專利名稱：一種治療咳喘病的中藥制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療咳喘病的中藥制劑及其制備方法，屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
咳喘是當今世界上難以根治的病癥之一，是呼吸系統(tǒng)的多發(fā)病，因為氣管對刺激 物過度敏感的反應(yīng)，嚴重的病人可延續(xù)數(shù)日或數(shù)周發(fā)作，此病具有對人體健康危害大、發(fā)病 率高、病程長等特點，給病人帶來了極大的痛苦和麻煩。經(jīng)典中醫(yī)理論認為，哮喘的發(fā)生，為 宿痰內(nèi)伏于肺，復(fù)加外感、飲食、體虛病后等因素，以致痰堵氣道、廢氣上逆所致。近年來，許 多學者在辨證施治、標本兼治的基礎(chǔ)上發(fā)展了臟腑論治、從肺論治、肺腎論治、肺脾論治、肺 肝論治、脾胃論治等不同的治療方法及手段，但是如何能夠快速治愈、根治此病仍是醫(yī)學界 的難題。目前治療咳喘的藥物主要有急支糖漿、強力止咳寧膠囊、止嗽咳喘寧糖漿、百花定 喘丸等。急支糖漿在理法特色定位上，僅有西藥之“病”的定位，而無“證”的定位，不利于醫(yī) 生及患者辨證用藥；強力止咳寧膠囊的平喘作用較弱；止嗽咳喘寧糖漿處方中用罌粟殼斂 肺止咳甚為不妥，該藥易成癮，而有強制性止咳作用，用于慢性支氣管炎，特別是老年患者， 易掩蓋其它病理變化；百花定喘丸全藥打粉制丸，工藝粗放易使患者吞服不便，且百花定喘 丸的功能主治僅以中醫(yī)術(shù)語定位，不便于臨床醫(yī)生的使用。因此，研制一種以西醫(yī)之“病”與 中醫(yī)之“證”相結(jié)合，便于醫(yī)生及患者使用，療效好且副作用小的中藥非常必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種治療咳喘病的中藥制劑及其制備方法。本發(fā)明以至 少六味中草藥組方精制而成，具有清熱宣肺、化痰散結(jié)、平喘止咳之功效，對支氣管炎、肺氣 腫、支氣管哮喘類病癥有良好的療效，且不易復(fù)發(fā)，無明顯毒副作用和不良反應(yīng)。本發(fā)明的技術(shù)方案一種治療咳喘病的中藥制劑，按照重量份計算，它是以吉祥草 600 650份、黃芩350 400份、浙貝母350 400份、毛大丁草400 450份、麻黃350 400份和地龍350 400份為主要原料藥制成的。按照重量份計算，該中藥制劑優(yōu)選為以吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、 毛大丁草417份、麻黃375份和地龍375份為原料藥制成。按照重量份計算，本發(fā)明中藥制劑也可以由以下原料藥制成吉祥草600 650 份、黃芩350 400份、浙貝母350 400份、蛤殼225 275份、毛大丁草400 450份、 麻黃350 400份和地龍350 400份。優(yōu)選的原料藥用量為吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、蛤殼250份、毛 大丁草417份、麻黃375份和地龍375份。按照重量份計算，本發(fā)明中藥制劑也可以由以下原料藥制成吉祥草600 650 份、黃芩350 400份、浙貝母350 400份、毛大丁草400 450份、麻黃350 400份、 炙桑白皮475 525份和地龍350 400份。
優(yōu)選的原料藥用量為吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、毛大丁草417份、麻黃375份、炙桑白皮500份和地龍375份。按照重量份計算，本發(fā)明中藥制劑也可以由以下原料藥制成吉祥草600 650 份、黃芩350 400份、浙貝母350 400份、毛大丁草400 450份、麻黃350 400份、 天竺黃400 450份、炙僵蠶400 450份和地龍350 400份。優(yōu)選的原料藥用量為吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、毛大丁草417份、 麻黃375份、天竺黃417份、炙僵蠶417份和地龍375份。按照重量份計算，本發(fā)明中藥制劑還可以由以下原料藥制成吉祥草600 650 份、黃芩350 400份、浙貝母350 400份、蛤殼225 275份、毛大丁草400 450份、 麻黃350 400份、炙桑白皮475 525份和地龍350 400份。優(yōu)選的原料藥用量為吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、蛤殼250份、毛 大丁草417份、麻黃375份、炙桑白皮500份和地龍375份。按照重量份計算，本發(fā)明中藥制劑還可以由以下原料藥制成吉祥草600 650 份、黃芩350 400份、浙貝母350 400份、蛤殼225 275份、毛大丁草400 450份、 麻黃350 400份、炙桑白皮475 525份、炙葶藶子350 400份和地龍350 400份。優(yōu)選的原料藥用量為吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、蛤殼250份、毛 大丁草417份、麻黃375份、炙桑白皮500份、炙葶藶子375份和地龍375份。按照重量份計算，本發(fā)明中藥制劑還可以由以下原料藥制成吉祥草600 650 份、黃芩350 400份、浙貝母350 400份、蛤殼225 275份、毛大丁草400 450份、 麻黃350 400份、炙桑白皮475 525份、炙葶藶子350 400份、天竺黃400 450份 和地龍350 400份。優(yōu)選的原料藥用量為吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、蛤殼250份、毛 大丁草417份、麻黃375份、炙桑白皮500份、炙葶藶子375份、天竺黃417份和地龍375份。按照重量份計算，本發(fā)明中藥制劑還可以由以下原料藥制成吉祥草600 650 份、黃芩350 400份、浙貝母350 400份、蛤殼225 275份、毛大丁草400 450份、 麻黃350 400份、炙桑白皮475 525份、炙葶藶子350 400份、天竺黃400 450份、 炙僵蠶400 450份和地龍350 400份。優(yōu)選的原料藥用量為吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、蛤殼250份、毛 大丁草417份、麻黃375份、炙桑白皮500份、炙葶藶子375份、天竺黃417份、炙僵蠶417 份和地龍375份。 所述的中藥制劑優(yōu)選為膠囊劑。前述治療咳喘病的中藥制劑的制備方法為按比例稱取全部原料藥，加水煎煮3 次，每次煎煮1小時，濾過，合并濾液，濃縮得浸膏；在浸膏中加乙醇，靜置，吸取上清液，濾 過，濾液回收乙醇，減壓濃縮，顯減壓干燥得干膏，干膏粉碎過篩，加入相應(yīng)的輔料，制成各 種不同的制劑。更具體的制備方法為按比例稱取全部原料藥材，加水煎煮3次，第一次加§倍量 水，第二、三次各加&倍量水，每次煎煮1小時，濾過，合并濾液濾液濃縮至50°C相對密度 為1. 1的浸膏，往浸膏中加入乙醇使含醇量為_，靜置24小時，吸取上清液，濾過，濾液回 收乙醇，減壓濃縮，80°C以下減壓干燥得干膏，干膏粉碎過80目篩，加入相應(yīng)的輔料，制成各種不同的制劑。
