專利名稱：一種治療咳喘病的膠囊劑的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療咳喘病的膠囊劑的檢測方法，屬于對藥品進(jìn)行質(zhì)量控制的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
咳喘是當(dāng)今世界上難以根治的病癥之一，是呼吸系統(tǒng)的多發(fā)病，因?yàn)闅夤軐Υ碳?物過度敏感的反應(yīng)，嚴(yán)重的病人可延續(xù)數(shù)日或數(shù)周發(fā)作，此病具有對人體健康危害大、發(fā)病 率高、病程長等特點(diǎn)，給病人帶來了極大的痛苦和麻煩。經(jīng)典中醫(yī)理論認(rèn)為，哮喘的發(fā)生，為 宿痰內(nèi)伏于肺，復(fù)加外感、飲食、體虛病后等因素，以致痰堵氣道、廢氣上逆所致。近年來，許 多學(xué)者在辨證施治、標(biāo)本兼治的基礎(chǔ)上發(fā)展了臟腑論治、從肺論治、肺腎論治、肺脾論治、肺 肝論治、脾胃論治等不同的治療方法及手段，但是如何能夠快速治愈、根治此病仍是醫(yī)學(xué)界 的難題。本申請人研制開發(fā)了一種治療咳喘病的中藥，對咳喘病有很好的療效，主要用于西 醫(yī)謂之急、慢性支氣管炎、肺氣腫、支氣管哮喘諸病，在中醫(yī)臨床辯證中，凡具有哮、喘證候， 且屬于實(shí)證、熱證者均為該處方的適用范疇。如中醫(yī)“哮證”中之“熱哮證”和“喘證”中之 “痰熱郁肺證”，以及“阻塞性肺氣腫”中屬于“熱證”者。但藥品如果沒有嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)， 得到的產(chǎn)品不能確保其質(zhì)量，結(jié)果必將影響該藥物的臨床療效；所以為提高藥物的治療作 用，確保用藥的安全、有效及產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定，制定一個嚴(yán)格可靠的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)成為保證藥品 質(zhì)量的基本要求。隨著現(xiàn)代儀器分析技術(shù)的發(fā)展，高效液相色譜法、薄層色譜鑒別法等分析 方法在藥品的質(zhì)量控制中得到了越來越廣泛的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種治療咳喘病的膠囊劑的檢測方法。本發(fā)明建立了系 統(tǒng)的、完整的、有效的成分鑒別和含量測定方法，可有效控制該藥品的質(zhì)量，從而確保其臨 床療效。本發(fā)明所述治療咳喘病的膠囊劑是以吉祥草600 650份、黃芩350 400份、浙 貝母350 400份、蛤殼225 275份、毛大丁草400 450份、麻黃350 400份、炙桑白 皮475 525份、炙葶藶子350 400份、天竺黃400 450份、炙僵蠶400 450份和地 龍350 400份為原料藥，加入適量輔料制成的。其制備方法為稱取十一味藥材，加水煎 煮3次，第一次加8倍量水，第二、三次各加6倍量水，每次煎煮1小時，濾過，合并濾液；濾 液濃縮至50°C相對密度為1. 1，加乙醇使含醇量為70%，靜置24小時，吸取上清液，濾過，濾 液回收乙醇，減壓濃縮，80°C以下減壓干燥，得干膏，粉碎過80目篩，加入淀粉25份和微晶 纖維素50份，混勻，顆粒裝入膠囊，即得膠囊劑。(以上份數(shù)均指重量份)本發(fā)明所述的檢測方法包括性狀、鑒別、檢查和含量測定項(xiàng)目；其中鑒別是對制劑 中的黃芩、浙貝母、毛大丁草、麻黃的薄層色譜鑒別；含量測定是對制劑中麻黃堿和黃芩苷 的含量測定。黃芩的鑒別方法是以黃芩對照藥材和黃芩苷對照品、黃芩素對照品、漢黃芩素對照品為對照，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸=10 3 1 2為展開劑的薄層色譜法； 浙貝母的鑒別方法是以貝母素甲、貝母素乙對照品為對照，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液= 17 2 1為展開劑的薄層色譜法；毛大丁草的鑒別方法是以毛大丁草對照藥材為對照， 以氯仿-甲醇=30 10為展開劑的薄層色譜法；麻黃的鑒別方法是以麻黃對照藥材為對 照，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液=20 5 0. 5為展開劑的薄層色譜法。具體的鑒別方法為(1)黃芩的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加乙酸乙酯-甲醇=3 1的混 合溶液30mL，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，取上清液 作為供試品溶液；另取黃芩對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；再取黃芩苷對照品、黃 芩素對照品、漢黃芩素對照品，加甲醇制成每ImL各含lmg、0. 5mg、0. 5mg的對照品溶液； 照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各
L，及對照品溶液2μ 1分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸= 10 3 1 2為展開劑，飽和30分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對 照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯三個相同 的暗色斑點(diǎn)；(2)浙貝母的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加濃氨試液2mL與甲苯20mL，放 置過夜，濾過，取濾液8mL，蒸干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為供試品溶液；另取貝母素 甲、貝母素乙對照品，加三氯甲烷制成每ImL各含2mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥 典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照品溶液各20 μ L，分別 點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液= 17 2 1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品 色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(3)毛大丁草的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加入石油醚溶液30mL，超聲 40分鐘，傾去石油醚液，殘?jiān)?0%乙醇40ml超聲40分鐘，濾過，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶 解，作為供試品溶液；另取毛大丁草對照藥材lg，同法處理，制成對照藥材溶液；照中國藥 典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液15ul、對照藥材溶液5 μ L，分 別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇=30 10為展 開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng) 的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(4)麻黃的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加濃氨試液數(shù)滴，再加三氯甲烷 IOmL,加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL充分振搖，濾過，濾液作為供試品溶 液；另取麻黃對照藥材lg，同法處理，作為對照藥材溶液；照中國藥典2005年版一部附錄 VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10yL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖 維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液=20 5 0.5為展開 劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液；在105°C加熱至斑點(diǎn)清晰；供試品色譜中，在與對照 藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。麻黃堿的含量測定方法是以鹽酸麻黃堿對照品為對照，以乙腈0. 磷酸= 5 95為流動相的高效液相色譜法；黃芩苷的含量測定方法是以黃芩苷對照品為對照，以 甲醇水磷酸=47 53 0.2為流動相的高效液相色譜法。
