專利名稱：維生素c轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)作用的化合物和植物。此外，涉及利用 該化合物和植物的維生素C吸收促進(jìn)用組合物、含該維生素C吸收促進(jìn)用組合物的美白用 組合物或膠原合成促進(jìn)用組合物。
背景技術(shù)：
維生素C作為生物體中的水溶性抗氧化物質(zhì)，對(duì)超氧陰離子和其他的活性氧物種 具有優(yōu)異的抗氧化作用，預(yù)防細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)成分的氧化。此外，通過控制已知作為膠原合成 中的脯氨酸殘基的羥基化和黑素合成的限速酶的酪氨酸酶、維生素C的螯合作用帶來的鐵 運(yùn)送的調(diào)整、進(jìn)而調(diào)節(jié)氧化和還原來參與各種酶反應(yīng)。雖然為具有多功能的維生素C，但土 撥鼠和包括人類在內(nèi)的靈長類由于欠缺L-古洛糖酸內(nèi)酯氧化酶而沒有維生素C合成能力， 進(jìn)而認(rèn)為維生素C由于具有水溶性的性質(zhì)、與其他脂溶性維生素相比生物體保持時(shí)間短， 因而容易導(dǎo)致維生素C的功能不足。作為由維生素C的缺乏而引起的疾病，列舉壞血病、創(chuàng)傷治愈能力的降低、骨和結(jié) 締組織的障礙、血管運(yùn)動(dòng)的不穩(wěn)定化等。進(jìn)而，維生素C對(duì)于包括心疾病、癌、白內(nèi)障、感冒 等各種疾病而作為予防或治療目的使用(非專利文獻(xiàn)1)。此外，除了疾病以外，還大量提供 以對(duì)肌膚美白和肌膚的滋潤強(qiáng)化、以及抗老化作用為目的的維生素C制劑。另一方面，盡管大量報(bào)導(dǎo)了關(guān)于維生素C的功能和其有效性的見解，但關(guān)于維生 素C向各組織的攝入原理，不明確的點(diǎn)仍然很多。1999年Tsukaguchi等人成功從大鼠克隆 了承擔(dān)維生素C的攝入的膜蛋白質(zhì)，并發(fā)現(xiàn)以鈉離子維生素C = 2 1的比例向細(xì)胞內(nèi) 輸送的鈉依賴性維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體(SVCT)(非專利文獻(xiàn)2)。在其后的研究中，明確了人類也 存在維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體，此外，明確了維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體中存在1型(SVCTl)和2型(SVCT2)2 種亞型。SVCTl主要分布于小腸、肝臟、腎臟、大腸、子宮、前列腺等的上皮組織，SVCT2廣泛 分布于肺、骨格肌肉、眼、骨、腦等內(nèi)皮組織。雖然均為特異性輸送維生素C，但通過動(dòng)力學(xué)分 析可知SVCT2比SVCTl特異性優(yōu)異(非專利文獻(xiàn)3)。Alexander等人研究了伴隨年齡增長的維生素C保有量與維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá) 量的關(guān)系，報(bào)導(dǎo)了大鼠肝臟中維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體(SVCTl)的表達(dá)量降低和維生素C保有量的 減少(非專利文獻(xiàn)4)。作為維生素C保有量降低的予防或改善的方法，列舉了維生素C的 繼續(xù)攝取，MacDonald等人使用人類腸道模型推測過剩的維生素C的攝取會(huì)降低維生素C轉(zhuǎn) 運(yùn)體(SVCTl)的表達(dá)、進(jìn)而降低維生素C的攝入能力(非專利文獻(xiàn)5)。從這些見解認(rèn)為，維 生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑對(duì)關(guān)于起因于維生素C保有量降低的維生素C的功能降低的予防 或改善來說是有效的方法。目前為止，關(guān)于提高SVCTl和SVCT2的表達(dá)的化合物或植物的報(bào)導(dǎo)極少。Fujita 等人報(bào)導(dǎo)了使用小鼠成骨細(xì)胞，地塞米松(dexamethazone)提高了 SVCT2的表達(dá)，使維生素 C的攝入量上升(非專利文獻(xiàn)6)。但是，地塞米松由于顯示荷爾蒙用作用，因而從副作用的 觀點(diǎn)出發(fā)，在使用時(shí)受到很大制約。此外，尚未有關(guān)于使SVCTl的表達(dá)增強(qiáng)的化合物或植物
3的報(bào)導(dǎo)。非專利文獻(xiàn) 1 =Molecular Membrane Biology, 2001, Vol. 18，87-95非專利文獻(xiàn)2 =Nature, 1999，Vol. 399，70-75非專利文獻(xiàn)3 =FEBS Letter, 1999，Vol. 460，480-484# # ^lJ ； K 4 =Archives of Biochemistry and Biophysics, 2003, Vol. 410, 112-120非專利文獻(xiàn)5 British Journal of Nutrition, 2002, Vol. 87,97-100非專利文獻(xiàn)6 British Journal of Nutrition, 2001, Vol. 86,145-149

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問題本發(fā)明的課題在于提供促進(jìn)維生素C向目標(biāo)組織攝入的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn) 劑。進(jìn)而，另一課題為提供含這樣的促進(jìn)劑的美白用組合物或膠原合成促進(jìn)用組合物。解決問題的方法本發(fā)明人等為了解決上述各個(gè)課題而進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了具有維生素C 轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)作用的化合物和植物等，作為維生素C吸收促進(jìn)用組合物、美白用組合物、 膠原合成促進(jìn)用組合物是極其有用的，從此觀點(diǎn)出發(fā)直至完成了本發(fā)明。即，這里所提出的 解決方法為如下方案。(1)維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑，其特征在于，含有選自夏至草素、膽留醇苯甲酸 酯、ugaferine、lapiferine、乙酸香葉酯、橙花叔醇、二氫茉莉酮、香芹基乙酸(Carvacryl acetate)、愈創(chuàng)木奧、二氫松柏醇、甜菊甙、DL-α -菔烯、馬鞭草苷、1-二十七烷醇、4-羥基 香豆素、膽酸、膽留醇油酸酯、白蠟樹甙、佛手酚所組成的化合物組中的至少1種以上。(2)維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑，其包含含前述(1)所述的任一化合物的植物、動(dòng) 物、礦物、微生物的粉碎物、其提取物、或提取物的水解物。(3)維生素C吸收促進(jìn)用組合物，其將前述(1)或(2)所述的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生 促進(jìn)劑與維生素C或維生素C衍生物組合而成。(4)前述(3)所述的維生素C吸收促進(jìn)用組合物，維生素C衍生物為2-0- α -D-吡
喃葡糖基-抗壞血酸。(5)美白用組合物，其包含前述(3)或(4)所述的維生素C吸收促進(jìn)用組合物。(6)膠原合成促進(jìn)用組合物，其包含前述(3)或(4)所述的維生素C吸收促進(jìn)用組 合物。(7)維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑，其特征在于，含有選自日本厚樸木蘭(Japanese big-leaf magnolia)、杏仁、甘茶、葡萄柚、麥冬、常春藤、肥皂草、魚腥草、母菊、棕兒茶、金 縷梅、桑、米糠、問荊所組成的組中的至少1種以上的粉碎物、其提取物、或提取物的水解 物。(8)維生素C吸收促進(jìn)用組合物，其將前述(7)所述的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑 與維生素C或維生素C衍生物組合而成。(9)前述⑶所述的維生素C吸收促進(jìn)用組合物，維生素C衍生物為2-0- α -D-吡
喃葡糖基-抗壞血酸。
4
(10)美白用組合物，其特征在于，其包含前述⑶或(9)所述的維生素C吸收促進(jìn) 用組合物。(11)膠原合成促進(jìn)用組合物，其特征在于，包含前述⑶或(9)所述的維生素C吸 收促進(jìn)用組合物。(12)美白用組合物，其特征在于，含有前述(3)、(4)、⑶或(9)所述的維生素C 吸收促進(jìn)用組合物和葡萄糖苷酶劑。(13)前述(12)所述的美白用組合物，葡萄糖苷酶劑為選自紫錐花、酵母、雙歧菌、 乳酸菌所組成的組中的至少1種以上的粉碎物、其提取物、或提取水解物。發(fā)明效果根據(jù)由本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的包含特定的化合物和植物的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑，在 使用了細(xì)胞的分析中，可確認(rèn)顯著促進(jìn)了 SVCTl和/或SVCT2的mRNA的表達(dá)。本發(fā)明的維 生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑可作為美白用組合物、膠原合成促進(jìn)用組合物使用，作為其使用 形態(tài)，列舉為經(jīng)口用、皮膚外用、注射、化妝品、醫(yī)藥等。


圖1為顯示三維皮膚模型的黑素生成抑制試驗(yàn)的結(jié)果的圖表。圖2為顯示炎癥的抑制效果的圖表。圖3為顯示色素沉積的改善效果的圖表。圖4為顯示葡萄柚提取物的SVCT產(chǎn)生促進(jìn)效果的圖。圖5為顯示三維皮膚模型的顯微鏡照片的圖。圖6為顯示三維皮膚模型的Fontana-Masson染色圖像的圖。圖7為顯示使用HPLC的抗壞血酸(0. 5mM)的分析圖表的圖。圖8為顯示使用HPLC的細(xì)胞內(nèi)的抗壞血酸的分析圖表的圖。圖9為顯示小鼠黑色素瘤B16-F10細(xì)胞中的葡萄柚提取物的維生素C吸收促進(jìn)效 果的測定結(jié)果的圖。圖10為顯示源自人類大腸癌的Caco2細(xì)胞中的葡萄柚提取物的維生素C吸收促 進(jìn)效果的測定結(jié)果的圖。
具體實(shí)施例方式以下，詳細(xì)說明本發(fā)明。作為本發(fā)明的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑所含的化合物， 可使用夏至草素、膽留醇苯甲酸酯、ugaferine、Iapiferine、乙酸香葉酯、橙花叔醇、二氫茉 莉酮、香芹基乙酸、愈創(chuàng)木奧、二氫松柏醇、甜菊甙、DL-α -菔烯、馬鞭草苷、1-二十七烷醇、 4_羥基香豆素、膽酸、膽留醇油酸酯、白蠟樹甙、佛手酚等。這些化合物可單獨(dú)使用1種，此 外，還可組合2種以上使用。此外，還可使用含有這些化合物的植物、動(dòng)物、礦物、微生物的 粉碎物、其提取物、或提取水解物。作為含夏至草素(CAS 465-92-9)的植物，列舉出紫蘇科夏至草屬的Marrubium acetabulosum> Marrubium adfine> Marrubium aellenii> Marrubium affine> Marrubium africanum> Marrubium album、Marrubium alternidens> Marrubium alyssoides>
S M ^ft (Marrubium alysson) > Marrubium angustifolium> Marrubium anisodon>