其中膠囊劑的制備方法為取上述粉碎過篩后的干膏粉，加入淀粉25重量份和撤 晶纖維素50重量份，混勻，顆粒裝入膠囊，即得。本發(fā)明組方以麻黃為君藥，其性辛溫，為散寒、宣肺、平喘之佳品；地龍清熱定驚、 通絡(luò)平喘；浙貝母清熱散結(jié)，化痰止咳；蛤殼清熱化痰，軟堅散結(jié)，此三味性寒之品與君藥 構(gòu)成寒溫并用之勢，合而為臣，著重取其通絡(luò)、散結(jié)之力，以助君藥平喘化痰之效。另毛大丁 草有宣肺止咳，發(fā)汗利水，行氣活血之力，以輔君藥散發(fā)宣肺之功；吉祥草善能滋陰潤肺，涼 血止血。常用于肺熱咳喘，灼傷肺絡(luò)而咯血者，以輔佐君藥滋陰潤肺之力；葶藶子有瀉肺平 喘、行水消腫之效，桑白皮更有瀉肺平喘、利肺消腫之功，此葶藶、桑白二味為《普濟方》中之 葶藶散，專治咳嗽喘急之名方，用于本方以佐君藥瀉肺、化痰、平喘之功效；方中黃芩有清熱 燥濕，瀉火解毒之效；僵蠶祛風定驚，化痰散結(jié)，天竺黃清熱豁痰，涼血定驚，此七味共為佐 藥，以輔佐君藥之力。諸藥合用共奏清熱宣肺，化痰散結(jié)，平喘止咳之功。適用于風熱犯肺， 肺失清肅，喉中痰鳴有聲，喘而氣粗息涌，胸脅滿悶，喘咳陳作，甚則不能平臥，痰粘稠，咯吐 不利，口渴喜飲或身熱微惡寒，便干、尿黃諸證候者；急、慢性支氣管炎，肺氣腫、支氣管哮喘 見上述之辨證者。以下是發(fā)明人在研制本中藥制劑的過程中所進行的主要實驗一、制備工藝的考察影響水提的因素主要有以下幾個方面煎煮次數(shù)、加水量、煎煮時間等。煎煮次數(shù)、 加水量、煎煮時間3個因素作4因素3水平正交試驗，以黃芩中的黃芩苷的提取量和麻黃中 的鹽酸麻黃堿的提取量綜合評分來作為指標優(yōu)選水提條件，以確定水提工藝條件。通過藥 材吸水率的考察、水提正交試驗及正交優(yōu)選醇提條件的驗證，確定最佳水提工藝為煎煮3 次，第1次加8倍量水(扣除藥材吸水)，第2、3次加6倍量水，每次提取1小時。影響醇沉的主要因素有醇沉浸膏密度、含醇量、靜置時間等，本試驗以醇沉浸膏密 度、含醇量、靜置時間3個因素各取3個水平進行4因素3水平正交試驗，以黃芩中的黃芩 苷的提取量和麻黃中的鹽酸麻黃堿的提取量綜合評分來作為指標優(yōu)選醇沉條件。通過醇沉 正交試驗及正交優(yōu)選水提條件的驗證，確定最佳醇沉工藝為醇沉相對密度為1. 1(50°C )， 加乙醇使含醇量為胃，靜置24小時。水提醇沉藥液分別采用常壓濃縮和減壓80°C以下濃縮，分別測定樣品中的有效成 分黃芩苷及鹽酸麻黃堿為指標，以優(yōu)選濃縮條件，試驗結(jié)果表明，濃縮溫度對水提有效成分 含量無顯著影響，結(jié)合大生產(chǎn)實際，濃縮采用減壓80°C以下濃縮。水提醇沉濃縮藥液分別采用常壓干燥和減壓80°C以下干燥，分別測定樣品中的有 效成分黃芩苷和鹽酸麻黃堿為指標來優(yōu)選干燥條件，結(jié)果表明，干燥溫度對水提醇沉干燥 樣品中有效成分含量無明顯的影響，而減壓干燥時間較短，結(jié)合大生產(chǎn)實際，選擇減壓80°C 以下干燥。通過對制劑處方的研究，吸濕率的考察、休止角的測定、臨界相對濕度的測定和裝 量的確定，膠囊劑成型工藝為水提醇沉膏粉加淀粉⑩、微晶纖維素50g，混勻，在相對臨界 濕度56%以下填充即可。水提工藝的考察、醇沉除雜工藝考察、水提醇沉濃縮工藝考察和干燥工藝考察的 相關(guān)試驗如下
1、水提工藝的考察(1)藥材吸水率考察按處方比例量稱取藥材3份，吉祥草62. 5g、桑白皮(炙)50g、黃芩37. 5g、浙貝母(粉)37. 5g、葶藶子(炒)37. 5g、天竺黃41. 7g、蛤粉25g、僵蠶(炙)41. 7g、地龍37. 5g、毛 大丁草41. 7g、麻黃37. 5g，共計450g,加10倍量水(即4500mL)浸泡，每隔30分鐘觀察1 次浸泡情況，直至藥材全部透心，濾出全部未被吸收的水，稱濕藥材重量，按下式求得藥材 吸水率。 表1藥材吸水考察 故首次加水煎煮時，應(yīng)補足藥材185 %的吸水量，為方便生產(chǎn)計算，首次加水煎煮 時，以全部水提藥材多加2倍量水，則多加水900g，與理論吸水率所要加的水相差不大，因 此首次水提時多加2倍量水是合理的。(2)水提條件篩選①正交試驗因素水平的選擇影響水煎煮的主要因素有煎煮次數(shù)、加水量、煎煮時間等。本試驗以這3個因素 為考察因素，各取3個水平，進行L9 (34)正交試驗，篩選水提工藝條件，因素水平表見表2。表2水提正交因素水平表 ②指標選擇為了使工藝能充分反映藥物療效，本試驗擬對工藝采用多指標綜合評價結(jié)合本 方藥物組成的特點及本方的功能主治，以本方中黃芩的有效成分黃芩苷的提取量為綜合評 價指標之一對工藝進行評價，權(quán)衡系數(shù)為50% ；以本方中麻黃的有效成分麻黃堿的提取量 為綜合評價指標之一對工藝進行評價，權(quán)衡系數(shù)為50%來優(yōu)選水提條件。③樣品制備按處方比例稱取藥材吉祥草62.5g、桑白皮(炙)50g、黃芩37.5g、浙貝母(粉)37. 5g、葶藶子(炒)37. 5g、天竺黃41. 7g、蛤粉25g、僵蠶(炙)41. 7g、地龍37. 5g、毛 大丁草41. 7g、麻黃37. 5g，共計450g，共9份，按L9 (34)正交試驗條件及水提正交因素水 平進行煎煮水提，藥液用200目濾布過濾后，減壓濃縮至相對相密度1. 2(50°C )，減壓干燥 (65 80°C, -0. 06 -0. 08Mpa)，樣品制備結(jié)果見表3。表3水提正交試驗樣品重量 ④試驗樣品中黃芩苷的測定儀器=Agilent 1100高效液相色譜儀；梅特勒-托利多AE電子分析天平 (METTLERT0LED0 十萬分之一)。試藥色譜甲醇(江蘇漢邦科技有限公司)；水(重蒸水)，自制；磷酸(江蘇漢邦 科技有限公司)；黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110715-200212，供含量 測定用)；樣品(自制，試驗樣品)。色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇水磷 酸=47 53 0.2為流動相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于2500。對照品溶液的制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的黃芩苷對照品15. 5mg，置 于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取5mL，置25mL容量瓶中，用流 動相稀釋至刻度，搖勻，即得每ImL含黃芩苷62 μ g的溶液。供試品溶液的制備取本制劑內(nèi)容物約0. 6g，精密稱定，加70%乙醇40mL，加熱回 流3小時，放冷，濾過，濾液移置IOOmL容量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘渣，洗 液濾入同一容量瓶中，加70 %乙醇至刻度，搖勻。精密量取lmL，置IOmL容量瓶中，加甲醇 至刻度，搖勻，即得。含量測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測 定，記錄，計算含量，結(jié)果見表4。表4水提正交試驗樣品中黃芩苷含測結(jié)果 ⑤試驗樣品中麻黃堿的測定儀器=Agilent 1100高效液相色譜儀；梅特勒-托利多AE電子分析天平 (METTLERT0LED0十萬分之一 )；HS12060D型超聲波清洗器(功率250w ；頻率40Khz)。試藥色譜純甲醇(江蘇漢邦科技有限公司)；色譜純乙腈(江蘇漢邦科技有限公 司)；水(重蒸水)，自制；磷酸(江蘇漢邦科技有限公司)；麻黃堿對照品(中國藥品生物 制品檢定所，批號=241-200102，供含量測定用)；樣品(自制，試驗樣品)。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙 腈0.1%磷酸=9 87為流動相，檢測波長為207nm。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計算應(yīng) 不低于3000。
