專利名稱：一種中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測方 法，
背景技術(shù)：
復(fù)方板藍(lán)根顆粒是中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)所收載的中藥成方制劑，具有 清熱解毒、涼血之功效，用于治療溫病發(fā)熱、出斑、風(fēng)熱感冒、咽喉腫爛、流行性乙型腦炎、肝 炎和腮腺炎等[1]?，F(xiàn)代藥效學(xué)研究表明，復(fù)方板藍(lán)根顆粒具有解熱、抗炎以及治療病毒性心 肌炎的作用[2’3]。目前，對復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量控制方法主要是基于靛藍(lán)、靛玉紅等成分 的定量分析[4’5]，不足以從整體上控制復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量。作為臨床常用制劑，其真?zhèn)?優(yōu)劣受其藥材來源、生產(chǎn)過程等諸多因素的影響，因此，有必要建立一種科學(xué)的質(zhì)量檢測方 法對復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量進(jìn)行評價。(參考文獻(xiàn)[1]中華人民共和國藥典委員會.中 華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)[M].第十二冊.[2]賈德武.復(fù)方板藍(lán)根顆粒解熱抗炎作 用的實驗研究[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2008，20 (4) 358-359. [3]馬維勇，陸仁英，許帆.復(fù) 方板藍(lán)根顆粒治療病毒性心肌炎的療效觀察[J].實用心腦肺血管病雜志，2003，11(3) 135-138. [4]李向陽，屠萬倩，李振國.HPLC法測定復(fù)方板藍(lán)根顆粒中靛玉紅的含量[J].中 醫(yī)研究，2005，18 (7) 18-19. [5]孫立新，佟立今，畢開順.復(fù)方板藍(lán)根顆粒定量方法的研究 [J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2002，19 (2) 138-140.)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測方法。該方法利用中藥 復(fù)方板藍(lán)根顆粒的電噴霧質(zhì)譜做指紋圖譜，利用高效液相色譜法測定了中藥復(fù)方板藍(lán)根顆 粒中尿苷的含量，并利用紫外-可見分光光度法測定了中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中總黃酮的含 量，保證了中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒質(zhì)量檢測方法的科學(xué)性和質(zhì)量檢測的先進(jìn)性。本發(fā)明利用軟電離質(zhì)譜技術(shù)對中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒進(jìn)行檢測，根據(jù)得到的中藥復(fù) 方板藍(lán)根顆粒的電噴霧指紋圖譜中特征指紋峰的個數(shù)及強(qiáng)度，對中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì) 量進(jìn)行初步評價；考慮到中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中含有多種核苷類成分，并且以尿苷為主，因 此本發(fā)明以尿苷作為標(biāo)準(zhǔn)對照品，通過高效液相色譜測定，得到尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品對應(yīng)色譜 峰的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測定供試樣品中尿苷的含量；本發(fā)明還考慮到中藥復(fù)方板藍(lán)根 顆粒中含有多種黃酮類成分，因此本發(fā)明利用紫外-可見分光光度法，采用蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn) 對照品，硝酸鋁與黃酮類化合物形成配合物的顯色原理進(jìn)行測定黃酮類成分，完成一種中 藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測方法。實施本發(fā)明的技術(shù)方案如下(1)中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒電噴霧指紋圖譜測定①中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品溶液的制備稱取中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒2-10g，加10-50mL水溶解，干燥后置于IOmL容量瓶中，
4加50% (V/V)甲醇定容至10mL，過濾，即為供試品溶液;②中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜取5-10 μ L供試品溶液，用甲醇稀釋至100-500 μ L，做電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧 質(zhì)譜實驗條件如下電噴霧電離源，正離子電離方式，噴霧電壓為4. 0-5. OkV,毛細(xì)管溫 度180-250 °C，流動注入泵進(jìn)樣流速3-8 μ L/min,掃描范圍質(zhì)荷比(m/z) 50-1000，在m/ zlOO-350 范圍內(nèi)，存在 m/zl04、m/zll6、m/zl33、m/zl75、m/zl82、m/zl85、m/z203、m/z210、 m/z287 和 m/z337 離子。