5Marrubium apulum、Marrubium aquaticum、Marrubium aschersoni、Marrubium astracanicum、Marrubium atlanticum、Marrubium ayardii、Marrubium ballota、 Marrubium ballotaeforme、Marrubium ballotoides、Marrubium bastetanum、 Marrubium bornmuelleri、Marrubium bourgaei、Marrubium brachyodon、Marrubium candidissimum、Marrubium catariaefolium、Marrubium cephalanthum、Marrubium cinerascens、Marrubium cinereum、Marrubium circinnatum、Marrubium civice、 Marrubium coerulescens、Marrubium condensatum、Marrubium cor datum、Marrubium crassidens、Marrubium creticum、Marrubium crispum、Marrumbium cuneatum、 Marrubium cylleneum、Marrubium depauperatum、Marrubium deserti、Marrubium duabense、Marrubium echinatum、Marrubium eriocephalum、Marrubium eriostachyum、 Marrubium faucidensΛMarrubium f1avumΛMarrubium f1exuosumΛMarrubium fontianum、 Marrubium friwaldskyanum、Marrubium gamodon、Marrubium germanicum、Marrubium glechomaefolium、Marrubium globosum、Marrubium goktschaicum、Marrubium guilliermondiiλ Marrubium hamatum、Marrubium hermonis、Marrubium heterocladum、 Marrubium heterodon、Marrubium hierapolitanum、Marrubium hirsutum、Marrubium hispanicum、Marrubium humbeftii、Marrubium humile、Marrubium hyperleucum、 Marrubium incanum、Marrubium incisum、Marrubium indicum、Marrubium kotschyi、 Marrubium kurdicum、Marrubium kusnezowii、Marrubium lamioides、Marrubium lanatum、 Marrubium laricum、Marrubium laurifolium、Marrubium leonuroides、Marrubium libanoticum、Marrubium litardierei、Marrubium lutescens、Marrubium macrodon、 Marrubium ma1cο1mianumΛ Marrubium marrubiastrumΛ Marrubium micranthum、Marrubium microphyllum、Marrubium mollissimum、Marrubium montenegrinum、Marrubium multibracteatum、Marrubium nanum、Marrubium nigrum、Marrubium noeanum、Marrubium odoratissimum、Marrubium orientale、Marrubium pallidum、Marrubium paniculatum、 Marrubium pannonicum、Marrubium parnassicum、Marrubium parviflorum、Marrubium pauciflorum、Marrubium peregrinum、Marrubium persicum、Marrubium pestalozzae、 Marrubium plicatum、Marrubium ρIumosumΛ Marrubium polyodon、Marrubium praecox、 Marrubium procerum、Marrubium propinquum、Marrubium pseudo—alyssum、Marrubium pseudo —dictamnus、Marrubium purpureum、Marrubium radiatum、Marrubium remotum、 Marrubium rotundifolium、Marrubium rubrum、Marrubium rugosum、Marrubium scrophu lariaefol ium λ Marrubium segobricense、Marrubium sericeum、Marrubium setaceum、Marrubium sewerzowi、Marrubium suffuticosum、Marrubium supinum、 Marrubium thessalum、Marrubium thouini、Marrubium trachyticum、Marrubium turkeviczii、Marrubium uncinatum、Marrubium undulalum、Marrubium vaillantii、 Marrubium vanense、Marrubium velutinum、Marrubium virescens、Marrubium vulcanicum、苦薄另 U 名歐 至胃(Marrmbium vulgare)、Marrubium werner Marrubium wilkommi、紫蘇科益母草屬的歐益母草(Leonurus cardiaca)、紫蘇科獅子耳屬 的獅耳花(Leonotis leonurus)等。 作為含膽留醇苯甲酸酯(CAS 604-32-0)的動(dòng)物，列舉海龍科的海龍(Syngnathusacus)等。作為含ugaferine (CAS :63026-58_4)的植物，列舉傘形科茴香屬的Ferula arrigonii、阿魏草(Ferula assafoetida)、茴香(Ferula communis)、Ferula involucrata、Ferula kuhistanica、Ferula lapidosa、Ferula Iatipinna、Ferula leucographa、林克阿魏(Ferula linkii)、Ferula sinaica、準(zhǔn)葛爾阿魏(Ferula soongarcia)、Ferula tenuiesta、Ferula ugamica 等。作為含lapiferine (CAS :86992-41_8)的植物，列舉傘形科茴香屬的 Ferula arrigonii、阿魏草(Ferula assafoetida)、茴香(Ferula communis)、Ferula involucrata、Ferula kuhistanica、Ferula lapidosa、Ferula latipinna、Ferula leucographa、林克阿魏(Ferula linkii)、Ferula sinaica、準(zhǔn)葛爾阿魏(Ferula soongarcia)、Ferula tenuiesta、Ferula ugamica 等。作為含乙酸香葉酯(CAS: 105-87-3)的植物，列舉松科冷杉屬的馬氏冷杉 (Abies mariesii)、菊科藿香薊屬的熊耳草(Ageratum houstonianum)、菊科倉術(shù)屬的蒼 術(shù)(Atractylodes lancea)、菊禾斗酒神菊屬的酒神菊樹(Baccharis dracunculifolia) > Baccharis latifolia> Baccharis(Bellis perennis) > 菊科金盞花屬的金盞菊(Calendula officinalis)、傘形科葛縷子屬的葛縷子(Carum carvi)、蕨藻科蕨藻屬的總狀蕨藻(Caulerpa racemosa)、茄科夜香樹屬的夜香樹(Cestrum nocturnum)、傘形科明黨參屬的明黨參(Changium smyrnioides)、柑橘科柑橘屬的來 W. (Citrus aurantifolia) > ■ (Citrus aurantium) > 弗·^ ttt (Citrus bergamia) > JC J=L (Citrus grandis) > A 5 (Citrus hassaku)、伊予 ttt (Citrus iyo) > (Citrus junos)、紀(jì)州tt橘(Citrus kinokuni) (Citrus limon)、香才緣(Citrus medica)、夏 (Citrus natsudaidai) > ^f (Citrus paradise) ^ -ψ· il (Citrus reticulate) > (Citrus sinensis)、臭 (Citrus sphaerocarpa) > Stffi (Citrus sudachi) > HiSttt (Citrus sulcata) ^iEffi (Citrus tachibana) >iUj'HttfIil (Citrus unshiu)、7jC豐公禾斗水 松屬的軟毛松藻(Codium tomentosum)、傘形科孜然芹屬的孜然芹(Cuminum cyminum)、 禾本禾斗香茅屬的青香茅(Cymbopogon caesius)、梓檬草(Cymbopogon citratus)、卡西 香茅(Cymbopogon khasianus)、楓茅(Cymbopogon winterianus)、傘形禾斗古月蘿卜屬的 Daucus carota、紫蘇科青蘭屬的Dracoc^phalum kotschyi、桃金娘科桉樹屬的尾葉桉 (Eucalyptus urophylla)、菊科蠟菊屬的蠟菊(Helichrysum bracteatum)、魚腥草科魚腥 草屬的魚腥草(Houttuynia cordata)、八角科八角屬的藏八角(Illicium griffithii)、 MMA^ (Illicium merri 11 ianum) > ft^lJttM W^lJtt (Juniperus formosana) > Ihfev (Juniperus rigida)、桃金娘科澳洲茶樹屬的I^ptospermum javanicum、傘形科藁本屬的 Ligusticum mutellina、馬鞭草科過江藤屬的辛巴威(Lippia javanica)、紫蘇科夏至草屬 的歐夏至草(Marrubium vulgare)、紫蘇科牛至屬的圓葉牛至(Origanum rotundifolium)、 牛兒苗科天竺葵屬的香葉天竺葵(Pelargonium graveolens)、楠科臺(tái)灣楨楠屬的巴西楠木 (Phoebe porosa)、杜鵑花科杜鵑花屬的櫻草杜鵑(Rhododendron primulaef lorum)、薔薇 科薔薇屬的百葉薔薇(Rosa centifolia)、紫蘇科鼠尾草屬的Salvia clevelandii,Salvia fructicosa、鳳梨鼠尾草(Salvia officinalis)、香紫蘇(Salvia sclarea)、菊禾斗萬壽菊 屬的孔雀草(Tagetes erecta)、使君子科欖仁屬的Te rminalia bentzoe、柏科崖柏屬的卓月§羊崖豐白(Thuja koraiensis)、紫蘇禾斗百Jl香屬白勺 Thymus sipyleus> Thymus thracicus、 百里香(Thymus vulgaris)、麝香草(Thymus zygis)、蕓香科花椒屬的鳳椒(Zanthoxylum bungeanum)、翼柄花椒(Zanthoxylum schinifolium)等。 作為含橙花叔醇(CAS 7212-44-4)的植物，列舉菊科菊科蓍屬的高山蓍 (Achillea alpine)、黃花蓍草(Achillea filipendulina)、Achillea ligustica、千葉蓍 草(Achillea milleifolium)、Achillea moschata、珠蓍(Achillea ptarmica)、毛葉耆 草(Achillea tomentosa)、菊科藿香薊屬的藿香薊(Ageratum conyzoides)、紫花藿香薊 (Ageratum houstonianum)、姜禾斗豆蔻屬的香豆蔻(Amomum aromaticum)、白豆蔻(Amomum cardamomum)、香豆蔻(Amomum subulatum)、縮砂(Amomum xanthioides)、姜(Amomum zingiber)、豆科紫穗槐屬的紫穗槐(Amorpha fruticosa)、山荼科山荼屬的荼(Camellia sinensis)、豆禾斗刀豆屬的白鳳豆(Canavalia ensiformis)、刀豆(Canavalia gladiata)、 海刀豆(Canavalia maritima)、前禾斗夜香樹屬的黃瓶子花(Cestrum aurantiacum)、夜 來香(Cestrum nocturnum)、芬芳紫花夜丁香(Cestrumpurpureum)、柑橘科柑橘屬的來 ■ (Citrus aurantifolia) λΜ (Citrus aurantium) λ j^^ffl" (Citrus bergamia) (Citrus grarndis)、乂V朔(Citrus hassaku)、伊予相(Citrus iyo)、豐由(Citrus junos)、 乳橘(Citrus kinokuni)、梓樣(Citrus limon)、香稼(Citrus medica)、夏禮(Citrus natsudaidai)、葡萄 |由(Citrus paradise)、早紅(Citrus reticulate)、舌甘 (Citrus sinensis) Λ Mt (Citrus sphaerocarpa) Λ 酸 t面(Citrus sudachi)、三寶 ttf (Citrus sulcata)、立花橘(Citrus tachibma)、溫州柑橘(Citrus unshiu)、大戟科巴豆屬的 Croton aubrevillei、H 度苦香 對(duì)(Croton eluteria)、赤芽Hf (Croton japonicum)、 南京黃才盧(Croton sebiferus)、巴豆(Croton tiglium)、Croton zambesicus、傘形禾斗人 參屬的人參(Daucus carota)、木棉科榴蓮屬的榴蓮(Durio zibethinus)、紫蘇科香薷屬 的香薷(Elsholtzia ciliata)、野把子(Elsholtzia rugulosa)、無患子科龍眼屬的龍 眼(Euphoria longm)、銀杏科銀杏屬的銀杏(Ginkgo biloba)、桕科剌桕屬的西洋杜松 (Juniperus communis)、海濱檜(Juniperus conferta)、朿Ij豐公(Juniperus formosana)、杜 松(Juniperus rigida)、傘形科藁本屬的Ligusticum mutellina、馬鞭草科過江藤屬的白 朿丨J 枝(Lippia alba)、梓檬過江藤(Lippia citriodora)、辛巴威(Lippia javanica)、過江 B (Lippia nodiflora) ^Lippia maltuflora^^^f^^M(Mentha aquatica) Λ 薄荷(Mentha arvensis)、滇產(chǎn)薄荷(Mentha canadensis)、歐薄荷(Mentha longifolia)、 古月(Mentha piperita) ,MWM^ (Mentha pulegium)、(Mentha spicata) Λ 紫蘇科姜味草屬的Micromeria carminea、山欖科子彈木屬的香欖(Mimusops elengi)、紫 蘇禾斗羅勒屬的羅勒(Ocimum basilicum)、Ocimum kilimandoscharicum、小冠薰(Ocimum tenuiflorum)、傘形科水芹屬的水芹(Oenanthe jaranica)、山羊百科山羊百屬(Pandanus boninensis) λΜ^Μ (Pandanus tectorius)、古月椒禾斗古月椒屬白勺豐對(duì)古月椒(Piper aduncum)、 蔞葉(Piper betle)、風(fēng)藤(Piper kadsura)、假藥(Piper longum)、卡瓦胡椒(Piper methysticum)、古月椒(Piper nigrum)、假蓽拔(Piper retrofractum)、馬齒覓禾斗馬齒覓屬 的半支蓮(Portulaca grmdifIora)、馬齒莧(Portulaca oleracea)、紫蘇科鼠尾草屬的 Salvia clevelandii、胃胃胃(Salvia cryptantha)、Salvia fructicosa、M_g·胃 (Salvia officinalis)、香紫蘇(Salvia sclarea)、以及作為精油的原料的植物等。