對照品溶液的制備稱取鹽酸麻黃堿對照品10. 35mg,精密稱定，置于IOOmL容量 瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取2mL，移置25mL容量瓶中，用流動相稀釋至 刻度，搖勻，即得每ImL含鹽酸麻黃堿8. 28 μ g的對照品溶液。供試品溶液的制備取試驗樣品約1. 5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇25mL，稱定重量，超聲處理(功率16W，頻率50kHz) 45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇 補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液lmL，置中性氧化鋁柱(100 200目，1. 5g，內(nèi) 徑Icm)上，用50%甲醇洗脫，收集洗脫液約9mL，移置IOmL容量瓶中，加磷酸1滴，用50% 甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。含量測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各15yL、20yL，注入液相色 譜儀，測定，記錄，計算含量，結(jié)果見表5。表5水提正交試驗樣品中麻黃堿含測結(jié)果 表6水提正交試驗結(jié)果
_注綜合評價=黃芩苷提取量X 0. 5+麻黃堿提取量X 0. 5 表7水提正交試驗方差分析表 從上表結(jié)果分析得知，各因素作用主次為B > A > C，D因素為空白作為誤差來源。 B因素有顯著性差異，且因素B中B3 > B2 > B1，則應(yīng)選擇B3為水提工藝條件參數(shù)；其他A、 C均無顯著性差異，且A3 > Al > A2，C2 > C3 > C1，結(jié)合大生產(chǎn)實際，無顯著性差異的A、C 因素應(yīng)選擇A1、C1為水提工藝條件，故選擇水提工藝A1B3C1，即煎煮3次，第1次加8倍量 水(扣除藥材吸水)，第2、3次加6倍量水，每次提取1小時。(3)優(yōu)選水提工藝條件驗證根據(jù)選擇水提工藝條件A1B3C1，即煎煮3次，第1次加8倍量水(扣除藥材吸水)， 第2、3次加6倍量水，每次提取1小時，濾過，濾液濃縮，干燥。據(jù)此條件稱取藥材吉祥草 62. 5g、桑白皮(炙)50g、黃芩37. 5g、浙貝母(粉)37. 5g、葶藶子(炒)37. 5g、天竺黃41. 7g、 蛤粉25g、僵蠶(炙)41. 7g、地龍37. 5g、毛大丁草41. 7g、麻黃37. 5g，共計450g,共三份，按 優(yōu)選水提條件A1B3C1提取，濾過，濾液濃縮，干燥，測定樣品中的黃芩苷和麻黃堿，驗證三 批，驗證試驗結(jié)果見表8、表9。表8水提正交驗證樣品含測結(jié)果
表9水提正交驗證結(jié)果
由上表結(jié)果可知，驗證試驗結(jié)果與正交結(jié)果相一致，說明水提工藝條件基本穩(wěn)定， 可作為水提工藝條件。2、醇沉除雜工藝考察(1)醇沉正交試驗本制劑處方藥材用量較大，每劑處方藥材總量為4500g，為減少服用量，在保證標 示物提取量相對穩(wěn)定的前提下，采用水提醇沉法對水提液進行除雜處理，用正交試驗來優(yōu) 選除雜工藝條件。以處方黃芩藥材中黃芩苷提取量和麻黃藥材中麻黃堿提取量進行綜合評 價作為評價指標，對除雜工藝條件進行優(yōu)選。①正交試驗因素水平的選擇影響水提醇沉的因素主要有醇沉浸膏密度、含醇量、靜置時間等，本試驗以醇沉浸 膏密度、含醇量、靜置時間3個因素各取3個水平，按L9 (34)正交要求試驗，因素水平見表 10。表10水提醇沉正交試驗因素水平 ②評價指標的選擇按水提工藝正交試驗選擇評價指標，以本方中黃芩的有效成分黃芩苷的提取量為 綜合評價指標之一對工藝進行評價，權(quán)衡系數(shù)為50% ；以本方中麻黃的有效成分麻黃堿的 提取量指標為綜合評價指標之一對工藝進行評價，權(quán)衡系數(shù)為50%來優(yōu)選除雜工藝條件。③樣品制備據(jù)水提條件稱取藥材吉祥草562. 5g、桑白皮(炙)450g、黃芩337. 5g、浙貝母(粉)337· 5g、葶藶子(炒)337· 5g、天竺黃375. 3g、蛤粉225g、僵蠶(炙)375. 3g、地龍 337. 5g、毛大丁草375. 3g、麻黃337. 5g，共計4050g，按水提條件煎煮3次，第1次加8倍量 水(扣除藥材吸水)，第2、3次加6倍量水，每次提取1小時，濾過，合并濾液，濾液均分成9 份，按四因素三水平正交試驗L9(34)的要求進行醇沉正交試驗，回收乙醇，濃縮，干燥，樣品 制備結(jié)果見表11。表11醇沉正交試驗樣品重量 ④試驗樣品中黃芩苷的測定儀器=Agilent 1100高效液相色譜儀；梅特勒-托利多AE電子分析天平 (METTLERT0LED0 十萬分之一)。試藥色譜甲醇(江蘇漢邦科技有限公司)；水(重蒸水)，自制；磷酸(江蘇漢邦 科技有限公司)；黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110715-200212，供含量 測定用)；樣品(自制，試驗樣品)。色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇水磷 酸=47 53 0.2為流動相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于5000。對照品溶液的制備精密稱取在60°C減壓干燥4小時的黃芩苷對照品15. 5mg，置 于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取5mL，移置25mL容量瓶中，用 流動相稀釋至刻度，搖勻，即得每ImL含黃芩苷62 μ g的溶液。供試品溶液的制備取試驗樣品0. 3g，精密稱定，加70%乙醇40mL，加熱回流3小 時，放冷，濾過，濾液置IOOmL容量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘渣，洗液濾入同 一容量瓶中，加70 %乙醇至刻度，搖勻。精密量取lmL，移置IOmL容量瓶中，加甲醇至刻度， 搖勻，即得。含量測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測 定，記錄，計算含量，結(jié)果見表12。表12水提正交試驗樣品中黃芩苷含測結(jié)果 ⑤試驗樣品中麻黃堿的測定儀器=Agilent 1100高效液相色譜儀；梅特勒-托利多AE電子分析天平 (METTLERT0LED0十萬分之一 )；HS12060D型超聲波清洗器(功率250w ；頻率40Khz)。試藥色譜純甲醇(江蘇漢邦科技有限公司)；色譜純乙腈(江蘇漢邦科技有限公 司)；水(重蒸水)，自制；磷酸(江蘇漢邦科技有限公司)；麻黃堿對照品(中國藥品生物 制品檢定所，批號=241-200102，供含量測定用)；樣品(自制，試驗樣品)。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙 腈0.1%磷酸=9 87為流動相，檢測波長為207nm。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計算應(yīng) 不低于6000。 對照品溶液的制備稱取鹽酸麻黃堿對照品10. 35mg,精密稱定，置IOOmL容量瓶 中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取2mL，置25mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻 度，搖勻，即得每ImL含鹽酸麻黃堿8. 28 μ g的對照品溶液。