專利名稱：補(bǔ)體抑制劑在制備用于預(yù)防或抑制組織損傷的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明概言之涉及用于預(yù)防與治療組織損傷的方法和組合物，且具體而言涉及用 于預(yù)防和治療與局部缺血_再灌注損傷相關(guān)的組織損傷的方法和組合物。
背景技術(shù)：
免疫系統(tǒng)補(bǔ)體免疫系統(tǒng)可保護(hù)身體免受病原細(xì)菌、病毒、寄生蟲及其他有害生物體的侵害。免疫 系統(tǒng)分為兩個(gè)部分體液系統(tǒng)和細(xì)胞系統(tǒng)。一般而言，體液系統(tǒng)包括補(bǔ)體系統(tǒng)并產(chǎn)生可防 御病原體的抗體。補(bǔ)體系統(tǒng)或簡(jiǎn)言為補(bǔ)體涉及可協(xié)助抗體進(jìn)行宿主防御的蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。 補(bǔ)體系統(tǒng)是天然免疫的一不可分割部分。補(bǔ)體不但可區(qū)分“自身”與“非自身”，而且可區(qū)分 “正常自身”與“經(jīng)改變的自身”。補(bǔ)體是包括至少30個(gè)表面結(jié)合可溶蛋白的一組蛋白。通 過在56°C下加熱血清30分鐘會(huì)破壞某些可溶蛋白的活性。補(bǔ)體蛋白參與用于調(diào)理吞噬作 用的微生物調(diào)理作用、通過裂解來直接殺滅微生物、白細(xì)胞對(duì)于炎癥位點(diǎn)的趨化吸引、白細(xì) 胞的激活及免疫復(fù)合體的加工。補(bǔ)體蛋白可在一連鎖反應(yīng)中發(fā)揮作用，其中一蛋白質(zhì)的結(jié)合或激活可促進(jìn)連鎖反 應(yīng)中下一蛋白質(zhì)的結(jié)合或激活。連鎖反應(yīng)的激活會(huì)引起釋放可促成炎癥反應(yīng)的被稱作過敏 毒素(C3a、C4a及大部分有效C5a)的生物活性小肽，并最終形成一可裂解靶細(xì)胞的膜攻擊 復(fù)合體(C5b_9)。不同的補(bǔ)體分子可由不同細(xì)胞類型合成，例如，成纖維細(xì)胞和腸上皮細(xì)胞 可生成Cl，而大部分組成是在肝中合成。補(bǔ)體系統(tǒng)的組成及機(jī)制已為人們所熟知。基本上，存在三個(gè)補(bǔ)體途徑傳統(tǒng)途徑、 凝集素途徑和旁路途徑。傳統(tǒng)途徑主要由含有抗原及IgG或IgM的免疫復(fù)合體觸發(fā)，但也 可由例如C-反應(yīng)性蛋白等其他作用劑觸發(fā)。凝集素途徑通過甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)或 纖維膠凝蛋白(ficolin)結(jié)合到異質(zhì)表面上的碳水化合物結(jié)構(gòu)(例如，甘露聚糖)上來觸 發(fā)。旁路途徑主要由重復(fù)多糖及其他聚合體結(jié)構(gòu)(諸如發(fā)現(xiàn)于細(xì)菌上的那些聚合體結(jié)構(gòu)) 來觸發(fā)。當(dāng)Clq(Clqrs復(fù)合體的一部分)的球形結(jié)構(gòu)域結(jié)合到IgM或多個(gè)IgG分子的Fc 片段上時(shí)，傳統(tǒng)途徑得到激活。在鈣離子存在下，該結(jié)合會(huì)引起兩個(gè)Clr分子的自身催化激 活。Clr分子可激活兩個(gè)Cls分子。Cls是一可使C4a自C4b解離的絲氨酸蛋白酶。C4b立即結(jié)合到靶細(xì)胞表面上的鄰近蛋白質(zhì)或碳水化合物上，并隨后在鎂離子存在下結(jié)合到C2 上。Cls可使C2b從該復(fù)合體上解離下來，生成傳統(tǒng)途徑的C3轉(zhuǎn)化酶，C4b2a。C3轉(zhuǎn)化酶可 使許多C3分子解離成C3a和C3b。一些C3b分子返回結(jié)合到C4b2a上以生成傳統(tǒng)途徑的 C5轉(zhuǎn)化酶，C4b2a3b。C5轉(zhuǎn)化酶可使C5解離成C5a和C5b。C5b結(jié)合到細(xì)胞表面，引發(fā)膜攻 擊復(fù)合體(MAC)的形成?！澳赝緩健背擞山Y(jié)合到細(xì)菌表面末端甘露糖基團(tuán)的鈣相依凝集素MBL弓丨發(fā)外 皆與傳統(tǒng)途徑類似。MBL是一由相同多肽鏈構(gòu)成的亞基的寡聚物，各個(gè)多肽鏈皆含有一富含 半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域、一膠原樣結(jié)構(gòu)域、一頸結(jié)構(gòu)域以及一碳水化合物識(shí)別結(jié)構(gòu)域。所定義的 MBL包括若干不同大小的這些寡聚物。MBL是Clq的類似物。當(dāng)MBL結(jié)合到其靶物(例如， 甘露糖或N-乙?；咸前?GlcNAc))上時(shí)，這種相互作用會(huì)引起被稱為MASP1、MASP2和 MASP3(與甘露聚糖結(jié)合凝集素相關(guān)的絲氨酸蛋白酶)的三個(gè)絲氨酸蛋白酶的激活，其類似 于Clr和Cls。其中，MASP2負(fù)責(zé)將C4解離成C4b和C4a，并負(fù)責(zé)將C2解離成C2a和C2b。 然后，C2a和C4b相結(jié)合以形成傳統(tǒng)途徑的C3轉(zhuǎn)化酶。從這一點(diǎn)開始，凝集素途徑與傳統(tǒng) 途徑相同。補(bǔ)體旁路途徑涉及一利用由傳統(tǒng)途徑和凝集素途徑生成的C3b的放大環(huán)路。一些 由傳統(tǒng)途徑C3轉(zhuǎn)化酶生成的C3b分子集中到旁路途徑中。表面結(jié)合的C3b與B因子結(jié)合 以生成C3bB，C3bB成為D因子的底物。D因子是一可解離Ba片段的絲氨酸酯酶，得到結(jié)合 至靶細(xì)胞表面的C3bBb。C3bBb通過備解素(P)得到穩(wěn)定，形成可作為旁路途徑C3轉(zhuǎn)化酶 的復(fù)合體C3bBbP。此C3轉(zhuǎn)化酶參與一放大環(huán)路以解離許多C3分子，從而引起C3b分子在 靶細(xì)胞上的沉積。一些此類C3b分子返回結(jié)合到C3bBb上從而形成C3bBb3b，即旁路途徑 C5轉(zhuǎn)化酶。C5轉(zhuǎn)化酶可將C5解離成C5a和C5b。C5b結(jié)合到細(xì)胞表面以引發(fā)膜攻擊復(fù)合 體的形成。傳統(tǒng)、凝集素和旁路補(bǔ)體途徑皆隨著C5轉(zhuǎn)化酶的形成而結(jié)束。C5轉(zhuǎn)化酶可經(jīng)由細(xì) 胞裂解途徑引起膜攻擊復(fù)合體(C5b6789n)的組裝。組份C5至C8以串聯(lián)形式相互連接，并 促進(jìn)一或多個(gè)C9單體插入至靶細(xì)胞的脂雙層中。該插入會(huì)導(dǎo)致可引起鈣流入的孔的形成 及隨后的有核細(xì)胞的細(xì)胞激活或者如果攻擊足夠強(qiáng)會(huì)引起細(xì)胞裂解及死亡。已表明，補(bǔ)體激活是若干與局部或系統(tǒng)炎癥相關(guān)的疾病的發(fā)病機(jī)理中的一個(gè)因 素。Kyriakides等人證明補(bǔ)體旁路途徑在酸吸入性損傷中起到重要作用(Membrane attack complex of complement and neutrophils mediate the injury ofacid aspiration. J.Appl. Physiol. 87(6) 2357-2361,1999 R Sialyl Lewisxhybridized complement receptor type 1 moderates acid aspiration injury. Am JPhysiol Lung Cell Mol Physiol 281 :L1494_L1499，2001)。美國(guó)專利第6，492，403號(hào)揭示一種使用呋喃基及噻吩 基脒類和胍類來治療由補(bǔ)體連鎖反應(yīng)傳統(tǒng)途徑調(diào)介的一急性或慢性病癥癥狀的方法。美國(guó) 專利第6，458，360號(hào)揭示一種包括一多肽的可溶重組融合蛋白，所述多肽含有一用于識(shí)別 一靶分子的識(shí)別位點(diǎn)，諸如一補(bǔ)體受體位點(diǎn)，且所述多肽可結(jié)合到一可在哺乳動(dòng)物中用來 抑制補(bǔ)體激活或補(bǔ)體相依細(xì)胞激活的免疫球蛋白鏈的N-末端。W00112212揭示凝集素補(bǔ)體 途徑的抑制劑及其用途。W00035483揭示用于調(diào)節(jié)與凝集素補(bǔ)體途徑相關(guān)的補(bǔ)體激活的方 法和產(chǎn)物。局部缺血與再灌注