8
作為含二氫茉莉酮(CAS 1128-08-01)的植物，列舉柑橘科柑橘屬的來檬(Citrus aurantifolia) > ■ (Citrus aurantium) > 弗·^ ttt (Citrus bergamia) > JC J=L (Cirus grandis)、八朔(Citrus hassaku)、伊予相(Citrus iyo)、袖(Citrus junos)、乳橘(Citrus kinokuni) > τ (Citrus limon)、香|緣(Citrus medica) >S (Citrus natsudaidai) > 葡萄 t由(Citrus paradise)、早紅(Citrus reticulate) > Stf (Citrus sinensis)、臭 (Citrus sphaerocarpa) > (Citrus sudachi) > HiSttt (Citrus sulcata) > AL^M (Citrus tachibana)、溫州柑橘(Citrus unshiu)、夾竹桃科假虎刺屬的假虎刺(Carissa carandas)、卡利撒(Carissa grandiflora)、以及、作為精油的原料的植物等。作為含香芹基乙酸(CAS :6380-28_5)的植物，列舉傘形科孜然芹屬的孜然芹 (Cuminum cyminum)、馬鞭草科過江藤屬的檸檬過江藤(Lippia citriodora)、辛巴威 (Lippia javanica) > Γ ^ (Lippia nodiflora) > Lippia maltuf lora> M ^h ^iP M 香草屬白勺 Thymus decassatus> Thymus sipyleus、Thymus thracicus、百 Jl 香(Thymus vulgaris)、麝香草(Thymus zygis)、敗醬科纈草屬的北纈草(Valeriana fauriei)、嫩莖纈 草(Valeriana flaccidissima)、繳草(Valeriana officinalis)等。 作為含愈創(chuàng)木奧(CAS 489-84-9)的植物，列舉菊科蒿屬的洋艾(Artemisia absinthium)、青蒿(Artemisia apiacea)、茵陳蒿(Artemisia capillaris)、龍蒿 (Artemisia dracunculus)、Artemisia maritime、艾草(Artemisia princeps)、柏禾斗絲柏 MWiJlttt (Callitris calcarata)(Callitris cupressiformis)、陰| (Cinnamomum
burmarmi)、t章(Cinnamomum camphora)、肉t圭(Cinnamomum cassia)(Cinnamomum
japonica)、黃t章(Cinnamomum parthenoxylon)、肉|圭(Cinnamomum seiboldii)、f易蘭肉|圭 (Cinnamomum verum)、桃金娘科丁香屬的Eugenia banderensis、櫳牛兒苗科老鸛草屬的椰 香天竺葵(Geranium macrorrhizum)、尼泊爾老鸛草(Geranium nepalense)、隸松節(jié)藻科凹 頂藻屬的Laurencia obtuse、菊科洋甘菊屬的母菊(Matricaria chamomilla)、錦葵科木槿 屬的香孔雀花(Pavonia odorata)等。作為含二氫松柏醇(CAS 2305-13-7)的植物，列舉松科松屬的赤松(Pinus densiflora)、紅松(Pinus koraiensis)、偃松(Pinus pumila)、歐洲赤松(Pinus sylvestris)、松科金錢松屬的金錢松(Pseudolarix amabilis)等。作為含甜菊甙(CAS 57817-89-7)的植物，列舉菊科斯臺(tái)比亞屬的甜菊(Stevia rebaudiana)等。作為含DL- α -菔烯(CAS 2437-95-8)的植物，列舉桃金娘科桉屬杏仁桉 (Eucalyptus amygdalina)(Eucalyptus cinera)(Eucalyptus globulus)、白 蘚葉桉(Eucalyptus leucoxylon) ,Eucalyptus regnans、以及、作為精油的原料的植物等。馬鞭草苷(CAS 548-37-8)是別名稱為Cornin的化合物。作為含馬鞭草苷的 植物，列舉山茱萸科山茱萸屬的頭狀四照花(Cornus capitata)、加拿大紅瑞木(Cornus canadensis) > lll^lC (Cornus controversa) > JFitlll^IC (Cornus florida)、東■四照# (Cornus kousa)、株木(Cornus macrophylla)、西洋山萊 IC (Cornus mas)、山 IC 肉(Cornus ofTicinalis)、|#=禾勺.中才卯M白勺f勺.中才卯(Pentstemon frutescens)、f勺.中才卯(Pentstemon gloxinioides)、Pentstemon nitidus、馬鞭草科馬鞭草屬的美女櫻(Verbena hybrida)、 馬鞭草(Verbena officinalis) > Verbena peruviana、糖葉美女櫻(Verbena rigida)、
9Verbena stricta、細(xì)葉美女櫻(Verbena tenera)等。作為含1-二十七烷醇(CAS 2004-39-9)的植物，列舉山羊百科山羊百屬的龍舌 ^ (Agave americana)(Agave cantala)(Agave filifera) ^1Jfli (Agave fourcroydes)、雷神(Agave potatorum)、瓊麻(Agave sisalana)、笹之雪(Agave victoriae—reginae)、瓜禾斗西瓜屬白勺藥西瓜(Citrullus colocynthis)、西瓜(Citrullus lanatus)、豆科山螞蝗屬的大葉拿身(Desmodium laxiflorum)、羽葉山馬幢(Desmodium οldhamii)、Desmodium paniculatum、Desmodium padocarpum、桑禾斗無花果屬的木瓜格 (Ficus auriculata)、愛玉子(Ficus awkeotsang)、印度格樹(Ficus bengalensis)、垂 葉格(Ficus benjamina)、無花果(Ficus carica)、三角格(Ficus diversifolia)、印度 橡膠樹(Ficus elastoca)、矮小天仙果(Ficus erecta)、琴葉橡皮樹(Ficus lyrata)、 格樹(Ficus microcarpa)、Ficus oxyphylla、薜蕩(Ficus pumila)、菩提樹(Ficus religiosa)、雀格(Ficus superba)、西克莫無花果(Ficus sycomorus)、菊禾斗豨薟屬的毛梗 稀蒼(Siegesbeckia glabrescens)、稀蒼(Siegesbeckia orientalis)等。作為含4-羥基香豆素(CAS 1076-38-6)的微生物，列舉青霉屬的卡門柏青霉 (Penicillium camembertii)、青霉菌(Penicillium jensenii)、點(diǎn)青霉(Penicillium notatum)、奶酪真菌(Penicillium roquefortii)等。作為含4_羥基香豆素的植物，列 舉牛栓藤科栗豆藤屬的 Agelaea nitida、Agelea obligua、Agelea trifolia、牛栓藤科 Byrsocarpus 屬白勺 Byrsocarpus coccineus、牛檢藤禾斗蠻毛果屬白勺 Cnestis corniculatus、 Cnestis ferruginea、序禾斗茴香屬的 Ferula arrigonii、阿魏草(Ferula assafoetida)、 茴香(Ferula communis)、Ferula involucrata、Ferula kuhistanica、多石阿魏(Ferula lapidosa)、Ferula latipinna、Ferula leucographa、林克阿魏(Ferula linkii)、Ferula sinaica、準(zhǔn)葛爾阿魏(Ferula soongarcia)、Ferula tenuiesta、Ferula ugamica、蕓香禾斗 蕓香屬的敘利亞蕓香(Ruta chal印ensis)、蕓香(Ruta graveolens)等。膽酸(CAS 81-25-4)被含于多數(shù)的哺乳類的膽汁中。作為含膽甾醇油酸酯(CAS 303-43-5)的微生物，列舉安德森皮剌蜱 (Dermacentor andersoni)等0作為含白蠟樹甙(CAS :524-30-1)的植物，列舉槭樹科槭樹屬的Acer aidzuense. 大紅葉械(Acer amoenum)、銳齒械(Acer argutum)、臺(tái)灣三角楓(Acer buergerianum)、 臺(tái)灣三角楓(Acer campestre)、櫪葉楓(Acer carpinifolium)、維奇山楂葉槭(Acer crataegifolium)、鬼械(Acer diabolicum)、二 柱械(Acer distylum)、荼條械(Acer girmala)、日本貝占梗海棠(Acer j aponica)、械木(Acer mono)、|$口十牛風(fēng)(Acer negundo)、 漂楓(Acer nigrum)、毛果槭(Acer nikoense)、日本槭(Acer nipponicum)、雞爪槭 (Acer palmatum)、挪威楓(Acer platanoides)、巖楓(Acer pseudoplatanus)、密花械 (Acer pycnanthum)、褐脈械(Acer ruf inerve)、糖械(Acer saccharum)、小葉施械(Acer sieboldianum)、小偕槭(Acer tschonoskii)、花偕槭(Acer ukurunduense)、七葉樹禾斗 七葉樹屬的七葉樹(Aesculus chinensis)、歐洲七葉樹(Aesculus hippocastanum)、 ^OfW (Aesculus turbinate)S ^hWM W^H Sli (Fraxinus americana) Λ 白錯(cuò)(Fraxinus chinensis)、金葉歐洲栲樹(Fraxinus excelsior)、白雞油(Fraxinus griffithii)、大葉錯(cuò)樹(Fraxinus hynchophylla)、日本白錯(cuò)木(Fraxinus japonica)、