具體的含量測定方法為(1)麻黃堿含量測定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙 腈0. 磷酸=5 95為流動相；流速為lmL/min ；柱溫25°C ；檢測波長為207nm ；理論 板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)不低于6000 ；對照品溶液的制備精密稱取鹽酸麻黃堿對照品10mg，置于IOOmL量瓶中，用甲醇 溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取lmL，置25mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得 每ImL含鹽酸麻黃堿4 μ g的對照品溶液；供試品溶液的制備取本制劑內(nèi)容物0.2g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加 入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖 勻，濾過；精密量取續(xù)濾液lmL，置中性氧化鋁柱上，用50%甲醇洗脫，收集洗脫液約9mL，置 IOmL量瓶中，加鹽酸1滴，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測 定，即得；本制劑每粒含麻黃以鹽酸麻黃堿CltlH15NO · HCl計(jì)，不得少于1. 29mg ；(2)黃芩苷含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇水 磷酸=47 53 0.2為流動相；流速為lmL/min ；柱溫30°C;檢測波長為207nm ；理論板數(shù) 按黃芩苷峰計(jì)不低于5000 ；對照品溶液的制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的黃芩苷對照品10mg，加甲 醇制成每ImL含黃芩苷50 μ g的對照品溶液；供試品溶液的制備取本制劑內(nèi)容物0. 3g，精密稱定，加70%乙醇40mL，回流3小 時，放冷，濾過，濾液移至IOOmL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V入同 一量瓶中，加70 %乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取lmL，置IOmL量瓶中，加甲醇稀釋至刻 度，搖勻，即得供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測 定，計(jì)算，即得；本制劑每粒含黃芩以黃芩苷C21H18O11計(jì)，不得少于13. Smg0本發(fā)明所述的檢測方法包括性狀其內(nèi)容物為棕褐色粉末，氣微，味微甜或微苦；鑒別(1)黃芩的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加乙酸乙酯_甲醇=3 1 的混合溶液30mL，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，取上 清液作為供試品溶液；另取黃芩對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；再取黃芩苷對照品、 黃芩素對照品、漢黃芩素對照品，加甲醇制成每ImL各含lmg、0. 5mg、0. 5mg的對照品溶液； 照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各
L，及對照品溶液2μ 1分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸= 10 3 1 2為展開劑，飽和30分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對 照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯三個相同 的暗色斑點(diǎn)；
(2)浙貝母的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加濃氨試液2mL與甲苯20mL，放 置過夜，濾過，取濾液8mL，蒸干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為供試品溶液；另取貝母素 甲、貝母素乙對照品，加三氯甲烷制成每ImL各含2mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥 典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照品溶液各20 μ L，分別 點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液= 17 2 1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品 色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
(3)毛大丁草的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加入石油醚溶液30mL，超聲 40分鐘，傾去石油醚液，殘?jiān)?0%乙醇40ml超聲40分鐘，濾過，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶 解，作為供試品溶液；另取毛大丁草對照藥材lg，同法處理，制成對照藥材溶液；照中國藥 典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液15ul、對照藥材溶液5 μ L，分 別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇=30 10為展 開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng) 的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(4)麻黃的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加濃氨試液數(shù)滴，再加三氯甲烷 IOmL,加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL充分振搖，濾過，濾液作為供試品溶 液；另取麻黃對照藥材lg，同法處理，作為對照藥材溶液；照中國藥典2005年版一部附錄 VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10yL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖 維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液=20 5 0.5為展開 齊U，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液；在105°C加熱至斑點(diǎn)清晰；供試品色譜中，在與對照 藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；檢查應(yīng)符合《中國藥典》2005年版一部附錄I L膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定；含量測定(1)麻黃堿含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙 腈0. 磷酸=5 95為流動相；流速為lmL/min ；柱溫25°C ；檢測波長為207nm ；理論 板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)不低于6000 ；對照品溶液的制備精密稱取鹽酸麻黃堿對照品10mg，置于IOOmL量瓶中，用甲醇 溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取lmL，置25mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得 每ImL含鹽酸麻黃堿4 μ g的對照品溶液；供試品溶液的制備取本制劑內(nèi)容物0.2g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加 入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖 勻，濾過；精密量取續(xù)濾液lmL，置中性氧化鋁柱上，用50%甲醇洗脫，收集洗脫液約9mL，置 IOmL量瓶中，加鹽酸1滴，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測 定，即得；本制劑每粒含麻黃以鹽酸麻黃堿CltlH15NO · HCl計(jì)，不得少于1. 29mg ；(2)黃芩苷含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇水 磷酸=47 53 0.2為流動相；流速為lmL/min ；柱溫30°C;檢測波長為207nm ；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)不低于5000 ；對照品溶液的制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的黃芩苷對照品10mg，加甲 醇制成每ImL含黃芩苷50 μ g的對照品溶液；供試品溶液的制備取本制劑內(nèi)容物0. 3g，精密稱定，加70%乙醇40mL，回流3小 時，放冷，濾過，濾液移至IOOmL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V入同 一量瓶中，加70 %乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取lmL，置IOmL量瓶中，加甲醇稀釋至刻 度，搖勻，即得供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測 定，計(jì)算，即得；本制劑每粒含黃芩以黃芩苷C21H18O11計(jì)，不得少于13. Smg0為了確保本發(fā)明檢測方法科學(xué)、合理、可行，申請人進(jìn)行了一系列試驗(yàn)研究和考
察。 (一 )鑒別1、黃芩的薄層色譜鑒別照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，取本制劑內(nèi)容物2g， 按本發(fā)明所述方法制成供試品溶液。另取黃芩對照藥材lg，缺黃芩的陰性制劑，同法制成對 照藥材溶液、陰性對照溶液；再取黃芩苷對照品、黃芩素對照品、漢黃芩素對照品，加甲醇制 成每ImL各含lmg、0. 5mg、0. 5mg的對照品溶液；吸取上述供試品溶液、陰性對照溶液、對照 藥材溶液各5 μ L及對照品溶液2 μ L，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲 醇-甲酸(10 3 1 2)為展開劑，飽和30分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品 色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，在與對照品色譜相應(yīng)的位置 上，顯三個相同的暗色斑點(diǎn)；陰性對照無干擾。故選擇其列入本發(fā)明檢測項(xiàng)目。2、浙貝母薄層色譜鑒別照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)。取本制劑內(nèi)容物 2g，按本發(fā)明所述方法制成供試品溶液。另取貝母素甲、貝母素乙對照品，缺浙貝母的陰性 制劑，同法制成對照品溶液、陰性對照溶液。吸取上述供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶 液各20 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲 醇-濃氨試液(17 2 1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色 譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果Rf值適中，斑點(diǎn)清晰，陰性 對照無干擾。