專利名稱：2-氯吡啶衍生物及其制法與在制備抗肝癌藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及2-氯吡啶衍生物及其制備方法與在制備抗肝癌藥物中的應(yīng)用。
技術(shù)背景。肝癌(h印atocellular carcinoma，HCC)是指肝細胞或肝內(nèi)膽管細胞發(fā)生的癌，是 惡性程度及轉(zhuǎn)移率很高的腫瘤之一，并且是是當今世界上最具威脅的疾病之一。目前有幾 種治療肝癌的藥物，但它們都有嚴重的副作用，因此限制了其臨床應(yīng)用。由于缺乏治療肝癌 的有效藥物，發(fā)現(xiàn)有效的具有抗肝癌細胞增殖活性的新化合物是一個很迫切的任務(wù)。2-氯-5-氯甲基吡啶(2-chloro-5-chloromethylpyridine，簡稱 CCMP)，純品為淺 黃色晶體，熔點33-35°C，沸點75-85°C /133. 322Pa，通過它的烷基化反應(yīng)、與雜環(huán)的縮合反 應(yīng)以及氨化后的進一步反應(yīng)，可以制備一系列新的具有好的生物活性的先導(dǎo)化合物，是合 成農(nóng)藥和醫(yī)藥的重要中間體。1，3，4_噁二唑雜環(huán)化合物具有抗炎、抗菌、抗驚厥、抗腫瘤等生物活性。據(jù)文獻報 道，在具有雜環(huán)化合物的分子中引入硫原子供電原子可以顯著增加受體與配體形成復(fù)合物 的親和力，有利于提高生物活性。噁二唑硫醇環(huán)外有-SH，它可以作為活潑的親核試劑和各種親電試劑發(fā)生反應(yīng)生 成硫醚，硫醚可進一步轉(zhuǎn)化為非常有用的另一種噁二唑硫酮衍生物，由于其硫酮結(jié)構(gòu)的存 在，3-位活潑的NH還可以和醛、仲胺或伯胺的鹽酸鹽縮合，生成更具廣譜生物活性的雜環(huán) Mannich堿。因此，含各種取代基的噁二唑硫醚的合成，迄今仍方興未艾。本發(fā)明將2-氯吡啶分子中引入1，3，4_噁二唑雜環(huán)，制備的2-氯吡啶衍生物，對 人肝癌細胞(Hep-G2)生長有明顯的抑制作用，因此2-氯吡啶衍生物作為很有潛力的抗肝 癌藥物的前景十分值得關(guān)注。隨著對2-氯吡啶類藥物研究的不斷深入，在對其抗腫瘤作用 機制不斷了解的基礎(chǔ)上進行有效的結(jié)構(gòu)改造與修飾和分子設(shè)計，將會有越來越多的高效、 低毒的2-氯吡啶類抗肝癌藥物用于臨床，造福人類。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類2-氯吡啶衍生物以及它們的制備方法與用途。本發(fā)明的技術(shù)方案如下一類2-氯吡啶衍生物，其特征是它有如下通式 式中R為
3 一種制備上述的2_氯吡啶衍生物的方法，其特征是它由下列步驟組成步驟1.將按通法制備的2謹ol 5-取代-2-巰基-1，3，4-噁二唑，2謹olNaOH，適 量乙腈加入到IOOml圓底燒瓶中，加熱攪拌溶解；步驟2.用恒壓滴液漏斗滴加5ml 2_氯_5_氯甲基吡啶的乙腈溶液(含2mmol，即 0. 324g 2-氯-5-氯甲基吡啶)，回流8-24h，薄層色譜(TLC)跟蹤反應(yīng)；步驟3.冷卻至室溫，減壓蒸除溶劑，用EtOAC溶解，水洗，飽和食鹽水洗；步驟4.有機相用無水Na2SO4干燥，過濾，減壓蒸除EtOAC，得粗產(chǎn)物；步驟5.將步驟4得到的粗產(chǎn)物重結(jié)晶得到本發(fā)明的2-氯吡啶衍生物。本發(fā)明的2-氯吡啶衍生物對人肝癌細胞0fep_G2)生長有明顯的抑制作用，因此 本發(fā)明的2-氯吡啶衍生物可以應(yīng)用于制備抗肝癌藥物。
具體實施例方式通過以下實施例進一步詳細說明本發(fā)明，但應(yīng)注意本發(fā)明的范圍并不受這些實施 例的任何限制。實施例一 2_氯-5-[5-(2-甲基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化 合物1)的制備 鄰甲基苯甲酸在濃硫酸催化作用下進行酯化反應(yīng)，得到鄰甲基苯甲酸乙酯。得到的芳香酸酯溶于適量無水乙醇，加入稍過量的85%的水合胼，攪拌下回流8_12h。減壓蒸除 溶劑，然后加水，待固體析出后，過濾并用水洗，乙醇重結(jié)晶，得到取代的酰胼。將0.02mol 酰胼，0. 02mol KOH溶于適量95%乙醇后，再慢慢滴加稍過量的CS2攪拌回流至無H2S氣體 產(chǎn)生為止，反應(yīng)終止后蒸除多余乙醇，倒入冷水中，用稀鹽酸調(diào)PH值至5-6，產(chǎn)生大量沉淀， 抽濾，水洗，晾干，用50%乙醇重結(jié)晶得到2-取代-5-巰基-1，3，4-噁二唑(本實施例得 到2- (2-甲苯基)-5-巰基-1，3，4-噁二唑)。