10Fraxinus lanuginose、水曲柳(Fraxinus mandshurica)、花白臘木(Fraxinus ornus)、 Fraxinus oxyphylla、臼本本州白錯(cuò)木(Fraxinus spaethiana)、Fraxinus sieboldiana、 杜鵑花科越橘屬的狹葉越桔(Vaccinium angustifolium)、野生兔眼越橘(Vaccinium ashei)、Vaccinium australe、烏飯樹(Vaccinium bracteatum)、紅果越桔(Vaccinium hirtum)、扁枝越桔(Vaccinium japonicum)、大果越桔(Vaccinium macrocarpon)、歐洲 越桔(Vaccinium myrtillus)、腺齒越桔(Vaccinium oldhami)、紅莓苔子(Vaccinium oxycoccus)、櫻桃越橘(Vaccinium praestans)、Vaccinium smallii、篤斯越橘(Vaccinium uliginosumu)、越桔(Vaccinium vitis-idaea)、忍冬禾斗錦帶屬的錦帶花(Weigela florida)等。作為含佛手酚(CAS :486-60-2)的植物，列舉柑橘科柑橘屬的來檬(Citrus aurantifolia)、■ (Citrus aurantium)、f弗·^ ffl" (Citrus bergamia)Λ JC K (Citrus grandis)、八朔(Citrus hassaku)、伊予相(Citrus iyo)、袖(Citrus junos)、乳橘(Citrus kinokuni)、梓樣(Citrus limon)、香稼(Citrus medica)、夏禮(Citrus natsudaidai)、 葡萄柚(Citrus paradise)、早紅(Citrus reticulate)、舌甘禮(Citrus sinensis)、臭 (Citrus sphaerocarpa) ΛMIS (Citrus sudachi) λ^^^ (Citrus sulcata) Λ^^ζ (Citrus tachibma)、溫州柑橘(Citrus unshiu)、?？瞥羯俚暮袢~盤花木(Dorstenia contrajerva)、Dorstenia elliptica、桑禾斗無花果屬的木瓜格(Ficus auriculata)、愛玉 子(Ficus awkeotsang)、印度格樹(Ficus bengalensis)、垂葉格(Ficus benjamina)、無 花果(Ficus carica)、三角格(Ficus diversifolia)、印度橡膠樹(Ficus elastoca)、矮 小天仙果(Ficus erecta)、琴葉橡皮樹(Ficus lyrata)、格樹(Ficus microcarpa)、Ficus oxyphylla、薜蒸(Ficus pumila)、菩提樹(Ficus religiosa)、雀格(Ficus superba)、西克 莫無花果(Ficus sycomorus)、傘形科憲活屬的寬葉憲活(notopterygium franchetii)、植 物憲活(notopterygium incisium)、憲活(notopterygium rhizomes)等。本發(fā)明的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑可使用日本厚樸木蘭、杏仁、甘茶、葡萄柚、 麥冬、常春藤、肥皂草、魚腥草、母菊、棕兒茶、金縷梅、桑、米糠、問荊等。這些可單獨(dú)使用1 種，此外，還可組合2種以上使用。此外，這些植物可使用其粉碎物、其提取物、或提取水解 物的任一種。日本厚樸木蘭(Magnolia obovata)是指如下植物木蘭科木蘭屬的落葉喬木，分 布于從北海道到九州和中國，生長于山地，被栽種成庭園樹、公園樹建筑材等。也指學(xué)名為 Magnolia hypoleuca.藥用部位的樹皮中含有生物堿的厚樸堿、木蘭花堿、木酚素類的厚樸 酚、厚樸酚等，用于腹痛、腹瀉、嘔吐等癥狀緩和。扁桃(Primus dulcis)是指如下的植物薔薇科李屬的落葉喬木，生長在夏季 雨少的地域且適于溫暖的水土，現(xiàn)在，地中海沿岸各國和美國加州為主產(chǎn)地。也指學(xué)名為 Prunus amygdalus、Prunus communis、_Amygdalus dulcis、_Amygdalus communisΛAmygdalus Sativus0壓榨種子得到的油用于乳化劑、按摩油、香料、利口酒的制造、制造糕點(diǎn)等。甜杏 仁由于不含作為生氰糖苷的苦杏仁甙，因而可以生食，以黃油、鹽等調(diào)味來作為堅(jiān)果使用。甘茶(Hydrangea macrophylla)是指如下的植物虎耳草科繡球?qū)俚穆淙~灌木， 作為庭木或藥用而栽培。植物體中有甜味，作為替代砂糖用途使用。甜味成分已知為葉甜 素、異葉甜素，干燥葉被作為甘茶飲用。
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葡萄柚(Citrus paradise)是指柑橘科柑橘屬的植物，為在溫暖的地方栽培的 常綠喬木。果肉柔軟、多汁，含1 2%檸檬酸、酸味稍強(qiáng)、因檸檬苦素而有苦味，大小與夏橙 相當(dāng)。肉色因品種而異，為黃色至紅色。紅色由番茄紅素產(chǎn)生。用于生食或果汁等，但大部 分被加工成冷凍濃縮果汁。麥冬(Ophiopogonjponicus)是指如下植物瓶爾小草科(Ophiogrossaceae)瓶 爾小草屬(Ophiogrossum)的羊齒植物，分布于從北海道至九州和中國、朝鮮半島。別名也 被稱為龍須，根的膨大部被稱為麥門冬，麥門冬被用于滋養(yǎng)強(qiáng)壯、鎮(zhèn)咳、祛痰等。常春藤(Hedera helix)是指如下的植物為五加科常春藤屬，廣泛分布于歐洲、 北非的蔓生植物。別名也被稱為洋常春藤(English ivy)等。葉被用于治療結(jié)石癥、黃癥寸。肥皂草(Saponiria officinalis)是指為石竹科肥皂草屬的植物，原產(chǎn)自歐洲 的多年草。別名也被稱為common Soapwort。此外,學(xué)名也表示為Silence saponalia。作 為藥用，使用葉和根莖結(jié)合使用于濕疹等皮膚病。在歐洲自古以來代替肥皂來使用。魚腥草(Houttuynia cordata)是指魚腥草科魚腥草屬的植物，分布于本州、四 國、九州、沖繩、以及臺(tái)灣、中國、喜馬拉雅、爪哇等的多年草。魚腥草的地上部的干燥物作為 解熱、解毒、利尿、濕疹、消炎藥使用。已知，特有的臭氣來自于月桂醛或癸醛等醛類。在亞 洲被用于藥用，但在歐美還作為觀賞用而栽培。母菊(Matricaria chamomilla)是指原產(chǎn)自歐洲的菊科洋甘菊屬的1年草生植 物。別名也稱為日耳曼母菊、德國母菊、春黃菊。以藥用為目的而在以歐洲各地為首的溫暖 地帶栽培，藥用部位的頭狀花序被用于發(fā)汗、驅(qū)蟲的目的，此外從母菊提取的精油被用于利 口酒、香煙的賦香劑、香水、洗發(fā)精。棕兒茶(uncaria gambir)為茜草科鉤藤屬的植物，分布于馬來半島、蘇門答臘、文 萊等，為在東南亞洲各地栽培的蔓性常綠低木。作為藥用部位使用葉和小枝，以緩和便血、 尿血、血痢為目的使用。此外，還作為口內(nèi)清涼劑的原料使用。作為同樣的目的，還使用兒 茶(Acacia catechu)的心材。美國金縷梅(Hamamelis virginiana)是指原產(chǎn)自北美東部至南部的金縷梅科 金縷梅屬的植物。葉具有作為藥用茶被印第安人使用的歷史，用于瀉藥、痔瘡。已知葉和樹 皮中含金縷梅丹寧。桑(Morus alba)是指東亞原產(chǎn)的桑科桑屬的植物，還被稱別名為唐桑、白桑、白實(shí) 桑。中醫(yī)中將幼枝稱為柔枝、葉稱為柔葉、果實(shí)稱為柔椹子、根的皮稱為柔白皮。柔枝用于 風(fēng)濕病和神經(jīng)痛等，柔葉用于解熱，柔椹子用于滋養(yǎng)強(qiáng)壯、貧血、養(yǎng)毛，柔白皮用于消炎性利 尿、鎮(zhèn)咳、高血壓。米糠(Oryza sativa)是指禾本科禾本屬的植物，作為日本的主食的米的糠。問荊(Equisetum arvense)是木賊科木賊屬的羊齒植物，營養(yǎng)莖被稱為問荊，胞子 莖被稱為問荊草。問荊和問荊草從同一地下莖而生出，早春首先問荊草伸出，然后問荊展 開。問荊作為藥用而被服用于利尿、止血、鎮(zhèn)咳、解熱，此外，作為外用而用于皮膚疾病、漆瘡寸。包含由上述列舉的本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的化合物的植物和本發(fā)明的植物可使用葉、莖、芽、 花、木質(zhì)部、木皮部(樹皮)等地上部，以及根、塊莖等地下部、種子、樹脂等所有部位。此外，包含由上述列舉的本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的化合物的微生物可使用例如液體培養(yǎng)物、固體培養(yǎng)物， 在菌類的情形中可用于菌系體、子實(shí)體等任一種。上述列舉的包含由本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的化合物的植物、礦物、微生物、動(dòng)物，可作為原體、 原體的水解物、提取物、提取物的水解物使用。此外，這些化合物即便為化學(xué)合成的物質(zhì)也
可使用。作為用于從植物、礦物、微生物、動(dòng)物得到本發(fā)明的化合物的提取方法，例如在葡 萄柚的情況下，列舉如下方法用適當(dāng)?shù)娜軇┨崛⑵咸谚指稍锏母稍镂铩⑵浞鬯槲?、壓?葡萄柚得到的榨汁等，根據(jù)情況而實(shí)施水解處理，通過過濾等去除不溶部分，在從該液體除 去溶劑之后，使用柱層析法等通常的提純方案得到目標(biāo)化合物的方法。作為用于提取的溶劑，列舉甲醇、乙醇、丙醇、1，3_ 丁二醇等醇類，醚、丙酮、醋酸乙 酯、己烷、環(huán)己烷、二氯甲烷、氯仿等有機(jī)溶劑、水等。這些溶劑可單獨(dú)使用、還可混合2種以 上使用。提取條件沒有特別限制，例如溫度為5 95°C，優(yōu)選為15 85°C，在常溫下也可 適當(dāng)提取。壓力可以為常壓、加壓、減壓的任一種。提取時(shí)間因選定的溶劑而不同，為數(shù)分 鐘 數(shù)小時(shí)，可通過反復(fù)提取、振蕩提取、提取時(shí)間的延長等提高提取效率。此外，進(jìn)行水解 時(shí)，列舉酯酶這樣的酶進(jìn)行的分解、乳酸菌和酵母等微生物進(jìn)行的分解、鹽酸、硫酸、醋酸、 磷酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸、富馬酸、蘋果酸等酸進(jìn)行的分解、氫氧化鈉、氫氧化鉀等堿進(jìn)行 的分解等。水解的條件沒有特別限制，在使用酶或微生物時(shí)，根據(jù)所使用的酶或微生物的最 適溫度、最適PH，通常在10 55°C、pH3 8，進(jìn)行5 24小時(shí)左右水解。使用酸或堿進(jìn)行 水解時(shí)，通常在2 15重量％的濃度下在常溫 60°C進(jìn)行0. 5 24小時(shí)左右水解。這些提取物或提取物的水解物在根據(jù)需要調(diào)整pH之后，可通過冷凍干燥、減壓蒸 餾、減壓 真空干燥、噴霧干燥等公知的方法得到濃縮干燥物。提純處理的方法沒有特別限 制，例如可將通過正相和反相柱層析法進(jìn)行的提純、重結(jié)晶、再沉淀、脫色處理、脫臭處理等 組合來提純。通過上述方法提取的含葡萄柚的提取物、本發(fā)明所列舉的植物的提取物和本發(fā)明 所列舉的化合物，在使用細(xì)胞的分析中，可確認(rèn)顯著促進(jìn)了維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)。由此可 知，本發(fā)明的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑作為維生素C吸收用組合物、美白用組合物、以及 膠原產(chǎn)生用組合物是有用的。本發(fā)明中的“維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑”提高了鈉依賴性維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體1型 (SVCTl)或2型(SVCT2)的任一者或兩者的表達(dá)，換句話說，提高了作為SLC23A1或SLC23A2 基因的任一者或兩者所表達(dá)的的產(chǎn)物的表達(dá)。本發(fā)明中的“維生素C吸收促進(jìn)用組合物”是指維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑與維 生素C或其衍生物的至少1種以上組合的物質(zhì)，通過經(jīng)口或涂布而攝取的維生素C、或其衍 生物在目標(biāo)臟器中的維生素C濃度高的組合物。作為本發(fā)明中的“維生素C衍生物”，除了 2-0- α -D-吡喃葡糖基-抗壞血酸以外， 還可列舉L-抗壞血酸單硬脂酸酯、L-抗壞血酸單棕櫚酸酯、L-抗壞血酸單油酸酯等抗壞血 酸單烷基酯類；L-抗壞血酸單磷酸酯、L-抗壞血酸-2-硫酸等抗壞血酸單酯衍生物；L-抗 壞血酸二硬脂酸酯、L-抗壞血酸二棕櫚酸酯、L-抗壞血酸二油酸酯等抗壞血酸二烷基酯 類；L-抗壞血酸二磷酸酯等抗壞血酸二酯衍生物、L-抗壞血酸三硬脂酸酯、L-抗壞血酸三 棕櫚酸酯、L-抗壞血酸三油酸酯等抗壞血酸三烷基酯類；L-抗壞血酸三磷酸酯等抗壞血酸
13三酯衍生物等，但并不限于這些。作為鹽，可列舉抗壞血酸與各種鹽基的鹽。例如堿金屬鹽 (例如鈉鹽等)、堿土類金屬鹽(例如鈣鹽、鎂鹽等)等，但并不限于這些。本發(fā)明中的“美白用組合物”是指對(duì)原有的色素斑、雀斑顯示淡化作用的組合 物。色素斑、雀斑是由于黑素生成過量并沉積而發(fā)生的結(jié)果，維生素C為與黑素生成有很 大關(guān)系的酪氨酸酶的阻礙物質(zhì)，還已知其增進(jìn)從氧化型濃色黑素變成還原型淡色黑素的作 用。臨床上報(bào)導(dǎo)了改善現(xiàn)有的色素斑、雀斑等的色素沉積(非專利文獻(xiàn)7:臨皮1967. Vol 21 (7). 725-729)。本發(fā)明的美白用組合物是指通過提高皮膚細(xì)胞中的維生素C濃度而增強(qiáng) 維生素C的美白作用的組合物。本發(fā)明的美白用組合物只要包含本發(fā)明的維生素C吸收促 進(jìn)用組合物即可，進(jìn)而，只要不阻礙維生素C吸收促進(jìn)作用則還可另行添加添加物來調(diào)整。本發(fā)明中的“膠原產(chǎn)生用組合物”是指通過提高維生素C濃度而增強(qiáng)維生素C具 有的膠原產(chǎn)生促進(jìn)作用的組合物。例如，膠原產(chǎn)生細(xì)胞為皮膚細(xì)胞時(shí)，指的是提高肌膚潤澤 的組合物，膠原產(chǎn)生細(xì)胞為骨母細(xì)胞時(shí)，指的是增強(qiáng)骨強(qiáng)度的組合物。本發(fā)明的膠原產(chǎn)生用 組合物包含本發(fā)明的維生素C吸收促進(jìn)用組合物即可，進(jìn)而，只要不阻礙膠原產(chǎn)生促進(jìn)作 用則還可以另行添加添加物來調(diào)整。本發(fā)明中的“葡萄糖苷酶劑”是指其自身具有葡萄糖苷酶活性的物質(zhì)、或使葡萄 糖苷酶活性活化的物質(zhì)。作為其自身具有葡萄糖苷酶活性的物質(zhì)，列舉例如酵母、雙歧菌、 乳酸菌，進(jìn)而，還可以使用源自鏈球菌屬、曲霉菌屬、鏈霉菌屬、根霉屬、梭桿菌屬、鏈霉菌屬 等的微生物的葡萄糖苷酶，這些并沒有限制。此外，作為使葡萄糖苷酶活性活化的物質(zhì)，可