故選擇其列入本發(fā)明檢測項(xiàng)目。3、毛大丁草的薄層色譜鑒別照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)中曾參照文獻(xiàn) “毛大丁草化學(xué)成分研究”，結(jié)果陰性有干擾，后參照“薄層掃描法測定毛大丁草中熊果苷的 含量”，加入甲醇溶液40mL，超聲30分鐘，過濾，回收甲醇至干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，取上清 液作為供試品溶液。另取毛大丁草對照藥材，同法制成對照藥材溶液。吸取上述供試品溶 液、對照藥材溶液各3 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以 乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10 1 1 1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸 乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)清晰。結(jié)果重現(xiàn)性差，樣品斑點(diǎn)不清晰。因此，采用取本制劑 內(nèi)容物2g，加入石油醚溶液30mL，超聲40分鐘，傾去石油醚液，殘?jiān)?0%乙醇40ml超聲40分鐘，過濾，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。另取毛大丁草對照藥材lg，缺 毛大丁草的陰性制劑，同法處理，制成對照藥材溶液、陰性對照溶液。吸取上述供試品溶液 15ul、對照藥材溶液、陰性對照溶液各5μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅 膠G薄層板上，以氯仿-甲醇(30 10)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm) 下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照無 干擾。故選擇其列入本發(fā)明檢測項(xiàng)目。4、麻黃薄層色譜鑒別照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，取本制劑內(nèi)容物2g， 按本發(fā)明所述方法制成供試品溶液。另取麻黃對照藥材，缺麻黃的陰性制劑，同法制成對照 藥材溶液、陰性對照溶液。吸取上述供試品溶液、對照藥材溶液、陰性對照溶液各9 μ L，分 別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液 (20 5 0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液。在105°C加熱至斑點(diǎn)清晰。 供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照無干擾。故 選擇其列入本發(fā)明檢測項(xiàng)目。5、桑白皮的薄層色譜鑒別照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)中曾參照2005 年版《中國藥典》桑白皮TLC的鑒別，結(jié)果陰性有干擾，效果不好。經(jīng)過分析，認(rèn)為黃芩中的 黃酮成分對試驗(yàn)造成干擾，故改變前處理辦法，加95%乙醇90mL回流1小時，過濾，濾液蒸 干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL溶解，取上清液作為供試品溶液。對照藥材同法處理，結(jié)果對照藥 材斑點(diǎn)不清晰，后又采用加水20ml回流30分鐘，過濾，濾液加乙醇使其含醇量為80%，放置 過夜，取上清液揮干，加Iml乙酸乙酯溶解，制成對照藥材溶液。吸取上述供試品溶液、對照 藥材溶液、陰性對照溶液各9μ 1，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，但色譜條件不穩(wěn)定，樣品Rf 變化較大，斑點(diǎn)模糊。故不列入本發(fā)明檢測項(xiàng)目。6、地龍的薄層色譜鑒別實(shí)驗(yàn)中分別參考了《中國藥典》2005年版地龍項(xiàng)下的鑒別方法，薄層掃描法測定地 龍類藥材中琥珀酸的含量，丹黃膠囊的薄層鑒別研究，舒心丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，雙波長薄層 掃描法測定地龍注射液中纈氨酸的含量，小活絡(luò)丸的薄層分析，均因干擾太大而未列入本 發(fā)明檢測項(xiàng)目。7、吉祥草的薄層色譜鑒別實(shí)驗(yàn)中分別參考了《貴州省中藥材、民族藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》以及復(fù)方吉祥草含片質(zhì)量標(biāo) 準(zhǔn)研究等文獻(xiàn)，均因干擾太大未列入本發(fā)明檢測項(xiàng)目。(二)含量測定本制劑以麻黃為君藥，故選擇麻黃中的有效成分鹽酸麻黃堿作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的含測 指標(biāo)，以很好地控制成品質(zhì)量；另外黃芩具有清熱燥濕，瀉火解毒功效，所以配合黃芩中的 有效成分黃芩苷作為本發(fā)明含量測定指標(biāo)成分，可以更好地控制成品質(zhì)量。1、麻黃堿照高效液相色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI D)測定。(1)儀器與試藥儀器=AngilentllOO高效液相色譜儀；ΗΒ-10250型超聲清洗器(250W，40kHz)，江 蘇漢邦科技有限公司；梅特勒_托利多AE電子分析天平(METTLER TOLEDO十萬分之一)。
試劑甲醇為色譜純，乙腈為色譜純，水為重蒸水，磷酸、中性氧化鋁均為分析純。鹽酸麻黃堿對照品購自中國藥品生物制品檢定所(供含量測定用)，批號為 241-200102。樣品本發(fā)明制劑(吉貝咳喘膠囊，批號20041001、20041002、20041003)。(2)對照品溶液的制備精密稱取鹽酸麻黃堿對照品13. 5mg,置于IOOmL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻 度，搖勻，精密量取lmL，置25mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得(每ImL含鹽酸麻 黃堿 5. 4 μ g)。(3)色譜條件的選擇在進(jìn)行鹽酸麻黃堿色譜條件選擇時，參考了《中國藥典》2005年版一部麻黃項(xiàng)下鹽 酸麻黃堿的含量測定色譜條件，進(jìn)行了色譜波長的篩選。根據(jù)實(shí)驗(yàn)確定鹽酸麻黃堿的色譜 條件為=DiamonsilTM(鉆石)C18 5 μ m(250X4. 6mm)；流動相為乙腈_0. 1 %磷酸(5 95)； 流速為lmL/min ；柱溫25°C ；檢測波長為207nm。選擇條件見表6。表6鹽酸麻黃堿色譜條件選擇 (4)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)陰性溶液的制備取缺麻黃的陰性樣品約0. 5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精 密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理(功率16W，頻率50kHz) 45分鐘，放冷，再稱定重量， 用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液lmL，置中性氧化鋁柱(100 200目， 1.5g，內(nèi)徑1cm)上，用50%甲醇洗脫，收集洗脫液約9mL，置IOmL量瓶中，加磷酸1滴，用 50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得?？瞻兹芤旱闹苽淙【呷F形瓶，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理45分 鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液lmL，置中性氧化 鋁柱(100 200目，1.5g，內(nèi)徑Icm)上，用50%甲醇洗脫，收集洗脫液約9mL，置IOmL量瓶 中，加磷酸1滴，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的本制劑內(nèi)容物約0. 5g，精密稱定，置于具 塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理(功率16W，頻率50kHz) 45分鐘，放 冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液lmL，置中性氧化鋁柱 (100 200目，1. 5g，內(nèi)徑1cm)上，用50%甲醇洗脫，收集洗脫液約9mL，置IOmL量瓶中，加 磷酸1滴，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。從圖譜可知，在此色譜條件下，鹽酸麻黃堿峰與其他組分峰完全分離，在與鹽酸麻 黃堿峰相同的保留時間內(nèi)，陰性對照無干擾。樣品理論板數(shù)以鹽酸麻黃堿峰計(jì)為6502，故確定理論板數(shù)以鹽酸麻黃堿計(jì)，應(yīng)不得低于6000。(5)供試品溶液的制備方法選擇A.提取溶劑的選擇取同一批號本制劑的內(nèi)容物約0. 5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，分別精密加入 75%甲醇、甲醇和乙醇各25mL，稱定重量，超聲處理(功率16W，頻率50kHz) 45分鐘，放冷， 再稱定重量，用相應(yīng)的溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。分別精密量取續(xù)濾液lmL，置中性 氧化鋁柱(100 200目，1.5g，內(nèi)徑lcm)上，分別用50%甲醇、50%甲醇和50%乙醇洗脫， 收集洗脫液約9mL，置10mL量瓶中，加磷酸1滴，分別用50%甲醇、50%甲醇和50%乙醇稀 釋至刻度，搖勻，即得，測定樣品中鹽酸麻黃堿的含量。結(jié)果見表7。表7提取溶劑選擇
