專利名稱：一種肉蓯蓉多糖的分離提純方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種肉蓯蓉多糖的分離提純方法，尤其是以微波輔助凍融法提取和大 孔吸附樹脂純化為主要手段的提取分離方法。屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
肉蓯蓉為列當(dāng)科多年生寄生植物，主要分布于內(nèi)蒙古、寧夏、甘肅、新疆、青海等沙 漠、荒漠干旱地帶，具有極高的藥用價(jià)值，有“沙漠人參”之美譽(yù)，是我國傳統(tǒng)的名貴中藥材。 肉蓯蓉中含有豐富的肉蓯蓉多糖、苯乙醇苷、生物堿、有機(jī)酸等，此外，還含有大量的礦物元 素。肉蓯蓉有補(bǔ)腎助陽，潤腸通便之功效；用于治療腎陽虧虛，精血不足之陽痿早泄、宮冷不 孕、腰膝酸痛、疲軟無力，以及腸燥津枯之便秘等癥?！侗静萸笳妗分杏浻小叭馍惾?，諸書既言 峻補(bǔ)精血，又言力能興陽助火，是明因其氣溫，力專滋陰，得此陽隨陰附，而陽自見興耳。惟 其力能滋補(bǔ)，故凡癥瘕積塊，得此而堅(jiān)即消。惟其滋補(bǔ)而陽得助，故凡遺精莖痛，寒熱時(shí)作， 亦得因是而除。”近代藥理學(xué)研究表明，肉蓯蓉多糖能提高機(jī)體免疫功能，促進(jìn)DNA合成，增 強(qiáng)體力，提高智力，具有明顯的抗衰老作用。文獻(xiàn)中對(duì)肉蓯蓉多糖提取純化已有一些報(bào)道。2009年11月10日，王曉琴等在“安 徽農(nóng)業(yè)科學(xué)”上發(fā)表了題為“肉蓯蓉多糖提取工藝及抑菌作用研究”的文章，提出采用熱水 浸提法提取肉蓯蓉多糖的方法，最佳提取工藝為以1 15的料水比在85°C下浸提2h。2006 年2月28日，吳波等在“廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)”上發(fā)表了題為“肉蓯蓉水溶性多糖的分離純化 及分析”的文章，提出采用95%乙醇脫脂、水提醇沉得粗多糖，S印hadex柱層析精制多糖。 2002年12月25日，曾群力等在“中草藥”上發(fā)表了題為“肉蓯蓉多糖的分離、純化和鑒定” 的文章，提出經(jīng)脫脂、沸水抽提、乙醇沉淀、Sevag法脫蛋白得到的粗多糖，再經(jīng)離子交換層 析和凝膠柱層析得到純凈的肉蓯蓉多糖。2002年4月30日，孫萍等在“數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志” 上發(fā)表了題為“肉蓯蓉多糖的微波提取及含量測(cè)定”的文章，提出用水提醇沉法提取肉蓯蓉 多糖。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種以微波輔助凍融法為主要提取手段和以大孔樹脂吸附 為主要純化技術(shù)的肉蓯蓉多糖的提取分離新方法，以達(dá)到工藝簡(jiǎn)單、提取效率高的目的。微波提取的原理是微射線輻射于溶劑并透過細(xì)胞壁到達(dá)細(xì)胞內(nèi)部，由于溶劑及細(xì) 胞液吸收微波能，細(xì)胞內(nèi)部溫度升高，壓力增大，當(dāng)壓力超過細(xì)胞壁的承受能力時(shí)，細(xì)胞壁 破裂，細(xì)胞內(nèi)部的有效成份從細(xì)胞中釋放出來，傳遞轉(zhuǎn)移到溶劑周圍被溶劑溶解。微波具有 穿透力強(qiáng)、選擇性高、加熱效率高等特點(diǎn)。微波提取法具有提取時(shí)間短，提取率高，是強(qiáng)化固 液提取過程頗具發(fā)展?jié)摿Φ男滦洼o助提取技術(shù)。凍融法是將目標(biāo)物冷凍至-15°C到-20°C，然后放置于室溫(或40°C )融化，由于 細(xì)胞中形成了冰晶及剩余液體中鹽濃度的增高可以使細(xì)胞破裂。微波輔助凍融法提取肉蓯蓉多糖，由于微波加熱的特殊方式，使細(xì)胞內(nèi)水分子吸收微波能后溫度迅速上升并汽化，產(chǎn)生的壓力使細(xì)胞壁破碎，再加上微波加熱前的冰凍處理，進(jìn)一步促進(jìn)了細(xì)胞壁的破碎效果，使肉蓯蓉多糖更易傾出，大大提高了肉蓯蓉多糖的提 取效率。