局部缺血_再灌注是流向身體組織的血流的中斷和隨后的且經(jīng)常是流向組織的 血流的突然恢復(fù)。雖然局部缺血后的血流恢復(fù)對(duì)于保護(hù)功能組織是必要的，但已知再灌注 本身對(duì)組織有害。已知局部缺血和再灌注二者是導(dǎo)致組織壞死的重要因素。若干機(jī)制似乎在與局部缺血_再灌注損傷相關(guān)的組織損傷的產(chǎn)生中起到成因作 用。某種程度上，這些機(jī)制中的大部分皆涉及嗜中性粒細(xì)胞。嗜中性粒細(xì)胞向局部缺血組 織中滲透是造成許多與局部缺血-再灌注損傷相關(guān)的組織損傷的原因。嗜中性粒細(xì)胞包 含一可將分子氧還原成一超氧陰離子的NADPH氧化酶。使用黃嘌呤氧化酶抑制劑、氧自由 基清除劑或鐵鰲合劑進(jìn)行預(yù)處理可顯著減少由再灌注引發(fā)的嗜中性粒細(xì)胞積聚。這表明， 活性氧代謝產(chǎn)物在嗜中性粒細(xì)胞向局部缺血后組織的募集中發(fā)揮作用，且表明，產(chǎn)生于上 皮及內(nèi)皮細(xì)胞中的黃嘌呤氧化酶衍生氧化劑會(huì)引發(fā)隨后可吸引并激活嗜中性粒細(xì)胞的促 炎癥劑的產(chǎn)生與釋放。此外，已表明，嗜中性粒細(xì)胞膜糖蛋白CD18在介導(dǎo)嗜中性粒細(xì)胞附 著到微血管內(nèi)皮的過程中發(fā)揮重要作用。針對(duì)CD18受體的單克隆抗體可抑制嗜中性粒細(xì) 胞對(duì)毛細(xì)血管內(nèi)皮的趨化性、凝集作用及附著。使用該受體特異性抗體可降低再灌注損傷 并可同樣有效地降低由輻射、過濾或抗嗜中性粒細(xì)胞抗體誘發(fā)的嗜中性白血球減少癥。因 此，嗜中性粒細(xì)胞附著到微血管內(nèi)皮上似乎是嗜中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的再灌注損傷和與局部缺 血_再灌注損傷相關(guān)的組織損傷中的一個(gè)基本步驟。胸腹主動(dòng)脈瘤及其修補(bǔ)一涉及胸部和腹部主動(dòng)脈的動(dòng)脈瘤稱作胸腹主動(dòng)脈瘤(TAAA)。過去，患有TAAA并 隨后經(jīng)歷TAAA修補(bǔ)的患者具有相對(duì)高的發(fā)病率及死亡率，尤其存在下肢癱瘓的風(fēng)險(xiǎn)。下肢 癱瘓風(fēng)險(xiǎn)可高達(dá)40%，此視組織損傷程度與動(dòng)脈瘤起因而定。由與TAAA修補(bǔ)相關(guān)的組織損 傷引起的下肢癱瘓和其他神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥常常是由于脊髓局部缺血(由低灌注引起的氧 缺乏和不充分的廢物清除)和系統(tǒng)炎癥所致。用于預(yù)防或治療與TAAA修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷的已知方法皆基于可降低與TAAA修 補(bǔ)相關(guān)的發(fā)病率與死亡率的細(xì)致外科手術(shù)及麻醉法(Thoracoabdominal Aortic Aneurysm Repair in High Risk Cardiac Patients :AModified Grafting Technique. Angiology, 7 =118-122,1998)。然而，因?yàn)榧词故且患夹g(shù)上成功的方法也可能會(huì)導(dǎo)致多個(gè)器官的功能障 礙以及可引起發(fā)病率和死亡率的其他問題的出現(xiàn)，因此，這些方法僅取得了有限的成功。因 此，業(yè)內(nèi)需要用于預(yù)防或治療與局部缺血-再灌注損傷和TAAA修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷的新方 法和組合物。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供用于預(yù)防或治療與局部缺血_再灌注損傷相關(guān)的 組織損傷的方法與組合物。本發(fā)明的又一目的是提供用于預(yù)防或治療與TAAA修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷的方法與 組合物。本發(fā)明的另一目的是降低由與局部缺血_再灌注損傷和TAAA修補(bǔ)相關(guān)的組織損 傷引起的發(fā)病率和死亡率。使用一用于預(yù)防或治療與局部缺血-再灌注損傷和與TAAA修補(bǔ)相關(guān)的組織損 傷的新穎方法可達(dá)成這些以及其他目的。所述方法包括向一可能遭受或正遭受與局部缺血_再灌注損傷或與TAAA修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷的患者施用一組織損傷預(yù)防量或治療量的 一種或多種補(bǔ)體抑制劑。所述補(bǔ)體抑制劑可以是任何已知補(bǔ)體抑制劑，但優(yōu)選地是一可結(jié) 合至且可抑制凝集素途徑中補(bǔ)體蛋白的抗體或其功能等效片段。所述抗體或抗體片段可抑 制參與所述補(bǔ)體途徑的蛋白質(zhì)(例如，C3a、C5a、MBL、MASP及膜攻擊復(fù)合體(MAC))的作用， 且當(dāng)一患者中的補(bǔ)體因局部缺血_再灌注損傷或TAAA修補(bǔ)后的局部缺血-再灌注損傷而 得到激活時(shí)，所述抗體或抗體片段可抑制或防止對(duì)組織和細(xì)胞的損傷。所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員將易知本發(fā)明的其它及進(jìn)一步的目的、特征及優(yōu)點(diǎn)。


圖1顯示對(duì)MBL缺陷TAAA患者的補(bǔ)體分析的有關(guān)數(shù)據(jù)。圖2顯示起始補(bǔ)體途徑激活產(chǎn)物的有關(guān)數(shù)據(jù)。圖3顯示末端補(bǔ)體途徑和C3激活的有關(guān)數(shù)據(jù)。圖4顯示細(xì)胞因子和趨化因子IL-I β、TNF α及IL_8的有關(guān)數(shù)據(jù)。圖5顯示細(xì)胞因子和趨化因子IL-6及IL-10的有關(guān)數(shù)據(jù)。圖6顯示涉及嗜中性粒細(xì)胞去顆粒產(chǎn)物的有關(guān)數(shù)據(jù)。