溶劑75%甲醇 甲醇 乙醇- 結(jié)果顯示用甲醇提取本制劑(吉貝咳喘膠囊)中的鹽酸麻黃堿的量最大。B.提取方法的選擇取同一批號本制劑的內(nèi)容物約0.5g，精密稱定，精密加入甲醇25mL，稱定重量，配 制三份，一份超聲處理45分鐘；另一份回流提取60分鐘；第三份索氏提取60分鐘。三份提 取后放冷，再稱定重量。用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，分別精密量取續(xù)濾液lmL，置中性 氧化鋁柱(100 200目，1.5g，內(nèi)徑lcm)上，分別用50%甲醇洗脫，收集洗脫液約9mL，置 10mL量瓶中，加磷酸1滴，分別用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得，測定樣品中鹽酸麻黃堿 的含量。結(jié)果見表8。表8提取方法選擇
溶劑索氏提取熱回流提取超聲提取鹽酸麻黃堿的含量(mg/g)1. 933. 243. 23結(jié)果顯示索氏提取效果較差，熱回流提取和超聲提取兩種方法無顯著性差異，故 選用操作簡單方便的超聲提取法。C.提取時間的選擇取同一批號本制劑的內(nèi)容物約0. 5g，精密稱定，精密加入甲醇25mL，稱定重量；超 聲處理15分鐘、25分鐘、35分鐘，45分鐘，60分鐘，放冷，稱定重量。用甲醇補(bǔ)足減失重量， 搖勻，濾過，取續(xù)濾液，測定樣品中丹參酮IIA的含量。結(jié)果見表9。表9提取時間選擇 結(jié)果顯示45分鐘與60分鐘鹽酸麻黃堿測定結(jié)果無顯著性差異，故將提取時間定為45分鐘。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)確定供試品溶液制備方法為取裝量差異項(xiàng)下的本制劑內(nèi)容物約 0. 5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加甲醇25mL，稱定重量，超聲處理(功率16W，頻 率50kHz) 45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液 ImL,置中性氧化鋁柱(100 200目，1. 5g，內(nèi)徑1cm)上，分別用50%甲醇洗脫，收集洗脫液 約9mL，移置IOmL量瓶中，加磷酸1滴，分別用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。(6)線性關(guān)系的考察標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取鹽酸麻黃堿對照品13. 5mg，置于IOOmL量瓶中，用甲醇 溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取30mL置150mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻， 作為鹽酸麻黃堿儲備液一。分別精密吸取鹽酸麻黃堿儲備液一各10mL、17mL、24mL、31mL、 38mL置50mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每ImL含鹽酸麻黃堿5. 4 μ g/ mL，9. 18 μ g/mL, 12. 96 μ g/mL, 16. 74 μ g/mL, 20. 52 μ g/mL 的系列對照品溶液，精密吸取上 述溶液20 μ L，分別注入高效液相色譜儀，按(3)項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜圖，以峰面積 為橫坐標(biāo)，對照品的進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表10。表10線性關(guān)系考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果 鹽酸麻黃堿回歸方程為:y= 7X10-4X-3. 8X10-4 (r = 0. 9996)。經(jīng)擬合過原點(diǎn)的方程為:y = 7X10-4x(r = 0. 9994)。將同一樣品的鹽酸麻黃堿峰面積分別代入上述兩方程中，結(jié)果相對偏差為 0. 96%,可認(rèn)為截距為零，用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量，鹽酸麻黃堿在0. 108 μ g 0. 4104 μ g范 圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。(7)精密度試驗(yàn)A.取對照品溶液20 μ L，注入高效液相色譜儀，按(3)項(xiàng)下色譜條件測定峰面積， 重復(fù)進(jìn)樣6次，以鹽酸麻黃堿峰面積進(jìn)行計(jì)算，求出相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(% )，結(jié)果見表11。表11精密度考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(% )為1. 40% (η = 6)，表明重復(fù)性良好。B.取同一批號本制劑的內(nèi)容物，按(5)項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，吸取供試 品溶液20 μ L，注入高效液相色譜儀，按(3)項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次，以鹽 酸麻黃堿峰面積進(jìn)行計(jì)算，求出相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD (%)，結(jié)果見表12。
表12精密度考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(% )為1. 6% (n = 6)，表明重復(fù)性良好(8)中間精密度試驗(yàn)取同一批號本制劑的內(nèi)容物，不同實(shí)驗(yàn)人員按供試品溶液制備方法操作制備供試 品溶液，吸取供試品溶液20 y L，注入不同高效液相色譜儀儀器一AngilentllOO 高效液相色譜儀；Diamosile_C18 (250mmX4. 6mm, 5 u m)儀器二島津 LC-20A 高效液相色譜儀；Diamosile-C18(250mmX4. 6mm，5iim)按(3)項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，兩臺儀器分別重復(fù)進(jìn)樣6次，以測得峰面積計(jì)算 鹽酸麻黃堿的含量，求出相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(% )，結(jié)果見表13。表13中間精密度考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(% )為2. 7% (n = 12)，表明中間精密度良好。(9)穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批號樣品的內(nèi)容物，按(5)項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，吸取供試品溶 液2(^1^，分別在0，1，2，4，8，1211注入高效液相色譜儀，按(3)項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，以 鹽酸麻黃堿峰面積進(jìn)行計(jì)算，求出相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(% )，結(jié)果見表14。表14穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果取供試品溶液，在設(shè)定的時間內(nèi)注入色譜儀，平均峰面積為293.54， RSD(% )為0. 74% (n = 6)，表明本供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。
(10)重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號本制劑的內(nèi)容物，按(5)項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，吸取供試品 溶液20 yL，注入高效液相色譜儀，按(3)項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，按下式計(jì)算出各樣品 中鹽酸麻黃堿含量，計(jì)算式如下 C 鹽酸麻黃堿對照品濃度(mg/mL)W:樣品稱樣量(g)A樣樣品峰面積Am 鹽酸麻黃堿對照品峰面積B樣樣品進(jìn)樣量(iiL)鹽酸麻黃堿對照品進(jìn)樣量(PL)根據(jù)上式計(jì)算出樣品中鹽酸麻黃堿含量，結(jié)果見表15。表15重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
編號123456
含量 mg/g3.31 3.33 3.35 3.34 3.36 3.34
平均含量mg/g3. 34
RSD (%)0. 47結(jié)果表明該樣品的平均含量為3. 34mg/g, RSD為0. 47% (n = 6)，表明重現(xiàn)性良好。(11)加樣回收率試驗(yàn)取同一批號本制劑內(nèi)容物，混勻，取約0.25g，9份，精密稱定，置于具塞錐形瓶中， 每三份分別加入鹽酸麻黃堿儲備液一(濃度為0. 169mg/mL)4mL，5mL和6mL。按(5)項(xiàng)下供 試品溶液制備方法操作，吸取對照品溶液和供試品溶液各15iU和20 yl，注入高效液相色 譜儀，按(3)項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，按下式計(jì)算出回收率，計(jì)算式如下回收率=(C-A) /BX100%A 樣品鹽酸麻黃堿的量(mg)B 鹽酸麻黃堿對照品加入量(mg)C:測得量(mg)結(jié)果見表16。表16加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果