(Echinacea purpurea、Echinacea 已ngustifolia、Echinacea palIiEchinacea simul&t&、Echin&ce已 ρΒΓΒ οχΒΛEchinacea atrorubens)等(I禾lit 獻(xiàn)ι 日本特開2005-029546號(hào)公報(bào))，但并不限于此。本發(fā)明的葡萄糖苷酶劑可將上述原 材料直接粉碎使用，此外，可以使用上述原材料的提取物、提取水解物。本發(fā)明的劑或者組合物可作為食品、醫(yī)藥品、化妝品等使用。作為食品，除了通常 的食品以外，還可作為營養(yǎng)輔助食品、功能性食品、健康食品、特定保健用食品等使用，還可 配合到例如果汁這樣的飲料中。醫(yī)藥品中，關(guān)于給藥，在將有效成分經(jīng)口給藥、非經(jīng)口攝取時(shí)，可與適于直腸內(nèi)給 藥、注射等給藥方法的固體或液體的醫(yī)藥用無毒性載體混合，以慣用的醫(yī)藥制劑的形態(tài)給 藥。作為形態(tài)，列舉例如粉末、散劑、顆粒、片劑、膠囊等固形劑、溶液劑、懸浮劑、乳劑等的液 劑、冷凍干燥制劑等，這些制劑可通過常規(guī)方案來調(diào)制。作為上述的醫(yī)藥品用無毒性載體， 列舉例如葡萄糖、乳糖、蔗糖、淀粉、甘露醇、糊精、脂肪酸甘油酯、聚乙二醇、羥乙烯淀粉、乙 二醇、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、氨基酸、明膠、清蛋白、水、生理食鹽水等。還可根據(jù)需要 適當(dāng)添加穩(wěn)定化劑、濕潤劑、乳化劑、結(jié)合劑、張度劑等添加劑。本發(fā)明的劑或者組合物中，被選定的化合物的有效給藥量根據(jù)對(duì)象者的年齡、體 重、癥狀、給藥路徑、給藥日程、制劑形態(tài)等來適當(dāng)選擇決定，例如經(jīng)口用的情況下，甜菊甙 的給藥量優(yōu)選為每1日1 5000mg，特別優(yōu)選為10 lOOOmg。此外，維生素C優(yōu)選為每1 日10 2000mg，特別優(yōu)選為100 lOOOmg?？蓪⑵浒?日分?jǐn)?shù)次給藥。本發(fā)明的劑或者組合物中，被選定的植物、動(dòng)物、礦物、微生物的粉碎物、干燥物、 提取物、提取水解物的有效給藥量根據(jù)對(duì)象者的年齡、體宜、癥狀、給藥路徑、給藥日程、制 劑形態(tài)、原材料的活性強(qiáng)度等來適當(dāng)選擇決定，例如在經(jīng)口用時(shí)，魚腥草提取物的給藥量優(yōu)
14選為每1日1 50000mg，特別優(yōu)選為10 lOOOmg。此外，維生素C優(yōu)選為每1日10 2000mg，特別優(yōu)選為100 lOOOmg。可將其按1日分?jǐn)?shù)次給藥。此外，本發(fā)明的劑或者組合物作為皮膚外用可制成藥事法中所謂的化妝品、醫(yī)藥 部外品、醫(yī)藥品中等所含產(chǎn)品。用于乳液、乳油、洗劑這樣的護(hù)膚產(chǎn)品、軟膏等。雖然并沒有 特別限定，但該劑型可得到水溶液系、增溶系、乳化系、粉末系、油液系、凝膠系、軟膏系、溶 膠系、水-油2層系、水-油-粉末3層系等廣泛的劑型。本發(fā)明的劑或者組合物中，被選定的化合物的皮膚外用中的含量根據(jù)癥狀的不同 而適當(dāng)選擇，例如為夏至草素時(shí)，為總重量的0. 001 10重量％左右、優(yōu)選為0. 01 2重 量％。此外，維生素C衍生物使用2-0- α -D-卩比喃葡糖基-抗壞血酸時(shí)，為總重量的0. 001 50重量％左右、優(yōu)選為0. 1 10重量％。將其按1 4次/日涂布當(dāng)然也無妨。本發(fā)明的劑或者組合物中，被選定的植物的皮膚外用中含量根據(jù)癥狀的不同而適 當(dāng)選擇，例如為葡萄柚提取物時(shí)，為總重量的0. 001 50重量％左右、優(yōu)選為0. 01 10重 量％。此外，維生素C衍生物使用2-0- α -D-吡喃葡糖基-抗壞血酸時(shí)，為總重量的0. 001 50重量％左右、優(yōu)選為0.1 10重量％。將其按1 4次/日涂布當(dāng)然也無妨。以下列舉實(shí)施例具體說明，但并不限于此。實(shí)施例1(植物的提取)在曰本厚樸木蘭(Magnolia obovata)、杏仁(Prunus dulcis)、甘茶(Hydrangea macrophylla)> 葡萄 t由(Citrus paradise)> 麥冬(Ophiopogon jponicus)、常 藤 (Hedera helix)、月巴阜草(Saponiria officinalis)、魚月星草(Houttuynia cordata)、母菊 (Matricaria chamomilla)、掠兒茶(uncalia gambir)、金縷梅(Hamamelis virginiana)、 桑(Morus alba)、米糖(Oryza sativa)、問荊(Equisetum arvense)的干燥物 IOOOg 中力口 入90%乙醇液12L(升)，40°C下攪拌5小時(shí)，用濾紙回收濾液。重復(fù)2次該操作，用蒸發(fā) 器對(duì)濾液減壓濃縮，除去乙醇溶劑。其結(jié)果，得到日本厚樸木蘭提取物120. 6g、杏仁提取 物150. 4g、甘茶提取物170. 9g、葡萄柚提取物127. 3g、麥冬提取物115. 3g、常春藤提取物 204. Sg、肥皂草提取物143. 7g、魚腥草提取物133. 9g、母菊提取物193. 2g、棕兒茶提取物 168. 2g、金縷梅提取物112. 0g、桑袖山物103. Sg、米糠提取物184. 7g、問荊提取物102. 7g的 干燥重量。實(shí)施例2(肝細(xì)胞中的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體(SVCT)的產(chǎn)生促進(jìn)活性的測定)將源自人類肝癌的!fepG2細(xì)胞(大日本制藥株式會(huì)社制)種到直徑3.5cm的培 養(yǎng)皿(7 7 > - >社制)使得成為5X 103cells，在含有10%的滅活胎牛血清(FBS)的 DMEM培養(yǎng)液7 二社制)中，在37°C、5% 二氧化碳存在下培養(yǎng)3天。3天后置換成新 的培養(yǎng)液，并作為被驗(yàn)物質(zhì)添加用的細(xì)胞。作為被驗(yàn)物質(zhì)的夏至草素、膽留醇苯甲酸酯、 ugaferine, lapiferine、乙酸香葉酯、橙花叔醇、二氫茉莉酮、香芹基乙酸、愈創(chuàng)木奧、二氫 松柏醇、甜菊甙、DL-α -菔烯、馬鞭草苷、1-二十七烷醇、4-羥基香豆素、膽酸、膽留醇油酸 酯、白蠟樹甙、佛手酚從7 t 二〉社買入。被驗(yàn)物質(zhì)溶解于二甲亞砜(DMSO)中，添加到被驗(yàn) 物質(zhì)添加用的細(xì)胞中使得最終濃度為100μΜ，6小時(shí)后，使用TRIZOL試劑(4 > e卜α夕 工乂社制)，通過常規(guī)方法回收全RNA。回收的全RNA使用First-StrandcDNAstrandcDNA
15Synthesis kit ( 7 * \ Λ K 4才寸4工 > 義社制)變換成cDNA，供于實(shí)時(shí)PCR。實(shí)時(shí)PCR 根據(jù)QuantiTectSYBRGreen PCR Kit (今了 ” >社制)來調(diào)制模板，使用實(shí)時(shí)PCR裝置(MJ 1J寸一 +社制)測定促進(jìn)SVCTl、SVCT2和甘油醛3-磷酸脫氫酶(GAPDH)mRNA的表達(dá)的活 性。已知GAPDH基因作為看家基因，在全部細(xì)胞中恒定地表達(dá)，因此，作為內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)的對(duì)照 基因被廣泛使用。此外，將被驗(yàn)物質(zhì)無添加(DMS00. 1%)作為對(duì)照組。PCR用引物和PCR 條件如下所示。〈引物〉SVCTl 用5，-TTC TGA TTGTGC TGC TGACC-3，(序列表序列號(hào) 1)5，-ATG TCA CTGTTG GCA TGAGC-3，(序列表序列號(hào) 2)SVCT2 用5，-GGA ACC TCTTTG TGC TTGGA-3，(序列表序列號(hào) 3)5，-CCT GGG ATGGTG TTA TC CAG-3，(序列表序列號(hào) 4)GAPDH 用5，-CGA CCA CTTTGT CAA GCTCA-3，(序列表序列號(hào) 5)5，-TTC CTC TTGTGC TCT TGCTG-3，(序列表序列號(hào) 6)<PCR的反應(yīng)條件〉關(guān)于SVCTl 和 SVCT2以(i)95°C、15 分鐘一(ii)94°C、15 秒一(iii) 55°C、30 秒一(iv) 72°C、30 秒為 1 循環(huán)，進(jìn)而重復(fù)35次(ii) (iv)后，在4°C下保存。關(guān)于GAPDH以(i)95°C、15 分種一(ii)94°C、15 秒一(iii) 58°C、30 秒一(iv) 72°C、30 秒為 1 循環(huán)，進(jìn)而重復(fù)35次(ii) (iv)后，在4°C下保存。PCR引物的校正通過PCR產(chǎn)物的溶解曲線和RT-PCR產(chǎn)物的電泳來確認(rèn)。目標(biāo) 基因的表達(dá)量如下計(jì)算并評(píng)價(jià)在PCR產(chǎn)物的指數(shù)函數(shù)擴(kuò)增區(qū)域的適當(dāng)位置設(shè)定閾值 (threshold)，并算出從閾值與PCR產(chǎn)物擴(kuò)增曲線的交點(diǎn)得到的循環(huán)數(shù)(thresholdcycle Ct值)。各被驗(yàn)物質(zhì)間的表達(dá)量的評(píng)價(jià)如下進(jìn)行將作為對(duì)照組的被驗(yàn)物質(zhì)無添加 (DMS00. 1 % )的SVCTl或SVCT2的mRNA的Ct值除以GAPDH的Ct值而得到值設(shè)為1，與被 驗(yàn)物質(zhì)添加時(shí)的表達(dá)量相比較研究。結(jié)果示于表1和表2。其結(jié)果可知，與對(duì)照組相比，促進(jìn)SVCTl和SVCT2兩者表達(dá)的化合物為夏至草素和 膽甾醇苯甲酸酯，僅促進(jìn)SVCTl表達(dá)的化合物為甜菊甙、DL-α -菔烯、馬鞭草苷、1-二十七 烷醇、4-羥基香豆素、膽酸、膽留醇油酸酯、白蠟樹甙、以及佛手酚，僅促進(jìn)SVCT2表達(dá)的化 合物為ugaferine、lapiferine、乙酸香葉酯、橙花叔醇、二氫茉莉酮、香芹基乙酸、愈創(chuàng)木 奧、以及二氫松柏醇。此外，在成骨細(xì)胞中使用公知具有促進(jìn)SVCT2表達(dá)的作用的地塞米松來嘗試進(jìn)行 與本發(fā)明的化合物的活性比較評(píng)價(jià)，地塞米松在肝細(xì)胞中完全看不到促進(jìn)SVCT2表達(dá)的作用。表1肝細(xì)胞中的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體(SVCTl)的產(chǎn)生促進(jìn)活性的測定
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表2肝細(xì)胞中的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體(SVCT2)的產(chǎn)生促進(jìn)活性的測定 實(shí)施例3(黑素細(xì)胞中的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體(SVCT)的產(chǎn)生促進(jìn)活性的測定)將源自人類正常黑素細(xì)胞的NHEM細(xì)胞(夕，#々社制)種到直徑3. 5cm的培養(yǎng) 皿(7 7 > - >社制)使得成為5X 103cells，在含有特定添加劑的254S培養(yǎng)液(夕，# 々社制)中，在37°C、5% 二氧化碳存在下培養(yǎng)8天。8天后，置換成新的培養(yǎng)液并作為被驗(yàn) 物質(zhì)添加用的細(xì)胞。作為被驗(yàn)物質(zhì)，使用從實(shí)施例1提取的植物、日本厚樸木蘭(Magnolia obovata) > {Ζ (Prunus duicis)、1ξ[" ^ (Hydrangea macrophylla) > 罾 t由(Citrus paradise)、麥冬(Ophiopogon jponicus)、常春藤(Hedera helix)、月巴阜草(Saponiria officinalis)、魚月星草(Houttuynia cordata)、母菊(Matricaria chamomilla)、掠兒 茶(uncalia gambir)、金縷梅(Hamamelis virginiana)、桑(Morus alba)、米糖(Oryza sativa)、問荊(Equisetum arvense)。被驗(yàn)物質(zhì)再溶解到50% 1，3_ 丁二醇水中使得成為