供試品溶液的制備取試驗樣品約0.5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入 甲醇25mL，稱定重量，超聲處理(功率16W，頻率50kHz) 45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇 補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液lmL，置中性氧化鋁柱(100 200目，1.5g， 內(nèi)徑1cm)上，用50%甲醇洗脫，收集洗脫液約9mL，置IOmL容量瓶中，加磷酸1滴，用50% 甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。含量測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各15μ 、20μ 1，注入液相色 譜儀，測定，記錄，計算含量，結(jié)果見表13。表13水提正交試驗樣品中麻黃堿含測結(jié)果 表14水提醇沉正交試驗結(jié)果 表15水提醇沉正交試驗方差分析表 注F0.05(2，2) = 19.00 Faoi (2，2) = 99. 0從上表結(jié)果分析得知，各因素作用主次為A>B>D>C，D為空白，為誤差來源， 但C因素較D因素變異方差小，故可將C、D兩因素變異均方之和作為該醇沉正交試驗方差 分析的誤差。A因素有顯著性差異，且因素A中Al > A2 > A3，則應(yīng)選擇Al為醇沉工藝條 件參數(shù)；其他B均無顯著性差異，因素B中B3 > B2 > Bi，結(jié)合大生產(chǎn)實際，無顯著性差異 的B因素選擇B2為水提醇沉工藝條件，故選擇醇沉工藝A1B2，即相對密度為1. 1(50°C)的 浸膏，加乙醇使含醇量為70 %，靜置24小時。(2)醇沉工藝驗證根據(jù)選擇醇沉工藝條件A1B2C2，即相對密度為1. 10 (50 °C )的浸膏，加乙醇使含醇量為70%，靜置24小時。據(jù)此條件稱取醇提藥材吉祥草62. 5g、桑白皮(炙)50g、黃芩 37. 5g、浙貝母(粉)37. 5g、葶藶子(炒)37. 5g、天竺黃41. 7g、蛤粉25g、僵蠶(炙)41. 7g、 地龍37. 5g、毛大丁草41. 7g、麻黃37. 5g，共計450g，共3份，按水提條件提取，濾過，濾液濃 縮至相對密度1.10(50°C),加乙醇使含醇量為70 %，靜置24小時，取上清液回收乙醇，濃 縮，干燥，測定樣品中的黃芩苷和麻黃堿的含量，驗證三批，驗證試驗結(jié)果見表16、17。
表16水提醇沉正交驗證樣品含測結(jié)果 可見，驗證試驗結(jié)果與正交結(jié)果相一致，說明醇沉工藝條件基本穩(wěn)定，可作為醇沉 工藝條件。3、水提醇沉濃縮工藝考察(1)樣品的制備稱取醇提藥材吉祥草375g、桑白皮(炙)300g、黃芩225g、浙貝母(粉)225g、 葶藶子(炒)225g、天竺黃250g、蛤粉150g、僵蠶(炙)250g、地龍225g、毛大丁草250g、 麻黃225g，共計2700g，按水提條件提取，濾過，濾液濃縮至相對密度1. 10(50°C )，加乙 醇使含醇量為70%，靜置24小時，取上清液，上清液均分成6等份，回收乙醇，3份減 壓80°C以下濃縮至相對密度1.2(50°C )，另3份常壓濃縮至相對密度1.2(50°C )，減壓 (-0. 06 -0. 08Mpa)80°C以下干燥，得樣品，樣品重量見表18。(2)按醇沉正交試驗測定樣品中黃芩苷及麻黃堿的含量，結(jié)果見表18。表18水提醇沉濃縮工藝結(jié)果 試驗結(jié)果表明，濃縮溫度對水提有效成分含量無顯著影響，結(jié)合大生產(chǎn)實際，濃縮 采用減壓80°C以下濃縮。4、干燥工藝考察(1)醇提干燥工藝考察①樣品的制備稱取醇提藥材吉祥草375g、桑白皮(炙)300g、黃芩225g、浙貝母(粉)225g、葶 藶子(炒)225g、天竺黃250g、蛤粉150g、僵蠶(炙)250g、地龍225g、毛大丁草250g、麻黃 225g，共計2700g，按水提條件提取，濾過，濾液濃縮至相對密度1. 10 (500C )，加乙醇使含醇 量為70%，靜置24小時，取上清液，上清液均分成6等份，回收乙醇，減壓80°C以下濃縮至 相對密度1. 2 (50°C )，取3份于干燥箱中常壓干燥，另取3份減壓(-0. 06 -0. 08Mpa) 80°C 以下干燥，得樣品，樣品重量見表19。②按醇沉正交試驗測定樣品中黃芩苷及麻黃堿的含量，結(jié)果見表19。表19醇提干燥工藝結(jié)果 試驗結(jié)果表明，干燥溫度對水提醇沉干燥樣品中有效成分含量無明顯的影響，而 減壓干燥時間較少，結(jié)合大生產(chǎn)實際，選擇減壓80°C以下干燥。本制劑所得干浸膏為全水提醇沉干浸膏，具有吸濕性強，黏度大等缺點，制備成合 格的膠囊劑需要加入適當?shù)妮o料。根據(jù)文獻研究，目前常用水溶性較好的膠囊賦型劑主要 有微粉硅膠、淀粉、糊精、乳糖等。就成型性及水溶性而言，乳糖優(yōu)于其它兩種輔料，淀粉最 差。但以乳糖為賦形劑，吸濕率明顯高于糊精，且乳糖的價格較貴。針對其吸濕性強，黏度 大的性質(zhì)，輔料選擇微粉硅膠、淀粉。以輔料用量、吸濕率、成型難易、水溶性為指標優(yōu)選輔 料種類。按干浸膏粉輔料=27 5的處方比例分別配制三種不同賦形劑的混合粉置于 密閉的內(nèi)置NaCl的飽和溶液(相對濕度75%)的干燥器中，按下式計算吸濕率，結(jié)果見下 表20。表20輔料與浸膏粉的配伍處方 A、吸濕百分率的測定將底部盛有氯化鈉過飽和溶液的玻璃干燥器放入25°C的 恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫24h，此時干燥器內(nèi)的相對濕度為75%。在已恒重的稱量瓶底部放入厚 約2mm的藥粉，精密稱重后置于氯化鈉過飽和溶液的玻璃干燥器內(nèi)(稱量瓶蓋打開)，于 25°C恒溫培養(yǎng)箱保存，定時稱量，按下式計算吸濕百分率。平行操作3次。 B、休止角的測定采用固定漏斗法。將3只漏斗串聯(lián)并固定于水平放置的坐標紙 上Icm高度處，小心地將不同輔料制成藥粉沿漏斗壁倒入最上的漏斗中，直到最下面漏斗 形成的藥粉圓錐尖端接觸到漏斗口為止，由坐標紙測出圓錐底部的直徑，計算休止角(tga = h/r)，結(jié)果見下表。表中數(shù)據(jù)表明=MMMIim和淀粉作輔料吸濕性較小，流動性較好， 故以微晶纖維素和淀粉為輔料較佳。鑒于微晶纖維素成本較高，淀粉吸濕以后成型效果較 差。故選擇微晶纖維素與淀粉5 2. 5的混合物為輔料，即藥粉與微晶纖維素、淀粉的比例 為 405 50 25。表21不同處方藥粉的吸濕率(η = 3)、休止角 C、臨界相對濕度的測定將制備好的顆粒干燥至恒重后，在恒重的稱量瓶底部放 入厚約2mm的顆粒，精密稱量后置于硫酸和鹽過飽和溶液的干燥器內(nèi)(稱量瓶蓋打開)于 25°C恒溫培養(yǎng)箱保持72h后稱量，計算吸濕率。以吸濕率為縱坐標，相對濕度為橫坐標作 圖，根據(jù)曲線斜率確定。臨界相對濕度為56%。表22硫酸和鹽的過飽和溶液在25°C的相對濕度和吸濕率 D、確定裝量將顆粒裝入0#膠囊200粒，隨機抽20粒稱重，平均質(zhì)量為0. 4805g,