將2mmol 2-取代-5-巰基-1，3，4-噁二唑， 2mmOlNa0H，適量乙腈加入到IOOml圓底燒瓶中，加熱溶解，滴加5ml 2-氯-5-氯甲基吡啶 的乙腈溶液(含2mmol，即0. 324g 2-氯-5-氯甲基吡啶)，回流8_24h，TLC跟蹤反應(yīng)。冷卻 至室溫，減壓蒸除溶劑，用EtOAC，先用水洗滌，然后用飽和食鹽水洗。有機相用無水Na2SO4 干燥，過濾，減壓蒸除EtOAC，重結(jié)晶得目標化合物。白色固體，產(chǎn)率65.8%，m. p. 80-810C51H NMR (300MHz, DMS0_d6) δ :2· 55(s，3H)，4· 59(s，2H)，7· 38-7. 43(m，2H)，7· 46-7. 52 (m, 2Η)， 7. 81 (d, J = 7. 9Hz, 1Η)，7. 98 (d, J = 8. 2Hz, 1Η)，8· 51 (s，1Η) · MS (ESI) :318· 8 (C15H13ClN3OS, [M+H]+)· Anal. Calcd for C15H12ClN3OS :C, 56. 69 ；H, 3. 81 ；N, 13. 22 % ；Found :C,56. 66 ；H, 3. 78 ；N, 13. 26% · 實施例二 2-氯-5-[5-(4-甲基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化 合物2)的制備 制備方法同實施例一。以對甲基苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合物。淡黃 色晶體，產(chǎn)率 65. 1%，m. p. 148-149 °C ；1H NMR (500MHz, DMS0-d6) δ :2· 40 (s，3Η)，4· 60 (s， 2H)，7. 41(d，J = 8. 0Hz，2H)，7. 53(d，J = 9. OHz, 1H), 7. 84 (d, J = 8. 0Hz，2H)，8. 00 (d， J = 8. 5Hz,lH),8. 52(s,lH). MS(ESI) :318. 8 (C15H13ClN3OS, [M+H]+). Anal. Calcd for C15H12ClN3OS :C, 56. 69 ；H, 3. 81 ；N, 13. 22% ；Found :C，56. 76 ；H, 3. 75 ；N, 13. 28% ·實施例三2-氯-5-[5_(2-甲氧基苯基)_1，3，4_噁二唑_2_硫代甲基]吡啶(化 合物3)的制備 制備方法同實施例一。以鄰甲氧基苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合物。淡黃色晶體，產(chǎn)率 52.7%，m. ρ· 73-74°C ；屯 NMR(300MHz, DMS0-d6) δ :3· 88 (s，3Η)，4· 57 (s， 2Η)，7· 11 (t，J = 7. 3Hz, 1H), 7. 26 (d, J = 8. 4Hz，1H)，7. 52 (d，J = 8. 2Hz，1H)，7. 60 (t， J = 7. 3Hz, 1H) ,7. 77 (d, J = 7. 8Hz，1H)，7. 98 (d，J = 8. 3Hz，1H)，8. 51 (s，1H) · MS (ESI) 334. 8 (C15H13ClN3O2S, [M+H] +) · Anal. Calcd for C15H12ClN3O2S :C，53. 97 ；H, 3. 62 ；N, 12. 59% ； Found :C, 53. 91 ；H, 3. 55 ；N, 12. 65% · 實施例四2-氯-5-[5_(4-甲氧基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化 合物4)的制備制備方法同實施例一。以對甲氧基苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合物。淡 黃色粉末，產(chǎn)率 53.9%，m.p. 120-121°C ；力匪R(500MHz，DMS0_d6) δ :3· 85 (s，3Η)，4· 58 (s， 2Η)，7. 13 (d, J = 8. 8Hz,2H)，7. 51 (d, J = 8. 2Hz, 1H)，7. 88 (d, J = 8. 8Hz,2H)，7. 98 (d, J = 8. 2Hz, 1H) ,8. 50 (s, 1H). MS(ESI) 334. 8 (C15H13ClN3O2S, [M+H]+). Anal. Calcd for C15H12ClN3O2S :C, 53. 97 ；H, 3. 