專利名稱：雙環(huán)氮雜烷類衍生物、其制備方法及其在醫(yī)藥上的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種雙環(huán)氮雜烷類衍生物、其制備方法及含有該衍生物的藥物組合物 以及其作為治療劑特別是作為二肽基肽酶抑制劑(DPPIV)的用途。
背景技術(shù)：
糖尿病是一種多病因的代謝疾病，特點(diǎn)是慢性高血糖，伴隨因胰島素分泌及/或 作用缺陷引起的糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝紊亂。糖尿病是一種非常古老的疾病，是由于人體內(nèi) 胰島素絕對或相對缺乏而引起的血中葡萄糖濃度升高，進(jìn)而糖大量從尿中排出，并出現(xiàn)多 飲、多尿、多食、消瘦、頭暈、乏力等癥狀。二肽基肽酶-IV(DPPIV)是一種絲氨酸蛋白酶，它可以在次末端含有一個(gè)脯氨酸 殘基的肽鏈里裂解N-末端二肽酶，盡管DPPIV對哺乳動(dòng)物的生理作用還沒有得到完全的證 實(shí)，但其在神經(jīng)酶代謝，T-細(xì)胞激活，癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移入內(nèi)皮及HIV病毒進(jìn)入淋巴樣細(xì)胞過程中 都起到重要的作用(W098/19998)。最近，有研究表明DPPIV可以阻止胰升糖素樣肽(GLP)-I的分泌，尤其，它可以裂 解GLP-I中N-末端的組-丙二肽酶，使其從活性形式的GLP-I (7-36)NH2降解為無活性的 GLP-I (9-36)NH2 (Endocrinology, 1999，140 5356 5363)。由于生理情況下，循環(huán)血中完 整GLP-I的半衰期很短，DPPIV降解GLP-I后的無活性代謝物能與GLP-I受體結(jié)合拮抗活 性GLP-I從而縮短了對GLP-I的生理反應(yīng)。而DPPIV抑制劑能完全保護(hù)內(nèi)源性甚至外源性 的GLP-I不被DPPIV滅活，極大的提高GLP-I的生理活性(5 10倍)，由于GLP-I對胰腺 胰島素的分泌是一個(gè)重要的刺激器并能直接影響葡萄糖的分配，DPPIV抑制劑對非胰島素 依賴型糖尿病(NIDDM)的治療起到很好的作用(US6110949)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種由通式(I)表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中
R選自烷基、環(huán)烷基、商代烷基、芳基、雜芳基、胺酰烷基、酰胺烷基、雜環(huán)胺酰烷基 或氨烷基，其中所述雜環(huán)為五元雜環(huán)或六元雜環(huán)，且該雜環(huán)進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)烷基、芳 基、雜芳基、商代烷基、商代烷氧基、羥基、氨基、烷氨基、酰胺基、胺酰基、氰基、炔基、烷氧 基、芳氧基、氨烷基、羥烷基、雜環(huán)烷基、羧酸、羧酸酯或商素取代；R1選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C (0) NR3R4、"C (0) R3、_C (0) OR3，其中烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基可以進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)烷基、芳基、羥 基、氨基、烷氧基、芳氧基或雜環(huán)烷基所取代；R2選自氫原子或烷基，其中烷基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自環(huán)烷基或芳基的取代基 所取代；R3和R4分別選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基，其中烷基、環(huán)烷 基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基可以進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、 環(huán)烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、商素、羥基、氨基、氰基、羥烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷氧基、三氟 甲基、羧酸或羧酸酯所取代；同時(shí)R3和禮可以與N原子一起形成一個(gè)3 8元的雜環(huán)基，其中5 8元雜環(huán)內(nèi) 可以進(jìn)一步含有一個(gè)或多個(gè)N、0或S原子，并且3 8元雜環(huán)上可以進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè) 烷基、芳基、雜芳基、商代烷基、商代烷氧基、羥基、氨基、氰基、烷氧基、芳氧基、羥烷基、雜環(huán) 烷基、羧酸、羧酸酯、鹵素或-NR3R4所取代；η 是 0 4。進(jìn)一步，本發(fā)明包括下述通式(IA)表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R選自烷基、環(huán)烷基、商代烷基、芳基、雜芳基、胺酰烷基、酰胺烷基、雜環(huán)胺酰烷基 或氨烷基，其中所述雜環(huán)為五元雜環(huán)或六元雜環(huán)，且該雜環(huán)進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)烷基、芳 基、雜芳基、商代烷基、商代烷氧基、羥基、氨基、烷氨基、酰胺基、胺?；?、氰基、炔基、烷氧 基、芳氧基、氨烷基、羥烷基、雜環(huán)烷基、羧酸、羧酸酯或商素取代；R1選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C (0) NR3R4、-C (0) R3、_C (0) OR3，其中烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基可以進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)烷基、芳基、羥 基、氨基、烷氧基、芳氧基或雜環(huán)烷基所取代；R2選自氫原子或烷基，其中烷基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自環(huán)烷基或芳基的取代基 所取代；R3和R4分別選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基，其中烷基、環(huán)烷 基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基可以進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、 環(huán)烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、商素、羥基、氨基、氰基、羥烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷氧基、三氟
4甲基、羧酸或羧酸酯所取代；同時(shí)R3和禮可以與N原子一起形成一個(gè)3 8元的雜環(huán)基，其中5 8元雜環(huán)內(nèi) 可以進(jìn)一步含有一個(gè)或多個(gè)N、0或S原子，并且3 8元雜環(huán)上可以進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè) 烷基、芳基、雜芳基、商代烷基、商代烷氧基、羥基、氨基、氰基、烷氧基、芳氧基、羥烷基、雜環(huán) 烷基、羧酸、羧酸酯、鹵素或-NR3R4所取代。優(yōu)選地，在通式(I)所示的化合物或其鹽中，R為 其中R5選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基，其中烷基、環(huán)烷基、芳基、 雜芳基或雜環(huán)烷基可以進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、環(huán)烷氧 基、芳氧基、雜芳氧基、商素、羥基、氨基、烷氨基、氰基、羥烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷氧基、羧酸 或羧酸酯所取代；R6和R7各自分別選自烷基、芳基、雜芳基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、羥基、氨基、氰 基、炔基、烷氧基、芳氧基、羥烷基、雜環(huán)烷基、羧酸、羧酸酯或鹵素；
W為碳、硫或氧原子，當(dāng)W為碳時(shí)，可以進(jìn)一步被R6或R7所取代。 進(jìn)一步，本發(fā)明包括下述(IB)表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
H
R,. N-R
N
I
R1
(IB)
其中R是R1選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C (0) NR3R4、_C (0) R3、_C (0) OR3，其中烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、芳基、羥 基、氨基、烷氧基、芳氧基或雜環(huán)烷基的取代基所取代；R2選自氫原子或烷基，其中烷基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自環(huán)烷基或芳基的取代基 所取代；R3和R4分別選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基，其中烷基、環(huán)烷 基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、 環(huán)烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、商素、羥基、氨基、氰基、羥烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷氧基、三氟甲基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；同時(shí)R3和R4與N原子一起形成一個(gè)3 8元的雜環(huán)基，其中5 8元雜環(huán)內(nèi)進(jìn)一 步含有一個(gè)或多個(gè)N、0或S原子，并且3 8元雜環(huán)進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、芳基、 雜芳基、商代烷基、商代烷氧基、羥基、氨基、氰基、烷氧基、芳氧基、羥烷基、雜環(huán)烷基、羧酸、 羧酸酯、鹵素或-NR3R4的取代基所取代；R5選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基，其中烷基、環(huán)烷基、芳基、 雜芳基或雜環(huán)烷基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、環(huán)烷氧 基、芳氧基、雜芳氧基、商素、羥基、氨基、烷氨基、氰基、羥烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷氧基、羧酸 或羧酸酯的取代基所取代；R6和R7各自分別選自烷基、芳基、雜芳基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、羥基、氨基、氰 基、炔基、烷氧基、芳氧基、羥烷基、雜環(huán)烷基、羧酸、羧酸酯或鹵素；W為碳、硫或氧原子，當(dāng)W為碳時(shí)，可以進(jìn)一步被R6或R7所取代。進(jìn)一步，本發(fā)明包括下述通式(IC)表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 R1選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C (0) NR3R4、_C (0) R3、_C (0) OR3，其中烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、芳基、羥 基、氨基、烷氧基、芳氧基或雜環(huán)烷基的取代基所取代；R2選自氫原子或烷基，其中烷基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自環(huán)烷基或芳基的取代基 所取代；R3和R4分別選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基，其中烷基、環(huán)烷 基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、 環(huán)烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、商素、羥基、氨基、氰基、羥烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷氧基、三氟 甲基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；同時(shí)R3和R4與N原子一起形成3 8元的雜環(huán)基，其中5 8元雜環(huán)內(nèi)進(jìn)一步含 有一個(gè)或多個(gè)N、0或S原子，并且3 8元雜環(huán)進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、芳基、雜芳 基、鹵代烷基、商代烷氧基、羥基、氨基、氰基、烷氧基、芳氧基、羥烷基、雜環(huán)烷基、羧酸、羧酸 酯、鹵素或-NR3R4的取代基所取代；R5選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基，其中烷基、環(huán)烷基、芳基、 其中R是雜芳基或雜環(huán)烷基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、環(huán)烷氧 基、芳氧基、雜芳氧基、商素、羥基、氨基、烷氨基、氰基、羥烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷氧基、羧酸 或羧酸酯的取代基所取代；R6和R7各自分別選自烷基、芳基、雜芳基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、羥基、氨基、氰 基、炔基、烷氧基、芳氧基、羥烷基、雜環(huán)烷基、羧酸、羧酸酯或鹵素；W為碳、硫或氧原子，當(dāng)W為碳時(shí)，可以進(jìn)一步被R6或R7所取代。本發(fā)明中所述的藥學(xué)上可接受的鹽為本發(fā)明化合物與選自下列的酸形成的鹽鹽 酸、對甲苯磺酸、酒石酸、馬來酸、乳酸、甲磺酸、硫酸、磷酸、檸檬酸、乙酸或三氟乙酸。優(yōu)選 為對甲苯磺酸、鹽酸、酒石酸或三氟乙酸。具體地，本發(fā)明包括如下所述結(jié)構(gòu)的化合物及其鹽 進(jìn)一步，本發(fā)明涉及一種如下列通式(ID)所示的化合物，其作為本發(fā)明通式(I) 化合物合成的中間體
(ID)其中R1選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-C (0) NR3R4、-C (0) R3、_C (0) OR3，其中烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、芳基、輕 基、氨基、烷氧基、芳氧基或雜環(huán)烷基的取代基所取代；R3和R4分別選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基，其中烷基、環(huán)燒 基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、 環(huán)烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、鹵素、羥基、氨基、氰基、羥烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷氧基、三氟 甲基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；同時(shí)R3和R4與N原子一起形成3 8元的雜環(huán)基，其中5 8元雜環(huán)內(nèi)進(jìn)一步含 有一個(gè)或多個(gè)N、0或S原子，并且3 8元雜環(huán)進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、芳基、雜芳 基、鹵代烷基、商代烷氧基、羥基、氨基、氰基、烷氧基、芳氧基、羥烷基、雜環(huán)烷基、羧酸、羧酸 酯、鹵素或-NR3R4的取代基所取代。本發(fā)明涉及通式(ID)所示化合物的制備方法，包括 冰浴下，將原料叔丁基-5-氧代_六氫-并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸酯在適宜的溶 劑中(如二氯甲烷)與三氟乙酸下反應(yīng)得到六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸鹽；
(ID)六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸鹽在堿存在下與酰氯或酯類反應(yīng)得到通式 (ID)的化合物；本發(fā)明涉及通式(IB)所示化合物的制備方法，包括 將所述的中間體(ID)室溫條件下在適宜的溶劑(如甲醇、乙醇)中與的不同胺、 取代的硼氫化鈉，在堿性條件下(如三乙胺)反應(yīng)得到通式(IB)化合物。本發(fā)明涉及通式(IB)所示化合物的制備方法，包括將叔丁醇鉀和甲基三苯基磷碘的甲苯溶液加熱后，在室溫下將中間體(ID)化合 物加入到上述溶液中反應(yīng)，得到氮雜雙環(huán)烯基化合物； 氮雜雙環(huán)烯基化合物在合適的溶劑中(如二氯甲烷)，在高氯酸銀作用下室溫下 與三甲基硅氰反應(yīng)得到氮雜雙環(huán)氰基化合物；
R^ NCR,‘ NH。 將氮雜雙環(huán)氰基化合物在合適的溶劑中(如乙醇)與適宜的酸(如鹽酸)在室
下反應(yīng)得到氮雜雙環(huán)氨基化合物；(IB) 將氮雜雙環(huán)氨基化合物在堿性溶劑(如N，N- 二甲基甲酰胺)溶劑中與鹵化物反 應(yīng)得到通式(IB)化合物。本發(fā)明涉及通式(IB)所示化合物的制備方法，包括
(ID)將中間體(ID)化合物和對甲苯磺酰甲基異腈在適宜的溶劑中(如乙二醇二甲醚)
發(fā)生異氰化反應(yīng)得到氮雜雙環(huán)氰基化合物； 氮雜雙環(huán)氰基化合物在在適宜的溶劑中(如四氫呋喃)，在六甲基二硅基胺基鋰
作用下與鹵化物反應(yīng)，得到R2取代的氮雜雙環(huán)氰基化合物； R2取代的氮雜雙環(huán)氰基化合物在酸的作用下水解得到R2取代的氮雜雙環(huán)羧基化 合物；或者R2取代的氮雜雙環(huán)氰基化合物在適宜的溶劑中(如二氯甲烷)，在冰浴下與 還原劑(DIBAL-H)反應(yīng)，先將氰基還原成醛基，得到的醛在四氫呋喃/水混合溶劑中，在冰 浴下與磷酸二氫鈉、亞氯酸鈉和2-甲基-2- 丁烯反應(yīng)，得到R2取代的氮雜雙環(huán)羧基化合 物； 將R2取代的氮雜雙環(huán)羧基化合物在堿性條件下(如三乙胺)及氯甲酸乙酯作用 下發(fā)生疊氮化反應(yīng)得到氮雜雙環(huán)疊氮基化合物； 氮雜雙環(huán)疊氮基化合物在適宜的溶劑中(如甲苯)加熱，再在酸性溶液中攪拌，并
調(diào)節(jié)PH為堿性，得到R2取代的氮雜雙環(huán)氨基化合物； 將R2取代的氮雜雙環(huán)氨基化合物在堿性溶劑中(如N，N- 二甲基甲酰胺)，與鹵化 物反應(yīng)得到通式(IB)化合物。本發(fā)明涉及通式(IC)所示化合物的制備方法，包括 將中間體(ID)在適宜的溶劑中(如四氫呋喃)，冰浴下與還原劑(如三叔丁基氧
鋁鋰氫)反應(yīng)得到氮雜雙環(huán)羥基化合物；
氮雜雙環(huán)羥基化合物在適宜的溶劑中(如二氯甲烷)，冰浴下與堿性試劑(如三乙 胺)、甲磺酰氯反應(yīng)得到氮雜雙環(huán)甲磺酸基化合物； 氮雜雙環(huán)甲磺酸基化合物在堿性試劑中(如N，N- 二甲基甲酰胺溶劑)與鄰苯二 甲酰亞胺鉀鹽加熱反應(yīng)得到鄰苯二甲酰亞胺取代的氮雜雙環(huán)化合物； 鄰苯二甲酰亞胺取代的氮雜雙環(huán)化合物在適宜的溶劑中(如乙醇)，與胼加熱得