16 結(jié)果平均回收率為102. 82%，RSD為0.11% (n = 9)，表明鹽酸麻黃堿的回收率良好。(12)樣品測定取10個批號的本制劑內(nèi)容物，按(5)項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，吸取供試品 溶液20 yL，注入高效液相色譜儀，按(3)項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，按(9)項(xiàng)下計(jì)算公式， 計(jì)算出各樣品中鹽酸麻黃堿含量(mg/g)。每粒含量(mg/粒)=含量(mg/g) X每粒粒重(g)注每粒粒重為0. 48g。結(jié)果見表17。表17十批樣品含量測定結(jié)果 上述10批樣品測得鹽酸麻黃堿平均含量為3. 35mg/g。從大批量規(guī)模生產(chǎn)考慮， 本制劑每克鹽酸麻黃堿的最低含量限度以平均含量的80%計(jì)算，即3. 35X0. 48X0.8 = 1. 29mg/粒，即每粒含麻黃以鹽酸麻黃堿(CltlH15NO · HCl)計(jì)，不得少于1. 29mg。2、黃芩苷照高效液相色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI D)測定。(1)儀器與試藥儀器=AngilentllOO高效液相色譜儀；HB-10250型超聲清洗器(250W，40kHz)，江 蘇漢邦科技有限公司；梅特勒_托利多AE電子分析天平(METTLER TOLEDO十萬分之一)。試劑甲醇為色譜純，磷酸為分析純，重蒸水。黃芩苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所(供含量測定用)，批號為 110715-200212。樣品本發(fā)明制劑(吉貝咳喘膠囊，批號:20041001、20041002、20041003)。(2)對照品溶液制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每ImL含 60 μ g的溶液，即得。(3)色譜條件的選擇在進(jìn)行黃芩苷色譜條件選擇時，參考了《中國藥典》2005年版一部黃芩項(xiàng)下黃 芩苷的含量測定色譜條件，進(jìn)行了色譜波長的篩選。根據(jù)實(shí)驗(yàn)確定黃芩苷的色譜條件為 DiamonsilTM(鉆石)C18 5 μ m(250X4. 6mm)；以甲醇-水-磷酸(47 53 0.2)為流動 相；流速為lmL/min ；柱溫30°C ；檢測波長為280nm。選擇條件見表18。表18黃芩苷色譜條件選擇
18 (4)系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)陰性對照試驗(yàn)及理論板數(shù)的確定陰性對照品溶液的制備取缺黃芩的陰性樣品內(nèi)容物約0. 3g，精密稱定，加70% 乙醇40mL，加熱回流3小時，放冷，濾過，濾液置于100mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌 容器和殘?jiān)匆簽V入同一容量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取lmL，置10mL量 瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。空白溶液的制備加70%乙醇40mL，加熱回流3小時，放冷，濾過，濾液置100mL量 瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。精 密量取lmL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備取本制劑內(nèi)容物約0. 3g，精密稱定，置于燒瓶中，加70%乙醇 40mL，加熱回流3小時，放冷，濾過，濾液置100mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和 殘?jiān)匆簽V入同一量瓶中，加70 %乙醇至刻度，搖勻。精密量取lmL，置10mL量瓶中，加甲 醇至刻度，搖勻，即得。測定方法精密吸取對照品溶液5 yL，陰性溶液、空白溶液及供試品溶液各 10 u L，按上述色譜條件注入色譜儀。根據(jù)圖譜可知，在此色譜條件下，黃芩苷峰與其他組分峰完全分離，在與黃芩苷峰 相同的保留時間內(nèi)，陰性對照無干擾。樣品理論板數(shù)以黃芩苷峰計(jì)為5331，故確定理論板數(shù) 以黃芩苷計(jì)，應(yīng)不得低于5000。(5)供試品溶液的制備方法的選擇A.提取溶劑的選擇取同一批號本制劑的內(nèi)容物約0.3g，精密稱定，置于燒瓶中，分別精密加入50% 乙醇、60%乙醇和70%乙醇各40mL，加熱回流3小時，放冷，濾過，濾液置100mL量瓶中，分 別用少量50 %乙醇、60%乙醇和70 %乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V入同一量瓶中，分 別加50%乙醇、60%乙醇和70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取lmL，移置10mL量瓶中，加甲 醇至刻度，搖勻，即得。測定樣品中黃芩苷的含量。結(jié)果見表19。表19提取溶劑選擇 試驗(yàn)結(jié)果表明，用70%乙醇提取本制劑(吉貝咳喘膠囊)中的黃芩苷的量最大。B.提取方法的選擇
19
取同一批號本制劑的內(nèi)容物約0. 3g，精密稱定3份，1份置于燒瓶中，精密加入 70%乙醇各40mL，加熱回流3小時，放冷，濾過，濾液置100mL量瓶中，用少量70%乙醇分次 洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取lmL，置10mL 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；一份置于具塞錐形瓶中，精密加入100mL70%乙醇，稱 定重量，超聲處理120分鐘，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精 密量取續(xù)濾液lmL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定樣品中黃芩苷的量。結(jié) 果見表20。表20提取方法選擇 結(jié)果顯示熱回流提取較超聲提取的黃芩苷含量高，故選用熱回流提取3小時作 為供試品的提取方法。C.提取時間的選擇取同一批號樣品的內(nèi)容物約0.3g，精密稱定5份，分別精密加入70%乙醇各40mL， 分別加熱回流1小時、2小時、3小時、4小時和5小時，放冷，濾過，濾液置100mL量瓶中，分 別用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。 精密量取lmL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定樣品中黃芩苷的含量。結(jié)果 見表21。表21 提取時間選擇 結(jié)果表明熱回流提取3小時前黃芩苷含量較低，熱回流提取4小時和5小時黃芩 苷的含量與熱回流3小時的含量無顯著差異，因此熱回流提取3小時為最佳提取時間。根據(jù)實(shí)驗(yàn)確定供試品溶液制備方法為取裝量差異項(xiàng)下的本制劑內(nèi)容物約0. 3g， 精密稱定，置燒瓶中，精密加入70%乙醇各40mL，加熱回流3小時，放冷，濾過，濾液置100mL 量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度， 搖勻。精密量取lmL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。(6)線性關(guān)系的考察標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取在60°C減壓干燥4小時的黃芩苷對照品15.5mg，置 100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取2、4、6、8、10mL置于25mL容量瓶 中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成黃芩苷濃度別為12. 4 u g/mL, 24. 8 u g/mL, 37. 2 u g/mL, 49. 6 u g/mL, 62 u g/mL的系列對照品溶液，精密吸取上述溶液10 u L，分別注入高效液相色 譜儀，按(3)項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜圖，以峰面積為橫坐標(biāo)，對照品的進(jìn)樣量為縱坐 標(biāo)進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表22。表22線性關(guān)系考察結(jié)果進(jìn)樣量(μβ) 0. 124 0. 248 0. 372 0.496 0.620
-
峰面積值383 764.1 1133.3 1527.3 1878.6黃芩苷回歸方程為:y= 3027. 7x+10. 94 (r = 0. 9998)經(jīng)擬合過原點(diǎn)的方程為:y = 3051. 8x(r = 0. 9997)。將同一樣品的黃芩苷峰面積分別代入上述兩方程中，結(jié)果相對偏差為0. 8%，可認(rèn) 為截距為零，用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量，黃芩苷在0. 124 μ g 0. 620 μ g范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。(7)精密度試驗(yàn)A.取對照品溶液5 μ L，注入高效液相色譜儀，按(3)項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，重 復(fù)進(jìn)樣6次，以黃芩苷的峰面積進(jìn)行計(jì)算，求出相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD )，結(jié)果見表23。表23精密度考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD)為0. 26% (η = 6)，表明重復(fù)性良好。B.取同一批號本制劑的內(nèi)容物，按(5)項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，吸取供試 品溶液10 μ L，注入高效液相色譜儀，按(3)項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次，以黃 芩苷峰面積進(jìn)行計(jì)算，求出相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD )，結(jié)果見表24。表24精密度考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果
編號123456
峰面積 344 345. 5 339. 7 346.8 343. 3 348.6
平均峰面積344. 65