62 ；N, 12. 59% ；Found :C，53. 88 ；H, 3. 53 ；N, 12. 67%實施例五2-氯-5-[5-(4-羥基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化 合物5)的制備制備方法同實施例一。以4-羥基苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合物。黃 色晶體，產(chǎn)率 67. 5 %，m. ρ· 198-200 "C ；1H NMR(500MHz, DMS0_d6) :4· 58(s，2H)，6· 93 (d, J = 9. 0Hz，2H)，7. 53 (d, J = 8. OHz, 1Η)，7. 78 (d, J = 8. 5Ηζ,2Η)，7. 98 (d, J = 8. 5Hz, 1Η), 8. 50 (s, 1Η), 10. 35 (s, 1Η). MS (ESI) :320. 8 (C14H11ClN3O2S, [Μ+Η]+)· Anal. Calcd for C14H10ClN3O2S :C, 52. 59 ；H, 3. 15 ；N, 13. 14% ；Found :C，52. 66 ；H, 3. 18 ；N, 13. 17% ·實施例六2_氯-5-[5-(2_氟苯基)-1，3，4_噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化合 物6)的制備 制備方法同實施例一。以2-氟苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合物。白色晶 體，產(chǎn)率 62. 8%，m. p. 109-1IO0C ；1H NMR(300MHz, DMS0_d6) δ :4· 60 (s，2Η)，7· 40-7. 53 (m， 3H)，7. 65-7. 73 (m, 1H)，7. 95-8. 01 (m, 2H)，8. 52 (s, 1H) · MS (ESI) 322. 8 (C14H10ClFN3OS, [M+H]+)· Anal. Calcd for C14H9ClFN3OS :C, 52. 26 ；H, 2. 82 ；N, 13. 06 % ；Found :C,52. 21 ；H, 2. 73 ；N, 13. 12%實施例七2_氯-5-[5-(4_氟苯基)-1，3，4_噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化合 物7)的制備制備方法同實施例一。以4-氟苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合物。淡黃 色晶體，產(chǎn)率 56.2%，m. p. 132-133 °C ；1H NMR (500MHz, DMS0_d6) δ :4· 61 (s，2Η)，7· 45 (t， J = 8· 5Hz，2H)，7· 53(d，J = 8. OHz, 1H) ,7. 99-8. 04(m,3H) ,8. 53 (s, 1H). MS (ESI) 322. 8 (C14H10ClFN3OS, [M+H] +) · Anal. Calcd for C14H9ClFN3OS :C，52. 26 ；H, 2. 82 ；N, 13. 06% ； Found :C, 52. 33 ；H, 2. 77 ；N, 13. 01% .實施例八2-氯-5-[5_(2-氯苯基)-l，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化合 物8)的制備 制備方法同實施例一。以2-氯苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合物。白色晶 體，產(chǎn)率 58. 4%，m. ρ· θ-δΟτνΗ NMR(300MHz，DMS0_d6) δ :4. 61 (s，2Η)，7. 51-7. 58 (m，2Η)， 7. 61-7. 72(m，2H)，7· 94 (d, J = 7. 7Hz, 1H)，7· 99 (d, J = 8. 2Hz, 1Η)，8· 52 (s, 1Η). MS (ESI) 339. 2 (C14H10Cl2N3OS, [Μ+Η] +) · Anal. Calcd for C14H9Cl2N3OS :C，49. 72 ；H, 2. 68 ；N, 12. 42% ； Found :C,49. 62 ；H, 2. 60 ；N, 12. 45% 實施例九2_氯-5-[5-(4_氯苯基)-1，3，4_噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化合 物9)的制備 制備方法同實施例一。