膠囊最后裝量可定為0. 48g。本發(fā)明進行了三批中試研究，三次中式研究投料量分別為2批10倍處方量藥材和 1批20倍處方量藥材，按所定工藝路線進行中試生產(chǎn)，對生產(chǎn)工藝指標進行全面考核，對成 品進行質(zhì)量評定，對各主要有效成分進行跟蹤檢測。三批中試生產(chǎn)結(jié)果表明，本產(chǎn)品各項技 術(shù)參數(shù)與工藝優(yōu)選條件相同，且工藝條件穩(wěn)定，說明工藝可行，適合批量生產(chǎn)。三次中式研究投料量分別為90kg、45kg、45kg，按所定工藝路線條件進行中試生 產(chǎn)，得中間體分別為8. 7kg、4. 40kg、4. 35kg，輔料用量分別為1. Okg,0. 50kg、0. 50kg，成品 率分別98. 2%、97. 7%、97. 1%0三批中試的鹽酸麻黃堿含量分別為1. 63mg/粒、1. 70mg/粒、1. 59mg粒；黃芩苷含量分別為38. 15mg/粒、37. 9Img/粒、38. 60mg/粒。三批中試測定 結(jié)果與小試研究結(jié)果基本一致，說明該工藝條件穩(wěn)定，適合批量生產(chǎn)。
二、藥效學試驗1、實驗材料1.1 藥物1. 1. 1受試藥物吉貝咳喘膠囊(本發(fā)明膠囊制劑)，貴陽中醫(yī)學院提供，批號 050114。1.1. 2陽性藥物①治療慢性支氣管炎及肺氣腫模型的陽性藥“咳喘順丸”，廣州陳李濟藥廠，批 號JMS03002，每克含生藥量為1. 5g。一次5g，一日3次。功能主治健脾燥濕，宣肺平喘， 化痰止咳。用于支氣炎，支氣管哮喘，肺氣腫所致的氣喘胸悶，咳嗽多痰，按成人體重60kg 計，每日用量為0. 25g生藥/kg。②鎮(zhèn)咳作用的陽性藥“咳必清”，西南藥業(yè)股份有限公司，批號66040034。③祛痰作用的陽性藥物“氯化銨”，上海光鏵科技有限公司，批號030306。④平喘作用的陽性藥“氨茶堿”太原市振興制藥有限責任公司，產(chǎn)品批號 20050201，生產(chǎn)日期2005年2月24日，有效期至2007年1月。⑤抗炎作用的陽性藥物“布絡(luò)芬片”，湖北百科享迪藥業(yè)有限公司，批號 041110，生產(chǎn)日期041110，有效期至2006. 10。⑥增強機體免疫功能的陽性藥物“甘露聚糖肽片”，成都利爾藥業(yè)有限公司，批 號041204，生產(chǎn)日期2004年12月8日，有效期至2006年11月。⑦體外抗菌作用的陽性藥“雙黃連口服液”哈高科白天鵝藥業(yè)集團有限公司，批 準文號Z23021566，產(chǎn)品批號:041125。⑧抗病毒作用的陽性藥物“病毒唑”，100mg/ml，江蘇省江陰制藥廠生產(chǎn)，批號 970418，蘇衛(wèi)藥準字(1990)第347005號。1.1. 3 試劑①脂多糖(LPS) =Sigma公司生產(chǎn)，規(guī)格10mg/小瓶，保存2 8°C。②III型前膠原放射免疫分析試劑盒(平衡法)上海海研醫(yī)學生物技術(shù)中心，批 號:20050501ο③酚紅上海試劑三廠，批號930919。④磷酸組胺上海伯奧生物科技有限公司，批號0505115。⑤DNCB 中國上海試劑一廠，批號2000-01-01。⑥丙酮成都鴻鶴化學試劑廠，批號20010828。⑦伊文思藍，F(xiàn)luka公司。1.1. 4 儀器ABX 60血細胞計數(shù)儀法國制造。BS200S型電子天平上海良平儀器儀表有限公司生產(chǎn)。01ympus-BX50型光學顯微鏡日本Olympus公司制造。MIAS2000型計算機圖像工作系統(tǒng)四川大學智勝軟件股份有限公司。800B離心機上海安亭科學儀器廠。
980-A型超聲霧化器，上海天緣醫(yī)用生物有限公司。722S型分光光度計，上海棱光技術(shù)有限公司。HX-200動物呼吸機成都泰盟科技有限公司。BL-410生物機能實驗系統(tǒng)成都泰盟科技有限公司。JY601型電子天平，上海良平儀器儀表有限公司。
96孔細胞培養(yǎng)板(美國Corning公司)，RPMI1640培養(yǎng)液(美國Gibco公司)，受 精雞胚(四川大學實驗動物中心)。1.2 動物①大鼠一級，雄性，12周齡，體重180_220g，由成都中醫(yī)藥大學實驗動物研究中 心提供。動物質(zhì)量合格證:SCXR(川)2004-11。②小鼠一級，體重18-22g，14_16g，早$兼?zhèn)?，由成都中醫(yī)藥大學實驗動物研究 中心提供，動物質(zhì)量合格證SCXR(川)2004-11。③豚鼠早$各半，體重150_170g，由成都中醫(yī)藥大學實驗動物研究中心提供。動 物質(zhì)量合格證:SCXR(川)2004-11。④豚鼠英國種，一級，早$各半，體重300_350g，由四川省實驗動物專委會養(yǎng)殖 場提供。動物質(zhì)量合格證川實動管質(zhì)第2004-14號。1. 3動物飼料由成都中醫(yī)藥大學實驗動物研究中心提供。1. 4實驗環(huán)境條件一級，設(shè)施合格證四川省實驗動物管理委員會實驗動物設(shè)施 條件合格證川實動管第2003-015號。1.5實驗場地成都中醫(yī)藥大學國家中醫(yī)藥管理局三級中藥藥理實驗室，證書登 記編號TCM-03-043，室內(nèi)溫度控制在18-22°C，相對濕度60-70%。1. 6大鼠、豚鼠劑量設(shè)置與臨床倍數(shù)關(guān)系大鼠、豚鼠試驗應(yīng)用劑量1. 4,0. 7,0. 35g/kg/d，即分別為臨床成人日用劑量的14 倍、7倍、3. 5倍，為本發(fā)明制劑高、中、低三組劑量組，成人體重按60Kg計算即臨床成人日用 劑量為0. lg/kg。陽性對照組0. 25g/kg(咳喘順丸組)。為臨床擬用藥量的7倍。模型對照組生理鹽水灌胃(ig)，容量均為lml/100g體重。空白對照組生理鹽水灌胃。1. 7小鼠劑量設(shè)置與臨床倍數(shù)關(guān)系小鼠試驗應(yīng)用劑量為1. 8,0. 9,0. 45g/kg/d即分別為臨床成人日用劑量的18倍、9
倍、4. 5倍，為本發(fā)明制劑高、中、低三個劑量組的實驗劑量。陽性藥物劑量均為臨床用量9倍。2、實驗方法及結(jié)果模型一對大鼠慢性支氣管炎與肺氣腫模型的治療作用，《用脂多糖加煙熏復(fù)制大 鼠慢性支氣管炎與肺氣腫模型》。
模型二 鎮(zhèn)咳作用試驗小鼠噴霧濃氨水引咳法取小鼠50只，雌雄各半，體重
18-22g，隨機分為5組，每組10只，分為本發(fā)明制劑高、中、低三個劑量組，及陽性藥物組和空白對照組。
模型三祛痰作用(小鼠氣管酚紅法)。取小鼠50只，雌雄各半，體重18_22g，隨 機分為5組，每組10只。
模型四平喘作用米用對磷酸組胺和氯化乙酰膽堿混合物引起整體豚鼠哮喘反 應(yīng)的潛伏期，以及哮喘程度，動物死亡時間及死亡動物數(shù)的實驗。取健康合格豚鼠50只，體 重150-170g/只，隨機分為5組，每組10只。
模型五本發(fā)明制劑對豚鼠支氣管平滑肌痙攣收縮的解痙平喘作用(肺溢流法)。
模型六對二甲苯致小鼠耳廓炎癥腫脹試驗。 模型七小鼠腹腔毛細血管通透性試驗。 模型八對小鼠棉球肉芽腫形成實驗的影響。 I炎癥作用。模型九本發(fā)明制劑對小鼠溶血素抗體生成的影響。
正常小鼠受雞紅細胞免疫后，既可產(chǎn)生抗雞紅細胞抗體(溶 血素)，這種抗體在體外，與雞紅細胞補體一起蘊育即可使雞紅細 M 胞溶解，釋放出血紅蛋白，是溶液顯紅色，顏色的深淺，反應(yīng)紅 細胞溶出量的多少。而紅細胞溶血與血清中的抗體含量有關(guān)。因 ⑩ 此，測定其上清液的光密度，則可間接判斷血清中抗體形成的數(shù) 量。光密度越大，則說抗體產(chǎn)生量越多，反之亦然。雞紅細胞的 1;| 種族差異及結(jié)構(gòu)組成與哺乳動物的差異比錦羊羊紅細胞大。根據(jù)免疫理論，它是更強的免疫原，且它價廉易得。 __通過本實驗可以考查受試藥物的免疫作用。_
試驗結(jié)果表明小鼠接受雞紅細胞免疫后，克產(chǎn)生雞紅細胞 抗體(溶血素)。本發(fā)明制劑連續(xù)給藥10天，使小鼠血清溶血素 ^ 含量升高，與空白組相比，本發(fā)明制劑高、中、低劑量組，使小 J 鼠血清溶血素含量的增加率分別為34. 52% (P < 0. 01)，20. 03% J( P <0.05)，12.50% (P >0.05)。表明本發(fā)明制劑高、中、低劑