具體實(shí)施例方式定義術(shù)語“患者”表示一可能遭受或正遭受與TAAA修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷的人類或其他 動(dòng)物，包括牛、豬、犬、貓、馬、鳥及羊等動(dòng)物。優(yōu)選地，所述患者是人類。術(shù)語“非經(jīng)腸地”表示經(jīng)靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)或腹腔內(nèi)注射的施用。術(shù)語“共同”表示(1)使用相同或不同施用途徑以相同或不同頻率單獨(dú)地將不同 補(bǔ)體抑制劑施用給所述患者，或(2)以一醫(yī)藥上可接受的組合物形式將不同補(bǔ)體抑制劑一 同施用給所述患者。術(shù)語“功能等效片段”表示能夠以與完全抗體實(shí)質(zhì)相同的方式結(jié)合至補(bǔ)體系統(tǒng)組 份并可抑制補(bǔ)體激活的抗體片段。除非另外特別說明，否則，所有本文所述抗體被定義為包 括其功能等效片段。本發(fā)明并不限于本文所述的特定方法、方案和試劑，因?yàn)檫@些皆會(huì)發(fā)生改變。此 外，本文所用術(shù)語僅用于闡述具體實(shí)施例的目的而不擬對(duì)本發(fā)明范疇加以限定。除非上下 文中另有明確說明，否則，本文和隨附權(quán)利要求書中所用的單數(shù)形式“一”、“一個(gè)”和“所述” 皆包括其復(fù)數(shù)指代，例如，當(dāng)提及“一抗體”時(shí)包括復(fù)數(shù)個(gè)所述抗體。除非另有定義，否則，本文所用的所有技術(shù)術(shù)語和科學(xué)術(shù)語以及任何簡(jiǎn)稱皆具有 熟習(xí)本發(fā)明領(lǐng)域中的此項(xiàng)技術(shù)者所普遍理解的相同含義。本文闡述了優(yōu)選的方法、裝置和 材料，但亦可使用任何與本文所述者相似或等效的方法和材料來實(shí)施本發(fā)明。本文提及的所有專利案及公開案皆在法律允許的范圍內(nèi)以引用方式并入本文中， 以便于闡述并揭示這些文獻(xiàn)中報(bào)告的可用于本發(fā)明的化合物和方法。然而，不應(yīng)將本文所 述理解為認(rèn)可本發(fā)明無權(quán)早于先前發(fā)明所揭示的此等揭示內(nèi)容。本發(fā)明一方面，本發(fā)明提供一種用于預(yù)防及治療與局部缺血_再灌注損傷相關(guān)的組織損
7傷的方法。所述方法包括向一可能遭受或正遭受與局部缺血_再灌注損傷相關(guān)的組織損傷 的患者施用一組織損傷預(yù)防量或治療量的一種或多種補(bǔ)體抑制劑。本發(fā)明基于下述發(fā)現(xiàn) 免疫系統(tǒng)補(bǔ)體組份在局部缺血-再灌注損傷期間的組織損傷形成中發(fā)揮重要作用，且用于 抑制或防止補(bǔ)體激活的方法和組合物亦可用來預(yù)防或治療這種組織損傷。所述方法和組合 物可用于降低易遭受或正遭受與局部缺血-再灌注損傷相關(guān)的組織損傷的患者的發(fā)病率 和死亡率。另一方面，本發(fā)明提供一種用于預(yù)防和治療與胸腹主動(dòng)脈瘤(TAAA)修補(bǔ)相關(guān)的 組織損傷的方法。所述方法包括向一可能遭受或正遭受與TAAA修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷的患 者施用一組織損傷預(yù)防量或治療量的一種或多種補(bǔ)體抑制劑。本發(fā)明基于下述發(fā)現(xiàn)免疫 系統(tǒng)補(bǔ)體組份在TAAA修補(bǔ)期間的組織損傷形成中發(fā)揮重要作用，且用于抑制或預(yù)防補(bǔ)體 激活的方法和組合物亦可用來預(yù)防或治療這種組織損傷。所述方法和組合物可用于降低易 遭受或正遭受與TAAA修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷的患者的發(fā)病率和死亡率。本發(fā)明補(bǔ)體抑制劑是已知可于一患者中抑制補(bǔ)體激活的任何分子。一般而言，這 些抑制劑是可作為補(bǔ)體抑制劑發(fā)揮作用的小有機(jī)分子、肽、蛋白質(zhì)、抗體、抗體片段或其他 分子。可用補(bǔ)體抑制劑包括補(bǔ)體抑制素(compstatin)及其功能類似物(可抑制C3)、C1抑 制劑(可共價(jià)結(jié)合Clr和Cls)、sCRl及其類似物(可分解所有C3轉(zhuǎn)化酶)、抗C5抗體(阻 斷C5激活)、抗C5a和抗C5a受體抗體以及小分子藥物(可抑制C5a信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑)、抗 C3a和抗C3a受體抗體以及小分子藥物(可抑制C3a信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑)、抗C6、7、8或9抗體 (可抑制MAC的形成或功能)、抗備解素抗體(使旁路途徑中的C3和C5轉(zhuǎn)化酶不穩(wěn)定)、 以及融合蛋白膜輔因子蛋白(可介導(dǎo)C3b和C4b解離的I因子的輔因子)和衰變加速因子 (DAF))(加速所有C3轉(zhuǎn)化酶的衰變)。其他可用抑制劑包括群集素(可抑制Cl)、CD59 (膜 攻擊復(fù)合體抑制劑)、C4bp (可加速傳統(tǒng)途徑C3轉(zhuǎn)化酶(C4b2a)的衰變)、H因子(可加速 旁路途徑C3轉(zhuǎn)化酶(C3bBb)的衰變)、I因子(使C4b和C3b蛋白水解解離并失活(需要 輔因子)、羧肽酶N(從C3a、C5a上去除末端精氨酸殘基)、玻璃粘連蛋白(S蛋白)(可結(jié)合 C5b-7復(fù)合體并防止膜插入)、SP-40 (調(diào)節(jié)膜攻擊復(fù)合體的形成)、⑶59 (抑制旁觀者細(xì)胞 裂解)、以及同源限制因子(HRF)(抑制旁觀者細(xì)胞裂解、抑制C8與C9的相互作用)。優(yōu)選地，所述補(bǔ)體抑制劑是可結(jié)合到并抑制一種或多種在補(bǔ)體連鎖反應(yīng)中行使功 能的蛋白質(zhì)(例如，C1、C3、C5、D因子或其組份以及蛋白酶解離產(chǎn)物)的抗體或其功能等效 片段。所述抗體可結(jié)合到一補(bǔ)體連鎖反應(yīng)中的所選補(bǔ)體蛋白質(zhì)上，并可在TAAA修補(bǔ)期間抑 制或防止補(bǔ)體激活。在一實(shí)施例中，所述補(bǔ)體抑制劑是一可結(jié)合到C5上并抑制其在補(bǔ)體連 鎖反應(yīng)中的作用的抗C5抗體或其功能等效片段。所述抗體還可以是一可結(jié)合到這些蛋白 質(zhì)上并可抑制其在補(bǔ)體連鎖反應(yīng)中的作用的抗C5a或抗C5b抗體。同樣，所述補(bǔ)體抑制劑 是一可結(jié)合到D因子上并可抑制其在補(bǔ)體連鎖反應(yīng)中的作用的抗D因子抗體或其功能等效 片段。所述抗體可以是多克隆或單克隆抗體，但優(yōu)選為單克隆抗體。在一優(yōu)選實(shí)施例中，所述補(bǔ)體抑制劑是可抑制凝集素補(bǔ)體途徑的化合物。這些抑 制劑包括抗MBL抗體及其功能等效片段、抗MASPl抗體及其功能等效片段、抗MASP2抗體及 其功能等效片段、抗MASP3抗體及其功能等效片段以及抗MBL復(fù)合抗體(可結(jié)合到由MBL、 MASPU MASP2和MASP3形成的復(fù)合體上的抗體)及其功能等效片段、甘露聚糖結(jié)合凝集素 受體拮抗劑(諸如可結(jié)合MBL的豆科植物衍生的凝集素)、角蛋白結(jié)合分子、抗角蛋白抗體