(2)中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量測定①高效液相色譜實驗條件C18色譜柱4· 6πιπιΧ250πιπι，5μπι ；柱溫20_35°C ；流動 相水和甲醇；水與甲醇體積比為90 10-95 5 ；洗脫時間15-30min ；紫外檢測器檢測 波長:230-280nm ；樣品進(jìn)樣量:5_20 μ L ；②尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的配制取Img的尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品，加50% (V/V)甲醇定 容至10mL，配成尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液； 尿苷線性關(guān)系的考察將尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液以4、8、12、16、2(^1^進(jìn)樣，測得 尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的高效液相色譜峰面積；以所得尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)尿 苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，計算得線性回歸方程；④中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液的高效液相色譜測定按照步驟①高效液相色 譜實驗條件，將中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜測定，得到尿苷色譜峰 的峰面積，根據(jù)尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的線性回歸方程，計算得供試品溶液中尿苷的質(zhì)量，并結(jié)合 供試品的質(zhì)量與中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比例，得到中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含 量為 0. 19-0. 22mg/g。(3)中藥復(fù)方板藍(lán)根顆?？傸S酮含量測定①蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的制備稱量20mg蘆丁對照品，置于25mL容量瓶中，用60% (V/V)乙醇溶解并定容至 25mL，搖勻，即為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，備用；②蘆丁線性關(guān)系的考察用移液槍精密移取蘆丁對照品溶液0、40、80、120、160、2001^，分別置6個251^容 量瓶中，分別加入0. 05g/mL亞硝酸鈉水溶液0. 2mL，搖勻，靜置6min，再分別加入0. 10g/mL 硝酸鋁水溶液0. 2mL,搖勻，靜置6min，再分別加入0. 04g/mL氫氧化鈉水溶液lmL，加60% (V/V)乙醇分別定容至刻度，搖勻，靜置15min，作為待測溶液；于490-510nm波長處測定待 測溶液的吸光度，以蘆丁對照品溶液的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，對應(yīng)蘆丁對照品的濃度(C)為 橫坐標(biāo)，計算得蘆丁對照品的線性回歸方程；③中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液總黃酮的含量測定將中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液于490-510nm波長處測定吸光度，根據(jù)中藥復(fù) 方板藍(lán)根顆粒供試品溶液的吸光度和得到的蘆丁對照品的線性回歸方程，測得中藥復(fù)方板 藍(lán)根顆粒供試品溶液中總黃酮的含量，根據(jù)供試樣品的質(zhì)量與中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量 的比例，得到中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中總黃酮的含量以蘆丁計為1. 27-1. 30mg/g。有益效果本發(fā)明提供一種中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測方法。利用軟電離質(zhì) 譜技術(shù)對中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒進(jìn)行檢測，根據(jù)得到的中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的電噴霧指紋圖譜中特征指紋峰的個數(shù)及強(qiáng)度，對中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量進(jìn)行初步評價；考慮到中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中含有多種核苷類成分，并且以尿苷為主，因此本發(fā) 明以尿苷作為標(biāo)準(zhǔn)對照品，通過高效液相色譜測定，得到尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品對應(yīng)色譜峰的峰 面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測定供試樣品中尿苷的含量；本發(fā)明還考慮到中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中 含有多種黃酮類成分，因此本發(fā)明利用紫外-可見分光光度法，采用蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)對照品， 硝酸鋁與黃酮類化合物形成配合物的顯色原理進(jìn)行測定黃酮類成分，完成一種中藥復(fù)方板 藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測方法，得到中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量為0. 19-0. 22mg/g ；得 到中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中總黃酮的含量以蘆丁計為1. 27-1. 30mg/g。本發(fā)明提供的一種中 藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測方法，既定性又定量，保證了中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒質(zhì)量檢測 方法的科學(xué)性和先進(jìn)性。