以4-氯苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合物。白 色固體，產(chǎn)率 61.3%，m. p. 147-148 °C ；1H NMR(300MHz, DMS0_d6) δ :4· 61 (s，2Η)，7· 52 (d， J = 8· 2Hz，2H)，7· 67(d，J = 8. 4Hz,2H) ,7. 95-8. 00(m,3H) ,8. 52 (s, 1H). MS (ESI) 339. 2 (C14H10Cl2N3OS, [M+H] +) · Anal. Calcd for C14H9Cl2N3OS :C，49. 72 ；H, 2. 68 ；N, 12. 42% ； Found :C,49. 83 ；H, 2. 61 ；N, 12. 38% ·實施例十2-氯-5-[5-(4-異丙基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化 合物10)的制備制備方法同實施例一。以4-異丙基苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合 物。黃色粉末，產(chǎn)率 51. 4 %, m. ρ· 195-197 "C ；1HNMR(500MHz, DMS0_d6) δ :1· 24(d, J = 7· 0Ηζ，6Η)，2· 97-3. 00(m，1Η)，4· 54(s，2H)，4· 60(s，2H)，7· 47(d，J = 8. 5Ηζ,2Η) ,7. 53 (d, J = 8. 5Hz, 1Η) ,7. 87 (d, J = 8. 5Ηζ,2Η) ,8. 00 (d, J = 8· ΟΗζ，1Η)，8· 52 (s，1Η) · MS (ESI) 346. 9 (C17H17ClN3OS, [Μ+Η]+) · Anal. Calcd for C17H16ClN3OS :C, 59. 04 ；H, 4. 66 ；N, 12. 15 % ； Found :C, 59. 07 ；H, 4. 61 ；N, 12. 21% .實施例i^一 2_氯-5-[5-(4-氨基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化 合物11)的制備 制備方法同實施例一。以4-氨基苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合物。黃 色粉末，產(chǎn)率 58. 9 %，m. ρ· 154-155 "C ；1H NMR(500MHz, DMS0_d6) :4· 54(s，2H)，5· 97 (s, 2H)，6. 66 (d, J = 9. 0Hz，2H)，7. 52 (d, J = 8. 5Hz, 1H)，7. 58 (d, J = 8. 5Hz，2H)，7. 96 (d, J = 8. OHz, 1H), 8. 49 (s, 1H). MS (ESI) :319. 8 (C14H12ClN4OS, [M+H]+). Anal. Calcd for C14H11ClN4OS :C, 52. 75 ；H, 3. 48 ；N, 17. 58% ；Found :C，52. 71 ；H, 3. 50 ；N, 17. 55% ·實施例十二 2-氯-5-[5-(4-二甲氨基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡 啶(化合物12)的制備 制備方法同實施例一。以4-二甲氨基苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合物。 黃色固體，產(chǎn)率 61. 3%，m. p. 151-153 °C ；1H NMR (500MHz, DMS0_d6) :3· 02 (s，6H)，4· 56 (s， 2Η)，6· 82 (d, J = 9. 0Ηζ，2Η)，7· 53 (d, J = 8. OHz, 1Η)，7. 72 (d, J = 8. 5Ηζ，2Η)，7· 98 (d, J = 8. OHz, 1Η), 8. 50 (s, 1Η). MS (ESI) :347. 8 (C16H16ClN4OS, [Μ+Η]+). Anal. Calcd for C16H15ClN4OS :C,55. 41 ；Η，4· 36 ；N, 16. 15% ；Found :C，55. 48 ；Η，4· 31 ；N, 16. 18% ·實施例十三2_氯-5-[5_(2-乙氧基苯基)_1，3，4_噁二唑_2_硫代甲基]吡啶 (化合物13)的制備 制備方法同實施例一。