RSD (%)0. 82結(jié)果表明相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(% )為0. 82% (η = 6)，表明重復(fù)性良好。(8)中間精密度試驗(yàn)取同一批號本制劑的內(nèi)容物，不同實(shí)驗(yàn)人員按(5)項(xiàng)下供試品溶液制備方法操 作，吸取對照品溶液和供試品溶液各5 μ L、10y L，注入不同高效液相色譜儀儀器一AngilentllOO 高效液相色譜儀；Diamosile_C18 (250mmX4. 6mm, 5 μ m)儀器二島津 LC-20A 高效液相色譜儀；Diamosile_C18 (250mmX 4. 6mm，5 μ m)按(3)項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，兩臺儀器分別重復(fù)進(jìn)樣6次，以測得峰面積計(jì)算黃芩苷的含量，求出相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(% )，結(jié)果見表25。表25中間精密度考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果表明相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(% )為2. 9% (n = 12)，表明中間精密度較好。(9)穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批號本制劑的內(nèi)容物，按(5)項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，吸取供試品 溶液5yL，分別在0，l，2，4，8，12h注入高效液相色譜儀，按(3)項(xiàng)下色譜條件測定峰面積， 以黃芩苷的峰面積進(jìn)行計(jì)算，求出相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(% )，結(jié)果見表26。表26穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果取供試品溶液，在設(shè)定的時間內(nèi)注入色譜儀，測得平均峰面積為349.65， RSD(% )為1. 62% (n = 6)，表明本供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。(10)重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號本制劑的內(nèi)容物，按(5)項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，吸取供試品 溶液10 yL，注入高效液相色譜儀，按(3)項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，按下式計(jì)算出各樣品 中黃芩苷含量，計(jì)算式如下 根據(jù)上式計(jì)算出樣品中黃芩苷含量，結(jié)果見表27。表27重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果該樣品的平均含量為37. 13mg/g, RSD為0. 39% (n = 6)，表明重現(xiàn)性良好。(11)加樣回收率試驗(yàn)儲備液的制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的黃芩苷對照品58. 13mg，置 50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。取同一批號本制劑內(nèi)容物約0. 15g，9份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，3份精確 加入黃芩苷儲備液(濃度為1. 1626mg/mL)各4mL ；3份精確加入黃芩苷儲備液(濃度為 1. 1626mg/mL)各5mL ；另3份精確加入黃芩苷儲備液(濃度為1. 1626mg/mL)各6mL ；按(5) 項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，吸取對照品溶液和供試品溶液各5 y L、10 y L，注入高效液 相色譜儀，按(3)項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，按下式計(jì)算出回收率，計(jì)算式如下結(jié)果見表 28。回收率=(C-A) /BX100%A 樣品中黃芩苷的量(mg)B 黃芩苷對照品加入量(mg)C 測得量(mg)表28加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果平均回收率為104. 92%，RSD)為2. 22% (η = 9)，表明黃芩苷的回收率良好。(12)樣品測定取10個批號的本制劑按(5)項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，吸取對照品溶液和供 試品溶液各5 μ L、10y L，注入高效液相色譜儀，按(3)項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，按(9)項(xiàng) 下計(jì)算公式計(jì)算出各樣品中黃芩苷含量(mg/g)；結(jié)果見表29。表29十批樣品含量測定結(jié)果 上述10批樣品測得黃芩苷平均含量為36. 03mg/g。從大批量規(guī)模生產(chǎn)考慮，本制 劑每克黃芩苷的含量限度以80%計(jì)算，黃芩苷的含量為36. 03X0.8X0. 48 = 13. 8mg/粒， 故本制劑的限度定為每粒含黃芩以黃芩苷(C21H180n)計(jì)，不得少于13.8mg。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明針對新開發(fā)的治療咳喘病的中藥制劑建立了系統(tǒng)的、完 整的、有效的質(zhì)量檢測方法，且所述方法的專屬性強(qiáng)，精密度高，重現(xiàn)性好，回收率高，測量 結(jié)果準(zhǔn)確，達(dá)到了有效控制藥物質(zhì)量的目的，從而確保了產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定以及臨床用藥的 安全、有效。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明實(shí)施例1 治療咳喘病的膠囊劑的制備(份數(shù)均指重量份)稱取吉祥草600 650 份、黃芩350 400份、浙貝母350 400份、蛤殼225 275份、毛大丁草400 450份、 麻黃350 400份、炙桑白皮475 525份、炙葶藶子350 400份、天竺黃400 450份、 炙僵蠶400 450份和地龍350 400份，加水煎煮3次，第一次加8倍量水，第二、三次各 加6倍量水，每次煎煮1小時，濾過，合并濾液；濾液濃縮至50°C相對密度為1. 1，加乙醇使 含醇量為70%，靜置24小時，吸取上清液，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮，80°C以下減壓干 燥，得干膏，粉碎過80目篩，加入淀粉25份和微晶纖維素50份，混勻，顆粒裝入膠囊，即得。該治療咳喘病的膠囊劑的完整檢測方法為性狀其內(nèi)容物為棕褐色粉末，氣微，味微甜或微苦；鑒別(1)黃芩的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加乙酸乙酯-甲醇(3 1)的混 合溶液30mL，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，取上清液作為供試品溶液。另取黃芩對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液。再取黃芩苷對照品、黃芩 素對照品、漢黃芩素對照品，加甲醇制成每lmL各含lmg、0. 5mg、0. 5mg的對照品溶液。照薄 層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對照藥材溶液 各5 y L及對照品溶液2 u 1分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (10 3 1 2)為展開劑，飽和30分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在 與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯三個 相同的暗色斑點(diǎn)。(2)浙貝母的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加濃氨試液2mL與甲苯20mL，放 置過夜，濾過，取濾液8mL，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取貝母素 甲、貝母素乙對照品，加三氯甲烷制成每lmL各含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜 法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對照品溶液各20 u L， 分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試 液(17 2 1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對 照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。(3)毛大丁草的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加入石油醚溶液30mL，超聲40 分鐘，傾去石油醚液，殘?jiān)?0%乙醇40ml超聲40分鐘，濾過，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解， 作為供試品溶液。另取毛大丁草對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中 國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液15ul、對照藥材溶液5yL，分別點(diǎn) 于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇(30 10)為展開劑， 展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位 置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。