粒子負載到滅菌后的膠原-殼聚糖/硅橡膠雙層支 架上得到負載季銨化殼聚糖和/pDNA-aFGF復合粒子的皮膚再生材料，其中pDNA-bFGF與支 架的重量比為5 100。把季銨化殼聚糖/pDNA-bFGF復合粒子負載到膠原-殼聚糖/硅 橡膠支架上，在豬背部造成三度燒傷創(chuàng)面，24h后切痂至有出血的正常組織(脂肪或肌肉)， 然后將材料植入。從H&E圖中看出從7天到21天支架完全降解，炎癥細胞數(shù)量減少，血管 增多。移植基因活性真皮替代物14天后的創(chuàng)面可以進行超薄皮片移植，移植后的全層皮膚 修復效果用H&E觀察。從圖10中可以看出移植98天，真皮組織膠原束類似正常組織，表皮 層與真皮層連接緊密，有乳頭狀結(jié)構(gòu)存在，表皮分化較好。
權(quán)利要求
1.一種負載季銨化殼聚糖和質(zhì)粒DNA復合粒子的皮膚再生材料的制備方法，包括如下 步驟1)用磷酸鹽緩沖液或三蒸水分別配制濃度為1 20mg/mL的季銨化殼聚糖溶液和濃度 為0. 1 5mg/mL的質(zhì)粒DNA溶液；將季銨化殼聚糖溶液與質(zhì)粒DNA溶液等比混合，震蕩均 勻，靜置，制得季銨化殼聚糖/質(zhì)粒DNA粒子溶液；2)用質(zhì)量濃度為0.3% 5%的乙酸溶液分別配制質(zhì)量濃度為0. 的膠原溶 液和質(zhì)量濃度為0. 的殼聚糖溶液，將殼聚糖溶液滴入膠原溶液中，攪拌均勻、真 空脫泡，得到膠原-殼聚糖混合溶液，其中殼聚糖和膠原的質(zhì)量比為1 9 5 5;將膠 原-殼聚糖共混液注入模具中，采用冷凍-干燥法，在_5°C -50°C溫度下冷凍干燥，獲得 膠原-殼聚糖三維多孔支架；將膠原-殼聚糖三維多孔支架于質(zhì)量濃度為0. 05% 的 戊二醛溶液中交聯(lián)1 48小時，反復清洗后，再次在_5°C _50°C溫度下冷凍干燥；3)將醫(yī)用膠粘劑以0.05 0. 5mg/cm2的量均勻涂覆在厚度為0. 05 0. 2mm的硅橡膠 薄膜表面，然后將步驟2、制備好的膠原-殼聚糖三維多孔支架放在涂覆膠粘劑的硅橡膠薄 膜表面上，獲得膠原-殼聚糖/硅橡膠雙層支架。4)將步驟1)的季銨化殼聚糖/質(zhì)粒DNA粒子溶液逐滴加到膠原-殼聚糖/硅橡膠雙 層支架上，其中質(zhì)粒DNA與支架的重量比為0.5 100 10 100，室溫下孵化0. 2 2小 時，在-5°C _50°C溫度下冷凍干燥，得到負載復合季銨化殼聚糖和質(zhì)粒DNA粒子的皮膚再 生材料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負載復合季銨化殼聚糖和質(zhì)粒DNA粒子的皮膚再生材料的制 備方法，其特征是所說的醫(yī)用膠粘劑是α-氰基丙烯酸酯類膠粘劑或有機硅膠粘劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負載復合季銨化殼聚糖和質(zhì)粒DNA粒子的皮膚再生材料的制 備方法，其特征是所說的質(zhì)粒DNA是表達血管內(nèi)皮細胞生長因子、血小板源性生長因子、酸 性成纖維細胞生長因子或堿性成纖維細胞生長因子的質(zhì)粒DNA。
全文摘要
本發(fā)明公開了負載季銨化殼聚糖和質(zhì)粒DNA復合粒子的皮膚再生材料的制備方法。該皮膚再生材料是通過將季銨化殼聚糖/質(zhì)粒DNA粒子導入膠原-殼聚糖/硅橡膠雙層支架制備而成。通過導入的季銨化殼聚糖/質(zhì)粒DNA粒子在皮膚缺損創(chuàng)面的原位轉(zhuǎn)染、表達皮膚再生修復過程的促血管生成因子，從而促進皮膚再生材料在創(chuàng)面上的快速血管化，誘導創(chuàng)面細胞的遷移、增殖和分化，實現(xiàn)創(chuàng)面快速、良好的修復。本發(fā)明所制備的皮膚再生材料具有快速的血管化性能和優(yōu)異的創(chuàng)面修復能力，可廣泛應用于創(chuàng)傷和燒傷等全層皮膚缺損的修復與再生，具有較好的臨床應用前景。
文檔編號A61L27/60GK102114272SQ20101019363
公開日2011年7月6日 申請日期2010年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月4日
發(fā)明者徐少駿, 毛崢偉, 郭瑞, 馬列, 高長有 申請人:浙江大學