具體實施例方式實施例1(1)復(fù)方板藍(lán)根顆粒電噴霧指紋圖譜測定①復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品溶液的制備稱取復(fù)方板藍(lán)根顆粒2g，加IOmL水溶解，干燥后置于IOmL容量瓶中，加50% (V/ V)甲醇定容至10mL，過濾，即為供試品溶液；②復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜取5 μ L供試品溶液，用甲醇稀釋至100 μ L，做電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧質(zhì)譜實驗 條件如下電噴霧電離源，正離子電離方式，噴霧電壓為4. OkV，毛細(xì)管溫度20°C，流動注入 泵進(jìn)樣流速3 μ L/min,掃描范圍質(zhì)荷比(m/z) 50-1000，在m/zl00_350范圍內(nèi)，存在m/zl04、 m/zll6、m/zl33、m/zl75、m/zl82、m/zl85、m/z203、m/z210、m/z287 和 m/z337 離子。②中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜(2)復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量測定①高效液相色譜實驗條件C18色譜柱4. 6πιπιΧ250πιπι，5μπι ；柱溫20°C ；流動相 水和甲醇；水與甲醇體積比為90 10;洗脫時間15min;紫外檢測器檢測波長230nm;樣 品進(jìn)樣量20yL;②尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的配制取Img的尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品，加50% (V/V)甲醇定 容至10mL，配成尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液； 尿苷線性關(guān)系的考察將尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液以4、8、12、16、2(^1^進(jìn)樣，測得 尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的高效液相色譜峰面積；以所得尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)尿 苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，計算得線性回歸方程；④復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液的高效液相色譜測定將復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶 液進(jìn)行高效液相色譜測定，得到尿苷色譜峰的峰面積，根據(jù)尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的線性回歸方 程，計算得供試品溶液中尿苷的質(zhì)量，并結(jié)合供試品的質(zhì)量與復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比 例得到復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量為0. 20-0. 21mg/g。(3)復(fù)方板藍(lán)根顆?？傸S酮含量測定①蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的制備精密稱量20mg蘆丁對照品，置于25mL容量瓶中，用60% (V/V)乙醇溶解并定容至
625mL，搖勻，即為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，備用；②蘆丁線性關(guān)系的考察用移液槍精密移取蘆丁對照品溶液0、40、80、120、160、2001^，分別置6個251^容 量瓶中，分別加入0. 05g/mL亞硝酸鈉水溶液0. 2mL，搖勻，靜置6min，再分別加入0. 10g/mL 硝酸鋁水溶液0. 2mL,搖勻，靜置6min，再分別加入0. 04g/mL氫氧化鈉水溶液lmL，加60% (V/V)乙醇分別定容至刻度，搖勻，靜置15min，作為待測溶液；于500nm波長處測定待測溶 液的吸光度，以蘆丁對照品溶液的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，對應(yīng)蘆丁對照品的濃度(C)為橫坐 標(biāo)，計算得蘆丁對照品的線性回歸方程；③復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液總黃酮的含量測定將復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液于500nm波長處測定吸光度，根據(jù)復(fù)方板藍(lán)根顆粒 供試品溶液的吸光度和得到的蘆丁對照品的線性回歸方程，測得復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶 液中總黃酮的含量，根據(jù)供試樣品的質(zhì)量與復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比例，得到復(fù)方板藍(lán) 根顆粒中總黃酮的含量以蘆丁計為1. 29-1. 30mg/g，完成一種中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量 檢測方法。實施例2(1)復(fù)方板藍(lán)根顆粒電噴霧指紋圖譜測定①復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品溶液的制備稱取復(fù)方板藍(lán)根顆粒4g，加20mL水溶解，干燥后置于IOmL容量瓶中，加50% (V/ V)甲醇定容至10mL，過濾，即為供試品溶液；②復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜取6 μ L供試品溶液，用甲醇稀釋至200 μ L，做電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧質(zhì)譜實驗 條件如下電噴霧電離源，正離子電離方式，噴霧電壓為4. 2kV，毛細(xì)管溫度180°C，流動注 入泵進(jìn)樣流速5 μ L/min,掃描范圍質(zhì)荷比(m/z) 50-1000，在m/z 100-350范圍內(nèi)，存在m/ zl04、m/zll6、m/zl33、m/zl75、m/zl82、m/zl85、m/z203、m/z210、m/z287 和 m/z337 離子。(2)復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量測定①高效液相色譜實驗條件C18色譜柱4. 