大孔吸附樹脂是一類不含交換基團(tuán)且有大孔結(jié)構(gòu)的高分子吸附樹脂，具有良好的 大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和較大的比表面積，在樹脂內(nèi)部具有三維空間立體孔結(jié)構(gòu)，可以通過物理吸 附從水溶液中有選擇地吸附有機(jī)物，具有物理化學(xué)穩(wěn)定性高、比表面積大、吸附容量大、選 擇性好、吸附速度快、解吸條件溫和、再生處理方便、使用周期長(zhǎng)、宜于構(gòu)成閉路循環(huán)、節(jié)省 費(fèi)用等諸多優(yōu)點(diǎn)。多數(shù)大孔吸附樹脂對(duì)多糖的吸附能力很差，而對(duì)色素和蛋白質(zhì)等物質(zhì)的 吸附能力較強(qiáng)，據(jù)此可有效去除水溶性色素和蛋白質(zhì)等物質(zhì)，以純化肉蓯蓉多糖。本發(fā)明所述肉蓯蓉多糖分離提純方法的具體步驟包括(1)提取將肉蓯蓉洗凈烘干后粉碎，分別用2-5倍重量的石油醚和體積分?jǐn)?shù)95% 的乙醇浸泡并超聲處理20至60分鐘，過濾后揮干溶劑，殘?jiān)?-2倍重量的新煮沸并放涼 的蒸餾水浸泡并置于冰箱中(_15°C至_25°C )冷凍8-12小時(shí)，取出后置于微波爐中800瓦 處理20-40分鐘(每隔5分鐘停止一次，6-10分鐘/次)后，過濾，殘?jiān)儆?-2倍重量的 新煮沸并放涼的蒸餾水浸泡，重復(fù)冷凍和微波處理過程2-5次，合并濾液即為多糖提取液；(2)純化大孔吸附樹脂先用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3% -5%的HCl浸泡2-6小時(shí)，使其充分 溶脹，再用蒸餾水沖洗至中性，然后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3% -5%的NaOH浸泡2_6小時(shí)，再用蒸餾 水沖洗至中性，而后用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇浸泡樹脂2-6小時(shí)，最后用蒸餾水洗至無醇后 裝50 X 1. 5厘米玻璃柱，將前述的多糖提取液常壓過柱后，減壓濃縮至原體積的1/5-1/2， 再用5-6倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇沉淀，將沉淀物冷凍干燥，再依次用丙酮、無水乙 醚和無水乙醇洗滌，揮干溶劑即可得到純凈的肉蓯蓉多糖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1(1)提取將肉蓯蓉洗凈烘干后粉碎并稱取20克，用IOOml石油醚浸泡并超聲處 理20分鐘，過濾再用80ml積分?jǐn)?shù)95%的乙醇浸泡并超聲處理20分鐘，過濾后揮干溶劑，約 17. 3克殘?jiān)?0ml新煮沸并放涼的蒸餾水浸泡并置于冰箱中(_15°C )冷凍8小時(shí)，取出 后用微波處理20分鐘(每隔5分鐘停止一次，6分鐘/次)后，過濾，殘?jiān)儆?0ml新煮沸 并放涼的蒸餾水浸泡，重復(fù)冷凍和微波處理過程3次，合并濾液即為多糖提取液；(2)純化大孔吸附樹脂(XDA-7)先用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的HCl浸泡2小時(shí)，使其充分 溶脹，再用蒸餾水沖洗至中性，然后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的NaOH浸泡2小時(shí)，再用蒸餾水沖洗 至中性，而后用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇浸泡樹脂2小時(shí)，最后用蒸餾水洗至無醇后裝50 X 1. 5 厘米玻璃柱，，將前述的多糖提取液常壓過柱，收集洗脫液約60ml，減壓濃縮至20ml，再用 IOOml體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇醇沉，將沉淀物冷凍干燥，再依次各用IOml丙酮、無水乙醚和 無水乙醇洗滌，揮干溶劑即可得到2. 