(4)麻黃的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加濃氨試液數(shù)滴，再加三氯甲烷 10mL,加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL充分振搖，濾過，濾液作為供試品溶 液。另取麻黃對照藥材lg，同法處理，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年 版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對照藥材溶液各10 yL，分別點(diǎn)于同一以羧 甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液(20 5 0.5) 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液。在105°C加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在 與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。檢查應(yīng)符合《中國藥典》2005年版一部附錄I L膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定；含量測定(1)麻黃堿含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙 腈0. 磷酸=5 95為流動相；流速為lmL/min ；柱溫25°C ；檢測波長為207nm ；理論 板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)不低于6000 ；對照品溶液的制備精密稱取鹽酸麻黃堿對照品10mg，置于100mL量瓶中，用甲醇 溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取lmL，移置25mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻， 即得每lmL含鹽酸麻黃堿4 y g的對照品溶液；供試品溶液的制備取本制劑內(nèi)容物0.2g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加 入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液lmL，移置中性氧化鋁柱上，用50%甲醇洗脫，收集洗脫液約9mL， 置IOmL量瓶中，加鹽酸1滴，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測 定，即得；本制劑每粒含麻黃以鹽酸麻黃堿CltlH15NO · HCl計(jì)，不得少于1. 29mg。(2)黃芩苷含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇水 磷酸=47 53 0.2為流動相；流速為lmL/min ；柱溫30°C;檢測波長為207nm ；理論板數(shù) 按黃芩苷峰計(jì)不低于5000 ；對照品溶液的制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的黃芩苷對照品10mg，加甲 醇制成每ImL含黃芩苷50 μ g的對照品溶液；供試品溶液的制備取本制劑內(nèi)容物0. 3g，精密稱定，加70%乙醇40mL，回流3小 時，放冷，濾過，濾液移至IOOmL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同 一量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取lmL，移置IOmL量瓶中，加甲醇稀釋至刻 度，搖勻，即得供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測 定，計(jì)算，即得；本制劑每粒含黃芩以黃芩苷C21H18O11計(jì)，不得少于13. Smgo
2權(quán)利要求
一種治療咳喘病的膠囊劑的檢測方法，其特征在于所述的檢測方法包括性狀、鑒別、檢查和含量測定項(xiàng)目；其中鑒別是對制劑中的黃芩、浙貝母、毛大丁草、麻黃的薄層色譜鑒別；含量測定是對制劑中麻黃堿和黃芩苷的含量測定。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療咳喘病的膠囊劑的檢測方法，其特征在于黃芩的鑒 別方法是以黃芩對照藥材和黃芩苷對照品、黃芩素對照品、漢黃芩素對照品為對照，以甲 苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸=10 3 1 2為展開劑的薄層色譜法；浙貝母的鑒別方 法是以貝母素甲、貝母素乙對照品為對照，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液=17 2 1為 展開劑的薄層色譜法；毛大丁草的鑒別方法是以毛大丁草對照藥材為對照，以氯仿-甲醇 =30 10為展開劑的薄層色譜法；麻黃的鑒別方法是以麻黃對照藥材為對照，以三氯甲 烷-甲醇-濃氨試液=20 5 0. 5為展開劑的薄層色譜法。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的治療咳喘病的膠囊劑的檢測方法，其特征在于具體鑒 別方法為(1)黃芩的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加乙酸乙酯-甲醇=3 1的混合溶 液30mL，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，取上清液作為供 試品溶液；另取黃芩對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；再取黃芩苷對照品、黃芩素對照 品、漢黃芩素對照品，加甲醇制成每ImL各含lmg、0. 5mg、0. 5mg的對照品溶液；照中國藥典 2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各5μ L及對照品 溶液2μ1分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸=10 3 1 2 為展開劑，飽和30分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng) 的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯三個相同的暗色斑點(diǎn)；(2)浙貝母的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加濃氨試液2mL與甲苯20mL，放置 過夜，濾過，取濾液8mL，蒸干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為供試品溶液；另取貝母素 甲、貝母素乙對照品，加三氯甲烷制成每ImL各含2mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥 典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照品溶液各20 μ L，分別 點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液= 17 2 1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品 色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(3)毛大丁草的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加入石油醚溶液30mL，超聲40分 鐘，傾去石油醚液，殘?jiān)?0%乙醇40ml超聲40分鐘，濾過，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作 為供試品溶液；另取毛大丁草對照藥材lg，同法處理，制成對照藥材溶液；照中國藥典2005 年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液15ul、對照藥材溶液5yL，分別點(diǎn)于 同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇=30 10為展開劑， 展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(4)麻黃的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加濃氨試液數(shù)滴，再加三氯甲烷10mL， 加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL充分振搖，濾過，濾液作為供試品溶液；另 取麻黃對照藥材lg，同法處理，作為對照藥材溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄 層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10 μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉 為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液=20 5 0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液；在105°C加熱至斑點(diǎn)清晰；供試品色譜中，在與對照藥材 色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療咳喘病的膠囊劑的檢測方法，其特征在于麻黃堿的含量測定方法是以鹽酸麻黃堿對照品為對照，以乙腈0.1%磷酸=5 95為流動相的 高效液相色譜法；黃芩苷的含量測定方法是以黃芩苷對照品為對照，以甲醇水磷酸= 47 53 0.2為流動相的高效液相色譜法。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的治療咳喘病的膠囊劑的檢測方法，其特征在于具體含 量測定方法為(1)麻黃堿含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈0. 磷 酸=5 95為流動相；流速為lmL/min ；柱溫25°C ；檢測波長為207nm ；理論板數(shù)按鹽酸麻 黃堿峰計(jì)不低于6000 ；對照品溶液的制備精密稱取鹽酸麻黃堿對照品10mg，置于IOOmL量瓶中，用甲醇溶解 并稀釋至刻度，搖勻；精密量取lmL，置25mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得每ImL 含鹽酸麻黃堿4 μ g的對照品溶液；供試品溶液的制備取本制劑內(nèi)容物0. 