6πιπιΧ250πιπι，5μπι ；柱溫25°C ；流動相 水和甲醇；水與甲醇體積比為92 8 ；洗脫時間:20min ；紫外檢測器檢測波長:254nm ；樣品 進(jìn)樣量:5μ L ；②尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的配制取Img的尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品，加50% (V/V)甲醇定 容至10mL，配成尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液； 尿苷線性關(guān)系的考察將尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液以4、8、12、16、2(^1^進(jìn)樣，測得 尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的高效液相色譜峰面積；以所得尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)尿 苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，計算得線性回歸方程；④復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液的高效液相色譜測定將復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶 液進(jìn)行高效液相色譜測定，得到尿苷色譜峰的峰面積，根據(jù)尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的線性回歸方 程，計算得供試品溶液中尿苷的質(zhì)量，并結(jié)合供試品的質(zhì)量與復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比 例得到復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量為0. 19-0. 20mg/g。(3)復(fù)方板藍(lán)根顆?？傸S酮含量測定①蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的制備
精密稱量20mg蘆丁對照品，置于25mL容量瓶中，用60% (V/V)乙醇溶解并定容至 25mL，搖勻，即為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，備用；②蘆丁線性關(guān)系的考察用移液槍精密移取蘆丁對照品溶液0、40、80、120、160、2001^，分別置6個251^容 量瓶中，分別加入0. 05g/mL亞硝酸鈉水溶液0. 2mL，搖勻，靜置6min，再分別加入0. 10g/mL 硝酸鋁水溶液0. 2mL,搖勻，靜置6min，再分別加入0. 04g/mL氫氧化鈉水溶液lmL，加60% (V/V)乙醇分別定容至刻度，搖勻，靜置15min，作為待測溶液；于490nm波長處測定待測溶 液的吸光度，以蘆丁對照品溶液的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，對應(yīng)蘆丁對照品的濃度(C)為橫坐 標(biāo)，計算得蘆丁對照品的線性回歸方程；③復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液總黃酮的含量測定將復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液于490nm波長處測定吸光度，根據(jù)復(fù)方板藍(lán)根顆粒 供試品溶液的吸光度和得到的蘆丁對照品的線性回歸方程，測得復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶 液中總黃酮的含量，根據(jù)供試樣品的質(zhì)量與復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比例，得到復(fù)方板藍(lán) 根顆粒中總黃酮的含量以蘆丁計為1. 27-1. 28mg/g，完成一種中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量 檢測方法。實施例3(1)復(fù)方板藍(lán)根顆粒電噴霧指紋圖譜測定①復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品溶液的制備稱取復(fù)方板藍(lán)根顆粒6g，加30mL水溶解，干燥后置于IOmL容量瓶中，加50% (V/ V)甲醇定容至10mL，過濾，即為供試品溶液；②復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜取7 μ L供試品溶液，用甲醇稀釋至300 μ L，做電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧質(zhì)譜實驗 條件如下電噴霧電離源，正離子電離方式，噴霧電壓為4. 5kV，毛細(xì)管溫度250°C，流動注 入泵進(jìn)樣流速6 μ L/min,掃描范圍質(zhì)荷比(m/z) 50-1000，在m/z 100-350范圍內(nèi)，存在m/ zl04、m/zll6、m/zl33、m/zl75、m/zl82、m/zl85、m/z203、m/z210、m/z287 和 m/z337 離子。(2)復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量測定①高效液相色譜實驗條件C18色譜柱4. 6πιπιΧ250πιπι，5μπι ；柱溫35°C ；流動相 水和甲醇；水與甲醇體積比為93 7 ；洗脫時間:22min ；紫外檢測器檢測波長:265nm ；樣品 進(jìn)樣量10yL;②尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的配制取Img的尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品，加50% (V/V)甲醇定 容至10mL，配成尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液； 尿苷線性關(guān)系的考察將尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液以4、8、12、16、2(^1^進(jìn)樣，測得 尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的高效液相色譜峰面積；以所得尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)尿 苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，計算得線性回歸方程；④復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液的高效液相色譜測定將復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶 液進(jìn)行高效液相色譜測定，得到尿苷色譜峰的峰面積，根據(jù)尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的線性回歸方 程，計算得供試品溶液中尿苷的質(zhì)量，并結(jié)合供試品的質(zhì)量與復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比 例得到復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量為0. 21-0. 22mg/g。(3)復(fù)方板藍(lán)根顆?？傸S酮含量測定
①蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的制備精密稱量20mg蘆丁對照品，置于25mL容量瓶中，用60% (V/V)乙醇溶解并定容至 25mL，搖勻，即為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，備用；②蘆丁線性關(guān)系的考察用移液槍精密移取蘆丁對照品溶液0、40、80、120、160、2001^，分別置6個251^容 量瓶中，分別加入0. 05g/mL亞硝酸鈉水溶液0. 2mL，搖勻，靜置6min，再分別加入0. 10g/mL 硝酸鋁水溶液0. 2mL,搖勻，靜置6min，再分別加入0. 04g/mL氫氧化鈉水溶液lmL，加60% (V/V)乙醇分別定容至刻度，搖勻，靜置15min，作為待測溶液；于510nm波長處測定待測溶 液的吸光度，以蘆丁對照品溶液的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，對應(yīng)蘆丁對照品的濃度(C)為橫坐 標(biāo)，計算得蘆丁對照品的線性回歸方程；③復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液總黃酮的含量測定將復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液于510nm波長處測定吸光度，根據(jù)復(fù)方板藍(lán)根顆粒 供試品溶液的吸光度和得到的蘆丁對照品的線性回歸方程，測得復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶 液中總黃酮的含量，根據(jù)供試樣品的質(zhì)量與復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比例，得到復(fù)方板藍(lán) 根顆粒中總黃酮的含量以蘆丁計為1. 28-1. 29mg/g，完成一種中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量 檢測方法。實施例4(1)復(fù)方板藍(lán)根顆粒電噴霧指紋圖譜測定①復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品溶液的制備稱取復(fù)方板藍(lán)根顆粒8g，加40mL水溶解，干燥后置于IOmL容量瓶中，加50% (V/ V)甲醇定容至10mL，過濾，即為供試品溶液；②復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜取8 μ L供試品溶液，用甲醇稀釋至400 μ L，做電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧質(zhì)譜實驗 條件如下電噴霧電離源，正離子電離方式，噴霧電壓為4. 8kV，毛細(xì)管溫度220°C，流動注 入泵進(jìn)樣流速7 μ L/min,掃描范圍質(zhì)荷比(m/z) 50-1000，在m/z 100-350范圍內(nèi)，存在m/ zl04、m/zll6、m/zl33、m/zl75、m/zl82、m/zl85、m/z203、m/z210、m/z287 和 m/z337 離子。(2)復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量測定①高效液相色譜實驗條件C18色譜柱4. 6πιπιΧ250πιπι，5μπι ；柱溫30°C ；流動相 水和甲醇；水與甲醇體積比為94 6 ；洗脫時間:25min ；紫外檢測器檢測波長:270nm ；樣品 進(jìn)樣量8yL;②尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的配制取Img的尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品，加50% (V/V)甲醇定 容至10mL，配成尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液； 尿苷線性關(guān)系的考察將尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液以4、8、12、16、2(^1^進(jìn)樣，測得 尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的高效液相色譜峰面積；以所得尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)尿 苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，計算得線性回歸方程；④復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液的高效液相色譜測定將復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶 液進(jìn)行高效液相色譜測定，得到尿苷色譜峰的峰面積，根據(jù)尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的線性回歸方 程，計算得供試品溶液中尿苷的質(zhì)量，并結(jié)合供試品的質(zhì)量與復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比 例得到復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量為0. 20-0. 21mg/g。
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(3)復(fù)方板藍(lán)根顆?？傸S酮含量測定①蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的制備精密稱量20mg蘆丁對照品，置于25mL容量瓶中，用60% (V/V)乙醇溶解并定容至 25mL，搖勻，即為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，備用；②蘆丁線性關(guān)系的考察用移液槍精密移取蘆丁對照品溶液0、40、80、120、160、2001^，分別置6個251^容 量瓶中，分別加入0. 05g/mL亞硝酸鈉水溶液0. 2mL，搖勻，靜置6min，再分別加入0. 10g/mL 硝酸鋁水溶液0. 2mL,搖勻，靜置6min，再分別加入0. 