8及其功能等效片段、MASP結(jié)合肽、MASP2結(jié)合肽以及MASP3結(jié)合肽。在一實(shí)施例中，將兩種或兩種以上補(bǔ)體抑制劑共同施用給一患者來預(yù)防和治療與 局部缺血_再灌注損傷(尤其是與TAAA修補(bǔ)相關(guān)的局部缺血-再灌注損傷)相關(guān)的組織 損傷。例如，一抗MBL抗體與另一補(bǔ)體抑制劑共同施用可預(yù)防或治療此種組織損傷?？筂BL 抗體及其功能等效片段、抗MASPl抗體及其功能等效片段、抗MASP2抗體及其功能等效片 段、抗MASP3抗體及其功能等效片段、抗MBL復(fù)合抗體及其功能等效片段、抗D因子抗體及 其功能等效片段以及抗備解素抗體及其功能等效片段的各種組合為首選。熟習(xí)此項(xiàng)技術(shù)者已熟知用于產(chǎn)生抗體(包括多克隆抗體、單克隆抗體、單價(jià)抗體、 人源化抗體、人類抗體、雙特異性抗體以及雜共軛抗體)的多種方法。多克隆抗體可在一哺乳動(dòng)物中通過單獨(dú)注射一免疫原或注射一免疫原與一佐劑的組合來產(chǎn) 生多克隆抗體。通常，使用一種或多種皮下或腹腔內(nèi)注射將免疫原注射于所述哺乳動(dòng)物 中。免疫原可包括感興趣的多肽或一包含所述多肽和另一已知可在所述接受免疫哺乳動(dòng) 物中產(chǎn)生免疫作用的多肽的融合蛋白。所述免疫原也可包括表達(dá)一重組受體或表達(dá)一含 有所述受體基因的DNA表達(dá)載體的細(xì)胞。這些免疫原蛋白的實(shí)例包括但不限于鑰孔血藍(lán) 蛋白、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白和大豆胰蛋白酶抑制劑。佐劑實(shí)例包括但不限于弗氏 (Freund' s)完全佐劑和MPL-TDM佐劑(單磷酰脂A、合成的海藻糖二棒桿霉菌酸酯)。所 屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員無需進(jìn)行過多實(shí)驗(yàn)即可選擇出免疫方案。單克隆抗體使用雜交瘤方法(例如，Kohler及Milstein闡述于Nature，256 =495(1975)中的 那些方法)可產(chǎn)生單克隆抗體。在一雜交瘤方法中，使用一免疫原免疫一小鼠、倉(cāng)鼠或其它 適當(dāng)宿主哺乳動(dòng)物來誘發(fā)出可產(chǎn)生或能夠產(chǎn)生特異性結(jié)合于所述免疫原上的抗體的淋巴 細(xì)胞?；蛘?，可在活體外對(duì)淋巴細(xì)胞進(jìn)行免疫。免疫原通常包括感興趣的多肽或一含這種 多肽的融合蛋白。一般而言，如果需要人類來源的細(xì)胞，則使用外周血淋巴細(xì)胞(“PBL”)。 如果需要非人類哺乳動(dòng)物來源的細(xì)胞，則使用脾細(xì)胞或淋巴結(jié)細(xì)胞。隨后使用一適宜融 合劑(例如，聚乙二醇)使淋巴細(xì)胞與一永久細(xì)胞系融合，以形成一雜交瘤細(xì)胞(Goding， Monoclonal Antibodies Principles and Practice,第59頁(yè)-第 103頁(yè)(Academic Press, 1986))。永久細(xì)胞系通常是經(jīng)轉(zhuǎn)化的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，尤其為嚙齒類動(dòng)物、牛或人類的骨髓瘤 細(xì)胞。通常，使用大鼠或小鼠骨髓瘤細(xì)胞系。雜交瘤細(xì)胞可在一適宜培養(yǎng)基中培養(yǎng)，該培養(yǎng) 基中優(yōu)選包含一種或多種可抑制未融合永久細(xì)胞生長(zhǎng)或存活的物質(zhì)。例如，如果親代細(xì)胞 缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)，則用于所述雜交瘤的培養(yǎng)基通常將包括次 黃嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT培養(yǎng)基)。所述HAT培養(yǎng)基可阻止HGPRT缺陷細(xì)胞的生長(zhǎng)。優(yōu)選的永久細(xì)胞系是那些可有效融合、支持所選抗體產(chǎn)生細(xì)胞對(duì)抗體的穩(wěn)定高水 平表達(dá)且對(duì)諸如HAT培養(yǎng)基等培養(yǎng)基敏感的細(xì)胞系。更優(yōu)選的永久細(xì)胞系是鼠骨髓瘤細(xì)胞 系，諸如那些可從沙克研究院細(xì)胞分配中心(Salklnstitute Cell Distribution Center, San Diego, Calif. USA)獲得的衍生自M0PC-21和MPC-Il小鼠腫瘤的細(xì)胞系，和可從美國(guó) 典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection, Rockville, Md. USA.)獲得的 SP2/0或X63-Ag8-653細(xì)胞。有人亦闡述了可使用人類骨髓瘤和小鼠-人雜骨髓瘤細(xì)胞系 來產(chǎn)生人類單克隆抗體(Kozbor，J. Immunol. 133 3001(1984) ；Brodeur 等人，MonoclonalAntibody Production Techniques and Applications,第 51 頁(yè)-第 63 頁(yè)(Marcel Dekker 公司，New York，1987))。也可使用小鼠骨髓瘤細(xì)胞系NSO (歐洲細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心 (European Collection of Cell Cultures, Salisbury, Wiltshire UK)。另夕卜，也可使用業(yè) 內(nèi)熟知的人類骨髓瘤和小鼠-人雜骨髓瘤細(xì)胞系來產(chǎn)生人類單克隆抗體。然后，可分析用于培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)基是否存在針對(duì)感興趣多肽的單克隆抗 體。優(yōu)選地，由雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的單克隆抗體的結(jié)合特異性可通過免疫沉淀或通過活體外 結(jié)合分析(例如，放射免疫分析(RIA)或酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA))來測(cè)定。這些技術(shù)和 分析已為業(yè)內(nèi)熟知。例如，單克隆抗體的結(jié)合親和力可通過Munson和Pollard闡述于Anal. Biochem. (107:220(1980))中的 Scatchard 分析來測(cè)定。在鑒別所需雜交瘤細(xì)胞后，所述細(xì)胞純系可通過有限稀釋法來進(jìn)一步亞克隆并 可通過標(biāo)準(zhǔn)方法使其生長(zhǎng)。適用于此目的的適宜培養(yǎng)基包括杜貝克氏改良鷹氏培養(yǎng)基 (Dulbecco' s Modified Eagle' s Medium)和 RPMI-1640 培養(yǎng)基?；蛘?，雜交瘤細(xì)胞可在 諸如一哺乳動(dòng)物體內(nèi)的腹水中于活體內(nèi)生長(zhǎng)。亞克隆細(xì)胞系所分泌的單克隆抗體可通過習(xí)用的免疫球蛋白純化方法(諸如蛋 白質(zhì)A-瓊脂糖凝膠、羥基磷灰石層析法、凝膠電泳、透析或親和層析法)自培養(yǎng)基或腹水液 體進(jìn)行分離或純化。單克隆抗體也可通過重組DNA方法來產(chǎn)生，例如，美國(guó)專利第4，816，567號(hào)中所 述的方法。編碼本發(fā)明單克隆抗體的DNA易于使用習(xí)用方法分離和測(cè)序，例如，通過使用 能夠特異性結(jié)合編碼鼠抗體重鏈及輕鏈的基因的寡核苷酸探針(Irmis M.等人，“PCR Protocols. A Guide to Methods and Applications" , Academic, San Diego, CA(1990), Sanger, F. S 等人，Proc. Nat. Acad. Sci. 74 :5463_5467 (1977))。