以2-乙氧基苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合物。棕色晶體，產(chǎn)率 52. 2%，m. p. 87-88°C ；1H NMR(500MHz, DMS0-d6) δ 1· 33 (t，J = 6. 5Hz，3Η)， 4. 17 (q, J = 7· 0Ηζ，2Η)，4· 58(s，2H)，7· 11 (t，J = 8. OHz, 1Η), 7. 25 (d, J = 8·5Ηζ，1Η)， 7. 54 (d, J = 8. 5Hz, 1Η)，7. 57-7. 60 (m, 1Η)，7. 78 (d, J = 7. 5Hz, 1Η)，7. 98 (d, J = 8. 5Hz, 1Η),8. 50(s,lH).MS (ESI) 348. 8 (C16H15ClN3O2S, [Μ+Η]+) · Anal. Calcd for C16H14ClN3O2S :C， 55. 25 ；Η，4· 06 ；N, 12. 08% ；Found :C，55. 33 ；Η，4· 01 ；N, 12. 11% · 實施例十四2-氯-5-[5-(4-乙氧基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶 (化合物14)的制備 制備方法同實施例一。以4-乙氧基苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合 物。白色粉末，產(chǎn)率 57. 1 %，m.p· 117-119 °C ；力匪 R(500MHz，DMS0_d6) :1· 36 (t，J = 7. 0Hz，3H)，4· 13 (q，J = 6. 5Hz，2H)，4· 59(s，2H)，7· 12 (d，J = 8. 5Hz，2H)，7. 53 (d, J =8. 0Hz, 1H) ,7. 87 (d, J = 9. 0Hz,2H) ,8. 00 (d, J = 8. 5Hz, 1H), 8. 52 (s, 1H). MS (ESI) 348. 8 (C16H15ClN3O2S, [M+H] +) · Anal. Calcd for C16H14ClN3O2S :C，55. 25 ；H, 4. 06 ；N, 12. 08% ； Found :C，55. 29 ；H，4. 05 ；N, 12. 11% ·實施例十五2-氯-5-[5-(3，4-二甲氧基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡 啶(化合物15)的制備 制備方法同實施例一。以3，4_ 二甲氧基苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化 合物。白色固體，產(chǎn)率 58. 1 %，m. p. 123-124 °C /H 匪R(500MHz，DMS0_d6) δ :3. 85(s， 6Η)，4· 59(s，2H)，7· 16 (d, J = 8. 5Hz, 1Η)，7· 40 (s, 1Η)，7· 53 (d, J = 9. 0Ηζ，2Η)，7· 99 (d, J = 8. OHz, 1Η) ,8. 52 (s, 1Η). MS(ESI) :364. 8 (C16H15ClN3O3S, [Μ+Η]+). Anal. Calcd for C16H14ClN3O3S :C,52. 82 ；Η，3· 88 ；N, 11. 55% ；Found :C，52. 76 ；Η，3· 91 ；N, 11. 51% ·實施例十六2_氯-5-[5-(3，5-二甲氧基苯基)_1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡 啶(化合物16)的制備
制備方法同實施例一。以呋喃-2-羧酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合物。淡黃 色晶體，產(chǎn)率 59.3%，m.p.97-98°C/H 匪R(300MHz，DMS0_d6) δ :4· 58 (s，2Η)，6· 80 (s，1Η)， 制備方法同實施例一。以3，5_ 二甲氧基苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合 物。白色粉末，產(chǎn)率58. 4%,m. ρ· 122-123°0；^ 匪R(500MHz，DMS0-d6) 3. 88(s，6H)，4· 61 (s, 2H), 6. 76 (s，1H), 7. 05(s，2H)，7· 54 (d, J = 8. OHz, 1H) ,8. 00 (d, J = 8. 5Hz, 1H)，8· 53 (s, 1H). MS(ESI) 364. 