2g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲 醇25mL，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾 過；精密量取續(xù)濾液lmL，置中性氧化鋁柱上，用50%甲醇洗脫，收集洗脫液約9mL，置IOmL 量瓶中，加鹽酸1滴，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得；本制劑每粒含麻黃以鹽酸麻黃堿CltlH15NO · HCl計(jì)，不得少于1. 29mg ；(2)黃芩苷含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇水磷酸 =47 53 0.2為流動相；流速為lmL/min ；柱溫30°C;檢測波長為207nm ；理論板數(shù)按黃 芩苷峰計(jì)不低于5000 ；對照品溶液的制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的黃芩苷對照品10mg，加甲醇制 成每ImL含黃芩苷50 μ g的對照品溶液；供試品溶液的制備取本制劑內(nèi)容物0. 3g，精密稱定，加70%乙醇40mL，回流3小時， 放冷，濾過，濾液移至IOOmL量瓶中，用少量70 %乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V入同一 量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取lmL，置IOmL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度， 搖勻，即得供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，計(jì) 算，即得；本制劑每粒含黃芩以黃芩苷C21H18O11計(jì)，不得少于13. Smg0
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2或4所述的治療咳喘病的膠囊劑的檢測方法，其特征在于所述 的檢測方法包括性狀其內(nèi)容物為棕褐色粉末，氣微，味微甜或微苦；鑒別(1)黃芩的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加乙酸乙酯-甲醇=3 1的混合溶液30mL，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，取上清液作為供試品溶液；另取黃芩對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；再取黃芩苷對照品、黃 芩素對照品、漢黃芩素對照品，加甲醇制成每ImL各含lmg、0. 5mg、0. 5mg的對照品溶液； 照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各 5 μ L及對照品溶液2 μ 1分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸= 10 3 1 2為展開劑，飽和30分鐘，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對 照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯三個相同 的暗色斑點(diǎn)；(2)浙貝母的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加濃氨試液2mL與甲苯20mL，放置 過夜，濾過，取濾液8mL，蒸干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為供試品溶液；另取貝母素 甲、貝母素乙對照品，加三氯甲烷制成每ImL各含2mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥 典2005年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照品溶液各20 μ L，分別 點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液= 17 2 1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品 色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(3)毛大丁草的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加入石油醚溶液30mL，超聲40分 鐘，傾去石油醚液，殘?jiān)?0%乙醇40ml超聲40分鐘，濾過，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作 為供試品溶液；另取毛大丁草對照藥材lg，同法處理，制成對照藥材溶液；照中國藥典2005 年版一部附錄VI B薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液15ul、對照藥材溶液5 μ L，分別點(diǎn)于 同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇=30 10為展開劑， 展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(4)麻黃的薄層色譜鑒別取本制劑內(nèi)容物2g，加濃氨試液數(shù)滴，再加三氯甲烷10mL， 加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL充分振搖，濾過，濾液作為供試品溶液；另 取麻黃對照藥材lg，同法處理，作為對照藥材溶液；照中國藥典2005年版一部附錄VI B薄 層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10μ L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉 為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液=20 5 0.5為展開劑，展 開，取出，晾干，噴以茚三酮試液；在105°C加熱至斑點(diǎn)清晰；供試品色譜中，在與對照藥材 色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；檢查應(yīng)符合《中國藥典》2005年版一部附錄I L膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定；含量測定(1)麻黃堿含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈0. 磷 酸=5 95為流動相；流速為lmL/min ；柱溫25°C ；檢測波長為207nm ；理論板數(shù)按鹽酸麻 黃堿峰計(jì)不低于6000 ；對照品溶液的制備精密稱取鹽酸麻黃堿對照品10mg，置于IOOmL量瓶中，用甲醇溶解 并稀釋至刻度，搖勻；精密量取lmL，置25mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得每ImL 含鹽酸麻黃堿4 μ g的對照品溶液；供試品溶液的制備取本制劑內(nèi)容物0. 2g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲 醇25mL，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液lmL，置中性氧化鋁柱上，用50%甲醇洗脫，收集洗脫液約9mL，置IOmL 量瓶中，加鹽酸1滴，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得； 本制劑每粒含麻黃以鹽酸麻黃堿CltlH15NO · HCl計(jì)，不得少于1. 29mg ； (2)黃芩苷含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇水磷酸 =47 53 0.2為流動相；流速為lmL/min ；柱溫30°C;檢測波長為207nm ；理論板數(shù)按黃 芩苷峰計(jì)不低于5000 ；對照品溶液的制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的黃芩苷對照品10mg，加甲醇制 成每ImL含黃芩苷50 μ g的對照品溶液；供試品溶液的制備取本制劑內(nèi)容物0. 3g，精密稱定，加70%乙醇40mL，回流3小時， 放冷，濾過，濾液移至IOOmL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一 量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取lmL，置IOmL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度， 搖勻，即得供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，計(jì) 算，即得；本制劑每粒含黃芩以黃芩苷C21H18O11計(jì)，不得少于13. Smg0
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療咳喘病的膠囊劑的檢測方法，所述檢測方法包括性狀、鑒別、檢查和含量測定項(xiàng)目；其中鑒別是對制劑中的黃芩、浙貝母、毛大丁草、麻黃的薄層色譜鑒別；含量測定是對制劑中麻黃堿和黃芩苷的含量測定。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明針對新開發(fā)的治療咳喘病的中藥制劑建立了系統(tǒng)的、完整的、有效的質(zhì)量檢測方法，且所述方法的專屬性強(qiáng)，精密度高，重現(xiàn)性好，回收率高，測量結(jié)果準(zhǔn)確，達(dá)到了有效控制藥物質(zhì)量的目的，從而確保了產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定以及臨床用藥的安全、有效。
文檔編號A61K35/56GK101884746SQ20101023153
公開日2010年11月17日 申請日期2010年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月20日
發(fā)明者李德鑫, 王祥培, 錢海兵, 靳鳳云 申請人:貴陽中醫(yī)學(xué)院