到氮雜雙環(huán)氨基化合物； 氮雜雙環(huán)氨基化合物在適宜的溶劑中(如二氯甲烷)，與鹵化物加熱，反應(yīng)得到通 式(IC)化合物。優(yōu)選地，R為 R5選自氫原子、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)烷基，其中烷基、環(huán)烷基、芳基、 雜芳基或雜環(huán)烷基進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)選自烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、烷氧基、環(huán)烷氧 基、芳氧基、雜芳氧基、商素、羥基、氨基、烷氨基、氰基、羥烷基、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷氧基、羧酸 或羧酸酯的取代基所取代；R6和R7各自分別選自烷基、芳基、雜芳基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、羥基、氨基、氰 基、炔基、烷氧基、芳氧基、羥烷基、雜環(huán)烷基、羧酸、羧酸酯或鹵素；W為碳、硫或氧原子，當(dāng)W為碳時(shí)，可以進(jìn)一步被R6或R7所取代。進(jìn)一步，本發(fā)明還包括將得到的通式(IB)或(IC)化合物經(jīng)純化后在酸的甲醇、二 氯甲烷或乙酸乙酯溶液中反應(yīng)，得到其酸加成產(chǎn)物鹽。進(jìn)一步，本發(fā)明涉及一種藥物組合物，其含有治療有效劑量的本發(fā)明化合物或其 藥學(xué)上可接受的鹽，和藥學(xué)上可接受的載體。進(jìn)一步，本發(fā)明還涉及本發(fā)明化合物化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備二肽基 肽酶(DPPIV)抑制劑藥物中的用途。在本發(fā)明通式⑴所表述的化合物或其鹽中，通式⑴以游離態(tài)或者以酸加成鹽 的形式存在，并提供醫(yī)藥上允許的(非毒性的，生理允許的)鹽；所述的醫(yī)藥上允許的鹽包 括鹽酸鹽、對甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、乳酸鹽、甲磺酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸 鹽、乙酸鹽或三氟乙酸鹽。優(yōu)選為對甲苯磺酸鹽、鹽酸鹽、酒石酸鹽及三氟乙酸鹽。發(fā)明的詳細(xì)說明除非有相反陳述，下列用在說明書和權(quán)利要求書中的術(shù)語具有下述含義?！巴榛敝革柡偷闹鍩N基團(tuán)，包括1至20個(gè)碳原子的直鏈和支鏈基團(tuán)。優(yōu)選含有 1至10個(gè)碳原子的中等大小烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、 戊基登。更優(yōu)選的是含有1至4個(gè)碳原子的低級烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁 基、異丁基或叔丁基等。烷基可以取代的或未取代的，當(dāng)被取代時(shí)，優(yōu)選的基團(tuán)為鹵素、羥 基、低級烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜環(huán)烷基、C (0) R3和C (0) NR3R4?！碍h(huán)烷基”指3至8元全碳單環(huán)、全碳5元/6元或6元/6元稠合環(huán)或多環(huán)稠合環(huán) (“稠合”環(huán)系意味著系統(tǒng)中的每個(gè)環(huán)與體系中的其他環(huán)共享毗鄰的一對碳原子)基團(tuán)，其 中一個(gè)或多個(gè)環(huán)可以含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵，單沒有一個(gè)環(huán)具有完全共軛的η電子系統(tǒng)。環(huán) 烷基的實(shí)例有環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯、環(huán)己烷、環(huán)己二烯、金剛烷、環(huán)庚烷、環(huán)庚三 烯等。環(huán)烷基可以是取代或未取代的。當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)取代基，獨(dú)立 地選自由低級烷基、三鹵烷基、鹵素、羥基、低級烷氧基、芳基(可選自被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取 代，取代基是彼此獨(dú)立地是商素、羥基、低級烷基或低級烷氧基)、芳氧基(可選自被一個(gè)或 多個(gè)基團(tuán)取代，取代基彼此獨(dú)立地是鹵素、羥基、低級烷基或低級烷氧基)、6元雜芳基(環(huán) 中具有1至3個(gè)氮原子，環(huán)中的碳可選地被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，取代基彼此獨(dú)立地是鹵 素、羥基、低級烷基或低級烷氧基)、5元雜芳基(具有1至3個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子，該 基團(tuán)的碳和氮原子可選地被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，取代基彼此獨(dú)立地是鹵素、羥基、低級烷基或低級烷氧基)、或5或6元雜環(huán)烷基(具有1至3個(gè)選自氮、氧和硫地雜原子，該基團(tuán) 地碳和氮原子(如果有的話)，可選地被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，取代基彼此獨(dú)立地是鹵素、 羥基、低級烷基或低級烷氧基)、巰基、(低級烷基)硫基、芳硫基(可選地被一個(gè)或多個(gè)基 團(tuán)取代，取代基彼此獨(dú)立地是商素、羥基、低級烷基或低級烷氧基)、氰基。?；⒘虼；?、 0-氨基甲?；?、N-氨基甲?；?、0-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲?；?、C-酰氨基、N-酰 氨基、硝基、N-磺酰氨基、S-磺酰氨基、C (0) R3、C (0) NR3R4和-C (0) OR3?！跋┗敝赣芍辽賰蓚€(gè)碳原子和至少一個(gè)碳-碳雙鍵組成的如上述定義的烷基。代 表性實(shí)例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-，2_或3- 丁烯基等。“炔基”指至少兩個(gè)碳原子和至少一個(gè)碳_碳三鍵組成的如上所定義的烷基。代表 性實(shí)例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-，2-或3- 丁炔基等?！胺蓟敝妇哂兄辽僖粋€(gè)芳環(huán)結(jié)構(gòu)的基團(tuán)，即具有共軛的π電子體系的芳環(huán)，包括 碳環(huán)芳基、雜芳即和聯(lián)芳基。所述的芳基可以由一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代機(jī)任選取代鹵 素、三鹵甲基、羥基、SR、硝基、氰基、烷氧基和烷基?！半s芳基”指具有1至3個(gè)雜原子作為環(huán)原子，其余的環(huán)原子為碳的芳基，雜原子包 括氧、硫和氮。所述環(huán)可以是5元或6元環(huán)。雜環(huán)芳基基團(tuán)的實(shí)例包括呋喃基、噻吩基、吡 啶基、吡咯、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基等?！半s環(huán)烷基”指單環(huán)或稠環(huán)基團(tuán)，在環(huán)中，具有5至9個(gè)環(huán)原子，其中一個(gè)或兩個(gè)環(huán) 原子選自氮、氧或S(0)n(其中η是整數(shù)0至2)的雜原子，其余環(huán)原子為碳。這些環(huán)還可 以具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵、不過，這些環(huán)不具有完全共軛的η電子系統(tǒng)。未取代的雜環(huán)烷基 包括但不限于吡咯烷基、哌啶子基、哌嗪子基、嗎啉基、硫代嗎啉基、高哌嗪其等、雜環(huán)烷基 可以是取代的或未取代的。當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選為一個(gè)或多個(gè)，更優(yōu)選一個(gè)、兩個(gè)或三 個(gè)，進(jìn)而更優(yōu)選一個(gè)或兩個(gè)，獨(dú)立地選自由低級烷基、三鹵烷基、鹵素、羥基、低級烷氧基、氰 基和?；M成的組。優(yōu)選地，雜芳基可選自被一個(gè)或兩個(gè)取代基取代，取代基獨(dú)立地選自鹵 素、低級烷基、三鹵烷基、羥基、巰基、氰基、N-酰氨基或羧基?！傲u基”指-OH基團(tuán)?！巴檠趸敝?0-(烷基)和-0-(未取代地環(huán)烷基)。代表性實(shí)例包括但不限于甲 氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環(huán)丙氧基、環(huán)丁氧基、環(huán)戊氧基、環(huán)己氧基等?！胞u代烷氧基”指-0-(鹵代烷基)。代表性實(shí)例包括但不限于三氟甲氧基、三溴甲
氧基等?！胺佳趸敝?0-芳基和-0-雜芳基，芳基和雜芳基定義同上。代表性實(shí)例包括但 不限于苯氧基、吡啶氧基、呋喃氧基、噻吩氧基、嘧啶氧基、吡嗪氧基等及其衍生物?！皫€基”指-SH基團(tuán)?！巴榱蚧敝?0-(烷基)和-0-(未取代的環(huán)烷基)。代表性實(shí)例包括但不限于甲 硫基、乙硫基、丙硫基、丁硫基、環(huán)丙硫基、環(huán)丁硫基、環(huán)戊硫基、環(huán)己硫基等?！胺剂蚧敝?S-芳基和-S-雜芳基，芳基和雜芳基定義同上。代表性實(shí)例包括但 不限于苯硫基、吡啶硫基、呋喃硫基、噻吩硫基、嘧啶硫基等及其衍生物、“酰基”指-C(0)-R”基團(tuán)，其中R”選自由氫、低級烷基、三鹵甲基、未取代的環(huán)烷 基、芳基(可選地被一個(gè)或多個(gè)，優(yōu)選一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)取代基，取代基選自由低級烷基、三 鹵甲基、低級烷氧基和鹵素組成的組)、雜芳基(通過環(huán)碳鍵合的)(可選地被一個(gè)或多個(gè)，
17優(yōu)選一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)取代基，取代基選自由低級烷基、三鹵甲基、低級烷氧基和鹵素組成 的組)和雜脂環(huán)基(通過環(huán)碳鍵合的)(可選地被一個(gè)或多個(gè)，優(yōu)選一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)取代 基取代，取代基選自由低級烷基、三鹵甲基、低級烷氧基和鹵素組成的組)。代表性酰基包括 但不限于乙?；?、三氟乙?；?、苯甲?；取！傲虼；敝?C(S)_R”基團(tuán)，其中R”的定義同上?！耙阴；敝?C(O)CH3基團(tuán)?！胞u素”指氟、氯、溴或碘，優(yōu)選氟或氯?！叭谆敝?CF3?！扒杌敝?_CN?！鞍被敝?NH2?！棒人帷敝?C00H?！棒人狨ァ敝?C00R，其中R為烷基或環(huán)烷基?！傲u烷基”指_(CH2)rNH2，其中r是1 4。“可選”或“可選地”意味著隨后所描述地事件或環(huán)境可以但不必發(fā)生，該說明包括 該事件或環(huán)境發(fā)生或不發(fā)生地場合。例如，“可選被烷基取代地雜環(huán)基團(tuán)”意味著烷基可以 但不必存在，該說明包括雜環(huán)基團(tuán)被烷基取代的情形和雜環(huán)基團(tuán)不被烷基取代的情形?！八幬锝M合物”表示一種或多種本文所述化合物或其生理學(xué)上/藥學(xué)上可接受的鹽 或前體藥物與其他化學(xué)組分的混合物，其他組分例如生理學(xué)/藥學(xué)上可接受的載體和賦形 劑。藥物組合物的目的是促進(jìn)化合物對生物體的給藥。本發(fā)明化合物的合成方法為了完成本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案合成方案I 冰浴下，叔丁基-5-氧代_六氫-并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸酯在適宜的溶劑中(如 二氯甲烷)中與三氟乙酸下反應(yīng)得到六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸鹽；六氫并環(huán)戊 二烯吡咯-5-酮三氟乙酸鹽在堿存在下與酰氯或酯類反應(yīng)得到通式(ID)的化合物；將所述 的中間體(ID)室溫條件下在適宜的溶劑(如甲醇、乙醇)中與的不同胺、取代的硼氫化鈉， 在堿性條件下(如三乙胺)反應(yīng)得到通式(IB)化合物。合成方案II 將叔丁醇鉀和甲基三苯基磷碘的甲苯溶液加熱后，在室溫下將中間體(ID)化合 物加入到上述溶液中反應(yīng)，得到氮雜雙環(huán)烯基化合物；氮雜雙環(huán)烯基化合物在適宜的溶劑 中(如二氯甲烷)，在高氯酸銀作用下室溫下與三甲基硅氰反應(yīng)得到氮雜雙環(huán)氰基化合物； 將氮雜雙環(huán)氰基化合物在合適的溶劑中(如乙醇)與適宜的酸(如鹽酸)在室溫下反應(yīng)得 到氮雜雙環(huán)氨基化合物；將氮雜雙環(huán)氨基化合物在堿性溶劑(如N，N-二甲基甲酰胺)溶劑 中與鹵化物反應(yīng)得到通式(IB)化合物。合成方案III 將中間體(ID)化合物和對甲苯磺酰甲基異腈在適宜的溶劑中(如乙二醇二甲醚) 發(fā)生異氰化反應(yīng)得到氮雜雙環(huán)氰基化合物；氮雜雙環(huán)氰基化合物在在適宜的溶劑中(如四 氫呋喃)，在六甲基二硅基胺基鋰作用下與商化物反應(yīng)，得到R2取代的氮雜雙環(huán)氰基化合 物；R2取代的氮雜雙環(huán)氰基化合物在酸的作用下水解得到R2取代的氮雜雙環(huán)羧基化合物， 或者R2取代的氮雜雙環(huán)氰基化合物在適宜的溶劑中(如二氯甲烷)，在冰浴下與還原劑 (DIBAL-H)反應(yīng)，先將氰基還原成醛基，得到的醛在四氫呋喃/水混合溶劑中，在冰浴下與 磷酸二氫鈉、亞氯酸鈉和2-甲基-2- 丁烯反應(yīng)，得到R2取代的氮雜雙環(huán)羧基化合物；將R2 取代的氮雜雙環(huán)羧基化合物在堿性條件下(如三乙胺)及氯甲酸乙酯作用下發(fā)生疊氮化反 應(yīng)得到氮雜雙環(huán)疊氮基化合物；氮雜雙環(huán)疊氮基化合物在適宜的溶劑中(如甲苯)加熱，再 在酸性溶液中攪拌，并調(diào)節(jié)PH為堿性，得到R2取代的氮雜雙環(huán)氨基化合物；將R2取代的氮 雜雙環(huán)氨基化合物在堿性溶劑中(如N，N-甲基甲酰胺)，與鹵化物反應(yīng)得到通式(IB)化 合物。合成方案IV
19 將中間體(ID)在適宜的溶劑中(如四氫呋喃)，冰浴下與還原劑(如三叔丁基氧 鋁鋰氫)反應(yīng)得到氮雜雙環(huán)羥基化合物；氮雜雙環(huán)羥基化合物在適宜的溶劑中(如二氯甲 烷)，冰浴下與堿性試劑(如三乙胺)、甲磺酰氯反應(yīng)得到氮雜雙環(huán)甲磺酸基化合物；氮雜雙 環(huán)甲磺酸基化合物在堿性試劑中(如N，N-二甲基甲酰胺溶劑)與鄰苯二甲酰亞胺鉀鹽加 熱反應(yīng)得到鄰苯二甲酰亞胺取代的氮雜雙環(huán)化合物；鄰苯二甲酰亞胺取代的氮雜雙環(huán)化合 物在適宜的溶劑中(如乙醇)，與胼加熱得到氮雜雙環(huán)氨基化合物；氮雜雙環(huán)氨基化合物在 適宜的溶劑中(如二氯甲烷)，與鹵化物加熱，反應(yīng)得到通式(IC)化合物。進(jìn)一步，通式(IB)或(IC)化合物經(jīng)純化后在酸的甲醇、二氯甲烷或乙酸乙酯溶液 中反應(yīng)，得到其酸加成產(chǎn)物鹽。本發(fā)明涉及一種藥物組合物，其含有治療有效劑量的化合物或其鹽和藥學(xué)載體， 或者本發(fā)明通式化合物或其鹽在制備二肽基肽酶抑制劑藥物中的用途。換言之，本發(fā)明還 提供含有藥物有效劑量的上述化合物的組合物，以及所述的化合物在制備二肽基肽酶抑制 劑中的用途。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例用于進(jìn)一步描述本發(fā)明，但這些實(shí)施例并非限制著本發(fā)明的范圍。實(shí)施例化合物的結(jié)構(gòu)是通過核磁共振(1H NMR)或質(zhì)譜(MS)來確定的。1H NMR位移(δ ) 以百萬分之一(ppm)的單位給出。NMR的測定是用BrukerAVANCE-400核磁儀，測定溶劑為氘 代氯仿(⑶Cl3)、氘代二甲基亞砜(DMSO-D6)、氘代甲醇(⑶30D)，內(nèi)標(biāo)為四甲基硅烷(TMS)， 化學(xué)位移是以10_6(ppm)作為單位給出。MS 的測定用 FINNIGAN LCQAd (ESI)質(zhì)譜儀。激酶平均抑制率及IC5tl值的測定用NovoStar酶標(biāo)儀(德國BMG公司)薄層硅膠使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254硅膠板柱層析一般使用煙臺黃海硅膠200 300目硅膠為載體。DMSO-D6 氘代二甲基亞砜；CDCl3:氘代氯仿；CD3OD:氘代甲醇；實(shí)施例1順-5- (2- (S) - (2-氰基吡咯-1-基)_2_氧代乙氨基)_N，N- 二甲基-六氫并環(huán)戊 二烯吡咯-2-酰胺鹽酸鹽
20 第一步[2- (2-氨基甲酰-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]_氨基甲酸叔丁酯Ib的制備將N-叔丁氧基羰基-甘氨酸la (5g，28. 56mmol)和L-脯氨酰胺(3. 25g， 28. 50mmol)溶于75mLN，N-二甲基甲酰胺中，冷卻到0°C，攪拌下加入1-羥基苯并三唑 (11.8g，87. 3mmol), N-乙基-N，_( 二甲氨基丙基)_ 碳二亞胺(11. 3g，59mmol)，三乙胺 (12. ImL,87. 3mmol)，自然升至室溫，攪拌過夜，次日薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料完全消失后， 低于50°C蒸去N，N-二甲基甲酰胺，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液(200mLX3)，合并有機(jī)相，用 50mL飽和氯化鈉溶液洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用乙酸 乙酯重結(jié)晶，得到標(biāo)題產(chǎn)物[2- (2-氨基甲酰-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸 叔丁酯 lb(7. 42g，白色粉末)，產(chǎn)率 95. 8%。MS m/z (ESI) :272·1(Μ+1)。第二步[2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]_氨基甲酸叔丁酯Ic的制備氮?dú)夥障拢谝粋€(gè)干燥的三口瓶中依次加入286mL吡啶，[2_(2_氨基甲酰-批 口各烷-1-基)-2_氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯lb(13. 5g，49.8mmol)，咪唑(7. Ilg, 104. 6mmol)，反應(yīng)體系冷卻到_35°C，攪拌下滴加三氯氧磷(19mL，204. 2mmol)，并在該溫度 下繼續(xù)反應(yīng)1小時(shí)，隨后自然升至室溫，反應(yīng)0. 5小時(shí)后，低溫蒸干吡啶，乙酸乙酯稀釋，加 7K，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液(200mLX3)，合并有機(jī)相，用50mL飽和氯化鈉溶液洗滌，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得標(biāo)題產(chǎn)物 [2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]_氨基甲酸叔丁酯Ic (10. 7g，白色粉末)，產(chǎn) 率 84. 9%。MS m/z (ESI) :254. 3(M+1)。第三步1-(2-氨基乙?；?-2-氰基-吡咯烷鹽酸鹽Id的制備 將[2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基]-氨基甲酸叔丁酯Ic (13. 7g， 54. 2mmol)攪拌下溶解于140mL乙醚和40mL水中，冰浴下滴加37%的鹽酸溶液(90mL)，冰 浴下反應(yīng)1小時(shí)，蒸干溶劑，乙醚分散離心，得到標(biāo)題產(chǎn)物1-(2-氨基乙?；?-2-氰基-吡 咯烷鹽酸鹽ld(10g，白色粉末)，產(chǎn)率98%。MS m/z (ESI) :154. 4(M+1)。第四步六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸鹽If的制備將叔丁基-5-氧代-六氫-并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸酯Ie (0. 32g，1. 42mmol)攪 拌下溶解于IOmL 二氯甲烷中，冰浴下加入三氟乙酸(3. 27mL，42. 7mmol)，0°C下反應(yīng)30分 鐘，減壓蒸干溶劑得到標(biāo)題產(chǎn)物六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸鹽If的粗產(chǎn)品，直接 用于下一步。MS m/z (ESI) :126. 4(M+1)。第五步N, N- 二甲基-5-氧代-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸酯Ig的制備將上一步六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸鹽If的粗產(chǎn)品攪拌下溶解于15mL 乙腈中，冰浴冷卻下加入碳酸鉀(0. 24g，l. 71讓01)，再滴加隊(duì)^二甲基氨甲酰氯(0. 14mL, 1.56mm0l)，室溫下反應(yīng)2小時(shí)，蒸掉溶劑，加入50mL水，用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，合并 有機(jī)相，用50mL飽和氯化鈉溶液洗滌，乙酸乙酯相用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液減壓濃 縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物N，N- 二甲基-5-氧代-六氫并環(huán)戊二 烯吡咯-2-羧酸酯Ig(0. 19g，淺黃色油狀物)，產(chǎn)率68.3%。MS m/z (ESI) :197·4(Μ+1)。1H NMR (DMSO-D6, 400ΜΗζ) δ 3. 56 (m，2H)，2. 85 (m，2H)，2. 7 (s，6H)，2. 81 (m，2H)， 2.5(m，2H)，2.01(m，2H)。第六步順-5- (2- (2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)_N，N- 二甲基-六氫并環(huán)戊二烯 吡咯-2-酰胺Ih的制備將1-(2_氨基乙?；?-2_氰基-吡咯烷鹽酸鹽ld(0.36g，1.91mmOl)攪拌下溶 解于20mL甲醇，加入N，N-二甲基-5-氧代-六氫-并環(huán)戊二烯吡咯-2-酰胺Ig(0. 25g， 1. 28mmol)及三乙酰氧基硼氫化鈉(1. 22g，5. 74mmol)，室溫反應(yīng)3小時(shí)，反應(yīng)液濃縮，加用 20mL飽和碳酸鈉溶液，然后用二氯甲烷(20mLX10)萃取反應(yīng)液，合并有機(jī)相，用IOmL飽和 氯化鈉溶液洗滌，二氯甲烷層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純 化得到殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物順-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2_氧代乙氨基)_N，N- 二甲 基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-酰胺Ih (0. 3g，白色粉末)，產(chǎn)率53 %。