本文所述的雜交瘤細(xì)胞可 作為這種DNA的優(yōu)選來源。一旦得到分離，就可將所述DNA置于表達(dá)載體中。然后，將該等 載體轉(zhuǎn)染至不會(huì)以其他方式產(chǎn)生免疫球蛋白的宿主細(xì)胞中，例如，猿COS細(xì)胞、中國(guó)倉(cāng)鼠卵 巢(CHO)細(xì)胞或骨髓瘤細(xì)胞。所述重組宿主細(xì)胞可用于產(chǎn)生所需的單克隆抗體。也可通過 (例如)用人類重鏈及輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域的編碼序列代替同源鼠類序列或通過將免疫球蛋白 編碼序列共價(jià)結(jié)合于一非免疫球蛋白多肽的全部或部分編碼序列來對(duì)DNA進(jìn)行修飾。這種 非免疫球蛋白多肽可替代一抗體的恒定結(jié)構(gòu)域或可替代一抗體的一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的可 變結(jié)構(gòu)域，從而產(chǎn)生一嵌合雙價(jià)抗體。單價(jià)抗體可利用一免疫球蛋白輕鏈和經(jīng)修飾重鏈的重組表達(dá)來產(chǎn)生。一般而言， 可在Fc區(qū)域的任何一點(diǎn)將重鏈截短，以便防止重鏈交聯(lián)?；蛘?，用另一氨基酸殘基替代相 關(guān)的半胱氨酸殘基或刪除相關(guān)的半胱氨酸殘基來防止交聯(lián)。同樣，可使用活體外方法來產(chǎn) 生單價(jià)抗體?？墒褂靡阎椒ɡ每贵w消化來產(chǎn)生抗體片段，優(yōu)選為Fab片段?？贵w和抗體片段可使用采用McCafferty等人在Nature 348 :552_554(1990)中 闡述的技術(shù)生成的抗體噬菌體文庫(kù)來產(chǎn)生。Clackson等人和Marks等人分別在Nature 352 624-628(1991)中和 J. Mol. Biol. 222 :581_597 (1991)中闡述了使用噬菌體文庫(kù)進(jìn)行 鼠類及人類抗體的分離。下述出版物闡述通過鏈重排(Marks等人，Bio/Technology 10: 779-783(1992))以及作為一用于構(gòu)建相當(dāng)大噬菌體文庫(kù)的策略的組合感染和活體內(nèi)重組 (Waterhouse 等人，Nuc. Acids. Res. 21 :2265_2266 (1993))來產(chǎn)生高親和性(nM 范圍)人類 抗體。因此，這些技術(shù)相對(duì)于用來分離單克隆抗體的傳統(tǒng)單克隆抗體雜交瘤技術(shù)而言是更具優(yōu)勢(shì)的可選方案。此外，也可通過(例如)用人類重鏈及輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域的編碼序列替 代同源鼠類序列(美國(guó)專利第4，816，567號(hào)；Morrison等人，Proc. Nat. Acad. Sci. USA 81 6851(1984))或通過將免疫球蛋白編碼序列共價(jià)結(jié)合于一非免疫球蛋白多肽的全部或部分 編碼序列來對(duì)DNA進(jìn)行修飾。通常，這些非免疫球蛋白多肽可替代一抗體的恒定結(jié)構(gòu)域或 可替代一抗體的一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的可變結(jié)構(gòu)域，從而產(chǎn)生一嵌合雙價(jià)抗體，所述雙價(jià)抗 體包含一個(gè)對(duì)一抗原具有特異性的抗原結(jié)合位點(diǎn)和另一個(gè)對(duì)一不同抗原具有特異性的抗 原結(jié)合位點(diǎn)。也可使用電融合而非化學(xué)融合的方法來形成雜交瘤進(jìn)而產(chǎn)生抗體。這種技術(shù)已 經(jīng)得到認(rèn)可。還可不采用融合而使用(例如)一 EB病毒或一轉(zhuǎn)化基因來轉(zhuǎn)化一 B-細(xì)胞 以使其成為永久細(xì)胞(“Continuously Proliferating HumanCellLines Synthesizing Antibody of Predetermined Specificity, " Zurawaki, V. R.等人，于 Kennett R. H.等人 編輯的"Monoclonal Antibodies, ” Plenum Press, N. Y. 1980，第 19 頁(yè)-第 33 頁(yè)中)。人源化抗體人源化抗體可使用Winter in Jones 等人在 Nature，321 :522_525 (1986)中、 Riechmann 等人在 Nature，332 :323_327 (1988)中以及 Verhoeyen 等人在 Science，239 1534-1536(1988)中所述的方法來產(chǎn)生。人源化過程通過以嚙齒類⑶R或⑶R序列來代替 相應(yīng)的人類抗體序列來完成。一般而言，一人源化抗體具有從一非人類來源引入其內(nèi)的一 或多個(gè)氨基酸。這些“人源化”抗體為嵌合抗體，其中，實(shí)質(zhì)上少于一個(gè)完好人類可變結(jié)構(gòu) 域的部分已由來自一非人類物種的相應(yīng)序列替代。實(shí)際上，人源化抗體通常為人類抗體，其 中某些CDR殘基及可能某些FR殘基被來自嚙齒類動(dòng)物抗體中類似位點(diǎn)的殘基取代。非人 類(例如，鼠類或牛類)抗體的人源化形式可為嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或諸如Fv、 Fab, Fab'、F(ab' )2等免疫球蛋白片段、或含衍生自非人類免疫球蛋白的最小序列的抗 體的其它抗原結(jié)合子序列。人源化抗體包括人類免疫球蛋白(受體抗體)，其中來自所述 受體的一互補(bǔ)決定區(qū)域(CDR)的殘基由來自一諸如小鼠、大鼠或兔等非人類物種(供體抗 體)的CDR且具有期望特異性、親和性及能力的殘基所替代。有時(shí)，人類免疫球蛋白的Fv 骨架殘基由對(duì)應(yīng)的非人類殘基所替代。人源化抗體也包含既未見于受體抗體亦未見于引入 CDR或骨架序列中的殘基。一般而言，人源化抗體包含至少一個(gè)且通常為兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域的 實(shí)質(zhì)全部部分，其中CDR區(qū)域的全部或?qū)嵸|(zhì)全部部分對(duì)應(yīng)于一非人類免疫球蛋白的那些部 分，且FR區(qū)域的全部或?qū)嵸|(zhì)全部部分為一人類免疫球蛋白一致序列的那些部分。人源化抗 體最優(yōu)至少包括一免疫球蛋白恒定區(qū)域(Fe)(通常為一人類免疫球蛋白恒定區(qū)域)的一部 分。人類抗體人類抗體可使用業(yè)內(nèi)已知的各種技術(shù)來產(chǎn)生，例如，Hoogenboom及Winter在 J. Mol. Biol.，227 381(1991)中及 Marks 等人在 J. Mol. Biol.，222 581(1991)中所闡述 的噬菌體展示文庫(kù)。人類單克隆抗體可使用Cole等人在Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss，第 77 頁(yè)(1985)中及 Boemer 等人在 J. Immunol.，147(1) 86-95(1991)中闡述的技術(shù)來產(chǎn)生?；蛘?，可使用在免疫后可于不產(chǎn)生內(nèi)源免疫球蛋白的情 況下產(chǎn)生整組人類抗體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如，小鼠)。