8 (C16H15ClN3O3S, [M+H]+). Anal. Calcd for C16H14ClN3O3S :C,52. 82 ；H, 3. 88 ；N, 11. 55% ；Found :C，52. 91 ；H, 3. 92 ；N, 11. 48% ·實施例十七2-氯-5-[5- (3，4，5_三甲氧基苯基)_1，3，4_噁二唑_2_硫代甲基] 批啶(化合物17)的制備 制備方法同實施例一。以3，4，5_三甲氧基苯甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標 化合物。黃色晶體，產(chǎn)率 60. 1 %, m. p. 119-120 °C ；1H NMR (500MHz, DMS0_d6) δ 3. 75(s, 3H)，3. 88(s，6H)，4. 60(s，2H)，7. 18(s，2H)，7. 54 (d, J = 8. 5Hz, 1H)，8. 00 (d, J = 8. OHz, 1H),8. 54(s,lH).MS (ESI) :394. 8 (C17H17ClN3O4S, [M+H]+) · Anal. Calcd for C17H16ClN3O4S :C， 51. 84 ；H,4. 09 ；N, 10. 67% ；Found :C，51. 75 ；H,4. 08 ；N, 10. 70% ·實施例十八2-氯-5-[5-(2-呋喃基)_1，3，4_噁二唑_2_硫代甲基]吡啶(化 合物18)的制備
7. 33 (s, 1H) ,7. 53 (d, J = 8. OHz, 1H), 7. 98 (d, J = 8. 5Hz，1H)，8. 06 (s，1H)，8. 51 (s，1H). MS(ESI) 294. 7 (C12H9ClN3O2S, [M+H]+) · Anal. Calcd f OrC12H8ClN3O2S :C,49. 07 ；H, 2. 75 ；N, 14. 31% ；Found :C，49. 16 ；H, 2. 80 ；N, 14. 25% · 實施例十九-.2-氯-5-[5-(2-噻吩基)_1，3，4_噁二唑_2_硫代甲基]吡啶(化 合物19)的制備 制備方法同實施例一。以噻吩-2-羧酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合物。白色粉 末，產(chǎn)率 58. 3%，m. p. QSifC51H NMR(300MHz，DMS0_d6) δ :4. 58 (s，2Η)，7. 27-7. 30 (m，1Η)， 7. 52 (d, J = 8. 2Hz, 1H)，7. 78-7. 79 (m, 1H)，7. 94-7. 95 (m, 1H)，7. 97-8. 00 (m, 1H)，8. 51 (s， 1H). MS (ESI) 310. 8 (C12H9ClN3OS2, [M+H]+) · Anal. Calcd for C12H9ClN3OS2 :C,46. 52 ；H, 2. 60 ；N, 13. 56% ；Found :C，46. 48 ；Η，2· 53 ；N, 13. 62% ·實施例二十2-氯-5-[5-(1-萘基)-1，3，4-噁二唑-2-硫代甲基]吡啶(化合 物20)的制備制備方法同實施例一。以1-萘甲酸代替鄰甲基苯甲酸，得目標化合物。淡黃色 晶體，產(chǎn)率 61.4%，m. p. 110-111°C ；1H NMR(500MHz, DMS0-d6) δ :4. 66 (s，2Η)，7. 55 (d，J = 8. 5Hz, 1H)，7· 66-7. 76(m，3H)，8· 03 (d, J = 8. OHz，1H)，8· 10 (d, J = 7. 5Hz, 1H)，8· 15 (d, J = 7. 5Hz, 1H) ,8. 22 (d, J = 8. 5Hz，1H)，8. 57 (s，1H)，8. 99 (d，J = 9. 0Hz，1H). MS (ESI) 354. 8 (C18H13ClN3OS, [M+H]+) · Anal. Calcd fOrC18H12ClN3OS :C,61. 10 ；H, 3. 42 ；N, 11. 88 % ； Found :C,61. 02 ；H, 3. 37 ；N, 11. 92% ·實施例二i^一 2-氯吡啶衍生物體外抗人肝癌細胞(Hep_G2)活性研究采用MTT [3-(4，5)-雙甲基-2-噻唑-(2，5)-苯基溴化四氮唑藍]法來測定2-氯 吡啶衍生物對人肝癌細胞(Hep-G2)的抑制率，計算IC5tl值(μ M)。1.培養(yǎng)液等的配制RPMI1640培養(yǎng)基一袋加水一升，補加2克碳酸氫鈉，10萬單位青霉素和IOOmg鏈 霉素，調(diào)節(jié)PH值至7. 4，用0. 22 μ m除菌濾膜過濾除菌。90mL培養(yǎng)基加滅活新生牛血清IOmL