MS m/z (ESI) :334. 5(M+1)。第七步順-5- (2- (2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)_N，N- 二甲基-六氫并環(huán)戊二烯 吡咯-2-酰胺鹽酸鹽1的制備將順-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二甲基-六氫并環(huán)戊 二烯吡咯-2-酰胺lh(200mg，0. 687mmol)分散于IOmL 二氯甲烷中，冰浴下加入2mL 0. 5N 的鹽酸乙醚溶液，蒸干溶劑，加入IOmL乙醚，沉淀物離心，得標(biāo)題產(chǎn)物順-5-(2-(2-氰基吡 咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N- 二甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-酰胺鹽酸鹽1 (180mg， 白色粉末)，產(chǎn)率80%。1H NMR(CD3OD, 400MHz) δ 4. 82 (dd，1H，J1 = 4Hz, J2 = 5. 2Hz)，4. 02 (dd，2H，J1 = J2 =16. 4Hz)，3. 62-3. 25 (m, 7H)，2. 76 (s,6H)，2. 51-1. 49 (m, 10H)。實(shí)施例2 順-甲基-5- (2- (S) - (2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸酯鹽酸鹽
第一步甲基5-氧代-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸酯2a的制備將六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸鹽lf(0.559g，2.34mmol)攪拌下溶解 于20mL乙腈中，冰水浴下依次加入碳酸鉀(0. 646g,4. 68mmol)和氯甲酸甲酯(0. 22mL, 2. 8mmol),自然升溫，室溫反應(yīng)過夜，減壓蒸干溶劑，加入50mL水，用乙酸乙酯(50mLX3) 萃取，合并有機(jī)相，依次用50mL飽和氯化鈉溶液和50mL水洗滌，乙酸乙酯相用無水硫酸鎂 干燥過夜，過濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物甲基5-氧 代_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸酯2a (0. 25g，無色油狀物)，產(chǎn)率58. 4 %。MS m/z (ESI) :184(M+1)。第二步順-甲基-5-(2_(2-氰基吡咯-1-基)-2_氧代乙氨基)_六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸酯2b的制備將1-(2_氨基乙?；?-2_氰基-吡咯烷鹽酸鹽ld(0.43g，2. 29mmol)攪拌下溶解于20mL甲醇中，加入甲基5-氧代-六氫-并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸酯2a (0. 28g，1. 53mmol) 及三乙酰氧基硼氫化鈉(1. 46g，6. 88mmol)，室溫反應(yīng)3小時(shí)，反應(yīng)液濃縮，加用20mL飽和碳 酸鈉溶液，然后用二氯甲烷(20mLX3)萃取反應(yīng)液，合并有機(jī)相，用IOmL飽和氯化鈉溶液洗 滌，二氯甲烷層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化得到的產(chǎn)品 順-甲基-5- (2- (2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸酯 2b (0. 22g，白色粉末)，產(chǎn)率41 %。MS m/z (ESI) :357(M+1)。第三步順-甲基-5-(2_(2-氰基吡咯-1-基)-2_氧代乙氨基)_六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸酯鹽酸鹽2的制備將順-甲基-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2_氧代乙氨基)_六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸酯2b分散于IOmL乙醚中，冰浴下加入2mL 0. 5N的鹽酸乙醚溶液，沉淀物離心， 得標(biāo)題產(chǎn)物順-甲基-5- (2- ((S) -2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-六氫并環(huán)戊二烯 吡咯-2-羧酸酯鹽酸鹽2 (200mg,白色粉末)。1H NMR (CD3OD, 400MHz) δ 4. 71 (m，1H)，3. 93 (m，2H)，3. 59-3. 28 (m，10H)，2. 64 (m， 2H)，2. 34 (m, 2H)，2. 17 (m, 2H)，2. 08 (m, 2H)。實(shí)施例3順-1- (2- (2- (2-羥基乙?；?-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙?；?_2_氰 基_吡咯烷鹽酸鹽 第一步2-(2-羥基乙酰基)_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-酮3a的制備將六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸鹽lf(764.8mg，3. 2mmol)和2_羥基乙酸 (267. 5mg，3. 52mmol)攪拌下溶解于IOmL乙腈中，冰水浴下加入羥基乙酸(1. 3g，9. 6mmol) 和1-乙基-3-二甲氨丙基-碳二亞胺鹽酸鹽(1. 23g，6. 4mmol)和三乙胺(1. 3mL，9. 6mmol)， 撤掉冰水浴，在25°C下反應(yīng)過夜，蒸干溶劑，加入20mL乙酸乙酯，抽濾，用20mL水洗滌濾液，乙酸乙酯層用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化得到殘余物，得 到標(biāo)題產(chǎn)物2- (2-羥基乙?；?-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-酮3a (0. 375g，無色油狀物)，產(chǎn) 率 64%。 第二步順-1- (2- (2- (2-羥基乙?；?-八氫并環(huán)戊二烯吡咯_5_基氨基)乙酰基)_2_氰 基_吡咯烷3b的制備將2-(2_羥基乙?；?_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-酮3a(0. 375g，2.05mmol)和 1-(2-氨基乙?；?-2-氰基-吡咯烷鹽酸鹽Id (0. 78g，4. lmmol)攪拌下溶解于IOmL四氫 呋喃和5mL甲醇中，室溫下反應(yīng)0. 5小時(shí)后，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(0. 87g，4. lmmol)，室 溫反應(yīng)過夜，減壓濃縮反應(yīng)液，加50mL甲醇和碳酸鉀(2g，7mmol)攪拌0. 5小時(shí)，減壓抽濾， 濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化得到產(chǎn)品順-l-(2-(2-(2-羥基乙?；?_八氫并環(huán)戊 二烯吡咯-5-基氨基)乙?；?-2_氰基-吡咯烷3，直接用于下一步反應(yīng)。 第三步順-1- (2- (2- (2-羥基乙?；?-八氫并環(huán)戊二烯吡咯_5_基氨基)乙酰基)_2_氰 基_吡咯烷鹽酸鹽3的制備將順-l-(2-(2-(2-羥基乙?；?_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰 基)-2-氰基-吡咯烷3b分散于IOmL乙醚中，冰浴下加入2mL 0. 5N的鹽酸乙醚溶液，沉淀 物離心，得到標(biāo)題產(chǎn)物順-l-(2-(2-(2-羥基乙?；?_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基) 乙酰基)-2-氰基-吡咯烷鹽酸鹽3 (IOOmg,白色粉末)。實(shí)施例4 順-1- (2- (2-(哌啶-1-羰基)_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)_2_氰 基_吡咯烷鹽酸鹽
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1f4a第一步2_(哌啶-1-羰基)_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮4a的1制備
25
將六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸鹽If (478mg，2mmol)攪拌下溶解于20mL 二氯甲烷中，加入碘代[3-(1_哌啶甲酰基)咪唑-1-甲基鹽](0.96g，3mmol)和三乙胺 (0. 84mL，6mmol)，室溫下反應(yīng)過夜，加入20mL水淬滅反應(yīng)，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合 并有機(jī)相，依次用50mL 10%檸檬酸溶液和50mL飽和氯化鈉溶液洗滌，二氯甲烷相用無水 硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化得到殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物2-(哌 啶-1-羰基)“六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮4a (0. 41g，無色油狀物)，產(chǎn)率87 %。MS m/z (ESI) :237(M+1)。第二步順-1- (2- (2-(哌啶-1-羰基)-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙?；?_2_氰 基_吡咯烷4b的制備將2-(哌啶-1-羰基)-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮4a (0. 41g，1. 74mmol)和 l-(2-氨基乙?；?-2-氰基-吡咯烷鹽酸鹽Id (0. 5g，2. 6mmol)溶解于50mL四氫呋喃中， 加入5g硫酸鈉和0. 05mL乙酸，室溫下反應(yīng)0. 5小時(shí)后，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1. Ig, 5. 2mmol)，室溫反應(yīng)3小時(shí)后，減壓濃縮反應(yīng)液，加入50mL飽和碳酸鈉溶液，用乙酸乙酯 (50mLX3)萃取，合并有機(jī)相，依次用50mL飽和氯化鈉溶液和50mL水洗滌，乙酸乙酯層用無 水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化得到標(biāo)題產(chǎn)物順-1-(2-(2-(哌 啶-1-羰基)_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)-2_氰基-吡咯烷4b，直接用于 下一步反應(yīng)。MS m/z (ESI) :410(M+1)。第三步順-1- (2- (2-(哌啶-1-羰基)-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙?；?_2_氰 基_吡咯烷鹽酸鹽4的制備將順-1-(2-(2-(哌啶-1-羰基)_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰 基)-2_氰基-吡咯烷4b分散于IOmL乙醚中，冰浴下加入2mL0. 5N的鹽酸乙醚溶液，沉淀 物離心，得到標(biāo)題產(chǎn)物順-1-(2-(2-(哌啶-1-羰基)_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基) 乙?；?-2-氰基-吡咯烷鹽酸鹽4 (0. 16g，白色粉末)。1H NMR (CD3OD, 400MHz) δ 4. 83 (dd，1H，J1 = 3. OHz, J2 = 5. 8Hz)，4. 09 (dd，2Η， J1 = J2 = 13. IHz)，3· 70-3. 30 (m，10Η)，2· 72(m，2H)，2· 47(m，2H)，2· 31-2. 00(m，5H)， 1. 66-1. 52 (m, 8H)。實(shí)施例5順-l-(2_(2-乙酰基-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙?；?_2_氰基-吡
咯烷酸鹽 第一步2-乙?；?六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮5a的制備將六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸鹽lf(717mg，3mmol)攪拌下溶解于乙腈 (20mL)中，冰水浴下加入二碳酸二叔丁酯(0. 42mL，4. 5mmol)和三乙胺(0. 98mL，9mmol)，冰 水浴下反應(yīng)過夜，蒸干溶劑，加入50mL水，用乙酸乙酯萃取(50mLX 3)，合并有機(jī)相，用50mL 飽和氯化鈉溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱譜法純化得到殘 余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物2-乙?；?六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮5a (0. 36g，無色油狀物)，產(chǎn)率 72%。 第二步順-1- (2- (2-乙?；?八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)_2_氰基-吡 口各烷5b的制備將2-乙?；?六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮5a (0.36g，2. 15mmol)和1_(2_氨基乙 ?；?-2-氰基-吡咯烷鹽酸鹽Id (0. 614g，3. 23mmol)溶解于50mL四氫呋喃中，加入5g硫 酸鈉和0. 05mL乙酸，室溫下反應(yīng)0. 5小時(shí)后，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(1. 37g，6. 46mmol)， 室溫反應(yīng)3小時(shí)后，減壓濃縮反應(yīng)液，加入50mL飽和碳酸鈉溶液，用乙酸乙酯(50mLX3)萃 取，合并有機(jī)相，依次用50mL飽和氯化鈉溶液和50mL水洗滌，乙酸乙酯層用無水硫酸鎂干 燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化得到標(biāo)題產(chǎn)物順-1- (2- (2-乙?；?八氫并 環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙?；?-2_氰基-吡咯烷5b，直接用于下一步反應(yīng)。MS m/z (ESI) 305. 5 (M+1)。第三步順-1- (2- (2-乙?；?八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰基)_2_氰基-吡 口各烷鹽酸鹽5的制備將上一步所得順-l-(2-(2-乙?；?八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰 基)-2-氰基-吡咯烷5b分散于20mL乙醚中，冰浴下加入4mL 0. 5N的鹽酸乙醚溶液，沉 淀物離心，得到標(biāo)題產(chǎn)物順-l-(2-(2-乙?；?八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙酰
27基)"2"氰基-吡咯烷酸鹽5 (0. 23g，白色粉末)。1H NMR (CD3OD, 400MHz) δ 4. 71 (m，1H)，3. 92 (m，2H)，3. 69—3. 37 (m，7H)，2. 69 (m， 2H)，2. 33 (m, 2H)，2. 13 (m, 2H)，2. 04-2. 00 (m, 5H)，1. 48 (m, 2H)。實(shí)施例6 順-5- [2- (2-氰基吡咯烷-I-基)-2-氧代-乙氨基]六氫并環(huán)戊二烯吡咯_2_羧 酸異丙胺鹽酸鹽
第一步N-異丙基-5-氧代-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸酯6a的制備將六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸鹽lf(7l7mg，3mmol)攪拌下溶解于20mL 二氯甲烷，冰水浴下加入異氰酸酯(9mL，9mmol)和三乙胺(I. 7mL, l2mmol)。室溫反應(yīng)過夜， 加50mL水，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有機(jī)相，依次用50mL 10%檸檬酸溶液和50mL 飽和氯化鈉溶液洗滌，二氯甲烷相用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜 法純化得到殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物N-異丙基-5-氧代-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸酯 6a (0. 3g，無色油狀物)，產(chǎn)率47. 6 %MS m/z (ESI) :211(M+1)。第二步順-5- [2- (2-氰基吡咯烷-I-基)-2-氧代-乙氨基]六氫并環(huán)戊二烯吡咯_2_羧 酸異丙胺6b的制備將N-異丙基-5-氧代-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸酯6a (0. 3g，1. 43mmol)和 (S)-1-(2-氨基乙?；?-2-氰基-吡咯烷鹽酸鹽Id(0. 407g，2. 14mmol)溶解于50mL四 S呋喃中，加入5g硫酸鈉和0. 05mL乙酸，室溫下反應(yīng)0. 5小時(shí)后，加入三乙酰氧基硼氧 化鈉(0. 9g，4. 3mmol)，室溫反應(yīng)3小時(shí)后，減壓濃縮反應(yīng)液，加入50mL飽和碳酸鈉溶液， 用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，合并有機(jī)相，依次用50mL飽和氯化鈉溶液和50mL水洗滌， 乙酸乙酯層用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化得到標(biāo)題產(chǎn)物 順-5-[2-(2-氰基吡咯烷-1-基)-2_氧代-乙氨基]六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸異丙 胺6b，直接用于下一步反應(yīng)。