^ 量組，均能增高小鼠血清抗體的生成，在體液免疫方面，有顯著 ^ 租金作用，即增強小鼠體液免疫功能。
陽性藥物《甘露聚糖肽》與空白組相比，具有相似作用，起 __增加率為39. 68% (P< 0. 01)。_模型十對DNCB(2，4_ 二硝基氯苯)致小鼠遲發(fā)型皮膚超敏反應(yīng)的影響。
2，4-二硝基氯苯(DNCB)是一種，小分子半抗原，(致敏原)與動物 . 皮膚接觸后，可與皮膚蛋白(角蛋白和膠原蛋白)結(jié)合成全抗原， 可刺激T淋巴細胞轉(zhuǎn)化，增殖至致敏淋巴細胞，經(jīng)一定時間后(一 般4一7天)再次將該抗原，攻擊皮膚，即可致攻擊部位遲發(fā)型超敏 反應(yīng)的發(fā)生，局部僅產(chǎn)生DTH反應(yīng)，一般于抗原攻擊后24— 1；' 48h，DTH反應(yīng)達高峰，在此時測定其皮膚的腫脹度，(用打孔器于同
__一部位打圓形皮膚片，丙酮處理后，用分光光度計測定QD值。
本發(fā)明制劑高、中、低劑量組，與空白組相比較對促進延遲型 ^ 皮膚超敏反應(yīng)的增加率分別為61.53% (P <0.01)，41. %02 (P< 5 0.01)，
5表明本發(fā)明制劑高、中、低劑量對細胞免疫具有顯著的促進
^ 作用，增強小鼠細胞免疫功能。
^ 陽性藥《甘露聚糖肽片》具有相似作用，其增加率為74. 35% __(P< 0. 01)。_模型十一對小鼠免疫器官重量的影響。
模型十二 抗菌作用(體外抗菌實驗)。本實驗以試管進行試驗，以MH液體培養(yǎng)基二倍稀釋法配制藥物溶液濃度，共7個 濃度，從1/2 1/64稀釋。實驗結(jié)果實驗顯示本發(fā)明制劑對肺炎鏈球菌和卡他雙球菌有較好的抑菌作用，共 有效抑菌濃度為31. 2mg/ml，對金黃色葡萄球菌有效抑菌濃度為15. 6mg/ml ；對肺炎球菌， 金黃色葡萄球菌，卡他雙球菌的殺菌濃度為31. 2mg/ml。模型十三抗病毒作用(1)體外流感病毒①取增殖活化的流感病毒，作雞紅細胞血凝試驗，滴定其血凝效價為1比1280。②取流感病毒1ml，與不同濃度(100mg/ml，50mg/ml，25mg/ml)的本發(fā)明膠囊藥溶 液Iml溶合后作用Ih。③注入雞胚尿囊腔后，孵育48小時，取尿束液。再作雞紅細胞血凝試驗，滴定流感病毒的血凝效價。實驗結(jié)果通過體外抗病毒實驗表明，本發(fā)明制劑藥液抑制流感病毒A/pk/8/20/ Hmi株的有效濃度為100mg/ml，抑制呼吸道合抱病毒的有效濃度為1.66mg/ml。三、急性毒性試驗(見下表)急性毒性試驗 四、長期毒性試驗(見下表)長期毒性試驗總結(jié)受試藥物 《吉貝咳喘膠囊》(本發(fā)明膠囊制劑)0.5g/粒貴陽中醫(yī)學院提供 受試動物i鼠早6各半，8-9周齡，體重90—100g 給藥途徑I胃給藥，與臨床給藥途徑相同(ig)。 分組及劑本發(fā)明制劑高劑量組9g/kg/d;相當于63.0 g生藥/kg/d 量設(shè)置 本發(fā)明制劑屮劑量組4. 5 g/kg/d；相當于31. 5 g生藥/kg/d 本發(fā)明制劑低劑量組2. 25g/kg/d;相當于15. 8g生藥/kg/d。
給藥12周時，與給藥前相比，雄性空白對照組平均增長121. 5g (P>0. 05) 給藥24周時，與給藥前相比，雄性空白對照組平均增長253. 6g (P>0. 05) 給藥4周時，與給藥前相比，雄性空白對照組平均增長311. 8g (P>0. 05) ②對雌性大鼠生長(體重增長)的影響
給藥12周時，與給藥前相比，雌性空白對照組平均增長111.5g (P>0.05) 給藥24周時，與給藥前相比，雌性空白對照組平均增長235.9g (P>0.05) 給藥4周時，與給藥前相比，雌性空白對照組平均增長290.0g (P>0.05)
對雄性大鼠 給藥12周時， 給藥24周吋， 給藥4周時， 對雌性大鼠 給藥12周時， 給藥24周時，
給藥4周時，與給藥前相比，雌性空白對照組攝食量平均增加51. 96g
與給藥前相比， 與給藥前相比， 與給藥前相比，
與給藥前相比， 與給藥前相比，
雄性空白對照組攝食量平均增加31. 9g； 雄性空白對照組攝食量平均增加44. 55g； 雄性空白對照組攝食量平均增加56. 57g
雌性空白對照組攝食量平均增加15. 90g； 雌性空白對照組攝食量平均增加44. 73g；
血液檢查結(jié)果表明本發(fā)明制劑高、 周觀察各項指標無明顯差異。
中、低劑量組給藥12周，24周及停藥4
對大鼠血經(jīng)檢測血漬中生化指標本發(fā)明制劑給藥12周，24周及停藥4周后觀察，其
29 五、分析與評價1、有效性分析與評價試驗中按照成人的臨床推薦用量為0. 5g/粒、4粒/次、3次/日的用量折算，大鼠 分別以臨床擬用量14倍、7倍、3. 5倍，小鼠分別以18、9、4. 5倍，高、中、低三組劑量組的劑 量，進行實驗觀察。在下列動物模型中，其結(jié)果為(1)在以“脂多糖加煙熏復(fù)制大鼠慢性支氣管炎與肺氣腫模型”的實驗顯示①本發(fā)明制劑可減少大鼠肺部炎癥細胞的滲出，降低肺部灌洗液中的WBC、LYM、 MON、GRA 數(shù)目。②降低大鼠血清中III型前膠原(pcIII)含量。③減少氣管部位炎癥細胞數(shù)目降低炎癥細胞區(qū)域光密度、積分光密度、黑度。④降低大鼠支氣管部位粘膜下層平均粘液腺面積、粘液腺最大周長和粘液腺最大直徑。⑤增加大鼠肺部平均肺泡數(shù)目、降低肺泡最大面積、肺泡最大周長和肺泡最大直 徑，抑制肺泡增大。⑥降低大鼠右心室肥大指數(shù)(RVHR)。⑦改善大鼠氣管肺組織病理組織形態(tài)學變化(2)鎮(zhèn)咳作用的實驗表明本發(fā)明制劑能顯著延長氨水引起小鼠咳嗽反應(yīng)的潛伏期 和減少小鼠咳嗽的次數(shù)。(3)祛痰作用的實驗顯示能顯著增加小鼠支氣管內(nèi)酚紅排泌量。(4)平喘作用的實驗顯示能顯著延長磷酸組胺和氯化乙酰膽堿混合物引起豚鼠 哮喘反應(yīng)的潛伏期和減輕豚鼠哮喘反應(yīng)癥狀程度。肺溢流量試驗對豚鼠支氣管痙攣已有顯 著的松弛作用。(5)抗炎作用的實驗顯示對急性滲出性炎癥和慢性增生性炎癥均具有抑制作 用。抑制二甲苯所致小鼠耳廓炎性腫脹，抑制小鼠腹腔毛細血管通透性增高和抑制小鼠棉 球肉芽腫的形成。(6)免疫功能實驗顯示能增強體液免疫功能和細胞免疫功能，促進溶血素生成 內(nèi)抗體，促進二硝基氯苯(DHCB)致小鼠遲發(fā)型皮膚超敏反應(yīng)并增加幼年小鼠脾臟和胸腺
的重量。
(7)抗菌作用實驗顯示對肺炎鏈球菌，卡塔雙球菌，金黃色葡萄球菌有較好的抑 菌作用和殺菌作用。(8)抗病毒試驗顯示能抑制流感病毒A/PK/8/20/Hmi株的藥物濃度為lOOmg/ ml，抑制呼吸道合胞病毒的有效抑制濃度為1. 66mg/ml綜上所述本發(fā)明制劑對支氣管炎與肺氣腫動物模型的實驗，和組織形態(tài)病理變化 具有多方面治療作用，并具有止咳、化痰、平喘和抗炎作用。其機理可以認為是本發(fā)明中藥 通過抗菌和抗病毒抑制致病因素，提高機體免疫功能，增強體質(zhì)而固本，故對機慢性支氣管 炎具有較好的療效。同時還體現(xiàn)了本發(fā)明中藥在中醫(yī)藥理論中的“清熱宣肺，化痰散結(jié)，平 喘止咳”功能與其作用機制的一致性。使本發(fā)明制劑在臨床使用中提供使用者以“病癥”相 結(jié)合的用藥準確性，使之合理的服務(wù)于患者，體現(xiàn)中藥的以人為本，辨證施治的基本原則。2、安全性分析與評價(1)從本發(fā)明制劑急性毒性試驗顯示以昆明種老鼠灌胃給藥28. Og/kg ；(以最大 濃度0. 35g/ml，給藥容量0. 8ml/20g體重相當于196. 00g生藥/kg)分兩次灌胃(ig)相 當臨床擬用量的280倍。連續(xù)觀察14天。