固體成分，添加到被驗(yàn)物質(zhì)添加用的細(xì)胞中使得該溶液的最終濃度為0. 5%,6小時(shí)后， 使用TRIZOL試劑(4 > Ii卜α夕工 > 社制)，通過常規(guī)方法回收全RNA。使用了 SVCT1、 SVCT2和GAPDH的實(shí)時(shí)PCR的表達(dá)評(píng)價(jià)通過與實(shí)施例2同樣的評(píng)價(jià)方法實(shí)施。結(jié)果示于表 3。其結(jié)果，與對(duì)照組相比，可知從實(shí)施例1提取的植物提取物促進(jìn)了 SVCT2的表達(dá)。 此外，已知在成骨細(xì)胞中具有促進(jìn)SVCT2表達(dá)作用的地塞米松，在黑素細(xì)胞中完全看不到 促進(jìn)SVCT2表達(dá)的作用。另外，本實(shí)施例中使用的源自人類正常黑素細(xì)胞的NHEM細(xì)胞由于 看不到SVCTl的表達(dá)，因而無法對(duì)促進(jìn)SVCTl表達(dá)的活性實(shí)施評(píng)價(jià)。表3黑素細(xì)胞中的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體(SVCT2)的產(chǎn)生促進(jìn)活性的測定
常春藤提取物2. 0肥皂草提取物2. 3魚腥草提取物1. 5母菊提取物2. 4棕兒茶提取物3. 9金縷梅提取物2. 3桑提取物2. 2米糠提取物2. 4問荊提取物2. 5實(shí)施例4(黑素生成抑制試驗(yàn))為了評(píng)價(jià)結(jié)合使用本發(fā)明中得到的植物與維生素C對(duì)美白作用的效果而通過以 下的試驗(yàn)測定黑素生成抑制活性。作為生成黑素的細(xì)胞，使用源自小鼠的B16-F10黑色素 瘤細(xì)胞，種到48孔板的各孔中使得成為2X 103cells，在添加FBS以使最終濃度為10%的 含氨基葡萄糖的最小必須培養(yǎng)液(MEM)中培養(yǎng)5天。其后，將培養(yǎng)液交換為含10%FBS、茶 堿的MEM，并作為被驗(yàn)物質(zhì)添加用的細(xì)胞。被驗(yàn)物質(zhì)使用如下物質(zhì)在50% 1，3- 丁二醇水 中再溶解實(shí)施例1中得到的日本厚樸木蘭、杏仁、甘茶、葡萄柚、麥冬、常春藤、肥皂草、魚腥 草，使得固體成分為1 %。添加濃度按照被驗(yàn)物質(zhì)的最終濃度為0. 5%、以及同時(shí)維生素C的 最終濃度為100μ g/ml來添加到被驗(yàn)物質(zhì)添加用的細(xì)胞中，培養(yǎng)3天，作為黑素生成抑制評(píng) 價(jià)用的試樣。黑素量通過如下求得通過刮刀處理將細(xì)胞剝離、離心后，通過十二烷基 硫酸鈉(SDS)增溶，測定475nm、260nm的吸光度而求得。黑素生成抑制率通過如下算出將 475nm、260nm的吸光度的在添加了被驗(yàn)物質(zhì)的培養(yǎng)液中培養(yǎng)的細(xì)胞的吸光度作為S475、S260， 將475nm、260nm的吸光度的在不添加被驗(yàn)物質(zhì)的培養(yǎng)液中培養(yǎng)的細(xì)胞的吸光度作為C475、 C26tl，通過下式1算出。該結(jié)果示于表4。如表4所示可知，單獨(dú)添加被驗(yàn)物質(zhì)時(shí)，看不到黑 素生成抑制效果，但通過與維生素C同時(shí)添加，則與維生素C單獨(dú)相比明顯抑制黑素生成。 由此可知，含有這些被驗(yàn)物質(zhì)和維生素C的組合物具有黑素生成抑制功能，具有美白作用。式1黑素生成抑制率(%) = i-[(S475/S260)/(C475/C260)] X 100表 4黑素生成抑制試驗(yàn)
19 實(shí)施例5(三維皮膚模型的黑素生成抑制試驗(yàn))為了評(píng)價(jià)結(jié)合使用本發(fā)明中得到的葡萄柚提取物、作為維生素C衍生物的 2-0- α -D-吡喃葡糖基_抗壞血酸(AA2G)、以及作為葡萄糖苷酶活化劑使用的紫錐花提取 物對(duì)美白作用的效果，通過以下的試驗(yàn)測定黑素生成抑制活性。作為評(píng)價(jià)體系，使用” 7 #々社銷售的包含源自正常人類的黑素細(xì)胞的三維皮膚 模型(MEL-300試劑盒)。按照試劑盒的說明而開始培養(yǎng)，培養(yǎng)液和被驗(yàn)物質(zhì)每2天交換為新 的物質(zhì)，進(jìn)行10天培養(yǎng)。10天后，在磷酸鹽緩沖液(PBS)中洗滌組織后，回收到1. 5ml管中， 添加蒸餾水100 μ 1，進(jìn)行超聲波破碎。進(jìn)而，加入900 μ 1 Soluene-350 (和光純藥社制)， 在100°C靜置45分鐘，使組織和黑素增溶，不溶組分通過離心分離(10000rpm、10分鐘)除 去。黑素的測定通過合成黑素(》- ^ K V , ★社制)做成標(biāo)準(zhǔn)曲線并通過500nm的 吸光度算出。被驗(yàn)物質(zhì)使用在50% 1，3-丁二醇水中再溶解實(shí)施例1中得到的葡萄柚以使固體 成分為的物質(zhì)(Gr)、2-0-α -D-批喃葡糖基-抗壞血酸(AA2G)、用30%乙醇水提取紫錐 花的葉的干燥物的紫錐花提取液(Ech)(含有0.3%紫錐花提取物(固體成分))。向三維 皮膚模型中添加的濃度按照Gr的最終濃度為0. 5%、或者同時(shí)AA2G的最終濃度為2%、或 者同時(shí)Ech為0. 2%來添加，分別評(píng)價(jià)單獨(dú)、結(jié)合使用時(shí)的黑素生成抑制活性。其結(jié)果示于圖1。如圖1所示可知，葡萄柚提取液(Gr)、2-0- α -D-吡喃葡糖基-抗壞血酸(AA2G)、 紫錐花提取液(Ech)均在單獨(dú)時(shí)與無添加的對(duì)照組相比看不到顯著性的差異，通過將3者 結(jié)合使用而看到顯著性的黑素生成抑制活性。實(shí)施例6(人類皮膚經(jīng)紫外線照射的炎癥的抑制、色素沉積的改善試驗(yàn))1.被驗(yàn)者使用健康成人男性10名(27 35歲)的背部進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2.驗(yàn)體使用作為維生素C衍生物的2-0- α -D-吡喃葡糖基-抗壞血酸(AA2G)和 作為維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑的葡萄柚提取物(GFE)，按下述表5所示的組成調(diào)制驗(yàn)體。以下，使用下述組成的驗(yàn)體進(jìn)行評(píng)價(jià)試驗(yàn)。表 5
AA2GGFE1,3-BG提純水實(shí)施例62. 0%0. 003%0. 247%剩余比較例12. 0%0. 0%0. 247%剩余比較例20. 0%0. 003%0. 247%剩余比較例30. 0%0. 0%0. 247%剩余AA2G 林原制2_0_ α -D-吡喃葡糖基-抗壞血酸CFE:—丸7 了瓜二 7制葡萄柚果實(shí)提取物7 ^ ；^ l· ^ 7葡萄柚B中的固體 成分1，3_BG :1，3_ 丁二醇3.試驗(yàn)方法3. 1炎癥的抑制效果的評(píng)價(jià)在背部將各驗(yàn)體設(shè)定4X 4cm的涂布區(qū)域，涂布8周驗(yàn)體。涂布量每1次涂布3mL， 1周約4次、8周約32次(28 35次)。8周后，測定該部位的LW表色系的f值，進(jìn)而， 照射MED的1. 2倍的太陽紫外線，2天后，測定同部位的a*值。紫外線照射2天后的a*值 減去紫外線照射前的f值，求出Δ 值。Δ 值越小，炎癥的抑制效果越高。3. 2色素沉積的改善效果的評(píng)價(jià)在背部將各驗(yàn)體設(shè)定4X4cm的涂布區(qū)域，測定驗(yàn)體涂布前的LW表色系的L* 值。接著，照射MED的1.2倍的太陽紫外線，2天后，測定同部位的L*值。從測定2天后的
值后開始涂布驗(yàn)體。涂布量每1次涂布3mL、l周約4次、8周約32次(28 35次)。紫 外線照射2、4、8周后測定同部位的L*值。紫外線照射2天后和紫外線照射2、4、8周后的 L*值減去驗(yàn)體涂布前(紫外線照射前)的L*值，求出ΔΙ；值。ΔΙ；值的負(fù)的值越小，色素 沉積越得到改善。3. 3測定機(jī)器
測色MIN0LTA制分光測色計(jì)CM-800D紫外線照射S0LARLIGHT CO.制 MODEL XPS 2004.測定結(jié)果4. 1炎癥的抑制效果各驗(yàn)體涂布部位的Δ 值示于表6、圖2。表6
驗(yàn)體Δ a*值實(shí)施例60. 82比較例11. 33比較例22. 25比較例32. 10僅配合作為維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑的GFE的比較例2的Δ 值與任何也未配 合的比較例3的Af值為幾乎相同的值。因此可知，僅GFE則無法得到抗炎癥效果。另一 方面，結(jié)合使用GFE與維生素C衍生物的AA2G的實(shí)施例6與比較例3相比顯示顯著性的抗 炎癥效果。而且，實(shí)施例6的Δ 值降低至僅配合AA2G的比較例1的Δ 值的60%。由 于看不到GFE自身的抗炎癥效果，因而結(jié)合使用GFE與AA2G的實(shí)施例6與單獨(dú)配合AA2G 的比較例1相比，顯示優(yōu)異的抗炎癥效果，這可以說是無法預(yù)測的顯著的效果。4. 2色素沉積的改善效果各驗(yàn)體涂布部位的Δ L*值示于表7、圖3。表7
驗(yàn)體UV照射 、‘- mUV照射 2天后UV照射 2周后UV照射 4周后UV照射 8周后實(shí)施例60- 2. 17-0. 95-0. 500. 44比較例10-2. 07-1. 57-1. 25-0. 09比較例20-2. 06-2. 23-1. 75- 0. 15比較例30-2. 02-1. 98-1. 92-0. 99 在紫外線照射2周后，作為僅配合維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑的GFE的比較例2的 Δ L*值與未配合任何物質(zhì)的比較例3的ΔΙ；值相比負(fù)的值變大。因此可知，僅GFE則看不 到色素沉積改善效果。另一方面，將GFE與作為維生素C衍生物的AA2G結(jié)合使用的實(shí)施例 6與比較例3相比，顯示顯著性的色素沉積改善效果。而且，實(shí)施例6的ΔΙ；值降低至僅配 合AA2G的比較例1的ΔΙ；值的負(fù)的值的60%，與比較例1相比，顯示顯著性的色素沉積改 善效果。由于看不到GFE自身的色素沉積改善效果，因而結(jié)合使用GFE與AA2G的實(shí)施例6
22與單獨(dú)配合AA2G的比較例1相比顯示優(yōu)異的色素沉積改善效果，這可以說是無法預(yù)測的顯 著的效果。在紫外線照射4周后，也得到與紫外線照射2周后幾乎同樣的效果。在紫外線 照射8周后，實(shí)施例6的色素沉積改善效果也最優(yōu)異。以下舉出配方例具體說明，但并不限 于此。實(shí)施例7(葡萄柚提取物的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體(SVCT)的產(chǎn)生促進(jìn)活性的測定)將小鼠黑色素瘤B16-F10細(xì)胞(大日本制藥株式會(huì)社制)種到直徑3. 5cm的培 養(yǎng)皿(7 TAzr >社制)中使得成為5X103cells，在含有10%的滅活胎牛血清(FB S)的 DMEM培養(yǎng)液(二社制)中、在37°C、5% 二氧化碳存在下培養(yǎng)。培養(yǎng)3天后，置換成新 的培養(yǎng)基并添加作為被驗(yàn)物質(zhì)的葡萄柚(Citrus paradise)提取物，使得培養(yǎng)基中的最終 濃度為0.6、1.8、6、18、60、18(^8/!111，6小時(shí)后使用11 12(^試劑(4 卜口夕工 >社制) 通過常規(guī)方法回收全RNA。作為葡萄柚提取物，添加實(shí)施例6中使用的一丸7 τ ；^ 7制葡 萄柚果實(shí)提取物7 r ^^ W > ζ葡萄柚B。該葡萄柚提取物為如下得到的物質(zhì)在葡萄 袖 citrus paradise Macfadyen (Rutaceae)的新鮮果實(shí) 5kg 中力口入 1,3- 丁二醇，浸淸，過 濾，向該濾液20kg中加入提純水20kg混合、過濾，從而得到。葡萄柚提取物的濃度換算為 固體成分濃度時(shí)為葡萄柚提取液中0. 6% (6mg/mL)。回收的全 RNA供于實(shí)時(shí)定量 one step RT-PCR。根據(jù) QuantiTect SYBR Green PCR Kit( * 7 >社制)調(diào)制模板，使用PCR裝置(MJ V寸一 ★社制)，測定促進(jìn)SVCT2和甘油 醛3-磷酸脫氫酶(GAPDH) mRNA的表達(dá)活性。PCR用引物和PCR條件如下所示?！匆铩礢VCT2 用Mm_Slc23a2_l_SG QuantiTect Primer Assay (、7 V >社制)GAPDH 用5，-AAC TTT GGC ATT GTG GAA GG-3，(序列表序列號(hào) 7)5，-ACA CAT TGG GGG TAG GAA CA-3，(序列表序列號(hào) 8)<PCR的反應(yīng)條件〉以(i) 50"C、30 分鐘一(ii)95"C、15 分鐘一(iii)94°C、15 秒一(iv) 55"C、30 秒 —(v)72°C、30秒為1循環(huán)，進(jìn)而重復(fù)40次(ii) (ν)后，在4°C下保存。PCR引物的校正通過PCR產(chǎn)物的溶解曲線和RT-PCR產(chǎn)物的電泳來確認(rèn)。目標(biāo)基 因的表達(dá)量如下表示在PCR產(chǎn)物的指數(shù)函數(shù)擴(kuò)增區(qū)域的適當(dāng)位置設(shè)定閾值，并從閾值與 PCR產(chǎn)物擴(kuò)增曲線的交點(diǎn)得到循環(huán)數(shù)(Ct值)，通過以下式算出，以相對(duì)于作為內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)的 GAPDH的表達(dá)量的數(shù)值表示。式2RNA 表達(dá)量 Y = 2-(ct)式3SVCT2 的表達(dá)量=Y(SVCT2)/Y(GAPDH)表達(dá)量的比較評(píng)價(jià)將被驗(yàn)物質(zhì)無添加的對(duì)照組的SVCT2的表達(dá)量作為1并通過相 對(duì)值進(jìn)行比較。結(jié)果示于圖4。其結(jié)果可知，SVCT2的表達(dá)的促進(jìn)依賴于葡萄柚提取物的 濃度?？紤]到由PCR的原理上Ct值的計(jì)測值產(chǎn)生的誤差，進(jìn)而實(shí)施例3中SVCT產(chǎn)生促進(jìn)