即為完全培養(yǎng)液。胰蛋白酶用D-hanks緩沖液配成0. 25%溶液，過濾除菌后4°C保存?zhèn)溆谩?.藥液配制準確稱取被測樣品1. Omg,加到滅菌的1. 5mL離心管中，加入DMSO ImL,配成Img/ mL原液，-40°c冷凍保存。臨用前融化后用適量D-hanks稀釋成相應(yīng)濃度應(yīng)用。3.細胞培養(yǎng)及傳代細胞均貼壁培養(yǎng)于含IOmL完全培養(yǎng)液細胞培養(yǎng)瓶中，于37°C、5% C02、飽和濕度 下培養(yǎng)。細胞長滿瓶底后用滅菌D-hanks液洗兩次，加0. 25%胰蛋白酶消化細胞2min，倒 掉胰蛋白酶，待輕搖細胞能完全脫落后，加完全培養(yǎng)液30ml后，用移液管吹散細胞，分裝于 3個新的細胞培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。4.抗增殖活性測試取剛剛長成完整單層的細胞一瓶，胰蛋白酶消化后收集細胞，用移液管吹打均勻， 取兩滴細胞懸液臺盼藍(Trypan Blue)染色，于顯微鏡下計數(shù)活細胞數(shù)目(死細胞數(shù)目不 得超過5% )，用完全培養(yǎng)液調(diào)整細胞數(shù)目至IX IO5個細胞/mL。于96孔細胞培養(yǎng)板中每 孔加入100 μ L細胞懸液，將培養(yǎng)板置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h，取出培養(yǎng)板后于每孔中加含 不同濃度梯度的被測樣品的溶液，每個濃度設(shè)3個平行孔，另設(shè)3孔細胞不加被測藥作正常 對照孔。加完藥后培養(yǎng)板于微孔板振蕩器上振蕩混勻，置于CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48h。取 出培養(yǎng)板，每孔加入25 μ L 4mg/mL的MTT液，振蕩混勻，繼續(xù)培養(yǎng)6h。加入每孔100 μ L SDS 裂解液(90mL三蒸水+IOg SDS+5mL異丙醇+2mL濃鹽酸)后培養(yǎng)12h。于酶標儀測定各孔 光吸收(0D值)，測定波長570nm，參考波長630nm。根據(jù)各孔OD值計算藥物對細胞增殖的 抑制率抑制率的計算細胞生長的抑制率按照下列公式計算抑制率=[1-(測試樣品OD值-空白OD值)/(陰性對照OD值-空白OD值)]X 100半數(shù)抑制濃度(IC5tl)定義為當50%的腫瘤細胞存活時的藥物濃度。根據(jù)測定的 光密度(0D值)，制作細胞生長抑制率的標準曲線，在標準曲線上求得其對應(yīng)的藥物濃度。測得的IC5tl見表1所示表1本發(fā)明所列2-氯吡啶衍生物的對人肝癌細胞0fep_G2)的抑制IC5tl值(μ M) 5-Fua)，5-Fluorouracil，陽性對照,
權(quán)利要求
一類2 氯吡啶衍生物，其特征是它有如下通式式中R為FSA00000216489000011.tif,FSA00000216489000012.tif
2.一種制備權(quán)利要求1所述的2-氯吡啶衍生物的方法，其特征是它由下列步驟組成 步驟1.將按通法制備的2mmol 2-取代-5-巰基-1，3，4-噁二唑，2mmolNa0H，溶劑乙腈加入到IOOml圓底燒瓶中，加熱攪拌溶解；步驟2.；滴液漏斗滴加5ml含2mmol的2-氯-5-氯甲基吡啶的乙腈溶液，回流8_24h， 薄層色譜跟蹤反應(yīng)；步驟3.冷卻至室溫，減壓蒸除溶劑，用EtOAC溶解，水洗，飽和食鹽水洗； 步驟4.有機相用無水Na2SO4干燥，過濾，減壓蒸除EtOAC，得粗產(chǎn)物； 步驟5.將步驟4得到的粗產(chǎn)物重結(jié)晶得到2-氯吡啶衍生物。
3.權(quán)利要求1所述的2-氯吡啶衍生物在制備抗肝癌藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一類2-氯吡啶衍生物，它有如下通式式中R為本發(fā)明的2-氯吡啶衍生物對人肝癌細胞(Hep-G2)生長有明顯的抑制作用，因此本發(fā)明的2-氯吡啶衍生物可以在制備抗肝癌藥物中應(yīng)用。本發(fā)明公開了其制法。
文檔編號A61K31/4439GK101914095SQ201010244869
公開日2010年12月15日 申請日期2010年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月4日
發(fā)明者張曉敏, 朱海亮, 焦慶才, 董凱, 鄭慶忠 申請人:南京大學(xué)