給藥后小鼠發(fā)育健康，肌肉豐滿，被毛濃密而有 光澤，緊貼其身，眼睛明亮且光滑，無異樣分泌物，肛周潔凈，攝食正常，四肢健壯，自發(fā)活動 正常，體重逐漸增加。與空白對照組相比較，無明顯差異。14天內(nèi)未見動物死亡及毒副反 應(yīng)。實驗結(jié)束時肉眼尸解未見明顯病理改變。根據(jù)文獻報道(徐淑云等主編《藥理試驗示法學》北京人名衛(wèi)生出版社，1982 412) “一般認為按體重計算小鼠的最大耐受量相當人用量的100倍以上則較為安全，可以 提高臨床試用”而本試驗為臨床擬用量的280倍，可認為本發(fā)明中藥制劑對動物的急性毒性 甚小，安全，可以提高臨床試用。(2)從本發(fā)明制劑長期毒性試驗顯示高、中、低劑量組(9g/kg/d、4.5g/kg/d、2. 25g/kg/d 分別相當于 63. 0g 生藥 /kg/d、31. 5g 生藥/kg/d、15.8g生/kg/d)灌胃給藥，連續(xù)24周。給藥3個月，各組隨機抽取活殺10只 大鼠(雌雄各半，第一批次)；給藥6個月各組隨機抽取活殺14只大鼠(雌雄各半，第二批 次)；余下每組6只大鼠停藥觀察4周后再行活殺(雌雄各3只，第三批次)。試驗前和試 驗期間，每周稱量大鼠體重一次，每周稱量大鼠攝食量一次?；顨⒎椒ㄊ菑拇笫蟾构蓽削耐?靜脈放血，收集血液，進行血液學和血液生化學檢查；將大鼠處死后取重要器官稱重(計算 臟器重量系數(shù))和進行病理形態(tài)學檢查。其試驗結(jié)果顯示①本發(fā)明制劑高、中、低三組劑量大鼠給藥前和給藥后24周內(nèi)以及停藥觀察4周 后均未見大鼠死亡。大鼠體外特征，行為活動，皮毛色澤，均與空白對照相似?？?、眼、鼻耳 生殖器等均無異常分泌物，大小便等未見異常。呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)未見異常。②對大鼠生長(體重增長)的影響顯示本發(fā)明制劑高、中、低三組劑量大鼠給藥 后12周、24周內(nèi)以及停藥觀察4周過程中各劑量組(雌雄各半)大鼠生長(體重增長)與 空白對照組均無顯著差異。③對大鼠攝食量(飼料消耗量)的影響顯示本發(fā)明制劑高、中、低三組劑量大鼠 給藥前和給藥后12周、24周內(nèi)以及停藥觀察4周過程中各劑量組(雌雄各半)大鼠與空白 對照組均無顯著差異。
31
④對大鼠血液細胞學的檢測中，顯示各劑量組給藥后12周、24周內(nèi)以及停藥觀察 4周過程中，大鼠其血液細胞各項指標無明顯差異。⑤對大鼠血液生化學的影響，經(jīng)檢測血液中生化指標顯示高、中、低劑量組的血液 生化各項指標也未出現(xiàn)異常。⑥對大鼠重要臟器重量系數(shù)的檢測中，大鼠的腦、心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、 睪丸、附睪、子宮及卵巢等臟器重量系數(shù)在高、中、低劑量組(雌雄各半)給藥12周，24周及 停藥4周后觀察均未出現(xiàn)異常。⑦在病理形態(tài)學檢測中顯示高、中、低三個劑量組大鼠給藥后24周內(nèi)以及停藥 觀察4周后對心、肺等28種器官組織均無顯著的病理學改變。由此可見，本發(fā)明制劑高、中、低三組劑量，經(jīng)長期給藥(24周)和停藥觀察4周， 對大鼠的行為活動、生長(體重增長)、攝食量(飼料消耗量)、血液學、血液生化學、臟器重 量系數(shù)、器官組織形態(tài)學等均無顯著毒性影響，提示了臨床使用安全。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明以至少六味中草藥組方精制而成，具有清熱宣肺、化痰散 結(jié)、平喘止咳之功效，對支氣管炎、肺氣腫、支氣管哮喘類病癥有良好的療效，且不易復(fù)發(fā)， 無明顯毒副作用和不良反應(yīng)；所提供的膠囊劑不但改善了 口感，利于服用，易為患者接受， 同時也方便了患者攜帶和儲存。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的說明實施例1 稱取吉祥草625g、黃芩375g、浙貝母375g、蛤殼250g、毛大丁草417g、麻 黃375g、桑白皮(炙)500g、葶藶子(炙)375g、天竺黃417g、僵蠶(炙)417g和地龍375g。 以上十一味，加水煎煮3次，第一次加8倍量水，第二、三次各加6倍量水，每次煎煮1小時， 濾過，合并濾液；濾液濃縮至相對密度1. 1(50°C )，加乙醇使含醇量為70%，靜置24小時， 吸取上清液，濾過，濾液回收乙醇、減壓濃縮，80°C以下減壓干燥，得干膏，粉碎過80目篩， 加淀粉25g、微晶纖維素50g，混勻，顆粒裝入膠囊，即得膠囊劑。實施例2 稱取吉祥草600g、黃芩350g、浙貝母350g、蛤殼225g、毛大丁草400g、麻 黃350g、炙桑白皮475g、炙葶藶子350g、天竺黃400g、炙僵蠶400g和地龍350g。Wii 味，加水煎煮3次，第一次加8倍水，第二、三次各加6倍量水，每次煎煮1小時，濾過，合并濾 液；濾液濃縮至相對密度1. 1(50°C )，加乙醇使含醇量為70%，靜置24小時，吸取上清液， 濾過，濾液回收乙醇、減壓濃縮，80°C以下減壓干燥，得干膏，粉碎過80目篩，加入適量蔗糖 /糊精、矯味劑和甜味劑混合均勻，用適量水或乙醇制成軟材，過篩制粒，干燥，整粒，分裝， 即得顆粒劑。實施例3 稱取吉祥草650g、黃芩400g、浙貝母400g、蛤殼275g、毛大丁草450g、麻 黃400g、桑白皮(炙)525g、葶藶子(炙)400g、天竺黃450g、僵蠶(炙)450g和地龍400g。 以上十一味，加水煎煮3次，第一次加8倍水，第二、三次各加6倍量水，每次煎煮1小時，濾 過，合并濾液；濾液濃縮至相對密度1. 1(50°C )，加乙醇使含醇量為70%，靜置24小時，吸 取上清液，濾過，濾液回收乙醇、減壓濃縮，80°C以下減壓干燥，得干膏，粉碎過80目篩，以 聚乙二醇6000為基質(zhì)，二甲基硅油作冷 凝液，滴制成丸，即得滴丸劑。實施例4 稱取吉祥草125g、黃芩75g、浙貝母75g、蛤殼50g、毛大丁草83.4g、麻黃75g、炙桑白皮100g、炙葶藶子75g、天竺黃83. 4g、炙僵蠶83. 4g和地龍75g。將這i^一味藥材加水煎煮3次，每次煎煮1小時，濾過，合并濾液，濃縮得浸膏；在浸膏中加乙醇，靜置，吸 取上清液，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮，最后減壓干燥得干膏，干膏粉碎過篩，加入片劑 常用輔料，壓制成片，即得片劑。實施例5 稱取吉祥草650g、黃芩350g、浙貝母350g、蛤殼275g、毛大丁草400g、麻 黃350g、桑白皮(炙)525g、葶藶子(炙)350g、天竺黃400g、僵蠶(炙)400g和地龍350g。將 這十一味藥材加水煎煮3次，第一次加§倍量水，第二、三次各加β倍量水，每次煎煮1小時， 濾過，合并濾液；濾液濃縮至相對密度為ι.的浸膏，往浸膏中加入乙醇使含醇量為 70%,靜置24小時，吸取上清液，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1. 2 (50^)， 加入適量羧甲基纖維素鈉、糖精鈉、矯味劑、防腐劑和純化水調(diào)整密度至1. 15坦￡^)，冷 卻，滅菌，分裝，即得糖漿劑。實施例6 稱取吉祥草650g、黃芩350g、浙貝母350g、蛤殼275g、毛大丁草400g、麻 黃350g、桑白皮(炙)525g、葶藶子(炙)350g、天竺黃400g和地龍350g，按實施例1_5中 所述方法制備成各種劑型。實施例7 稱取吉祥草650g、黃芩350g、浙貝母350g、蛤殼275g、毛大丁草400g、麻 黃350g、桑白皮(炙)525g、葶藶子(炙)350g和地龍350g，按實施例1-5中所述方法制備 成各種劑型。實施例8 稱取吉祥草650g、黃芩350g、浙貝母350g、蛤殼275g、毛大丁草400g、麻 黃350g、桑白皮(炙)525g和地龍350g，按實施例1_5中所述方法制備成各種劑型。實施例9 稱取吉祥草650g、黃芩350g、浙貝母350g、毛大丁草400g、麻黃350g、天 竺黃400g、僵蠶(炙)400g和地龍350g，按實施例1-5中所述方法制備成各種劑型。實施例10 稱取吉祥草650g、黃芩350g、浙貝母350g、毛大丁草400g、麻黃350g、 桑白皮(炙)525g和地龍350g，按實施例1-5中所述方法制備成各種劑型。實施例11 稱取吉祥草650g、黃芩350g、浙貝母350g、蛤殼275g、毛大丁草400g、 麻黃350g和地龍350g，按實施例1-5中所述方法制備成各種劑型。實施例12 稱取吉祥草650g、黃芩350g、浙貝母350g、毛大丁草400g、麻黃350g和 地龍350g，按實施例1-5中所述方法制備成各種劑型。