23效果為1. 4倍以上的植物提取物通過在實(shí)施例4中的黑素生成抑制試驗(yàn)中與維生素C同時(shí) 添加從而與維生素C單獨(dú)相比具有黑素抑制效果的增強(qiáng)作用，因此，把SVCT的表達(dá)量與對(duì) 照組相比增加1.4倍以上的物質(zhì)，判斷為有SVCT促進(jìn)效果。其結(jié)果，可知在小鼠黑色素瘤 B16-F10細(xì)胞中，葡萄柚提取物18μ g/ml以上具有促進(jìn)SVCT2表達(dá)的效果。實(shí)施例8(化合物的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體(SVCT)的產(chǎn)生促進(jìn)活性的測定)將源自人類大腸癌的Caco2細(xì)胞(大日本制藥株式會(huì)社制)種到直徑3.5cm的培 養(yǎng)皿使得成為5X 103cells，在含有10%的滅活胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)液中、在37°C、 5%二氧化碳存在下培養(yǎng)。培養(yǎng)3天后，置換成新的培養(yǎng)基并添加作為被驗(yàn)物質(zhì)的甜菊甙 (CAS 57817-89-7)、乙酸香葉酯(CAS 105-87-3)、橙花叔醇(CAS :7212-44_4)、二氫茉莉 酮(CAS :1128-08-01)、夏至草素(CAS :465_92_9)、馬鞭草苷(CAS :548_37_8)、白蠟樹甙 (CAS :524-30-1))、佛手酚(CAS :486-60_2)，使得培養(yǎng)基中的最終濃度為100 μ M。從被驗(yàn)物 質(zhì)添加起6小時(shí)后使用TRIZOL試劑通過常規(guī)方法回收全RNA。回收的全RNA供于實(shí)時(shí)定量 one StepRT-PCR0 根據(jù) QuantiTectSYBR Green PCR Kit ( ^f 7 y > 社制)調(diào)制模板，使用 PCR裝置(MJ 'J寸一 f社制)測定促進(jìn)SVCTl、SVCT2和甘油醛3-磷酸脫氫酶(GAPDH)mRNA 的表達(dá)活性。PCR用引物使用與實(shí)施例2中使用的物質(zhì)同樣的物質(zhì)。PCR條件如下所示。<PCR的反應(yīng)條件〉關(guān)于SVCTl 和 SVCT2以(i) 50"C、30 分鐘一(ii)95"C、15 分鐘一(iii)94°C、15 秒一(iv) 55"C、30 秒 —(v)72°C、30秒為1循環(huán)，進(jìn)而重復(fù)40次(ii) (ν)后，在4°C下保存。關(guān)于GAPDH(i)50 °C、30 分鐘一(ii)95 °C、15 分鐘一(iii)94 °C、15 秒一(iv)58°C、30 秒 —(v)72°C、30秒為1循環(huán)，進(jìn)而重復(fù)35次(ii) (iv)后，在4°C下保存。PCR引物的校正通過PCR產(chǎn)物的溶解曲線和RT-PCR產(chǎn)物的電泳來確認(rèn)，通過與實(shí) 施例7同樣的算出方法進(jìn)行目的基因的表達(dá)量的比較。結(jié)果示于表8。與實(shí)施例7同樣，將 與對(duì)照組相比增加了 1. 4倍以上SVCT的表達(dá)量的物質(zhì)作為具有SVCT促進(jìn)效果時(shí)，僅促進(jìn) SVCTl表達(dá)的化合物為甜菊甙、乙酸香葉酯、二氫茉莉酮、馬鞭草苷、白蠟樹甙、佛手酚，僅促 進(jìn)SVCT2表達(dá)的化合物為夏至草素?？芍然ㄊ宕即龠M(jìn)SVCT1、SVCT2這兩者表達(dá)。表8被驗(yàn)物質(zhì)/GAPDH (相對(duì)對(duì)照比)SVCTlSVCT2甜菊甙1.561.09乙酸香葉酯1.571.12橙花叔醇1.821.97二氫茉莉酮2.031.33夏至草素1.391.62馬鞭草苷1.521.00白蠟樹甙2.281.17佛手酚2.191.28實(shí)施例9(使用三維肝細(xì)胞模型的化合物的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體(SVCT)的產(chǎn)生促進(jìn)活性的測 定)為了在接近于生物體內(nèi)的環(huán)境中進(jìn)行評(píng)價(jià)，使用在中空纖維內(nèi)將人類肝細(xì)胞三維 培養(yǎng)的人類三維肝細(xì)胞模型TESTLIVER (東洋紡社制)。人類三維肝細(xì)胞模型在12孔板 中人類肝細(xì)胞無血清培養(yǎng)基(東洋紡社制)中、在37°C、5%二氧化碳存在下、在設(shè)置的振蕩 機(jī)上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。振蕩培養(yǎng)3天后，置換成新的培養(yǎng)基并添加作為被驗(yàn)物質(zhì)的甜菊甙、乙 酸香葉酯、橙花叔醇、二氫茉莉酮、夏至草素、馬鞭草苷、白蠟樹甙、佛手酚，使得培養(yǎng)基中的 最終濃度為100 μ M。每24小時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)基的交換，每次都要添加被驗(yàn)物質(zhì)。從被驗(yàn)物質(zhì) 添加起3天后使用TRIZOL試劑通過常規(guī)方法回收全RNA。使用SVCT2和GAPDH的實(shí)時(shí)PCR 的表達(dá)評(píng)價(jià)通過與實(shí)施例8同樣的評(píng)價(jià)方法實(shí)施。結(jié)果示于表9。與實(shí)施例7同樣，將與對(duì)照組相比增加1. 4倍以上SVCT的表達(dá)量的物質(zhì)作為具有 SVCT促進(jìn)效果時(shí)，僅促進(jìn)SVCTl表達(dá)的化合物為乙酸香葉酯、馬鞭草苷，僅促進(jìn)SVCT2表達(dá) 的化合物為橙花叔醇。可知促進(jìn)SVCT1、SVCT2兩者表達(dá)的化合物為甜菊甙、二氫茉莉酮、夏 至草素、白蠟樹甙、佛手酚。表9
25被驗(yàn)物質(zhì)/GAPDH (相對(duì)對(duì)照比)SVCTlSYCT2甜菊甙1.601.74乙酸香葉酯1.761.30橙花叔醇1.371.54二氫茉莉酮2.781.66夏至草素1.531.70馬鞭草苷2.731.00白蠟樹甙1.801.51佛手酚1.771.43實(shí)施例10(三維皮膚模型的黑素生成抑制試驗(yàn)(Fontana-Masson染色))三維皮膚模型Melan0Derm(夕，#々社制)中，為了進(jìn)行同時(shí)添加葡萄柚提 取物和維生素C時(shí)的黑素生成抑制效果的評(píng)價(jià)以及黑素細(xì)胞的形態(tài)觀察，進(jìn)行借助 Fontana-Masson染色的黑素的染色。此外，對(duì)于具有使α -葡萄糖苷酶的活性上升、并將 2-0- α -D-吡喃葡糖基_抗壞血酸迅速變換為活性型L-抗壞血酸的作用的紫錐花提取物結(jié) 合使用時(shí)也進(jìn)行了評(píng)價(jià)。三維皮膚模型根據(jù)試劑盒的說明開始培養(yǎng)，培養(yǎng)基和被驗(yàn)物質(zhì)每 2天交換為新的物質(zhì)，被驗(yàn)物質(zhì)以與實(shí)施例5使用的物質(zhì)同樣的結(jié)合使用。其中，葡萄柚提 取物使用實(shí)施例7中使用的提取物。培養(yǎng)第10天通過顯微鏡進(jìn)行形態(tài)觀察，用PBS洗滌組 織后，通過常規(guī)方法進(jìn)行Fontana-Masson染色。結(jié)果示于圖5、6。其結(jié)果可知，30 μ g/mL的葡萄柚提取物(GFE)、6 μ g/mL的紫錐花提取物(ECE)的 單獨(dú)和兩者的組合時(shí)，黑素細(xì)胞活化，但通過加入2質(zhì)量％的2-0- α -D-吡喃葡糖基-抗壞 血酸(AA2G)，則黑素細(xì)胞收縮、失去活性。進(jìn)而可知，通過結(jié)合使用30 μ g/mL的葡萄柚提取 物(GFE)，黑素產(chǎn)生抑制活性得到促進(jìn)。此外可知，通過結(jié)合使用2質(zhì)量％的2-0- α -D-吡 喃葡糖基_抗壞血酸(AA2G)、30 μ g/mL的葡萄柚提取物(GFE)、6 μ g/mL的紫錐花提取物 (ECE)這三種，黑素生成抑制活性最高。葡萄柚提取物(GFE)使用實(shí)施例7中記載的葡萄柚 提取液來添加。紫錐花提取物使用實(shí)施例5中記載的紫錐花提取液來添加。實(shí)施例11(維生素C的細(xì)胞內(nèi)攝入量的測定)將小鼠黑色素瘤B16-F10細(xì)胞和源自人類大腸癌的Caco2細(xì)胞分別種到直徑IOcm 的培養(yǎng)皿使得成為IX IO6Cells,在含有10%的滅活胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)液中、在 37°C、5%二氧化碳存在下培養(yǎng)。小鼠黑色素瘤B16-F10細(xì)胞將培養(yǎng)3天后的細(xì)胞作為維生
26素C攝入試驗(yàn)用的細(xì)胞，源自人類大腸癌的Caco2細(xì)胞將培養(yǎng)1周后的細(xì)胞作為維生素C 攝入試驗(yàn)用的細(xì)胞。使用實(shí)施例7所記載的葡萄柚提取液，添加葡萄柚提取物使得培養(yǎng)液 中的最終濃度為30μ g/ml并將24小時(shí)后的細(xì)胞用于維生素C攝入試驗(yàn)。將培養(yǎng)液在培 養(yǎng)用緩沖液(15mM Hepes、135mM NaCl、5mM KClU. 8mM CaCl2,0. 8mM MgCl2)中進(jìn)行 2 次洗 滌，然后在37°C、5%二氧化碳存在下進(jìn)行1小時(shí)預(yù)培養(yǎng)。置換成新的培養(yǎng)用緩沖液、作為 維生素C添加抗壞血酸()^ ι社制)5mM、小鼠黑色素瘤B16-F10細(xì)胞培養(yǎng)3小時(shí)、源自 人類大腸癌的Caco2細(xì)胞培養(yǎng)1小時(shí)，然后用冰冷的PBS洗滌3次，使反應(yīng)停止。在包含 ImM EDTA的70% MeOH Iml中溶出抗壞血酸，然后加入IOmM 二硫蘇糖醇(和光純藥工業(yè)株 式會(huì)社制)作為還原劑反應(yīng)10分鐘，變換成還原型抗壞血酸，將用0. 2 μ m過濾器(了 F 〃、巧、”社制)過濾的物質(zhì)用于分析。分析使用高效液相色譜儀(HPLC)，柱使用L-柱 ODS (4. 6mmX 250mm)(化學(xué)物質(zhì)評(píng)價(jià)研究機(jī)構(gòu)制)，流動(dòng)相使用A相(IOmM四丁基氫氧化銨 溶液/IOmM磷酸二氫鉀/0.5%甲醇PH = 6)和B相(50%甲醇)。作為洗脫條件，施加0 15分鐘僅A相、15 25分鐘從A相至B相、25 35分鐘從B相至A相的梯度，35 60分 鐘僅A相。在該條件下的還原型抗壞血酸的洗脫時(shí)間為21分鐘。從此時(shí)的峰高度，使用 標(biāo)準(zhǔn)曲線算出細(xì)胞內(nèi)的抗壞血酸濃度，作為維生素C的細(xì)胞內(nèi)攝入量。同時(shí)使用細(xì)胞用蛋 白質(zhì)提取試劑(PIERCE社制)從細(xì)胞提取蛋白質(zhì)。通過使用作為蛋白質(zhì)定量試劑盒的DC Protein Assay(BIO-RAD)用Lowry法計(jì)測的蛋白質(zhì)量，對(duì)抗壞血酸向細(xì)胞內(nèi)的攝入量進(jìn)行 補(bǔ)正，以抗壞血酸量(ymol)/蛋白質(zhì)量(mg protein)來表示。結(jié)果示于圖7 10。其 結(jié)果可知，通過添加30 μ g/ml葡萄柚提取物，維生素C向細(xì)胞內(nèi)的攝入量在小鼠黑色素瘤 B16-F10細(xì)胞中增加至約2. 4倍、在源自人類大腸癌的Caco2細(xì)胞中增加至約1. 5倍。實(shí)施例12(葡萄柚提取物中的佛手酚的定量分析)通過HPLC法分析實(shí)施例6、7、10、11中使用的葡萄柚提取物(一丸7 7 > 二義制 葡萄柚果實(shí)提取物7 r ^^ W > ζ葡萄柚Β中的固體成分)所含的佛手酚的濃度。其結(jié) 果，葡萄柚提取物中的佛手酚為0. 015質(zhì)量％。HPLC分析條件(柱Capcell pak C18 4. 6mm Φ X 250mm(SHISEID0)柱溫度40°C檢測器UV315nm洗脫液(A) 5%醋酸水溶液(B)乙腈=75 25流速l.OmL/分鐘、注入量20yL、試樣稀釋溶劑DMS0/乙醇=2 18(V/V))。佛手酚溶出時(shí)間9. 6分鐘實(shí)施例13(化合物組的黑素生成抑制試驗(yàn))為了評(píng)價(jià)結(jié)合使用本發(fā)明中得到的化合物與維生素C對(duì)美白作用的效果，通過以 下的試驗(yàn)，測定黑素生成抑制活性。作為生成黑素的細(xì)胞，使用源自小鼠的B16-F10黑色素瘤細(xì)胞，在6孔板的各孔按照1 X IO5Cells播種，在DMEM+10% FBS的培養(yǎng)液(年二社制)中培養(yǎng)24小時(shí)，使細(xì) 胞粘連。其后，用DMEM+10% FBS置換培養(yǎng)液、添加IOOnM的[Nle4，D_Phe7] α -MSH( ν ”-r ^ K 'J ,子社制)，誘導(dǎo)黑素產(chǎn)生。同時(shí)，作為被驗(yàn)物質(zhì)，添加ugaferine25yM(含 有 0. DMS0)、夏至草素、Iapiferine 50 μ M(含有 0. 1% DMS0)、白蠟樹甙 100 μ M(含有 0. 1% DMS0)、對(duì)照添加0. 1% DMS0。被驗(yàn)物質(zhì)單獨(dú)組在其后48小時(shí)培養(yǎng)，進(jìn)行黑素生成抑 制評(píng)價(jià)。被驗(yàn)物質(zhì)與維生素C的結(jié)合使用組在其后每24小時(shí)添加維生素C( ν ^F