這些轉(zhuǎn)基因小鼠可自Abgenix公司 (Fremont,California)及Medarex 公司(Annandale,New Jersey)購(gòu)得。有人曾闡述，嵌合和種系突變小鼠中抗體重鏈結(jié)合區(qū)域(JH)基因的純合缺失會(huì)引起內(nèi)源抗體產(chǎn)生的完全抑 制。將人類種系免疫球蛋白基因陣列轉(zhuǎn)入這些種系突變小鼠中可在受到抗原攻擊后引起人 類抗體的產(chǎn)生。參見(例如)Jakobovits 等人在 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 2551 (1993) 中、Jakobovits 等人在 Nature362 :255_258 (1993)中、Bruggermann 等人在 Year in Immunol. 7 33(1993)中以及 Duchosal 等人在 Nature 355 258(1992)中的闡述。人類抗體 也可衍生自噬菌體展示文庫(kù)(Hoogenboom等人，J. Mol. Biol. 227 :381 (1991) ；Marks等人， J. Mol. Biol. 222 :581-597 (1991) ；Vaughan 等人，Nature Biotech 14:309(1996))。雙特異性抗體雙特異性抗體可由兩個(gè)免疫球蛋白重鏈/輕鏈對(duì)的重組共表達(dá)產(chǎn)生，其中所述兩 個(gè)重鏈具有不同的特異性。雙特異性抗體是單克隆抗體，優(yōu)選為對(duì)至少兩種不同抗原具有 結(jié)合特異性的人類或人源化抗體。在本發(fā)明中，一種結(jié)合特異性是針對(duì)NFAT激活受體的 結(jié)合特異性，另一種結(jié)合特異性是針對(duì)任何其它抗原(優(yōu)選為一細(xì)胞表面受體或受體亞單 位)的結(jié)合特異性。由于免疫球蛋白重鏈及輕鏈的隨機(jī)分配，因此，這些雜交瘤會(huì)產(chǎn)生一由 10種不同抗體構(gòu)成的潛在混合物。然而，這些抗體中僅有一種具有正確的雙特異性結(jié)構(gòu)。 正確分子的回收和純化通常通過親和層析法來完成。具有期望結(jié)合特異性的抗體可變結(jié)構(gòu)域(抗體_抗原結(jié)合位點(diǎn))可融合到免疫球 蛋白恒定結(jié)構(gòu)域序列中。所述融合體優(yōu)選具有一包含鉸合區(qū)域、CH2區(qū)域及CH3區(qū)域中至少 一部分的免疫球蛋白重鏈恒定結(jié)構(gòu)域。優(yōu)選地，至少所述融合體之一中具有包含輕鏈結(jié)合 所需位點(diǎn)的第一重鏈恒定區(qū)域(CHI)。將編碼免疫球蛋白重鏈及(若需要)免疫球蛋白輕 鏈的DNA插入到單獨(dú)表達(dá)載體中，并共轉(zhuǎn)染至一適宜宿主生物體中。Suresh等人在Methods inEnzymology,121 =210(1986)中闡述了用于產(chǎn)生雙特異性抗體的適宜技術(shù)。雜共軛抗體雜共軛抗體可使用已知的蛋白融合方法(例如，通過將一抗體的胺基偶接至另一 抗體或其他多肽的一硫醇基上)來產(chǎn)生。若需要，可使用已知方法引入一硫醇基。例如，可 使用二硫化物交換反應(yīng)或通過形成一硫醚鍵來產(chǎn)生包含一抗體或一抗體片段以及一多肽 毒素的免疫毒素。適用于此目的的適宜試劑實(shí)例包括亞胺基硫醇鹽及甲基-4-巰基丁酰亞 胺酯(mercaptobutyrimidate)。這些抗體可用來靶向免疫補(bǔ)體組份且可用來預(yù)防或治療與 TAAA修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷?？赏ㄟ^能夠使抑制劑到達(dá)靶細(xì)胞的任何方法將補(bǔ)體抑制劑施用給患者。這些方法 包括但不限于經(jīng)口、直腸、經(jīng)鼻、外敷、皮內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)以及腸內(nèi)施用方式。優(yōu)選采 用注射，這是由于注射可允許精確控制投藥所用時(shí)間和劑量水平。優(yōu)選地，以非經(jīng)腸方式 施用補(bǔ)體抑制劑。對(duì)于非經(jīng)腸施用而言，可將補(bǔ)體抑制劑與一生理上可接受的非經(jīng)腸媒劑 一起調(diào)配成(例如)溶液、懸浮液、乳劑或凍干粉劑。這些媒劑的實(shí)例為水、鹽水、林格氏 (Ringer' s)溶液、葡萄糖溶液和5%人體血清白蛋白。也可使用脂質(zhì)體和諸如固定油等非 水性媒劑。媒劑或凍干粉劑可包含維持等滲性的添加劑(例如，氯化鈉、甘露醇)和維持化 學(xué)穩(wěn)定性的添加劑(例如，緩沖劑和防腐劑)。所述調(diào)配物可使用常用技術(shù)滅菌。例如，通 過將1. 5重量％的有效成分溶于0. 9%的氯化鈉溶液中可制備一適于經(jīng)注射施用的非經(jīng)腸 組合物。補(bǔ)體抑制劑可在一局部缺血-再灌注損傷或一 TAAA修補(bǔ)之前及/或之后立即施
12用，例如，在一局部缺血_再灌注損傷或一 TAAA修補(bǔ)之前24小時(shí)內(nèi)及/或之后72小時(shí)內(nèi) 施用，或者在患者從所述損傷或TAAA修補(bǔ)中康復(fù)期間依據(jù)一設(shè)計(jì)處方投藥方案定期施用， 例如，每天一次持續(xù)30天、每?jī)商煲淮纬掷m(xù)60天或每周一次，以使治療頻率和劑量最小化 并使治療效力最大化。另一方面，本發(fā)明提供一種可用于預(yù)防和治療與局部缺血-再灌注損傷或一 TAAA 修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷的組合物，所述組合物包含一種或多種補(bǔ)體抑制劑以及一種或多種 醫(yī)藥上可接受的佐劑、載劑、賦形劑及/或稀釋劑。用于制造醫(yī)藥組合物的可接受佐劑、 載劑、賦形劑及/或稀釋劑為熟悉此項(xiàng)技術(shù)的技術(shù)人員所熟知，例如，Hoover, John Ε.， Remington' s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing 公司，Easton, Pennsylvania 1975。藥物調(diào)配物的另一論述可參見Liberman，H. Α.和Lachman，L.編輯的Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N. Y.，1980。最優(yōu)選地，所述抑制劑與醫(yī)藥上可 接受的載劑混合以形成一可使得劑量制備和施用容易的組合物。從不含非揮發(fā)性致熱原的 水、無菌水以及抑菌水制備而成且含至少0. 025M諸如磷酸鈉、碳酸氫鈉、檸檬酸鈉等緩沖 鹽的水性媒劑也適合于形成可注射的補(bǔ)體抑制劑溶液。除了這些緩沖液外，亦可使用若干 其他水性媒劑。這些水性媒劑包括能夠滅菌的等滲注射組合物，諸如氯化鈉、林格氏溶液、 葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、以及乳酸林格氏溶液。添加諸如甲醇、乙醇或丙二醇等與水混溶 的溶劑通常會(huì)增加所述抑制劑在這些媒劑中的溶解度和穩(wěn)定性。此外，亦可采用諸如棉籽 油、芝麻油或花生油以及酯類(例如，肉豆蔻酸異丙酯)等非水性媒劑作為所述抑制劑的懸 浮媒劑。另外，還可添加各種能夠增強(qiáng)組合物的穩(wěn)定性、無菌性和等滲性的添加劑，包括抗 菌防腐劑、抗氧化劑、螯合劑以及緩沖劑。然而，所用的任何媒劑、稀釋劑或添加劑皆必須具 有生物相容性并可與本發(fā)明抑制劑相容。