權(quán)利要求
一種治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，它是以吉祥草600～650份、黃芩350～400份、浙貝母350～400份、毛大丁草400～450份、麻黃350～400份和地龍350～400份為主要原料藥制成的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，它是 以吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、毛大丁草417份、麻黃375份和地龍375份為 原料藥制成的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，原料 藥還有蛤殼225 275份。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，它是 以吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、蛤殼250份、毛大丁草417份、麻黃375份和 地龍375份為原料藥制成的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，原料 藥還有炙桑白皮475 525份。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，它是 以吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、毛大丁草417份、麻黃375份、炙桑白皮500 份和地龍375份為原料藥制成的。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，原料 藥還有天竺黃400 450份、炙僵蠶400 450份。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，它是 以吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、毛大丁草417份、麻黃375份、天竺黃417份、 炙僵蠶417份和地龍375份為原料藥制成的。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，原料 藥還有蛤殼225 275份、炙桑白皮475 525份。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，它 是以吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、蛤殼250份、毛大丁草417份、麻黃375份、 炙桑白皮500份和地龍375份為原料藥制成的。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，原 料藥還有炙葶藶子350 400份。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，它 是以吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、蛤殼250份、毛大丁草417份、麻黃375份、 炙桑白皮500份、炙葶藶子375份和地龍375份為原料藥制成的。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，原 料藥還有天竺黃400 450份。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，它 是以吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、蛤殼250份、毛大丁草417份、麻黃375份、 炙桑白皮500份、炙葶藶子375份、天竺黃417份和地龍375份為原料藥制成的。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于原料藥還有炙僵蠶 400 450 份。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于按照重量份計算，它是以吉祥草625份、黃芩375份、浙貝母375份、蛤殼250份、毛大丁草417份、麻黃375份、 炙桑白皮500份、炙葶藶子375份、天竺黃417份、炙僵蠶417份和地龍375份為原料藥制 成的。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-16中任一項所述的治療咳喘病的中藥制劑，其特征在于所述的 中藥制劑為膠囊劑。
18.如權(quán)利要求1-16中任一項所述的治療咳喘病的中藥制劑的制備方法，其特征在 于按比例稱取全部原料藥，加水煎煮3次，每次煎煮1小時，濾過，合并濾液，濃縮得浸膏； 在浸膏中加乙醇，靜置，吸取上清液，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮，g減壓干燥得干膏，干 膏粉碎過篩，加入相應(yīng)的輔料，制成各種不同的制劑。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的治療咳喘病的中藥制劑的制備方法，其特征在于按比例 稱取全部原料藥材，加水煎煮3次，第一次加§倍量水，第二、三次各加fi倍量水，每次煎煮 1小時，濾過，合并濾液；濾液濃縮至相對密度為1. 1的浸膏，往浸膏中加入乙醇使含醇 量為ΙΜ ，靜置24小時，吸取上清液，濾過,濾液回收乙醇,減壓濃縮,80 °C以下減壓干燥, 得干膏，干膏粉碎過80目篩，加入相應(yīng)的輔料，制成各種不同的制劑。
20.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的治療咳喘病的中藥制劑的制備方法，其特征在于取 粉碎過篩后的干膏粉，加入淀粉25重量份和微晶纖維素50重量份，混勻，顆粒裝入膠囊，即 得膠囊劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療咳喘病的中藥制劑及其制備方法，按照重量份計算，它是以吉祥草600～650份、黃芩350～400份、浙貝母350～400份、毛大丁草400～450份、麻黃350～400份和地龍350～400份為主要原料藥制成的。本發(fā)明以至少六味中草藥組方精制而成，具有清熱宣肺、化痰散結(jié)、平喘止咳之功效，對支氣管炎、肺氣腫、支氣管哮喘類病癥有良好的療效，且不易復(fù)發(fā)，無明顯毒副作用和不良反應(yīng)。
文檔編號A61K35/64GK101869656SQ20101023153
公開日2010年10月27日 申請日期2010年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月20日
發(fā)明者葛正行, 靳鳳云, 韓云霞 申請人:貴陽中醫(yī)學院