04g/mL氫氧化鈉水溶液lmL，加60% (V/V)乙醇分別定容至刻度，搖勻，靜置15min，作為待測溶液；于505nm波長處測定待測溶 液的吸光度，以蘆丁對照品溶液的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，對應(yīng)蘆丁對照品的濃度(C)為橫坐 標(biāo)，計算得蘆丁對照品的線性回歸方程；③復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液總黃酮的含量測定將復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液于505nm波長處測定吸光度，根據(jù)復(fù)方板藍(lán)根顆粒 供試品溶液的吸光度和得到的蘆丁對照品的線性回歸方程，測得復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶 液中總黃酮的含量，根據(jù)供試樣品的質(zhì)量與復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比例，得到復(fù)方板藍(lán) 根顆粒中總黃酮的含量以蘆丁計為1. 27-1. 29mg/g，完成一種中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量 檢測方法。實施例5(1)復(fù)方板藍(lán)根顆粒電噴霧指紋圖譜測定①復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品溶液的制備稱取復(fù)方板藍(lán)根顆粒10g，加50mL水溶解，干燥后置于IOmL容量瓶中，加50% (V/ V)甲醇定容至10mL，過濾，即為供試品溶液；②復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜取10 μ L供試品溶液，用甲醇稀釋至500 μ L，做電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧質(zhì)譜實驗 條件如下電噴霧電離源，正離子電離方式，噴霧電壓為5. OkV，毛細(xì)管溫度190°C，流動注 入泵進(jìn)樣流速8 μ L/min,掃描范圍質(zhì)荷比(m/z) 50-1000，在m/z 100-350范圍內(nèi)，存在m/ zl04、m/zll6、m/zl33、m/zl75、m/zl82、m/zl85、m/z203、m/z210、m/z287 禾口 m/z337 離子。(2)復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量測定①高效液相色譜實驗條件C18色譜柱4. 6πιπιΧ250πιπι，5μπι ；柱溫25°C ；流動相 水和甲醇；水與甲醇體積比為95 5 ；洗脫時間:30min ；紫外檢測器檢測波長:280nm ；樣品 進(jìn)樣量12yL;②尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的配制取Img的尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品，加50% (V/V)甲醇定 容至10mL，配成尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液； 尿苷線性關(guān)系的考察將尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液以4、8、12、16、2(^1^進(jìn)樣，測得 尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的高效液相色譜峰面積；以所得尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)尿 苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，計算得線性回歸方程；④復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液的高效液相色譜測定將復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶 液進(jìn)行高效液相色譜測定，得到尿苷色譜峰的峰面積，根據(jù)尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的線性回歸方 程，計算得供試品溶液中尿苷的質(zhì)量，并結(jié)合供試品的質(zhì)量與復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比
10例得到復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量為0. 19-0. 20mg/g。(3)復(fù)方板藍(lán)根顆?？傸S酮含量測定①蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的制備精密稱量20mg蘆丁對照品，置于25mL容量瓶中，用60% (V/V)乙醇溶解并定容至 25mL，搖勻，即為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，備用；②蘆丁線性關(guān)系的考察用移液槍精密移取蘆丁對照品溶液0、40、80、120、160、2001^，分別置6個251^容 量瓶中，分別加入0. 05g/mL亞硝酸鈉水溶液0. 2mL，搖勻，靜置6min，再分別加入0. 10g/mL 硝酸鋁水溶液0. 2mL,搖勻，靜置6min，再分別加入0. 04g/mL氫氧化鈉水溶液lmL，加60% (V/V)乙醇分別定容至刻度，搖勻，靜置15min，作為待測溶液；于495nm波長處測定待測溶 液的吸光度，以蘆丁對照品溶液的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，對應(yīng)蘆丁對照品的濃度(C)為橫坐 標(biāo)，計算得蘆丁對照品的線性回歸方程；③復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液總黃酮的含量測定將復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液于495nm波長處測定吸光度，根據(jù)復(fù)方板藍(lán)根顆粒 供試品溶液的吸光度和得到的蘆丁對照品的線性回歸方程，測得復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶 液中總黃酮的含量，根據(jù)供試樣品的質(zhì)量與復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比例，得到復(fù)方板藍(lán) 根顆粒中總黃酮的含量以蘆丁計為1. 27-1. 28mg/g，完成一種中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量 檢測方法。
權(quán)利要求