MS m/z (ESI) :384(M+1)。第三步順-5- [2- (2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙氨基]六氫并環(huán)戊二烯吡咯_2_羧 酸異丙胺鹽酸鹽6的制備將上一步所得的順-5- [2- (2-氰基吡咯烷-I-基)-2-氧代-乙氨基]六氫并環(huán)戊 二烯吡咯-2-羧酸異丙胺6b分散于IOmL乙醚中，冰浴下加入2mL 0. 5N的鹽酸乙醚溶液， 沉淀物離心，得到標(biāo)題產(chǎn)物順-5-[2-(2-氰基吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙氨基]六氫并環(huán) 戊二烯吡咯-2-羧酸異丙胺鹽酸鹽6 (80mg,白色粉末)。1H NMR(CD30D，400MHz) δ 4. 70 (m, 1H)，3. 92 (m, 2H)，3. 76-3. 32 (m, 8H)， 2. 63-1. 41 (m, 10H)，1. 01 (d, 6H, J = 6Hz)。實(shí)施例7順-1- (2- (2-(嗎啡啉-4-羰基)-八氫并環(huán)戊二烯吡咯_5_基氨基)乙酰 基)-2_氰基-吡咯烷鹽酸鹽 第一步2-(嗎啡啉-4-羰基)-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮7a的制備將六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸鹽lf(574mg，2.4mmol)攪拌下溶解于 20mL乙腈中，冰水浴下加入碳酸鉀(0. 397g，2. 88mmol)，滴加嗎啡啉_4_酰氯(0. 323mL, 2. 64mmol)，冰水浴下反應(yīng)過夜，蒸干溶劑，加入50mL水，用乙酸乙酯萃取(50mLX 3)，合并 有機(jī)相，用50mL飽和氯化鈉溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱 譜法純化得到殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物2-(嗎啡啉-4-羰基)_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮 7a (0. 572g，無色油狀物)，產(chǎn)率77. 3 %。MS m/z (ESI) :239(M+1)。第二步順-1- (2- (2-(嗎啡啉-4-羰基)-八氫并環(huán)戊二烯吡咯_5_基氨基)乙酰 基)-2_氰基-吡咯烷7b的制備
將2_(嗎啡啉-4-羰基)_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮7a(0. 64g，2. 69mmol)和 l-(2-氨基乙?；?-2_氰基-吡咯烷鹽酸鹽ld(0. 764g,4. 03mmol)溶解于50mL四氫 呋喃中，加入5g硫酸鈉和0. 05mL乙酸，室溫下反應(yīng)0. 5小時(shí)后，加入三乙酰氧基硼氫化 鈉(1. 71g，8. 07mmol)，室溫反應(yīng)3小時(shí)后，減壓濃縮反應(yīng)液，加入50mL飽和碳酸鈉溶液， 用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，合并有機(jī)相，依次用50mL飽和氯化鈉溶液和50mL水洗滌， 乙酸乙酯層用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化得到標(biāo)題產(chǎn)物 順-1- (2- (2-(嗎啡啉-4-羰基)-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙?；?-2-氰基-吡 咯烷7b，直接用于下一步反應(yīng)。MS m/z (ESI) 376. 7 (M+1)。第三步順-1- (2- (2-(嗎啡啉-4-羰基)-八氫并環(huán)戊二烯吡咯_5_基氨基)乙酰 基)-2-氰基_吡咯烷鹽酸鹽7的制備將上一步所得的順-1-(2-(2-(嗎啡啉-4-羰基)_八氫并環(huán)戊二烯吡咯_5_基 氨基)乙?；?-2_氰基-吡咯烷7b分散于IOmL乙醚中，冰浴下加入2mL 0. 5N的鹽酸乙 醚溶液，沉淀物離心，得到標(biāo)題產(chǎn)物順-1- (2- (2-(嗎啡啉-4-羰基)-八氫并環(huán)戊二烯吡 咯-5-基氨基)乙酰基)-2-氰基-吡咯烷鹽酸鹽7 (30mg,白色粉末)，產(chǎn)率3 %。實(shí)施例8順-1- (2- (2-(吡咯烷-1-羰基)_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙?；?2_氰 基_吡咯烷鹽酸鹽 第一步
2-(吡咯烷-1-羰基)-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮8a的制備將六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮三氟乙酸鹽If (478mg，2mmol)攪拌下溶解于20mL 二氯甲烷中，加入吡咯烷-1-酰氯(0. 276mL, 2. 5mmol)和三乙胺(0. 84mL, 6mmol)，室溫下反 應(yīng)過夜，加入10%檸檬酸溶液調(diào)節(jié)PH值為4，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有機(jī)相，用 50mL飽和氯化鈉溶液洗滌，二氯甲烷相用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱 色譜法純化得到殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物2-(吡咯烷-1-羰基)-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮 將實(shí)施例1所得的順-5-(2-(2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N-二 甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-酰胺lh(157mg，0. 54mmol)分散于IOmL 二氯甲烷中，冰 浴下加入2mL三氟乙酸攪拌0. 5小時(shí)，沉淀物離心，得到標(biāo)題產(chǎn)物順-5-(2-(2-氰基批 口各"I"基)-2_氧代乙氨基)_N，N- 二甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-酰胺三氟乙酸鹽 9 (20 Img，白色粉末)。1H NMR(CDC13，400MHz) δ 4. 74(t，1H，J = 5. 2Hz), 3. 98 (d, 1H, J = 15. 6Hz)，
8a(0. 26g，無色油狀物)，廣率 58. 5%。MS m/z (ESI) :223(M+1)。第二步順-1- (2- (2-(吡咯烷-1-羰基)_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙?；?2_氰 基-吡咯烷8b的制備將2_(吡咯烷-1-羰基)_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-酮8a(0.26g，l. 17mmol)和 1-(2-氨基乙?；?-2-氰基-吡咯烷鹽酸鹽Id (0. 33g，1. 75mmol)溶解于50mL四氫呋喃中， 加入5g硫酸鈉和0. 05mL乙酸，室溫下反應(yīng)0. 5小時(shí)后，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(0. 75g， 3. 5mmol)，室溫反應(yīng)3小時(shí)后，減壓濃縮反應(yīng)液，加入50mL飽和碳酸鈉溶液，用乙酸乙酯 (50mLX3)萃取，合并有機(jī)相，依次用50mL飽和氯化鈉溶液和50mL水洗滌，乙酸乙酯層用無 水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化得到標(biāo)題產(chǎn)物順-1-(2-(2-(批 口各烷-1-羰基)“八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙?；?2-氰基-吡咯烷8b，直接用于 下一步反應(yīng)。MS m/z (ESI) :396(M+1)。第三步順-1- (2- (2-(吡咯烷-1-羰基)_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基氨基)乙?；?2-氰 基-吡咯烷鹽酸鹽8的制備將上一步所得的順-1-(2-(2-(吡咯烷-1-羰基)_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-基 氨基)乙?；?2_氰基-吡咯烷8b分散于IOmL乙醚中，冰浴下加入2mL 0. 5N的鹽酸乙 醚溶液，沉淀物離心，得到標(biāo)題產(chǎn)物順-1-(2-(2-(吡咯烷-1-羰基)-八氫并環(huán)戊二烯批 口各-5-基氨基)乙?；?2-氰基-吡咯烷鹽酸鹽8 (90mg,白色粉末)。1H NMR (CD3OD, 400MHz) δ 4. 72 (m，1H)，4. 09 (m，2H)，3. 43-3. 30 (m，11H)，2. 62 (m， 2H)，2. 35 (m, 2H)，2. 18 (m, 2H)，2. 08 (m, 2H)，1. 77 (m, 4H)。實(shí)施例9順-5- (2- (2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)_N，N- 二甲基-六氫并環(huán)戊二烯 批咯-2-酰胺三氟乙酸鹽
31.步
OHOMs
\
第三步
N
O^N'
I
10a
N
O^N'
I
..Cw.
H
10c
^H2
H")~("H-
L.)
第四步 、〉第五歩 N
O^N'
I
H^V TFA
o°nc <y
N
O^N'
I
10e
N
O^N-
I
10第一步順-5-羥基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸酯N，N- 二甲基酰胺IOa的制備在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，在一個(gè)干燥的三口燒瓶中，將N，N 二甲基-5-氧代-六氫并環(huán)戊二 烯吡咯-2-羧酸酯Ig(1. 58g，8. 06mmol)攪拌下溶解于30mL四氫呋喃中，冷卻到_25°C，并 在該溫度下，滴加30mL三叔丁基氧鋁鋰氫(2. 45g，9. 6mmol)的四氫呋喃溶液，在_25°C反應(yīng) 2. 5小時(shí)后，加水淬滅反應(yīng)，加入20mL飽和氯化銨溶液，自然升至室溫，分液，水相用二氯甲 燒(50mLX3)萃取，合并有機(jī)相，用50mL飽和氯化鈉溶液洗滌，硫酸鎂干燥有機(jī)相，抽濾，濾 液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物順-5-羥基_六氫并環(huán)戊二烯 口比咯-2-羧酸酯N, N- 二甲基酰胺IOa (1. 27g，無色油狀物)，產(chǎn)率80%。MS (m/z) (ESI) 199 (M+1)。第二步順-2- 二甲基氨甲?；鵢八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-甲磺酸酯IOb的制備在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下，在干燥的單口燒瓶中將順-5-羥基-六氫并環(huán)戊二烯批 口各-2-羧酸酯N，N-二甲基酰胺10a(1.69g，8. 5mmol)攪拌下溶解于30mL 二氯甲烷中，冰
32
3. 79 (d, 1H, J = 15. 6Hz)，3. 57-3. 25 (m, 7H)，2. 75 (s,6H)，2. 55 (m, 2H)，2. 33 (m, 2H)， 2. 20-2. 08 (m, 4H)，1. 74 (m, 2H)。實(shí)施例10反-5- (2- (2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)_N，N- 二甲基-六氫并環(huán)戊二烯 批咯-2-酰胺三氟乙酸鹽
TFA HN
O0NC
__H
N
O^N鹽浴冷卻至_5°C 0°C之間，依次加入三乙胺(1. 66g，14. 45mmol)和甲基磺酰氯(2. 2g， 21. 74mmol)，攪拌0. 5小時(shí)后自然升至室溫，在室溫下反應(yīng)2小時(shí)，減壓濃縮反應(yīng)液，加 入20mL水，用乙酸乙酯(50mLX6)萃取，合并有機(jī)相，用50mL飽和氯化鈉溶液洗滌，硫 酸鎂干燥有機(jī)相，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得的殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物 順-2- 二甲基氨甲?；?八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-甲磺酸酯IOb (1. 94g，白色固體)，產(chǎn)率 83%。MS(m/z) (ESI) :277(M+1)第三步反-5- (1，3- 二氧代-1，3- 二氫-異吲哚_2_基)-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-羧酸二 甲基酰胺IOc的制備在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下，在干燥的單口瓶中將順-2- 二甲基氨甲?；?八氫并環(huán)戊二 烯吡咯-5-甲磺酸酯IOb (lg，3. 6mmol)攪拌下溶解于20mLN，N-二甲基甲酰胺中，加入鄰 苯二甲酰亞胺鉀鹽(993mg，5. 4mmol)，升溫到70°C，反應(yīng)3小時(shí)，減壓濃縮N，N-二甲基甲 酰胺，加入20mL水，用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，合并有機(jī)相，用50mL飽和氯化鈉溶液洗 滌，硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，得到標(biāo)題產(chǎn)物反_5-(1，3- 二氧代-1，3- 二氫-異吲 哚-2-基)-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-羧酸二甲基酰胺IOc (1. 06g,白色固體)，產(chǎn)率90%，產(chǎn) 品直接用于下一步反應(yīng)。MS (m/z) (ESI) :328(M+1)。第四步反-5-氨基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸N，N- 二甲酰胺IOd的制備在單口瓶中將反-5-(l，3-二氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)_六氫并環(huán)戊 二烯吡咯-羧酸二甲基酰胺10c(lg，3.06mmOl)攪拌下溶解于20mL 95%乙醇中，加入胼 (490mg, 15. 3mmol)，加熱回流反應(yīng)8小時(shí)，冷卻到室溫，抽濾，濾液減壓濃縮，得到白色的固 體，加入25mL甲醇，抽濾，濾液減壓濃縮，用堿性氧化鋁柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo) 題產(chǎn)物反-5-氨基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸N，N- 二甲酰胺IOd (290mg,無色油狀 物)，產(chǎn)率48%。MS (m/z) (ESI) 198 (M+1)。第五步反-5- (2- (2-氰基吡咯-1-基)_2_氧代乙氨基)_N，N- 二甲基-六氫并環(huán)戊二烯 吡咯-2-酰胺IOe的制備在干燥的單口燒瓶中加入反-1- (2-氯-乙基)-吡咯-2-氰基(334mg，1. 94mmol)， 加入20mL反-5-氨基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸N，N- 二甲酰胺IOd (290mg, 1. 46mmol) 的二氯甲烷溶液，加熱回流48小時(shí)，減壓濃縮反應(yīng)液，用硅膠柱色譜法純化所得到的殘余 物，得到反-5- (2- (2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N，N- 二甲基-六氫并環(huán)戊二烯 吡咯-2-酰胺10e，直接用于下一步反應(yīng)。第六步 反-5- (2- (2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)_N，N- 二甲基-六氫并環(huán)戊二烯 吡咯-2-酰胺三氟乙酸鹽10的制備 將上一步得到的反-5- (2- (2-氰基吡咯-1 -基)-2-氧代乙氨基)-N，N- 二甲
33基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-酰胺IOe攪拌下溶解于IOmL 二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸 攪拌0. 5小時(shí)，得到反-5- (2- (2-氰基吡咯-1-基)-2-氧代乙氨基)-N, N- 二甲基-六氫 并環(huán)戊二烯吡咯-2-酰胺三氟乙酸鹽10 (201mg,白色固體)。MS (m/z) (ESI) :334(M+1)。1H NMR (CDCl3,400ΜΗζ) δ 4. 65 (m, 1Η)，3. 93 (d, 1Η, J = 15. 2Ηζ)，3. 74 (d, 1Η, J = 15. 2Ηζ)，3. 69-3. 19 (m, 7Η)，2. 77 (s,6H)，2. 18-1. 96 (m, 10H)。實(shí)施例115- [2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)_2_氧代-乙胺基]_5_甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸二甲基酰胺對甲苯磺酸鹽 第一步5-亞甲基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將叔丁醇鉀(7. 17g，0. 064mol)和甲基三苯基磷碘(25. 8g， 0. 064mol)攪拌下溶解于150mL甲苯中，加熱回流3小時(shí)，冷卻至室溫，加入30mL的N， N- 二甲基-5-氧代-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸酯Ig (5. Og, 0. 0255mol)甲苯溶液，30 分鐘后，薄層色譜跟蹤反應(yīng)，原料消失，加入30mL水和30mL飽和氯化鈉溶液，用乙酸乙酯 (200mLX4)萃取，合并有機(jī)相，干燥過夜。抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化，得到 標(biāo)題產(chǎn)物5-亞甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺1 Ia (4. Og,淺黃色油狀透明 液體)，收率80%0 第二步5-異氰基-5-甲基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將5-亞甲基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺 lla(l. 6g，8. 23mmol)攪拌下溶解于30mL 二氯甲烷中，再依次加入三甲基硅氰(4. 08g, 41. 2mmol)和高氯酸銀(5. 12g，24. 7mmol)，室溫下攪拌過夜后，用飽和碳酸氫鈉溶液處理 部分反應(yīng)液，薄層色譜跟蹤反應(yīng)，仍有大部分的原料剩余，冰浴下，加入20mL飽和碳酸氫鈉 溶液，反應(yīng)放熱，10分鐘后，過濾，除去固體，分液后，用乙酸乙酯(50mLX4)萃取，合并有 機(jī)相，用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化得到標(biāo)題產(chǎn)物5-異氰 基-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺1 Ib (0. 33g，淡黃色油狀物)，收率18. 1%。GC-MS 221. I(M+)。1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 3. 31 (m，4H)，2. 97 (m，2H)，2. 84 (s，6H)，2. 32 (m，2H)， 1. 52(s，3H)，1. 46 (m, 2H)。第三步5-氨基-5-甲基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備在冰浴下，將0. 38mL的6N的鹽酸加入5_異氰基_5_甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸二甲基酰胺llb(0. 388g，1.75mm0l)的15mL乙醇溶液中，撤掉冰浴，在室溫下 反應(yīng)1. 5小時(shí)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)，原料消失，加入20mL飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應(yīng)，用二 氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有機(jī)相，蒸干溶劑，用硅膠柱色譜法純化得到標(biāo)題產(chǎn)物5-氨 基-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺Ilc (0. 28g，黃色油狀物)，收率 75. 7%。MS m/z (ESI) 212. 2 (M+1)。第四步5- [2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)_2_氧代-乙胺基]_5_甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備將5-氨基-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺llc(200mg， 0. 92mmol)攪拌下溶解于8mL的N，N-二甲基甲酰胺中，加入1_(2-氯-乙酰基)-吡咯 烷-2-氰基(175mg，1. 02mmol)，室溫下反應(yīng)過夜后，在40 50°C水浴中，減壓除去N，N- 二 甲基甲酰胺，用硅膠柱色譜法純化，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-[2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2_氧 代_乙胺基]-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺lld(135mg，無色油狀 液體)，收率42. 3%?；厥?-氨基-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺 llc(130mg)。MS m/z (ESI) :348· 2 (M+1)。第五步5- [2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)_2_氧代-乙胺基]_5_甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸二甲基酰胺對甲苯磺酸鹽的制備在冰浴下，將5- [2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)_2_氧代-乙胺基]_5_甲基-六氫 并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺lld(20mg，0. 057mmol)和一水合對甲苯磺酸(12mg，