38純凈的肉蓯蓉多糖。產(chǎn)品的紅外光譜圖顯示出明顯的多糖特征，未出現(xiàn)蛋白質(zhì)和色素的特征峰。實(shí)施例2(1)提取將肉蓯蓉洗凈烘干后粉碎并稱取20克，用120ml石油醚浸泡并超聲處 理50分鐘，過濾再用IOOml積分?jǐn)?shù)95%的乙醇浸泡并超聲處理40分鐘，過濾后揮干溶劑，殘?jiān)s17. O克用25ml新煮沸并放涼的蒸餾水浸泡并置于冰箱中(_20°C )冷凍10小時(shí)，取 出后用微波處理30分鐘(每隔5分鐘停止一次，8分鐘/次)后，過濾，殘?jiān)儆?5ml新煮 沸并放涼的蒸餾水浸泡，重復(fù)冷凍和微波處理過程2次，合并濾液即為多糖提取液； (2)純化大孔吸附樹脂(DlOlB)先用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的HCl浸泡3小時(shí)，使其充分 溶脹，再用蒸餾水沖洗至中性，然后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的NaOH浸泡3小時(shí)，再用蒸餾水沖洗 至中性，而后用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇浸泡樹脂3小時(shí)，最后用蒸餾水洗至無醇后裝50 X 1. 5 厘米玻璃柱，，將前述的多糖提取液常壓過柱，收集洗脫液約50ml，減壓濃縮至15ml，再用 90ml體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇醇沉，將沉淀物冷凍干燥，再依次各用IOml丙酮、無水乙醚和 無水乙醇洗滌，揮干溶劑即可得到2. 51純凈的肉蓯蓉多糖。產(chǎn)品的紅外光譜圖顯示出明顯的多糖特征，未出現(xiàn)蛋白質(zhì)和色素的特征峰。
權(quán)利要求
一種肉蓯蓉多糖的分離提純方法，其特征在于所述方法的具體步驟為(1)提取將肉蓯蓉洗凈烘干后粉碎，分別用2-5倍重量的石油醚和體積分?jǐn)?shù)95％的乙醇浸泡并超聲處理20至60分鐘，過濾后，殘?jiān)?-2倍重量的新煮沸并放涼的蒸餾水浸泡并置于冰箱中(-15℃至-25℃)冷凍8-12小時(shí)，取出后置于微波爐中800瓦處理20-40分鐘(每隔5分鐘停止一次，5-10分鐘/次)后，過濾，殘?jiān)儆?-2倍重量的新煮沸并放涼的蒸餾水浸泡，重復(fù)冷凍和微波處理過程2-5次，合并濾液即為多糖提取液；(2)純化用預(yù)處理過的大孔吸附樹脂裝填50×1.5厘米玻璃柱，用蒸餾水飽和，將前述的多糖提取液常壓過柱后，減壓濃縮至原體積的1/5-1/2，再用5-6倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95％的乙醇沉淀，將沉淀物冷凍干燥，再依次用丙酮、無水乙醚和無水乙醇洗滌，揮干溶劑即可得到純凈的肉蓯蓉多糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種肉蓯蓉多糖的分離提純方法，其特征是將肉蓯蓉洗凈烘干后粉碎，分別用石油醚和乙醇浸泡并超聲處理，以脫除脂肪等成分，過濾后殘?jiān)谜麴s水浸泡并置于冰箱中冷凍，取出后微波處理使之迅速融化，濾液即為肉蓯蓉多糖提取液；讓此提取液常壓通過大孔吸附樹脂柱，減壓濃縮，醇沉，冷凍干燥，再依次用丙酮、無水乙醚和無水乙醇洗滌，即可得到純凈的肉蓯蓉多糖。本提取過程容易實(shí)現(xiàn)，與傳統(tǒng)方法相比，提取時(shí)間短，提取效率高。
文檔編號(hào)A61P15/08GK101870742SQ201010213839
公開日2010年10月27日 申請(qǐng)日期2010年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月30日
發(fā)明者周考文, 崔立卿, 方超, 趙紫欣 申請(qǐng)人:北京聯(lián)合大學(xué)生物化學(xué)工程學(xué)院