在一實(shí)施例中，所述組合物包含一第一補(bǔ)體抑制劑和一第二抗體，所述第一補(bǔ)體 抑制劑選自由抗MBL抗體及其功能等效片段、抗MASPl抗體及其功能等效片段、抗MASP2抗 體及其功能等效片段、抗MASP3抗體及其功能等效片段、以及抗MBL復(fù)合抗體及其功能等效 片段組成的群組，且所述第二抗體是一不同于所述第一抗體的抗體，其選自由抗MBL抗體 及其功能等效片段、抗MASPl抗體及其功能等效片段、抗MASP2抗體及其功能等效片段、抗 MASP3抗體及其功能等效片段、抗MBL復(fù)合抗體及其功能等效片段以及其他補(bǔ)體抑制劑組 成的群組。當(dāng)補(bǔ)體抑制劑是一抗體或抗體片段時(shí)，其調(diào)配物是任何已知適于向一患者施用抗 體的調(diào)配物，例如，諸如于美國(guó)專利申請(qǐng)案第20020136719號(hào)中所揭示的那些固體抗體調(diào) 配物、諸如于美國(guó)專利第6，267，958號(hào)中所揭示的那些再構(gòu)成凍干調(diào)配物、或諸如于美國(guó) 專利第6，171，586號(hào)中所揭示的水性調(diào)配物。施用給一患者的補(bǔ)體抑制劑數(shù)量或劑量根據(jù)患者類型、患者年齡、患者個(gè)頭、抑制 劑類型、治療頻率、施用目的(治療或預(yù)防)以及組織損傷嚴(yán)重程度而有所變化。一般而言， 補(bǔ)體抑制劑按每公斤體重約2至50毫克(mg/kg)的劑量施用給患者，優(yōu)選自約5至30mg/ kg。補(bǔ)體抑制劑可按一次劑量投與或可將該劑量分成較小劑量以更頻繁的頻次施用。補(bǔ)體 抑制劑可單獨(dú)或共同施用以抵抗與TAAA修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷。實(shí)例本發(fā)明可由其優(yōu)選實(shí)施例的下述實(shí)例來進(jìn)一步闡釋，但應(yīng)了解，除非另外特別說明，否則所納入的這些實(shí)例僅用于闡釋目的而非意欲限制本發(fā)明的范圍。研究設(shè)計(jì)與患者研究19位年齡在18歲以上、確診患有TAAA(分別從第六肋間隙延伸到腎動(dòng)脈以 下，或從隔膜延伸到腎動(dòng)脈以下)(克勞福德程度(Crawford extent) III和IV ；Coselli JS, LeMarie SA. Surgical techniques thoracoabdominal aorta. Cardiol Clin North Amer 1999 ；4 :751_765)、經(jīng)歷外科手術(shù)修補(bǔ)的胸腹主動(dòng)脈瘤修補(bǔ)(TAAA)患者。這些患者不 需要心肺分流術(shù)，因而可排除由體外裝置誘發(fā)的炎癥反應(yīng)。以患有腹部主動(dòng)脈瘤或動(dòng)脈硬 化而經(jīng)歷常規(guī)腹壁部分切除術(shù)(η = 5)或于降主動(dòng)脈中經(jīng)歷血管內(nèi)支架植入術(shù)(η = 6)的 患者作為對(duì)照。在前一組中，內(nèi)臟局部缺血限制在由內(nèi)部腸系膜動(dòng)脈供血的區(qū)域，然而在后 者中不存在內(nèi)臟局部缺血。排除標(biāo)準(zhǔn)是需要呼吸機(jī)支持的呼吸衰竭、需要血液透析的腎衰 竭、休克或嚴(yán)重低血壓。此外，患有肝炎和HIV、近來或正經(jīng)歷系統(tǒng)性細(xì)菌、病毒和寄生蟲感 染、具有狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或其他已知可引起補(bǔ)體升高的疾病病史的患者均排除在本 研究之外。對(duì)19位經(jīng)歷胸腹主動(dòng)脈瘤修補(bǔ)(TAAA)的患者、6位經(jīng)歷降大動(dòng)脈血管內(nèi)支架植 入術(shù)(血管內(nèi)支架)的患者以及5位經(jīng)歷開放腹部主動(dòng)脈瘤外科手術(shù)(腹部)的患者的術(shù) 前患者人口統(tǒng)計(jì)示于表1中。在外科手術(shù)期間，記錄患者的常規(guī)血液動(dòng)力學(xué)和呼吸參數(shù)，包 括動(dòng)脈血壓、心率、中心靜脈壓、體溫、排尿量以及血液氣體。記錄有關(guān)手術(shù)時(shí)間、鉗緊時(shí)間、 腎臟、內(nèi)臟及下肢局部缺血時(shí)間、血液流失、輸液的臨床信息以及有關(guān)術(shù)后并發(fā)癥的詳細(xì)資 料和臨床結(jié)果。腎臟肌酸酐與血液尿素氮。肺Pa02/Fi02比率、PEEP值、每日胸部X-射 線評(píng)價(jià)、機(jī)械通氣持續(xù)時(shí)間、重插管法。肝臟總膽紅素、LD、ALT及AST。心臟經(jīng)壓力調(diào)節(jié) 的心率(PAR = HRXCVP/MAP)。血細(xì)胞白細(xì)胞計(jì)數(shù)和血小板計(jì)數(shù)。神經(jīng)系統(tǒng)格拉斯哥昏 迷評(píng)分(Glasgow Coma Score)和TAAA修補(bǔ)后脊髓損傷的表現(xiàn)形式。在患者離開醫(yī)院之前 繼續(xù)跟蹤患者的多器官功能和術(shù)后并發(fā)癥。記錄30天時(shí)的死亡率?；ㄙM(fèi)6個(gè)月來登記和 完成追蹤調(diào)查。在該研究中，受試者不接受任何實(shí)驗(yàn)性方法或治療干預(yù)，且不施用研究性藥
劑。
表1
TAAA血管內(nèi)支架腹部p-也
年齡(歲)69(65-73)74(65-80)57(45-85)NS
體重(kg)73(65-81)65(53-103)70(50-87)NS
性別(η)
男性1123NS
女性842
高血壓
012NS
是1953
高膽固醇血癥
否1452NS
是513
糖尿病
否1950NS
TAAA血管內(nèi)支架腹部P-值
皮膚-皮膚時(shí)間(min)164(140-190)100 (61-231)189 (132-233)NS1
內(nèi)臟局部缺血(min)37 (30-44)
下肢局部缺血(min)54 (44-63)73(40-116)72 (45-98)NS
總局部缺血(min)55 (46-65)73(40-116)72(40-116)NS
移植物大小(mm)23(21-24)31(29-38)15(14-16)< 0. 001
移植物類型(η)
兩分支型1002
直型961
動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)002
ICU停留時(shí)間(days)1(1-2)1(全部)0 (0-3)0. 04
呼吸機(jī)使用時(shí)間(hrs)11(8-26)
輸入量(mL)3800305074000. 004
(3100-4500)(1097-5947) (6250-8250)
1NS =統(tǒng)計(jì)上不顯著
觀察19位經(jīng)歷胸腹主動(dòng)脈瘤修補(bǔ)(TAAA)患者、6位經(jīng)歷降主動(dòng)脈血管內(nèi)支架移植
術(shù)的患者(血管內(nèi)支架)和5位經(jīng)歷開放腹部主動(dòng)脈瘤外科手術(shù)的患者(腹部)中的死亡 率和術(shù)后并發(fā)癥。結(jié)果示于表3中。表3
TAAA血管內(nèi)支架腹部P"
死亡率100NS:
術(shù)后并發(fā)癥
否1054NS
是911
收縮變力性
否1155NS
是810
重插管法200NS
重新手術(shù)300NS
血栓栓塞100NS
心肌梗塞200NS
尿毒癥510NS
胃腸衰竭210NS