0.063mmol)攪拌下溶解于2mL的二氯甲烷中，攪拌10分鐘后，撤掉冰浴，蒸干反應(yīng)液中溶 劑，得到油狀物，加入5mL乙酸乙酯，劇烈攪拌，有白色固體析出，抽濾，得到的白色固體為 標(biāo)題產(chǎn)物5- [2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯 吡咯-2-羧酸二甲基酰胺對甲苯磺酸鹽11 (26mg，白色固體)，收率86. 8%。MS m/z (ESI) 348. 2 (M+1)。1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7. 68 (d，2H)，7. 17 (d，2H)，3. 72 (m，1H)，3. 68 (m，1H)， 3. 58 (m, 1H)，3. 30 (m, 4H)，2. 98 (s, 2H)，2. 81 (s，6H)，2. 55 (m, 2H)，2. 22 (m, 4H)，2. 05 (m, 2H)，
1.62 (m, 2H)，1. 56(s，3H)。實(shí)施例12 5- [2- (2-氰基_吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]_5_甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡
35 第一步5-氰基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備在冰浴下，將N，N- 二甲基-5-氧代-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸酯Ig (12. 9g， 0. 066mol)和對甲苯磺酰甲基異腈(14. 2g，0. 0727mol)攪拌下溶解于240mL乙二醇二甲醚 中，滴加叔丁醇鉀(14.8g，0. 132mol)的叔丁醇溶液，滴畢，撤掉冰浴，室溫下反應(yīng)過夜，薄 層色譜跟蹤，反應(yīng)完全，加入IOOmL水，50mL飽和氯化鈉溶液，用乙酸乙酯(200mLX3)萃取， 合并有機(jī)相，用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱層析法純化，得到標(biāo)題產(chǎn)物 5-氰基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12a (7. Og,淺黃色油狀液)，收率51 %。MS m/z (ESI) 208. 1 (M+1)。1H NMR (DMSO-D6, 400ΜΗζ) δ 3. 5-3. 0 (m, 4H)，2. 75 (s,6H)，2. 6 (m, 1H)，2. 1-1. 5 (m, 6H)。第二步5-氰基-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將5-氰基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12a (4. 2g， 20. 2mmol)和碘甲烷(11.5g，80. 8mmol)攪拌下溶解于IOOmL干燥的四氫呋喃，在室溫下， 滴加六甲基二硅基胺基鋰(80. 8mL，80. 8mmol)，室溫下反應(yīng)2小時(shí)，MS檢測反應(yīng)結(jié)束，加入 IOOmL水，用乙酸乙酯(200mLX3)萃取，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，得到油狀 物，薄層色譜顯示為兩個(gè)較近的點(diǎn)，用硅膠柱色譜法純化，下面的點(diǎn)為5-氰基-5-甲基-六 氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12b(2.411 g，淺黃色油狀物)。MS m/z (ESI) :222. 2(M+1)。
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 3. 44 (m，2H)，3. 3 (m，2H)，2. 85 (s，6H)，2. 77 (m，2H)， 2. 06 (m, 2H)，2. 00 (m, 2H)，1. 36 (s, 3H)。第三步2- 二甲基氨甲?；?5-甲基_八氫_并環(huán)戊二烯吡咯-5-羧酸的制備將5-氰基-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12b (6. 99g， 31. 6mmol)攪拌下溶解于90mL的36%鹽酸中，油浴50°C下攪拌48小時(shí)，薄層色譜跟蹤反 應(yīng)，原料消失，反應(yīng)結(jié)束，加入150mL水，冰浴下用碳酸鉀固體中和反應(yīng)液，調(diào)節(jié)pH為6左 右，用乙酸乙酯(150mLX3)萃取，再用二氯甲烷(150mLX3)萃取，合并有機(jī)相，用無水硫酸 鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，得到標(biāo)題產(chǎn)物2- 二甲基氨甲?；?5-甲基-八氫-并環(huán)戊二 烯吡咯-5-羧酸12c (7. Og,黃色液體)，收率92 %，直接用于下一步反應(yīng)。MS m/z (ESI) 241. 2 (M+1)。第四步5-氨基-5-甲基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備在冰浴下，將2-二甲基氨甲?；?5-甲基-八氫-并環(huán)戊二烯吡咯-5-羧 酸12c (1. Og, 4. 2mmol)攪拌下溶解于25mL丙酮中，在_5 °C下，滴加三乙胺(463. 5mg, 4. 58mmol)和氯甲酸乙酯(497mg，4. 58mmol)的IOmL丙酮溶液，在_5°C下，反應(yīng)15分鐘，加 入疊氮化鈉(546mg，8. 4mmol)的IOmL水溶液，在_5°C繼續(xù)反應(yīng)30分鐘，加入25mL水淬滅反 應(yīng)，用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃濾液，得到一粗產(chǎn)品-5-(疊 氮基羰基)-N，N，5-三甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-氨甲酰12d (700mg,黃色油狀物)。第五至第六步 將此黃色油狀物5-(疊氮基羰基)-N，N，5-三甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯_2_氨 甲酰12d(700mg)加入到20mL甲苯中回流2小時(shí)，蒸干甲苯，得到產(chǎn)品(3aS，5r，6aR)-5-異 氰酰-N，N，5-三甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯_2 (IH)-氨甲酰12e，冰浴下滴加SmL的8N 鹽酸，攪拌30分鐘，薄層色譜跟蹤反應(yīng)原料消失，在冰浴下，用3N氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH > 12， 用乙酸乙酯(15mLX3)萃取，合并有機(jī)相，用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠 柱色譜法純化得到標(biāo)題產(chǎn)物5-氨基-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺 12f(500mg,淺黃色油狀液體)。MS m/z (ESI) 212. 2 (M+1)。1H 匪R (DMSO-D6,400MHz) δ 3. 5-3. 0 (m，4H)，2. 72 (s，6H)，1. 7-1. 3 (m，6H)，1. 04 (s，
3H)。第七步5- [2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)_2_氧代-乙胺基]_5_甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備將5-氨基-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12f (332mg， 1. 57mmol)攪拌下溶解于的IOmL的N，N- 二甲基甲酰胺/CH2Cl2 (1 1)混合溶劑中，加入 1- (2-氯-乙?；?-吡咯烷-2-氰基(217mg，1. 26mmol)，室溫下反應(yīng)過夜，抽干溶劑，用硅 膠柱色譜法純化，得到標(biāo)題產(chǎn)物5- [2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲 基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12g (240mg,無色油狀物)，收率55 %。MS m/z (ESI) 348. 2 (M+1)。
第八步5- [2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)_2_氧代-乙胺基]_5_甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸二甲基酰胺對甲苯磺酸鹽的制備將5-[2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]_5_甲基-六氫并環(huán)戊二 烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12g(150mg，0. 43mmol)和一水合對甲苯磺酸(82mg，0. 43mmol) 攪拌下溶解于4mL的二氯甲烷中，攪拌10分鐘后，蒸干反應(yīng)液中溶劑，得到標(biāo)題產(chǎn)物 5- [2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧 酸二甲基酰胺對甲苯磺酸鹽12 (220mg,淡黃色固體)，收率95. 3%。MS m/z (ESI) :348. 2(M+1)。1H NMR (DMSO-D6, 400MHz) δ 4. 82 (m，1H)，3. 97 (s，2H)，3. 79 (m，2H)，3. 49 (m，2H)， 3. 21 (m, 4H)，2. 75 (s,6H)，2. 62 (m, 2H)，2. 19 (m, 2H)，1. 92-1. 61 (m, 3H)，2. 06 (m, 3H)，1. 2 (s，
3H)。實(shí)施例135- (2- (-2-氰基-4-氟吡咯烷基)_2_氧代乙基氨基)-N，N，5_三甲基-六氫 并環(huán)戊二烯吡咯-2-氨甲酰酒石酸鹽 第一步(2S，4R) (叔丁氧羰基)~4~羥基吡咯烷_2_羧酸的制備將羥脯氨酸13a(60g,0. 458mol)加入到750mL四氫呋喃/水(2 1)混合溶劑中， 加入252mL 10%的氫氧化鈉溶液，加入750mL 二碳酸二叔丁酯(136g，0. 624mol)的四氫呋 喃/水(2 1)溶液，室溫下反應(yīng)過夜，加入500mL乙酸乙酯，分液，有機(jī)層丟棄，水相用濃 鹽酸調(diào)節(jié)PH為2，用1. 5L乙酸乙酯萃取，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液 減壓濃縮，得到標(biāo)題產(chǎn)物(2S，4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-羥基吡咯烷-2-羧酸13b (86. 4g，無 色油狀物)，收率80%。第二步
(2S，4R)-叔丁基2-氨甲酰_4_羥基吡咯烷羧酸酯的制備氬氣氛下，將(2S，4R)-1_(叔丁氧羰基)-4_羥基吡咯烷-2-羧酸13b(86.4g， 0. 374mol)攪拌下溶解于1. 2L四氫呋喃中，加入三乙胺(41g，0. 411mol)，冷卻至-15°C，加 入氯甲酸乙酯(43. 84g，0. 411mol)，攪拌10分鐘后，加入236. 8mL氨水，在2小時(shí)內(nèi)慢慢升 溫至5°C，再加入32g氯化銨，攪拌30分鐘后停止，分液，有機(jī)相用無水硫酸干燥，水相用乙 酸乙酯(100mLX2)萃取，合并有機(jī)相，蒸干溶劑，真空抽干溶劑，得到標(biāo)題產(chǎn)物(2S，4R)_叔 丁基2-氨甲酰-4-羥基吡咯烷-1-羧酸酯13c (74g，白色固體)，收率86%。第三步(2S，4R)-叔丁基2-氰基_4_羥基吡咯烷羧酸酯的制備氬氣氛下，將(2S，4R)_叔丁基2-氨甲酰_4_羥基吡咯烷羧酸酯 13c (74g，0. 3217mol)攪拌下溶解于740mL吡啶中，冷卻至-20°C，滴加三氟乙酸酐 (169g，. 0. 804mol)，滴畢升至室溫反應(yīng)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，加入水淬滅反應(yīng)， 加入0. 8L乙酸乙酯，攪拌，分液，有機(jī)相用500mL飽和氯化鈉溶液洗滌，再用400mL濃鹽酸 中和吡啶至微酸性，再用300mL 2M氫氧化鈉溶液洗滌，用500mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無 水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，得到標(biāo)題產(chǎn)物(2S，4R)-叔丁基2-氰基-4-羥基吡咯 烷-1-羧酸酯13d (49. 7g，黃褐色油狀物)，收率73%。第四步(2S，4S)-叔丁基2-氰基_4_氟吡咯烷羧酸酯的制備氬氣氛下，將(2S，4R)_叔丁基2-氰基-4-羥基吡咯烷-1-羧酸酯13d(49.7g， 0. 2344mol)攪拌下溶解于1130mL 二氯乙烷中，冷卻至_30°C，加入三氟化二乙氨基硫 (56. Ig, 0. 3516mol)，反應(yīng)45分鐘后升至_5°C，自然升至室溫，反應(yīng)過夜，薄層色譜跟蹤反 應(yīng)，原料消失，緩慢加入飽和碳酸氫鈉溶液，劇烈冒泡，冷卻，使溫度控制在20°C以下，直到 反應(yīng)液PH大于7，加入冰水，加入500mL 二氯甲烷，分液，依次用500mL飽和硫酸氫鈉溶液 和500mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，濃縮過程中溫度低 于38°C，得到標(biāo)題產(chǎn)物(2S，4S)-叔丁基2-氰基-4-氟吡咯烷羧酸酯13e (50g,棕黃色 固體)，產(chǎn)率100%。第五步(2S，4S) -4-氟_2_氰基吡咯烷的制備氬氣氛下，將(25，45)-叔丁基2-氰基-4-氟吡咯烷-1-羧酸酯136(^，4.6讓01) 攪拌下溶解于2mL乙酸乙酯中，冷卻至15°C，加入2. 5mL 3M氯化氫的1，4-二氧六環(huán)溶液， 室溫下攪拌2小時(shí)，在25°C以下反應(yīng)5小時(shí)，薄層色譜有原料，把渾濁的反應(yīng)液過濾，母液 再在室溫下攪拌2小時(shí)，又有白色固體析出，過濾，母液繼續(xù)攪拌2小時(shí)，過濾，合并過濾出 來的白色固體，得到標(biāo)題產(chǎn)物(2S，4S) -4-氟-2-氰基吡咯烷13f (15. 6g，白色固體)，收率: 76. 6%。第六步(2S，4S)-1-(2-氯乙?；?_4_氟_2_氰基吡咯烷的制備氬氣氛下，將氯代乙酰氯(11. 13g,98. 5mmol)攪拌下溶解于120mL 二氯甲烷中， 冷卻至0°C，將(2S，4S) -4"氟-2-氰基吡咯烷13f (11. 4g，75. 7mmol)攪拌下溶解于400mL 二氯甲烷中，加入三乙胺(16. Ig, 158. 97mmol)，在30分鐘內(nèi)將此溶液滴加到氯代乙酰氯的二氯甲烷溶液中，在0°C反應(yīng)2小時(shí)，加入200mL水，150mL 二氯甲烷，萃取分液，有機(jī)相用 少量飽和硫酸氫鈉溶液洗滌至中性，再依次用300mL水和300mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無 水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物(2S， 4S)-1-(2-氯乙酰基)-4-氟-2-氰基吡咯烷13g (8g，白色晶體)，收率60 %。參考文獻(xiàn)W02003002553。第七步5-(2-(2-氰基-4-氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基)-N，N，5_三甲基-六氫 并環(huán)戊二烯吡咯-2-氨甲酰的制備氮?dú)夥障拢瑢?-氨基-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺 12(130mg，0. 616mmol)，(2S，4S)-1-(2-氯乙?；?_4_ 氟-2-氰基吡咯烷 13g(117. 4mg， 0. 616mmol)和碳酸鉀(85mg，0. 616mmol)攪拌下溶解于2mL 二氯甲烷與2mL N, N- 二甲基 甲酰胺的混合溶劑中，室溫下反應(yīng)過夜，薄層色譜跟蹤反應(yīng)，原料基本消失，減壓濃縮除掉 反應(yīng)液中的二氯甲烷和N，N- 二甲基甲酰胺，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn) 物5- (2- (2-氰基-4-氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基)-N，N，5-三甲基-六氫并環(huán)戊 二烯吡咯_2 (IH)-氨甲酰13h (0. 13g，無色油狀液體)，收率58%。第八步5-(2-(2-氰基-4-氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基)-N，N，5_三甲基-六氫 并環(huán)戊二烯吡咯_2 (IH)-氨甲酰酒石酸鹽的制備室溫下，將5- (2- (2-氰基-4-氟吡咯烷基)_2_氧代乙基氨基)-N，N，5_三甲 基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2 (IH)-氨甲酰13(0. 16g，0. 44mmol)攪拌下溶解于5mL 二氯甲 烷中，滴加5mL酒石酸(65.6mg，0.44mmol)的丙酮溶液，室溫下反應(yīng)30分鐘，有白色固體析 出，過濾，用丙酮洗滌固體，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-(2-(2_氰基-4-氟吡咯烷-1-基)-2_氧代乙基 氨基)-N, N, 5-三甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-氨甲酰酒石酸鹽13 (0. 18g，白色固體)， 收率:82%0 1H NMR (DMSO-D6, 400ΜΗζ) δ 5. 76 (m, 1H)，5. 46 (m, 1H)，5. 0 (m, 1H)，4. 08-4. 05 (m, 4H)，3. 97 (m, 2H)，3. 69 (m, 2H)，2. 73 (s,6H)，2. 61 (m, 2H)，1. 87 (m, 3H)，1. 57 (m, 3H)，1. 18 (s, 3H)，1. 9(m，2H)。實(shí)施例145-芐基-5- [2- (2-氰基_4_氟-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán) 戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸鹽 第一步5-芐基-5-氰基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備氮?dú)夥障?，?-氰基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12a(4. Og,
19.3mmol)攪拌下溶解于60mL四氫呋喃中，加入芐氯(5.4g，42. 5mmol)，室溫?cái)嚢柘碌渭?六甲基二硅基胺基鋰(42. 5mL，42. 5mmol)，室溫下攪拌4小時(shí)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消 失，加入50mL水淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減 壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-芐基-5-氰基-六氫并環(huán)戊二 烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14a(2. 6g，淡黃色固體)，收率46%。第二步5-芐基-5-甲?；鵢六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備將5-芐基-5-氰基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14a(2. Og， 6. 7mmol)攪拌下溶劑于IOOmL 二氯甲烷中，在O °C下滴加二異丁基氫化鋁(20. 2mL,