'J , +社制)至最終濃度4mM，添加2次(總計(jì)添加8mM)，進(jìn)行黑素生成抑制評(píng)價(jià)。黑素量的測定通過如下進(jìn)行通過胰蛋白酶處理將細(xì)胞剝離，重復(fù)2次PBS洗滌， 通過TritonX(和光純藥社制)將細(xì)胞增溶，吸光度為475nm。使用合成黑素(〉^、 -r ^ Y 'J ” 社制)制成標(biāo)準(zhǔn)曲線并算出黑素量。被驗(yàn)物質(zhì)與維生素C帶來的結(jié)合使用效 果通過下式4的黑素生成抑制率計(jì)算出?！彩?〕結(jié)合使用效果帶來的黑素生成抑制率(％ ) = (1-維生素C結(jié)合使用時(shí)的黑素量 /被驗(yàn)物質(zhì)單獨(dú)時(shí)的黑素量)X100其中，對(duì)照的被驗(yàn)物質(zhì)單獨(dú)時(shí)的黑素量值是指添加最終濃度0. 的用于被驗(yàn)物 質(zhì)的溶解的溶劑、即DMSO時(shí)的黑素量，對(duì)照的維生素C結(jié)合使用時(shí)的黑素量值是指結(jié)合使 用0. DMSO和維生素C時(shí)的黑素量。此外，對(duì)照的結(jié)合使用效果帶來的生成抑制率是指 0. 1 % DMSO與維生素C結(jié)合使用添加時(shí)的黑素量相對(duì)于單獨(dú)添加0. 1 % DMSO時(shí)的黑素量作 為黑素生成抑制率來表示的值。將該結(jié)果示于表10。在0. DMSO與維生素C結(jié)合使用添加時(shí)，相對(duì)于0. 1%DMS0 單獨(dú)添加時(shí)的黑素量的黑素生成抑制率為61.4%，將夏至草素、ugaferine, lapiferine, 白蠟樹甙和維生素C結(jié)合使用時(shí)，黑素生成抑制率分別提高至69. 7%、64. 6%、68. 1%, 68.4%。這是從0. DMSO與維生素C結(jié)合使用添加的數(shù)據(jù)和夏至草素、ugaferine、 Iapiferine、白蠟樹甙單獨(dú)的數(shù)據(jù)無法預(yù)測的顯著的協(xié)同效果。該協(xié)同效果可推測為由夏至草素、ugaferine、lapiferine,白蠟樹甙的SVCT產(chǎn)生 促進(jìn)效果帶來的。表10夏至草素、ugaferine, lapiferine,白蠟樹甙的黑素生成抑制試驗(yàn)
28被驗(yàn)物質(zhì)黑素生成抑制效果被驗(yàn)物質(zhì)單 獨(dú)時(shí) (pg黑素 /IO6Cells)維生素C結(jié)合 使用時(shí) (Mg黑素 /IO6Cells)維生素C結(jié)合 使用效果帶 來的黑素生 成抑制率(％)對(duì)照 (0.1%DMSO)23.39.061.4夏至草素 (50μΜ)15.74.869.7ugaferine (25 μΜ)15.85.664.6lapiferine (50μΜ)15.14.868.1白蠟樹甙 (ΙΟΟμΜ)22.27.068.4實(shí)施例14(化合物組的膠原產(chǎn)生評(píng)價(jià)試驗(yàn))為了評(píng)價(jià)關(guān)于本發(fā)明中得到的化合物與維生素C的膠原產(chǎn)生能力(也稱為膠原合 成促進(jìn)能力)的結(jié)合使用效果而進(jìn)行以下的試驗(yàn)，從而測定膠原產(chǎn)生促進(jìn)作用。將源自正 常人類皮膚的纖維芽細(xì)胞、即NHDF細(xì)胞(Cambrex Bio Science Walkersville社制)種 到24孔多孔板{7 r a >社制)使得成為5X 104cells/well，在DMEM+10% FB S的培 養(yǎng)液(￥7、社制)中，在37°C、5%二氧化碳存在下培養(yǎng)3天。置換成FBM(serum free, 無血清)的培養(yǎng)液(三光純藥會(huì)社制)，作為被驗(yàn)物質(zhì)添加夏至草素50 μ Μ、甜菊甙、佛手酚 100 μ Μ,對(duì)照添加0. 1 % DMS0,進(jìn)行24小時(shí)的預(yù)培養(yǎng)。預(yù)培養(yǎng)后，用FBM培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞， 置換成FBM培養(yǎng)液后，將維生素C( ν “了 ；ι F 'J、y ★社制)添加到培養(yǎng)液中使得最終 濃度為10 μ M，處理1小時(shí)，將維生素C攝入細(xì)胞內(nèi)。其后，用FBM培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞，置換成 FBM培養(yǎng)液，24小時(shí)后，對(duì)各孔均回收Iml的條件培養(yǎng)液(conditioned medium (CM))，制成 I型膠原測定的試樣。對(duì)于前述回收的CM，用typel collagenC-p印tide (PIP) EIA kit(夕 力7社制)測定膠原量(檢測極限濃度10ng/ml)。在抗PIP單克隆抗體板(96孔)的各 孔中加入過氧化物酶標(biāo)記的抗PIP單克隆抗體100 μ 1，接著，添加預(yù)先以含1 %牛血清白蛋
29白的PBS稀釋20倍的CM各20 μ 1，在37°C培養(yǎng)3小時(shí)。其后，丟掉反應(yīng)液，以200 μ 1 PBS 洗滌4次后，加入各100 μ 1基質(zhì)TMBZ (3，3’，5，5’ -四甲基聯(lián)苯胺)，在室溫下使其反應(yīng)15 分鐘。反應(yīng)結(jié)束時(shí)加入IN硫酸100 μ 1，測定波長450mm的吸光度。將夏至草素的測定結(jié)果示于表11。夏至草素在維生素C結(jié)合使用時(shí)與對(duì)照相比看 到了膠原產(chǎn)生促進(jìn)作用。甜菊甙、佛手酚的結(jié)果示于表12。甜菊甙、佛手酚在維生素C結(jié)合使用時(shí)與對(duì)照相 比看到了膠原產(chǎn)生促進(jìn)作用。表11夏至草素的膠原產(chǎn)生促進(jìn)作用
被驗(yàn)物質(zhì)單 獨(dú)時(shí) (ng膠原 /IO5Cells)維生素C結(jié)合 使用時(shí) (ng膠原 /IO5Cells)比率(維生素 C結(jié)合使用時(shí) /被驗(yàn)物質(zhì)單 獨(dú)時(shí))對(duì)照 (0.1% DMS0)144022421. 56夏至草素 (50 μ Μ)151025671. 70表 12甜菊甙、佛手酚的膠原產(chǎn)生促進(jìn)作用
被驗(yàn)物質(zhì)單獨(dú)時(shí) (ng膠原 /IO5Cells)維生素C結(jié)合使用 時(shí) (ng 膠原 /IO5Cells比率(維生素 C結(jié)合使用時(shí)/ 被驗(yàn)物質(zhì)單獨(dú) 時(shí))對(duì)照 (0. 1 % DMS0)161023611. 47甜菊甙 (100 μ M)155327241. 75
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配方例1 [片劑的制造]
使用魚腥草提取物和維生素C，通過常規(guī)方法制造下述組成的片劑。
(組成) 魚腥草提取物
(配方重量％) 14. 39橄欖葉提取水解物4. 66
胱氨酸16. 00
煙酰胺1. 2
維生素C24. 45
纖維素26. 80
淀粉4. 00
食用蛋殼粉6. 00
蔗糖酯2. 50
配方例2
[果汁的制造]
使用含甜菊甙的甜菊提取物和維生素C，通過常規(guī)方法制造下述組成的果汁。
(組成)(配方重量％)
果糖葡萄糖液糖15. 00
檸檬酸10. 40
維生素C0. 50
香料0. 02
色素0. 10
甜菊提取物10. 00
提純水63. 98
配方例3
[軟膏的制造]
使用夏至草素和維生素C，通過常規(guī)方法制造下述組成的軟膏。
(組成)(配方重量％)
白色凡士林24. 00
丙二醇12. 00
硬脂醇20. 00
對(duì)羥基苯甲酸甲酯0. 05
維生素C2. 00
夏至草素2. 00
香料0. 10
31
提純水39. 85
配方例4
[化妝水的制造]
使用葡萄柚提取物、2-0-α -D-吡喃葡糖基_抗壞血·過常規(guī)方法制造下述組成的化妝水。
(組成)(配方重量％)
1，3_ 丁二醇5. 00
乙醇4. 50
甘油10. 00
紫錐花提取物0. 50
AA2G2. 00
葡萄柚提取物0. 50
二丙二醇2. 00
甘草酸二鉀鹽0. 10
氫氧化鉀0. 40
提純水75. 0
配方例5
[面膜的制造]
使用葡萄柚提取物、2-0-α -D-吡喃葡糖基_抗壞血·過常規(guī)方法制造下述組成的面膜。
(組成)(配方:重量％ )
1，3_ 丁二醇6. 00
乙醇3. 50
甘油5. 00
AA2G2. 00
菌類植物膠(sclerotium gum) 0. 30
橄欖葉提取水解物1. 00
紫錐花提取物0. 20
檸檬酸鈉0. 20
檸檬酸0. 02
葡萄柚提取物0. 5
胱氨酸0. 08
羧甲基纖維素0. 30
氫氧化鉀0. 40
提純水80. 50
配方例6
[乳液的制造]
使用葡萄柚提取物、2-0-α -D-吡喃葡糖基_抗壞血·
過常規(guī)方法制造下述組成的乳液t
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工業(yè)上的可利用性根據(jù)本發(fā)明的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑，在使用細(xì)胞的分析中，可顯著促進(jìn) SVCTl和/或SVCT2的mRNA的表達(dá)，可將其作為美白用組合物或膠原合成促進(jìn)用組合物使用。
權(quán)利要求
維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑，其特征在于，含有葡萄柚的粉碎物、其提取物、或提取物的水解物。
2.維生素C吸收促進(jìn)用組合物，其特征在于，將權(quán)利要求1所述的維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生 促進(jìn)劑與維生素C或維生素C衍生物組合而成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的維生素C吸收促進(jìn)用組合物，維生素C衍生物為2-0-α-D-批 喃葡糖基-抗壞血酸。
4.美白用組合物，其特征在于，其包含權(quán)利要求2或3所述的維生素C吸收促進(jìn)用組合物。
5.膠原合成促進(jìn)用組合物，其特征在于，其包含權(quán)利要求2或3所述的維生素C吸收促 進(jìn)用組合物。
6.美白用組合物，其特征在于，其含有權(quán)利要求2或3所述的維生素C吸收促進(jìn)用組合 物和葡萄糖苷酶劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的美白用組合物，葡萄糖苷酶劑為選自紫錐花、酵母、雙歧菌、 乳酸菌所組成的組中的至少1種以上的粉碎物、其提取物、或提取水解物。
全文摘要
本發(fā)明提供具有維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)作用的物質(zhì)。維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生促進(jìn)劑，其有效成分為夏至草素、膽甾醇苯甲酸酯、ugaferine、lapiferine、乙酸香葉酯、橙花叔醇、二氫茉莉酮、香芹基乙酸、愈創(chuàng)木薁、二氫松柏醇、甜菊甙、DL-α-蒎烯、馬鞭草苷、1-二十七烷醇、4-羥基香豆素、膽酸、膽甾醇油酸酯、白蠟樹甙、佛手酚的化合物，或者，日本厚樸木蘭、杏仁、甘茶、葡萄柚、麥冬、常春藤、肥皂草、魚腥草、母菊、棕兒茶、金縷梅、桑、米糠、問荊的提取物。
文檔編號(hào)A61K8/67GK101912352SQ20101022129
公開日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2007年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月14日
發(fā)明者人見高正, 千場智尋, 宿里充穗, 山崎奈穗子, 櫻井哲人, 相部香 申請(qǐng)人:株式會(huì)社芳珂