20
多器官衰竭 300 NS創(chuàng)口感染210 NS其他并發(fā)癥 410 NS1NS =統(tǒng)計(jì)上不顯著參閱表2和表3，TAAA組中一患者在術(shù)后第一天由于大量出血和腸局部缺血而死 亡。本研究過小以致于無法進(jìn)行組間臨床參數(shù)的統(tǒng)計(jì)比較。然而，當(dāng)對(duì)于各個(gè)單獨(dú)患者將 并發(fā)癥分組為“是”(η = 9)或“否”(η= 10)時(shí)，存在一種趨勢(shì)，即，經(jīng)歷并發(fā)癥的TAAA組 患者(2625 (1760-3345) AU/mL)較未經(jīng)歷并發(fā)癥的那些患者(1514 (951-2210) AU/mL)具有 更高的補(bǔ)體激活程度(更大的TCC曲線下面積)(ρ = 0. 06)。來自實(shí)例的數(shù)據(jù)表明，在經(jīng)歷TAAA修補(bǔ)的患者中補(bǔ)體激活是臨床并發(fā)癥嚴(yán)重程 度的一種指標(biāo)，且表明這種激活主要由凝集素途徑調(diào)介并通過旁路途徑得以放大。因此，用 于抑制或防止補(bǔ)體激活的方法可用于預(yù)防和治療與TAAA修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷。在本說明書中，已揭示本發(fā)明的典型優(yōu)選實(shí)施例，盡管采用了特定術(shù)語，但這些術(shù) 語僅以普通和描述意義使用而非用于限制本發(fā)明，本發(fā)明的范圍在隨附權(quán)利要求書中界 定。顯然，借助于上述教示內(nèi)容可對(duì)本發(fā)明實(shí)施多種修改和改變。因此，應(yīng)了解，可在隨附 權(quán)利要求書的范圍內(nèi)以不同于具體描述內(nèi)容的方式實(shí)施本發(fā)明。
權(quán)利要求
補(bǔ)體抑制劑在制備用于預(yù)防或抑制與胸腹主動(dòng)脈瘤修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷的藥物中的用途。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述補(bǔ)體抑制劑選自補(bǔ)體抑制素或其功能等效片 段、Cl抑制劑、sCRl、抗C5抗體或其功能等效片段、抗C5a抗體或其功能等效片段、抗C5a 受體抗體或其功能等效片段、抗C3a抗體或其功能等效片段、抗C3a受體抗體或其功能等效 片段、抗C6抗體或其功能等效片段、抗C7抗體或其功能等效片段、抗C8抗體或其功能等效 片段、抗C9抗體或其功能等效片段、抗備解素抗體或其功能等效片段、融合蛋白膜輔因子 蛋白(MCP)、衰變加速因子(DAF)、群集素、⑶59、C4bp、H因子、I因子、羧肽酶N、玻璃粘連蛋 白(S蛋白)、SP-40、CD59和同源限制因子(HRF)。
3.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述補(bǔ)體抑制劑抑制凝聚素途徑的組分。
4.如權(quán)利要求3所述的用途，其中所述補(bǔ)體抑制劑是抗MBL抗體或其功能等效片段、抗 MASPl抗體或其功能等效片段、抗MASP2抗體或其功能等效片段、抗MASP3抗體或其功能等 效片段、抗MBL復(fù)合體抗體或其功能等效片段、甘露聚糖結(jié)合凝集素受體拮抗劑、角蛋白結(jié) 合分子、抗角蛋白抗體或其功能等效片段、MASPl結(jié)合肽、MASP2結(jié)合肽或MASP3結(jié)合肽。
5.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述補(bǔ)體抑制劑是抗體或其功能等效片段。
6.如權(quán)利要求5所述的用途，其中所述抗體是抗MBL抗體或其功能等效片段、抗MASPl 抗體或其功能等效片段、抗MASP2抗體或其功能等效片段、抗MASP3抗體或其功能等效片 段、或抗MBL復(fù)合體抗體或其功能等效片段。
7.如權(quán)利要求6所述的用途，其中所述抗體是抗MBL抗體或其功能等效片段。
8.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述補(bǔ)體抑制劑是在患者接受胸腹主動(dòng)脈瘤修補(bǔ)之 前24小時(shí)或之后72小時(shí)內(nèi)施用。
9.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述補(bǔ)體抑制劑是在患者遭受胸腹主動(dòng)脈瘤修補(bǔ)后 定期施用。
10.用于預(yù)防或抑制與胸腹主動(dòng)脈瘤修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷的組合物，所述組合物包括 補(bǔ)體抑制劑以及一種或多種醫(yī)藥上可接受的佐劑、載體、賦形劑及/或稀釋劑。
11.如權(quán)利要求10所述的組合物，其中所述補(bǔ)體抑制劑選自補(bǔ)體抑制素或其功能等效 片段、Cl抑制劑、SCRl、抗C5抗體或其功能等效片段、抗C5a抗體或其功能等效片段、抗C5a 受體抗體或其功能等效片段、抗C3a抗體或其功能等效片段、抗C3a受體抗體或其功能等效 片段、抗C6抗體或其功能等效片段、抗C7抗體或其功能等效片段、抗C8抗體或其功能等效 片段、抗C9抗體或其功能等效片段、抗備解素抗體或其功能等效片段、融合蛋白膜輔因子 蛋白(MCP)、衰變加速因子(DAF)、群集素、⑶59、C4bp、H因子、I因子、羧肽酶N、玻璃粘連蛋 白(S蛋白)、SP-40、CD59和同源限制因子(HRF)。
12.如權(quán)利要求10所述的組合物，其中所述補(bǔ)體抑制劑抑制凝聚素途徑的組分。
13.如權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述補(bǔ)體抑制劑是抗MBL抗體或其功能等效 片段、抗MASPl抗體或其功能等效片段、抗MASP2抗體或其功能等效片段、抗MASP3抗體或 其功能等效片段、抗MBL復(fù)合體抗體或其功能等效片段、甘露聚糖結(jié)合凝集素受體拮抗劑、 MASPl結(jié)合肽、MASP2結(jié)合肽或MASP3結(jié)合肽。
14.如權(quán)利要求10所述的組合物，其中所述補(bǔ)體抑制劑是抗體或其功能等效片段。
15.如權(quán)利要求14所述的組合物，其包括抗MBL抗體或其功能等效片段。
16.權(quán)利要求10-15任一項(xiàng)所述的組合物在制備用于預(yù)防或抑制與胸腹主動(dòng)脈瘤修補(bǔ) 相關(guān)的組織損傷的藥物中的用途。全文摘要
本發(fā)明涉及補(bǔ)體抑制劑在制備用于預(yù)防或治療與胸腹主動(dòng)脈瘤修補(bǔ)修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷的藥物中的用途。所述補(bǔ)體抑制劑較佳是可結(jié)合至且可抑制參與膜攻擊復(fù)合體形成的補(bǔ)體蛋白上的抗體，較佳是可抑制凝集素途徑中MBL、MASP1、MASP2及MASP3的抗體。所述補(bǔ)體抑制劑可單獨(dú)使用或組合使用以降低由與局部缺血-再灌注損傷或TAAA修補(bǔ)相關(guān)的組織損傷導(dǎo)致的發(fā)病率及死亡率。
文檔編號(hào)A61K38/00GK101897969SQ20101022144
公開日2010年12月1日 申請(qǐng)日期2004年2月20日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月21日
發(fā)明者豐錫中 申請(qǐng)人:健泰科生物技術(shù)公司