20.2mmol)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，加水淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相， 用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物 5-芐基-5-甲?；鵢六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14b(729mg，無色油狀液體)， 收率:36%0第三步5-芐基-2- 二甲基氨基甲酰_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羧酸的制備氮?dú)夥障?，?-芐基-5-甲?；鵢六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺 14b (0. 729g，2. 43mmol)攪拌下溶解于28mL四氫呋喃和14mL水的混合溶劑中，在0°C下， 加入二水合磷酸二氫鈉(1. 14g，7. 29mmol)，亞氯酸鈉(0. 66g，7. 29mmol)和2-甲基-2- 丁 烯(0. 513g，7. 32mmol)，在0°C下反應(yīng)2小時(shí)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，加入乙酸乙 酯萃取反應(yīng)液，合并有機(jī)相，用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化 所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-芐基-2- 二甲基氨基甲酰-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羧酸 14c (0. 76g，無色油狀液體)，收率98 %。MS m/z (ESI) 317. 3 (M+1)。1H NMR(DMSO-D6,400ΜΗζ) δ 7. 5-7. O (m, 5H)，3. 24 (m, 2H)，3. 1 (m, 2H)，2. 76 (s, 2H)， 2. 7 (s，6H)，2. 68 (m, 2H)，1. 99-1. 55 (m, 4H)。
第四步5-芐基-2- 二甲基氨基甲酰_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羰基疊氮化物的制備冰浴下，將5-芐基-2-二甲基氨基甲酰-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羧酸 14c (0. 86g,2. 72mmol)攪拌下溶解于30mL丙酮中，在-5°C下，依次滴加三乙胺(0. 303g, 2. 99mmol)，15mL氯甲酸乙酯(0. 325g，2. 99mmol)的丙酮溶液，攪拌15分鐘，滴加15mL疊氮 化鈉(0. 353g，5. 44mmol)的水溶液，攪拌30分鐘，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，濃縮掉丙 酮，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，得到標(biāo)題產(chǎn)物 5-芐基-2- 二甲基氨基甲酰-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羰基疊氮化物14d (0. 9g，淺黃色油 狀液體)，收率97%。第五步5-芐基-5-異氰?；鵢六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備將5-芐基-2-二甲基氨基甲酰-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羰基疊氮化物 14d(1.0g，2. 72mmol)攪拌下溶解于20mL甲苯中，加熱回流1. 5小時(shí)，濃縮掉甲苯，所得殘余 物為標(biāo)題產(chǎn)物5-芐基-5-異氰?；?六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14e，直接 用于下一步反應(yīng)。第六步5-氨基-5-芐基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備室溫下，將上一步得到的5-芐基-5-異氰酰基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二 甲基酰胺14e中滴加12mL的8N的鹽酸，攪拌30分鐘，用4N的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH為9， 用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化 所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-氨基-5-芐基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺 14f(0. 55g，無色油狀液體)，收率-JOVao第七步5-芐基-5- [2- (2-氰基_4_氟-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán) 戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備將5-氨基-5-芐基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14f(0. Ig, 0. 35mmol)攪拌下溶解于4mL 二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(V/V = 1/1)混合溶劑中， 加入(2S，4S)-l-(2-氯乙?；?-4_氟-2-氰基吡咯烷13g(66. 5mg，0. 35mmol)和碳酸 鉀(49mg，0. 35mmol)，在40°C下反應(yīng)12小時(shí)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，濃縮掉反應(yīng) 液，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-芐基-5-[2-(2-氰基-4-氟-吡咯 烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14g (87mg,白 色固體)，收率56%0MS m/z (ESI) :442· 2 (M+l)。第八步 5-芐基-5- [2- (2-氰基_4_氟-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán) 戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸鹽的制備 將5-芐基-5- [2- (2-氰基_4_氟-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]_六氫并 環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺14g(87mg，0. 197mmol)攪拌下溶解于3mL 二氯甲烷中， 滴加3mL酒石酸的丙酮溶液，室溫下反應(yīng)30分鐘，濃縮掉溶劑，加入乙酸乙酯及丙酮重結(jié)晶，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-芐基-5- [2- (2-氰基-4-氟-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六 氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸鹽14(80mg，白色固體)，收率68%。1H NMR (DMSO-D6, 400ΜΗζ) δ 7. 32-7. 2 (m, 5H)，5. 55 (d, 1H)，5. 41 (d, 1H)，4. 97 (m, 1H)，4. 31 (s，2H)，4. 08 (m, 1H)，4. 0-3. 5 (m, 6H)，2. 81 (s，2H)，2. 78 (s,6H)，2. 5 (m, 2H)， 2. 0(m，3H)，1. 6-1. 3(m，6H)。實(shí)施例155-環(huán)己基甲基-5- [2- (2-氰基-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán) 戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸鹽 第一步5-氰基-5-環(huán)己基甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備將5-氰 基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12a (3. 66g，17. 6mmol)攪拌下溶解于150mL 四氫呋喃中，滴入溴甲基環(huán)己烷(6. 2g，35. 2mmol)，滴加六甲基二硅基胺基鋰(35. 2mL, 35. 2mmol)，室溫下反應(yīng)2小時(shí)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，加入150mL飽和氯化銨溶 液，用乙酸乙酯(60mLX3)萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅 膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-氰基-5-環(huán)己基甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸二甲基酰胺15a(2. 2g，黃色固體)，收率41.5%。 第二步5-環(huán)己基甲基-5-甲酰基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備在O °C下，將5-氰基-5-環(huán)己基甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基 酰胺15a(1.2g，3. 95mmol)攪拌下溶解于30mL 二氯甲烷中，冰浴下滴加二異丁基氫化鋁(11. 8mL，11. 8mmol)，反應(yīng)1小時(shí)后，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，加入IOOmL飽和酒石酸 鉀鈉溶液，攪拌至溶液透明，用乙酸乙酯(100mLX3)萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥， 抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-環(huán)己基甲基-5-甲 ?；鵢六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15b (0. 4g，微黃色油狀物)，收率33 %。MS m/z (ESI) 307. 4 (M+1)。第三步5-環(huán)己基甲基-2- 二甲基氨基甲酰_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羧酸的制備將5-環(huán)己基甲基-5-甲?；鵢六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺 15b (0. 713g，2. 33mmol)攪拌下溶解于60mL四氫呋喃和30mL水的混合溶劑中，在0°C下，加 入二水合磷酸二氫鈉(1. 09g, 6. 99mmol)，亞氯酸鈉(0. 79g，6. 99mmol)和2-甲基-2- 丁烯 (0. 62mL，7. Ommol)，在0°C下反應(yīng)2小時(shí)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，蒸干四氫呋喃，加 入乙酸乙酯萃取水相，合并有機(jī)相，用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜 法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-環(huán)己基甲基-2- 二甲基氨基甲酰_八氫并環(huán)戊二烯吡 咯-5-羧酸15c (0. 75g，黃色固體)，收率100%。MS m/z (ESI) 323. 3 (M+1)。第四步5-環(huán)己基甲基-2- 二甲基氨基甲酰_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羰基疊氮化物的制 備冰浴下，將5-環(huán)己基甲基-2- 二甲基氨基甲酰_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羧酸 15c (0. 75g，2. 33mmol)攪拌下溶解于20mL丙酮中，在0至_5°C下滴加三乙胺(0. 36mL, 2. 56mmol)，加入2mL氯甲酸乙酯(0. 25mL，2. 56mmol)的丙酮溶液，攪拌15分鐘，加入2mL 疊氮化鈉(0. 303g, 4. 66mmol)的水溶液，維持溫度在0至_5°C，繼續(xù)反應(yīng)30分鐘，薄層色 譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，蒸干反應(yīng)液中的丙酮，加入IOmL水，用乙酸乙酯(IOmLX 5)萃取， 合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，所得殘余物為標(biāo)題產(chǎn)物5-環(huán)己基甲 基-2- 二甲基氨基甲酰_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羰基疊氮化物15d (0. 79g，黃色油狀物)， 直接用于下一步反應(yīng)。第五步5-環(huán)己基甲基-5-異氰?；鵢六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備將5-環(huán)己基甲基-2- 二甲基氨基甲酰_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羰基疊氮化物 15d(0. 79g，2. 27mmol)攪拌下溶解于20mL甲苯中，加熱回流1小時(shí)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原 料消失，蒸干反應(yīng)液，得到的殘余物為標(biāo)題產(chǎn)物5-環(huán)己基甲基-5-異氰?；?六氫并環(huán)戊 二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15e (0. 65g，灰色固體)，直接用于下一步反應(yīng)。MS m/z (ESI) 320. 4 (M+1)。第六步5-氨基-5-環(huán)己基甲基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備冰浴下，將IOmL的8N鹽酸滴入5_環(huán)己基甲基_5_異氰酰基-六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸二甲基酰胺15e (0. 65g，2. 03mmol)中，撤掉冰浴，在50°C下反應(yīng)20分鐘，薄層色 譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，加入濃氨水至反應(yīng)液PH大于8，用乙酸乙酯(30mL*5)萃取水相，合 并有機(jī)相，用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-氨基-5-環(huán)己基甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15f (0. 5g，灰 色油狀物)，收率84%0MS m/z (ESI) :294· 3 (M+l)。第七步5-環(huán)己基甲基-5- [2- (2-氰基-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán) 戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備將5-氨基-5-環(huán)己基甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺 15f(0. 115g，0. 39mmol)攪拌下溶解于IOmL 二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(V/V = 1/1) 中，加入1-(2_氯-乙酰基)_吡咯烷-2-氰基(54mg，0. 31mmol)，在50°C下反應(yīng)2小時(shí)， 薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，減壓濃縮除掉反應(yīng)液中的二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰 胺，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-環(huán)己基甲基-5-[2-(2-氰基-吡咯 烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15g (113mg，無 色油狀液體)，收率67%。MS m/z (ESI) 430. 5 (M+1)。第八步5-環(huán)己基甲基-5- [2- (2-氰基-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán) 戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸鹽的制備將5-環(huán)己基甲基-5-[2-(2_氰基-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六 氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺15g(113mg，0. 263mmol)攪拌下溶解于IOmL乙酸 乙酯中，滴加2mL酒石酸的丙酮溶液，攪拌30分鐘后，過濾，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-環(huán)己基甲 基-5- [2- (2-氰基_吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸 二甲基酰胺酒石酸鹽15(40mg，白色固體)。1H NMR (DMSO-D6, 400MHz) δ 5. 2 (m，1H)，4. 77 (s，2H)，4. 18 (m，3H)，4. 02 (m，1H)， 3. 63 (m, 2H)，3. 32 (m, 2H)，2. 73 (s,6H)，2. 58 (m, 2H)，2. 16-1. 87 (m, 9H)，1. 59-1. 19 (m, 8H)。實(shí)施例165-環(huán)戊基-5- [2- (2-氰基-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊二 烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸鹽 第一步5"氰基-5-環(huán)戊基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備氮?dú)夥障拢瑢?-氰基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12a攪拌下溶解 于30mLN，N-二甲基甲酰胺中，加入碘代環(huán)戊烷(5. 4g，27. 5mmol)，滴加六甲基二硅基胺基 鋰(27. 5mL，27. 5mmol)，室溫下攪拌2小時(shí)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，加入IOmL水，濃 縮掉N，N-二甲基甲酰胺，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減 壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-氰基-5-環(huán)戊基-六氫并環(huán)戊 二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16a (2. 6g，淺黃色固體)，收率42%。MS m/z (ESI) 276. 2 (M+1)。1H NMR (DMSO-D6,400MHz) δ 3. 35-3. O (m，4Η)，2. 24(s，6H)，1. 34-2. 5 (m，15H)。第二步5-環(huán)戊基-5-甲酰基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備在O °C下，將5-氰基-5-環(huán)戊基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺 16a(0. 817g，2. 97mmol)攪拌下溶解于40mL 二氯甲烷中，冰浴下滴加二異丁基氫化鋁 (8. 9mL，8. 9mmol)，反應(yīng)45分鐘后，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，蒸干二氯甲烷，加入 IOOmL飽和酒石酸鉀鈉溶液，攪拌至溶液透明，用乙酸乙酯(100mLX4)萃取，合并有機(jī)相， 無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物 5-環(huán)戊基-5-甲?；?六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16b (0. 266g，淡黃色油狀 物)，收率32%。MS m/z (ESI) 279. 3 (M+1)。第三步
5-環(huán)戊基-2- 二甲基氨基甲酰-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羧酸的制備將5-環(huán)戊基-5-甲?；鵢六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16b (0. 266g，
0.955mmol)攪拌下溶解于20mL四氫呋喃和IOmL水的混合溶劑中，在0°C下，加入二水合磷 酸二氫鈉(0. 448g，2. 87mmol)，亞氯酸鈉(0. 26g，2. 87mmol)和 2-甲基-2- 丁烯(0. 24mL， 2. 88mmol)，在0°C下反應(yīng)2小時(shí)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，蒸干四氫呋喃，加入乙酸 乙酯萃取水相，合并有機(jī)相，用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化 所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-環(huán)戊基-2- 二甲基氨基甲酰_八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羧酸 16c (0. 28g，黃色固體)，收率99. 6%0MS m/z (ESI) :295· 5 (M+l)。第四步5-環(huán)戊基-2- 二甲基氨基甲酰-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羰基疊氮化物的制備冰浴下，將5-環(huán)戊基-2-二甲基氨基甲酰-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羧酸 16c (0. 28g,6. 95mmol)攪拌下溶解于20mL丙酮中，在0至_5°C下滴加三乙胺(0. 15mL，
1.05mmol)，2mL氯甲酸乙酯(0. ImL, 1. 05mmol)的丙酮溶液，攪拌15分鐘后，加入疊氮化鈉 (0. 124g，1. 9mmol)的水溶液，在反應(yīng)30分鐘，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，蒸干丙酮，加 入IOmL水，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，得到標(biāo)題 產(chǎn)物5-環(huán)戊基-2- 二甲基氨基甲酰-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羰基疊氮化物16d (0. 287g， 黃色油狀物)，收率95%，直接用于下一步反應(yīng)。第五步5-環(huán)戊基-5-異氰酰基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備將5-環(huán)戊基-2-二甲基氨基甲酰-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羰基疊氮化物 16d(0. 287g，0. 9mmol)攪拌下溶解于IOmL甲苯中，加熱回流1小時(shí)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原 料消失，蒸干溶劑，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-環(huán)戊基-5-異氰?；?六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸 二甲基酰胺16e，直接用于下一步反應(yīng)。MS m/z (ESI) 292. 3 (M+1)。第六步5-氨基-5-環(huán)戊基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備冰浴下，向上一步得到的5-環(huán)戊基-5-異氰?；鵢六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧 酸二甲基酰胺16e中滴加IOmL 8N的鹽酸，撤掉冰浴，在50°C下反應(yīng)15分鐘，薄層色譜跟 蹤反應(yīng)至原料消失，加入濃氨水調(diào)節(jié)反應(yīng)液PH大于8，用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用無 水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-氨 基-5-環(huán)戊基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16f (0. 18g，黃色油狀液體)，收 率81· 8%。MS m/z (ESI) :266. 2(M+1)。第七步5-環(huán)戊基-5- [2- (2-氰基-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊二 烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備氮?dú)夥障?，?-氨基-5-環(huán)戊基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺 16f(0. 108g，0. 407mmol)和 1_ (2-氯-乙?；?-吡咯烷-2-氰基(70mg，0. 407mmol)攪拌下溶解于3mL的N，N-二甲基甲酰胺，加入碳酸鉀(57mg，0.407mmol)，油浴80°C下反應(yīng)過夜， 薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，濃縮反應(yīng)液，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn) 物5-環(huán)戊基-5- [2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸二甲基酰胺16g(100mg，無色油狀液體)，收率61.3%。MS m/z (ESI) 402. 3 (M+1)。第八步5-環(huán)戊基-5- [2- (2-氰基-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊二 烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸鹽的制備將5-環(huán)戊基-5- [2- (2-氰基-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán) 戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺16g(102mg，0. 254mmol)攪拌下溶解于2mL乙酸乙酯中，加 入3mL酒石酸的丙酮溶液，攪拌30分鐘，有白色固體析出，加入少量正己烷，繼續(xù)攪拌，過 濾，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-環(huán)戊基-5- [2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氫 并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸鹽16(88mg，白色固體)，收率65%。實(shí)施例175-芐基-5- [2- (2-氰基_吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]_六氫并環(huán)戊二烯 吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸鹽 5-芐基-5- [2- (2-氰基_吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]_六氫并環(huán)戊二烯 吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備氮?dú)夥障?，?-氨基-5-芐基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺 14f(0. Ig,0. 35mmol)、l-(2-氯-乙?；?_ 吡咯烷 _2_ 氰基(120. 4mg，0. 7mmol)和碳酸 鉀(49mg，0. 35mmol)攪拌下溶解于3mL的N，N-二甲基甲酰胺，油浴80°C下反應(yīng)過夜，薄 層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，濃縮反應(yīng)液，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物 5-芐基-5- [2- (2-氰基_吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧 酸二甲基酰胺17a(56mg，無色油狀液體)，收率40%。MS m/z (ESI) 424. 3 (M+1)。
第二步5-芐基-5- [2- (2-氰基_吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]_六氫并環(huán)戊二烯 吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸鹽的制備將5-芐基-5- [2- (2-氰基-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊 二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺17a(56mg，0. 132mmol)攪拌下溶解于ImL乙酸乙酯中，加入 ImL酒石酸的丙酮溶液，攪拌30分鐘，有白色固體析出，加入少量正己烷，繼續(xù)攪拌，過濾， 得到標(biāo)題產(chǎn)物5-芐基-5-[2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán) 戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸鹽17(50mg，白色固體)，收率67%。1H NMR (DMSO-D6, 400MHz) δ 7. 32-7. 19(m，5H) , 4. 78 (m, 1Η) , 4. 23(s，2H)， 3. 8-3. 0 (m, 8Η)，2. 75 (s,2H)，2. 73 (s, 6H)，2. 18 (m, 2H)，2. 16 (m, 2H)，1. 87 (m, 3H)，1. 35 (m, 3H)。實(shí)施例185- [2- (2-氰基-4-氟-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]_5_甲基-六氫并環(huán) 戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺對甲苯磺酸鹽 第一步5- [2- (2-氰基-4-氟-吡咯烷基)_2_氧代-乙胺基]_5_甲基-六氫并環(huán)戊 二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備氮?dú)夥障?，?-氨基-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺 llc(l. 3g，7. 58mmol)、(2S，4S)-1-(2-氯乙?；?_4_ 氟-2-氰基吡咯烷 13g(1.74g， 9. lmmol)、碳酸鉀(1.26g，9. Immo 1)及30mL的N，N_ 二甲基甲酰胺和18mL 二氯甲烷加入反 應(yīng)瓶中，油浴30°C下反應(yīng)過夜后，薄層色譜跟蹤反應(yīng)，原料消失，減壓除去N，N-二甲基甲酰 胺，用硅膠柱色譜法純化，得到標(biāo)題產(chǎn)物5- [2- (2-氰基-4-氟-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙 基氨基]-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺18a (1. 39g，白色固體)，收率: 50%。MS m/z (ESI) 348. 2 (M+1)。第二步
5- [2- (2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙胺基]_5_甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸二甲基酰胺對甲苯磺酸鹽的制備室溫下，將5-[2-(2_氰基-4-氟-吡咯烷-1-基)-2_氧代-乙基氨基]-5-甲 基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺18a (0. 9g，2. 47mmol)攪拌下溶解于5mL的二 氯甲烷中，再將一水合對甲苯磺酸(469mg，2. 47mmol)攪拌下溶解于3mL丙酮中，將對甲苯 磺酸的丙酮溶液滴加入上述溶液中，滴加過程中有白色沉淀逐漸產(chǎn)生，攪拌30分鐘后，加 ImL正己烷攪拌，過濾，得到的標(biāo)題產(chǎn)物5- [2- (2-氰基-4-氟-吡咯烷基)_2_氧代-乙 基氨基]-5-甲基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺對甲苯磺酸鹽18 (1. 3g，白色 固體)，收率93%0MS m/z (ESI) :366· 1 (M+l)。1H NMR (DMSO-D6, 400ΜΗζ) δ 7. 74 (d, 2Η)，7. 29 (d, 2Η)，5. 57-5. 44 (m, 1Η)，5. 07 (m, 1Η)，4. 19-4. 07 (m, 4H)，3. 49 (m, 2H)，3. 35 (m, 2H)，3. 0 (m, 2H)，2. 9 (s,6H)，2. 6 (m, 2H)， 2. 39 (m, 5H)，1. 57 (m, 2H)，1. 34 (s, 3H)。實(shí)施例195-乙基-5- [2- (2-氰基-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊二烯 吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸鹽 第一步5-氰基-5-乙基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將5-氰基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺12a (3. Og, 14. 5mmol)攪拌下溶解于60mL干燥的四氫呋喃，加入碘乙烷(4. 52g,29mmol)在室溫下，滴 加六甲基二硅基胺基鋰(29mL，29mmol)，室溫下反應(yīng)2小時(shí)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)，原料消失， 加入20mL水，用乙酸乙酯(200mLX3)萃取，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，得到油狀物，薄層色譜顯示為兩個(gè)較近的點(diǎn)，用硅膠柱色譜法純化，得到5-氰基-5-乙基_六氫并 環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19a (1. 64g，淺黃色油狀物)。MS m/z (ESI) 236. 3(M+1)。1H 匪R (DMSO-D6, 400MHz) δ 3. 5-3. 0 (m，4H)，2. 7 (s，6H)，1. 9-1. 2 (m，8H)，1. 19 (m，
3H)。第二步2- 二甲基氨甲酰基-5-乙基_八氫_并環(huán)戊二烯吡咯-5-羧酸的制備將5-氰基-5-乙基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19a(1.54g， 6. 55mmol)攪拌下溶解于60mL 二氯甲烷中，在0 °C下滴加二異丁基氫化鋁(19. 6mL， 19. 6mmol)，滴畢，在0°C下攪拌30分鐘，薄層色譜跟蹤反應(yīng)，原料消失，反應(yīng)結(jié)束，加入 1. 5mL水，用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-乙基-5-甲?；?六氫 并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19b (0. 4g，淡黃色液體)，收率26 %。MS m/z (ESI) 239. 1 (M+1)。第三步5-乙基-2- 二甲基氨基甲酰-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羧酸的制備將5-乙基-5-甲?；鵢六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19b(0.4g，
1.68mmol)攪拌下溶解于18mL四氫呋喃和9mL水的混合溶劑中，加入二水合磷酸二氫鈉 (787mg, 5. 04mmol)，亞氯酸鈉(0. 454g, 5. 04mmol)和 2-甲基-2- 丁烯(354mg，5. 06mmol)， 氮?dú)夥障拢?°C下反應(yīng)2小時(shí)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，加入乙酸乙酯萃取水相，合 并有機(jī)相，用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃縮，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-乙基-2- 二甲基氨基 甲酰-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羧酸19c (0. 426g，淡黃色油狀液體)，收率100 %，直接用 于下一步反應(yīng)。MS m/z (ESI) 255. 2 (M+1)。第四步5-乙基-2- 二甲基氨基甲酰-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羰基疊氮化物的制備冰浴下，將5-乙基-2-二甲基氨基甲酰-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羧酸 19c (0. 56g，2. 2mmol)攪拌下溶解于60mL丙酮中，在_5 °C下滴加三乙胺(0. 245mg,
2.43mmol)，加入2mL氯甲酸乙酯(263mg,2. 43mmol)的丙酮溶液，攪拌15分鐘，加入2mL疊 氮化鈉(0. 286g，4. 4mmol)的水溶液，維持溫度在0至_5°C，繼續(xù)反應(yīng)30分鐘，薄層色譜跟 蹤反應(yīng)至原料消失，加入IOmL水，用乙酸乙酯(10mLX5)萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干 燥，抽濾，濾液減壓濃縮，所得殘余物為標(biāo)題產(chǎn)物5-乙基-2- 二甲基氨基甲酰-八氫并環(huán)戊 二烯吡咯-5-羰基疊氮化物19d (0. 5g，淡黃色油狀物)，直接用于下一步反應(yīng)。第五步5-乙基-5-異氰?；鵢六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備將5-乙基-2-二甲基氨基甲酰-八氫并環(huán)戊二烯吡咯-5-羰基疊氮化物 19d(0. 5g，1. 86mmol)攪拌下溶解于30mL甲苯中，加熱回流2小時(shí)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原 料消失，蒸干反應(yīng)液，得到的殘余物為標(biāo)題產(chǎn)物5-乙基-5-異氰?；?六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸二甲基酰胺19e，直接用于下一步反應(yīng)。第六步
5-氨基-5-乙基_六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備室溫下，將12mL的8N鹽酸滴入上一步得到的5_環(huán)己基甲基_5_異氰?；?六氫 并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19e中，攪拌30分鐘，用8N氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為 9-10，用二氯甲烷(30mLX5)萃取水相，合并有機(jī)相，用無水硫酸鎂干燥，抽濾，濾液減壓濃 縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-氨基-5-乙基-六氫并環(huán)戊二烯吡 咯-2-羧酸二甲基酰胺19f(0. 3g，無色油狀物)，收率71%。MS m/z (ESI) 226. 2 (M+1)。第七步 5-乙基-5- [2- (2-氰基-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊二烯 吡咯-2-羧酸二甲基酰胺的制備氮?dú)夥障?，?-氨基-5-乙基-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺 19f (0. 202g，0. 897mmol)、l-(2-氯-乙?；?_ 吡咯烷 _2_ 氰基(185mg, 1. 07mmol)、碳酸 鉀(148mg，1. 07mmol)及9mL 二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(V/V = 1/1)混合溶劑加入 反應(yīng)瓶中，在60°C下反應(yīng)2小時(shí)，薄層色譜跟蹤反應(yīng)至原料消失，減壓濃縮除掉反應(yīng)液中 的二氯甲烷和N，N- 二甲基甲酰胺，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-乙 基-5- [2- (2-氰基_吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸 二甲基酰胺19g (120mg，淡黃色油狀液體)，收率40 %。MS m/z (ESI) 362. 2 (M+1)。第八步5-乙基-5- [2- (2-氰基-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊二烯 吡咯-2-羧酸二甲基酰胺酒石酸鹽的制備將5-乙基-5- [2- (2-氰基-吡咯烷基)_2_氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊 二烯吡咯-2-羧酸二甲基酰胺19g(120mg，0. 33mmol)攪拌下溶解于ImL乙酸乙酯中，滴 加2mL酒石酸(50mg，0. 33mmol)的丙酮溶液，攪拌30分鐘后，過濾，得到標(biāo)題產(chǎn)物5-乙 基-5- [2- (2-氰基_吡咯烷-1-基)-2-氧代-乙基氨基]-六氫并環(huán)戊二烯吡咯-2-羧酸 二甲基酰胺酒石酸鹽19(160mg，白色固體)，收率94%。MS m/z (EST) :362· 2 (M+1)。1H NMR (DMSO-D6, 400MHz) δ 4. 79 (m，1H)，4. 11 (s，2H)，3. 65 (m，2H)，3. 49 (m，2H)， 3. 22 (m, 4H)，2. 75 (s,6H)，2. 55 (m, 2H)，2. 19 (m, 2H)，2. 09 (m, 2H)，1. 99 (m, 2H)，1· 51 (m, 4H)， 0. 86(t，3H)。測試?yán)飳W(xué)評價(jià)DPP IV/DPP8/DPP9抑制活性的測定下面的方法是用來測定本發(fā)明化合物抑制DPPIV/DPP8/DPP9酶活性的。檢測了本 發(fā)明中化合物抑制純DPPIV/DPP8/DPP9酶活性的抑制能力。每個(gè)化合物的抑制率或半抑制 濃度IC5tl(把酶活性抑制至50%時(shí)所測化合物的濃度)是以固定量的酶混合底物及不同濃 度的待測化合物來測定的。DPP IV抑制活性的測定材料和方法
材料a.白色 96 孔板(BMG)b. Tris緩沖液制備IOOmL 2mM的Tris緩沖液，將0. 0242g Tris溶解于約 90mLdH20 中，用 HCl 和 NaOH 調(diào)節(jié) pH 到 8. 00，最后加 dH20 至 IOOmL0c. DPPIV 酶(CalBiochem Catalog no. 317630)，溶解于 Tris 緩沖液中至 2mM。d. DPPIV-Glo 底物(Promega Catalog no. G8350)，溶解于 dH20 中至 ImM。e. DPPIV-Glo.緩沖液(Promega Catalog no. G8350)f.熒光素檢測試劑(Promega Catalog no. G8350)g. DMSOh. dH20操作按以下操作順序進(jìn)行1.解凍DPPIV-Glo.使用前緩沖并平衡到室溫。2.使用前緩沖凍存的熒光素檢測試劑。3.懸浮DPPIV-Glo.在底物中加入超純水輕微混合均勻后，制成ImM的底物。4.將熒光素檢測試劑放入茶色瓶中，加入DPPIV-Glo.。熒光素檢測試劑應(yīng)在1分 鐘內(nèi)溶解。5.用DMSO溶解所測化合物至最終操作濃度的50倍。6.每個(gè)試管中加入50倍濃度的所測化合物2 μ L，在反面對照合空白對照中加入 2 μ LDMSO07.在每個(gè)試管中加入46μ L Tris緩沖液，在空白對照中加入48 μ L Tris緩沖液。8.在反面對照和測試樣的每個(gè)試管中加入2 μ LDPPIV酶。9.振動(dòng)混合并離心試管。將試管中物質(zhì)全部轉(zhuǎn)移到96-well平板上。10.混合底物和DPPIV-Glo.比例為1 49。振動(dòng)混合至充分混合。使用前在室 溫下靜置30-60分鐘。11.在每個(gè)96-well平板孔中加入50 μ L DPPIV-Glo.和底物的混合液，用封膜封
住平板。12.用平板振蕩器在300-500rpm/30s下慢慢混合96孔中物質(zhì)。在室溫下培養(yǎng)30 分鐘到3小時(shí)。13.記錄發(fā)光。抑制率定義[1-(S-B)/(N_B)]*100%S 樣品B:空白對照N:反面對照DPP 8抑制活性的測定材料和方法材料i.白色 96 孔板(BMG)j. Tris緩沖液制備IOOmL 2mM的Tris緩沖液，將0. 0242g Tris溶解于約90mLdH20 中，用 HCl 和 NaOH 調(diào)節(jié) pH 到 8. 00，最后加 dH20 至 IOOmL0LDPP8 酶(Bioscience Catalog no. 80080)，溶解于 25mM Tris-HCl, ρΗ8. 0, 100mMNaCl,0. 05% Tween-20,50 % glycerol, 3mM DTT 緩沖液中。反應(yīng)使用終濃度為 0.lng/100μ L assay。1. DPP8-GI0 底物(Promega Catalog no. G8350)，溶解于 dH20 中至 ImM。m. DPP8-GI0.緩沖液(Promega Catalog no. G8350)n.熒光素檢測試劑(Promega Catalog no. G8350)0. DMSOp. dH20操作按以下操作順序進(jìn)行14.解凍DPP8-Glo.使用前緩沖并平衡到室溫。15.使用前緩沖凍存的熒光素檢測試劑。16.懸浮DPP8-G10.在底物中加入超純水輕微混合均勻后，制成ImM的底物。17.將熒光素檢測試劑放入茶色瓶中，加入DPPS-Glo.。熒光素檢測試劑應(yīng)在1分 鐘內(nèi)溶解。18.用DMSO溶解所測化合物至最終操作濃度的50倍。19.每個(gè)試管中加入50倍濃度的所測化合物2μ L，在反面對照合空白對照中加入 2 μ LDMSO020.在每個(gè)試管中加入46μ L Tris緩沖液，在空白對照中加入48 μ L Tris緩沖 液。21.在反面對照和測試樣的每個(gè)試管中加入2 μ LDPP8酶。22.振動(dòng)混合并離心試管。將試管中物質(zhì)全部轉(zhuǎn)移到96-well平板上。23.混合底物和DPPS-Glo.比例為1 49。振動(dòng)混合至充分混合。使用前在室溫 下靜置30-60分鐘。24.在每個(gè)96_恥11平板孔中加入5(^1^ DPP8_Glo.和底物的混合液，用封膜封住平板。25.用平板振蕩器在300-500rpm/30s下慢慢混合96孔中物質(zhì)。在室溫下培養(yǎng)30 分鐘到3小時(shí)。26.記錄發(fā)光。抑制率定義[1-(S-B)/(N_B)]*100%S 樣品B:空白對照N:反面對照DPP 9抑制活性的測定材料和方法材料q.白色 96 孔板(BMG)r. Tris緩沖液制備IOOmL 2mM的Tris緩沖液，將0. 0242g Tris溶解于約90mLdH20 中，用 HCl 和 NaOH 調(diào)節(jié) pH 到 8. 00，最后加 dH20 至 IOOmL0S.DPP9 酶(Bioscience Catalog no. 80090)，溶解于 25mM Tris-HCl, ρΗ8. 0, 100mMNaCl,0. 05% Tween-20,50 % glycerol, 3mM DTT 緩沖液中。反應(yīng)使用終濃度為 0.01ng/100 μ L assay。t.u. DPP9-Glo 底物(Promega Catalog no. G8350)，溶解于 dH20 中至 ImM。v. DPP9-Glo.緩沖液(Promega Catalog no. G8350)w.熒光素檢測試劑(Promega Catalog no. G8350)x. DMSOy. dH20操作按以下操作順序進(jìn)行27.解凍DPP9-Glo.使用前緩沖并平衡到室溫。28.使用前緩沖凍存的熒光素檢測試劑。29.懸浮DPP9-Glo.在底物中加入超純水輕微混合均勻后，制成ImM的底物。30.將熒光素檢測試劑放入茶色瓶中，加入DPP9-G10.。熒光素檢測試劑應(yīng)在1分 鐘內(nèi)溶解。 31.用DMSO溶解所測化合物至最終操作濃度的50倍。32.每個(gè)試管中加入50倍濃度的所測化合物2μ L，在反面對照合空白對照中加入 2 μ LDMSO033.在每個(gè)試管中加入46μ L Tris緩沖液，在空白對照中加入48 μ L Tris緩沖 液。34.在反面對照和測試樣的每個(gè)試管中加入2 μ LDPP9酶。35.振動(dòng)混合并離心試管。將試管中物質(zhì)全部轉(zhuǎn)移到96-well平板上。36.混合底物和DPP9-G10.比例為1 49。振動(dòng)混合至充分混合。使用前在室溫 下靜置30-60分鐘。37.在每個(gè)96_恥11平板孔中加入5(^1^ DPP9_Glo.和底物的混合液，用封膜封住平板。38.用平板振蕩器在300-500rpm/30s下慢慢混合96孔中物質(zhì)。在室溫下培養(yǎng)30 分鐘到3小時(shí)。39.記錄發(fā)光。抑制率定義[1-(S-B)/(N_B)]*100%S:樣品B:空白對照N:反面對照表1實(shí)施例IC50數(shù)據(jù) DPPIV抑制劑降血糖作用的初步評價(jià)試驗(yàn)?zāi)康挠^察DPPIV抑制劑類受試化合物實(shí)施例1和實(shí)施例2對正常ICR小鼠口服糖耐量 的影響，初步評價(jià)其在體內(nèi)的降血糖作用。受試動(dòng)物種屬、品系ICR小鼠來源中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號SYXK (滬)2004-2005體重25 30g性別雄性動(dòng)物數(shù)40只飼養(yǎng)條件SPF級動(dòng)物房飼養(yǎng)，溫度22-24°C，濕度45_80%，光照150-300LX, 12 小時(shí)晝夜交替。受試藥物名稱實(shí)施例1化合物批號01顏色、形態(tài)白色粉末純度96.97%提供單位上海恒瑞醫(yī)藥有限公司研發(fā)中心配制方法準(zhǔn)確稱取藥物，加入雙蒸水，分別配制成0. 5、0. 15及0. 05mg/mL的混懸 液。(注該化合物雖供試品接收單上顯示易溶于水，但實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其水溶性較差，低濃度 時(shí)基本能溶解，但濃度為0. 5mg/mL時(shí)仍有肉眼可見的顆粒存在。我們也曾試用CMC配 制該化合物，但效果比雙蒸水配制差。)給藥劑量口服給藥l、3、10mg/kg，容積20mL/kg。名稱實(shí)施例2化合物批號01
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顏色、形態(tài)白色粉末純度99.62%提供單位上海恒瑞醫(yī)藥有限公司研發(fā)中心配制方法準(zhǔn)確稱取藥物，加入雙蒸水溶解，充分混勻，配成1. 5mg/mL的溶液，然 后稀釋成0. 5,0. 15及0. 05mg/mL的透明溶液。給藥劑量口服給藥:l、3、10mg/kg，容積 20mL/kgo試驗(yàn)方法一、藥物對正常ICR小鼠血糖的影響取正常雄性ICR小鼠，按體重隨機(jī)分組，每組6只，分別為空白對照、陽性對照組， 以及不同劑量的給藥組。具體分組如下
試驗(yàn)1 空白對照 給藥組1
給藥組2口服雙蒸水
口服實(shí)施例1化合物lmg/kg 口服實(shí)施例1化合物3mg/kg 口服實(shí)施例1化合物10mg/kg 口服實(shí)施例2化合物lmg/kg 口服實(shí)施例2化合物3mg/kg 口服實(shí)施例2化合物10mg/kg
試驗(yàn)2 空白對照 給藥組1 口服雙蒸水
口服實(shí)施例1化合物lmg/kg 口服實(shí)施例1化合物3mg/kg 口服實(shí)施例1化合物10mg/kg 給藥組2 口服實(shí)施例2化合物lmg/kg 口服實(shí)施例2化合物3mg/kg 口服實(shí)施例2化合物10mg/kg 各組動(dòng)物禁食6小時(shí)后，分別單次給予受試藥物或雙蒸水，于給藥后30分鐘時(shí)口 服葡萄糖2. 5g/kg，于給糖前及給糖后30、60和120分鐘時(shí)取血，測定血清葡萄糖水平。二、血清葡萄糖測定方法采用葡萄糖試劑盒測定血清中的葡萄糖含量，取250 μ 1酶工作液，加入5μ 1血 清，同時(shí)設(shè)立空白管(加入5μ1雙蒸水)及標(biāo)準(zhǔn)管(加入5μ1葡萄糖標(biāo)液)，混勻，37°C水 浴20分鐘，以空白管調(diào)零，OD505nm處比色測定。血清葡萄糖含量BG(mmol/l) = OD /OD^ X 5. 55數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析1、采用均值士SD及Student-t test對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析2、計(jì)算給糖后30分鐘時(shí)血糖下降百分率以及曲線下面積AUC試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)1 雄性ICR小鼠于禁食6小時(shí)后口服雙蒸水、不同劑量的受試物實(shí)施例1、實(shí)施例2，
各組于給藥30分鐘后，做口服糖耐量試驗(yàn)。結(jié)果顯示，空白對照組小鼠口服葡萄糖2. 5g/kg后血清葡萄糖濃度明顯升高，30分鐘時(shí)達(dá)到峰值。實(shí)施例1化合物低、中、高3個(gè)劑量組 小鼠的血糖在30分鐘時(shí)均明顯低于空白對照組，其血糖下降百分率分別達(dá)19. 16%,22. 85 和31. 85%。實(shí)施例2化合物各劑量組小鼠給糖后30分鐘時(shí)血糖明顯低于空白對照組(P < 0.01)，與空白對照組相比，分別下降了 25. 54%,25. 92和26. 93%。試驗(yàn)2 雄性ICR小鼠于禁食6小時(shí)后口服雙蒸水、不同劑量的受試物實(shí)施例1、實(shí)施例2， 各組于給藥30分鐘后，做口服糖耐量試驗(yàn)。結(jié)果顯示，空白對照組小鼠口服葡萄糖2. 5g/ kg后血清葡萄糖濃度明顯升高，30分鐘時(shí)達(dá)到峰值；SHR1039各劑量組小鼠給糖后30分鐘 時(shí)血糖明顯低于空白對照組(P <0.01)，與空白對照組相比，分別下降了 26. 10%,30. 24和 32. 05%。SHR1040低、中、高3個(gè)劑量組小鼠的血糖在30分鐘時(shí)均明顯低于空白對照組，其 血糖下降百分率分別達(dá)24. 51%,26. 96%和27. 75%。結(jié)論本報(bào)告中的兩次試驗(yàn)結(jié)果均顯示，受試化合物實(shí)施例1、實(shí)施例2在正常ICR小鼠 口服糖耐量試驗(yàn)中均具有明顯的降血糖作用。其中，受試化合物實(shí)施例1顯示出較好的量 效關(guān)系。DPPIV抑制類化合物對KKAy小鼠口服糖耐量的影響試驗(yàn)?zāi)康挠^察受試化合物實(shí)施例1和實(shí)施例2對II型糖尿病KKAy小鼠口服糖耐量的影響， 初步評價(jià)其在體內(nèi)的降血糖作用。受試動(dòng)物種屬、品系KKAy小鼠來源中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號SYXK (滬)2004-2005體重40 55g 性別雌性52只；雄性33只飼養(yǎng)條件SPF級動(dòng)物房飼養(yǎng)，溫度22-24°C，濕度45_80%，光照150-300LX, 12 小時(shí)晝夜交替。受試藥物名稱實(shí)施例1化合物和實(shí)施例2化合物配制方法準(zhǔn)確稱取藥物，加入雙蒸水溶解，充分混勻，配成3mg/mL的混懸液，然后稀釋成1、0. 3和0. lmg/mL的透明溶液。給藥劑量口服給藥l、3、10、30mg/kg，容積10mL/kg。試驗(yàn)方法受試物對KKAy小鼠血糖的影響取正常KKAy小鼠，禁食6小時(shí)后按體重和空腹血糖分組，每組5只，分別為空白對 照以及不同劑量的給藥組。具體實(shí)驗(yàn)如下試驗(yàn)1 雄性0704空白對照口服雙蒸水SHR1039組口服實(shí)施例1化合物10mg/kg口服實(shí)施例1化合物30mg/kg
空白對照口服雙蒸水SHR1039組口服實(shí)施例1化合物3mg/kg口服實(shí)施例1化合物10mg/kg試驗(yàn)3:雄性0712空白對照口服雙蒸水SHR1040組口服實(shí)施例2化合物3mg/kg口服實(shí)施例2化合物10mg/kg試驗(yàn)4:雌性0907空白對照口服雙蒸水SHR1040組口服實(shí)施例2化合物3mg/kg口服實(shí)施例2化合物10mg/kg各組動(dòng)物禁食6小時(shí)后，分別單次給予受試化合物或雙蒸水，于給藥后30分鐘時(shí) 口服葡萄糖2. 5g/kg(雌性KKAy小鼠)或1. 5g/kg(雄性KKAy小鼠)，于給糖后O、30、60和 120分鐘時(shí)用血糖儀測定血清葡萄糖含量。數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析3、采用均值士 SD及Student-t test或Anova對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析4、計(jì)算給糖后30分鐘時(shí)血糖下降百分率以及曲線下面積AUC試驗(yàn)結(jié)果四、化合物實(shí)施例1 試驗(yàn)1、2雄性KKAy小鼠于禁食6小時(shí)后口服雙蒸水及不同劑量受試物實(shí)施例1，各組于給 藥30分鐘后，做口服糖耐量試驗(yàn)。結(jié)果顯示，空白對照組小鼠口服葡萄糖1. 5g/kg后血清 葡萄糖濃度明顯升高，30分鐘時(shí)達(dá)到峰值；實(shí)施例1在10和30mg/kg組小鼠給糖后30分 鐘時(shí)血糖比空白對照組有所降低，與空白對照組相比，分別下降了 16. 22%和17. 15%。雌性KKAy小鼠于禁食6小時(shí)后口服雙蒸水及不同劑量受試物實(shí)施例1，各組于給 藥30分鐘后，做口服糖耐量試驗(yàn)。結(jié)果顯示，空白對照組小鼠口服葡萄糖2. 5g/kg后血清 葡萄糖濃度明顯升高，30分鐘時(shí)達(dá)到峰值；實(shí)施例1在3和10mg/kg組小鼠給糖后30分鐘 時(shí)血糖與空白對照組相比明顯降低，其下降率為40. 63%和24. 68%。五、化合物實(shí)施例2 試驗(yàn)3、4雄性KKAy小鼠于禁食6小時(shí)后口服雙蒸水及不同劑量受試物實(shí)施例2，各組于給 藥30分鐘后，做口服糖耐量試驗(yàn)。結(jié)果顯示，空白對照組小鼠口服葡萄糖1. 5g/kg后血清 葡萄糖濃度明顯升高，30分鐘時(shí)達(dá)到峰值；實(shí)施例2在10和30mg/kg組小鼠給糖后30分 鐘時(shí)血糖比空白對照組有所降低，與空白對照組相比，分別下降了 13. 79%和12. 23%。雌性KKAy小鼠于禁食6小時(shí)后口服雙蒸水及不同劑量受試物實(shí)施例2，各組于給 藥30分鐘后，做口服糖耐量試驗(yàn)。結(jié)果顯示，空白對照組小鼠口服葡萄糖2. 5g/kg后血清 葡萄糖濃度明顯升高，30分鐘時(shí)達(dá)到峰值；實(shí)施例2化合物10mg/kg組小鼠給糖后30分鐘 時(shí)血糖較空白對照組有所降低(P = 0. 075,anova)，降幅達(dá)21. 55%，但由于個(gè)體差異較大， 無顯著性差異。結(jié)論
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受試化合物實(shí)施例1和實(shí)施例2在II型糖尿病KKAy小鼠口服糖耐量試驗(yàn)中均具 有一定的降血糖作用。
權(quán)利要求
下式所示化合物FSA00000195667800011.tif
2.一種藥物組合物，其含有治療有效劑量的根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物和藥學(xué)上可 接受的載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物在制備二肽基肽酶抑制劑藥物中的用途。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物在制備二肽基肽酶抑制劑藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及雙環(huán)氮雜烷類衍生物、其制備方法及其在醫(yī)藥上的用途，特別是一種通式(I)所示的新的雙環(huán)氮雜烷類衍生物、其制備方法及含有該衍生物的藥物組合物以及其作為治療劑特別是作為二肽基肽酶抑制劑(DPPIV)的用途，其中通式(I)的各取代基同說明書中的定義相同。
文檔編號A61P3/10GK101914092SQ20101022923
公開日2010年12月15日 申請日期2008年1月23日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月23日
發(fā)明者付建宏, 關(guān)東亮, 呂賀軍, 李利, 楊方龍, 林志剛, 沈光遠(yuǎn), 王林, 趙富強(qiáng), 鄧炳初 申請人:上海恒瑞醫(yī)藥有限公司;江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司