一種中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測方法，其特征在于步驟和條件如下(1)中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒電噴霧指紋圖譜測定①中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品溶液的制備稱取中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒2 10g，加10 50mL水溶解，干燥后置于10mL容量瓶中，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，過濾，即為供試品溶液；②中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜取5 10μL供試品溶液，用甲醇稀釋至100 500μL，做電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧質(zhì)譜實驗條件如下電噴霧電離源，正離子電離方式，噴霧電壓為4.0 5.0kV，毛細(xì)管溫度180 250℃，流動注入泵進(jìn)樣流速3 8μL/min，掃描范圍質(zhì)荷比(m/z)50 1000，在m/z100 350范圍內(nèi)，存在m/z104、m/z116、m/z133、m/z175、m/z182、m/z185、m/z203、m/z210、m/z287和m/z337離子。(2)中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量測定①高效液相色譜實驗條件C18色譜柱4.6mm×250mm，5μm；柱溫20 35℃；流動相水和甲醇；水與甲醇體積比為90∶10 95∶5；洗脫時間15 30min；紫外檢測器檢測波長230 280nm；樣品進(jìn)樣量5 20μL；②尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的配制取1mg的尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，配成尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液；③尿苷線性關(guān)系的考察將尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液以4、8、12、16、20μL進(jìn)樣，測得尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的高效液相色譜峰面積；以所得尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，計算得線性回歸方程；④中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液的高效液相色譜測定按照步驟①高效液相色譜實驗條件，將中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜測定，得到尿苷色譜峰的峰面積，根據(jù)尿苷標(biāo)準(zhǔn)對照品的線性回歸方程，計算得供試品溶液中尿苷的質(zhì)量，并結(jié)合供試品的質(zhì)量與中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比例，得到中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量為0.19 0.22mg/g。(3)中藥復(fù)方板藍(lán)根顆?？傸S酮含量測定①蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液的制備稱量20mg蘆丁對照品，置于25mL容量瓶中，用60％(V/V)乙醇溶解并定容至25mL，搖勻，即為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，備用；②蘆丁線性關(guān)系的考察用移液槍精密移取蘆丁對照品溶液0、40、80、120、160、200μL，分別置6個25mL容量瓶中，分別加入0.05g/mL亞硝酸鈉水溶液0.2mL，搖勻，靜置6min，再分別加入0.10g/mL硝酸鋁水溶液0.2mL，搖勻，靜置6min，再分別加入0.04g/mL氫氧化鈉水溶液1mL，加60％(V/V)乙醇分別定容至刻度，搖勻，靜置15min，作為待測溶液；于490 510nm波長處測定待測溶液的吸光度，以蘆丁對照品溶液的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，對應(yīng)蘆丁對照品的濃度(C)為橫坐標(biāo)，計算得蘆丁對照品的線性回歸方程；③中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液總黃酮的含量測定將中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液于490 510nm波長處測定吸光度，根據(jù)中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液的吸光度和得到的蘆丁對照品的線性回歸方程，測得中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒供試品溶液中總黃酮的含量，根據(jù)供試樣品的質(zhì)量與中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比例，得到中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中總黃酮的含量以蘆丁計為1.27 1.30mg/g。
全文摘要
本發(fā)明提供一種中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測方法。利用軟電離質(zhì)譜技術(shù)得到的中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的電噴霧指紋圖譜中特征指紋峰的個數(shù)及強(qiáng)度，對中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量進(jìn)行初步評價；以尿苷作為標(biāo)準(zhǔn)對照品，通過高效液相色譜測定，得到中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中尿苷的含量為0.19-0.22mg/g；利用紫外-可見分光光度法，采用蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)對照品，硝酸鋁與黃酮類化合物形成配合物的顯色原理進(jìn)行測定，得到中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒中總黃酮的含量以蘆丁計為1.27-1.30mg/g。本發(fā)明提供的一種中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測方法，既定性又定量，保證了中藥復(fù)方板藍(lán)根顆粒質(zhì)量檢測方法的科學(xué)性和先進(jìn)性。
文檔編號A61K36/704GK101904884SQ20101025153
公開日2010年12月8日 申請日期2010年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月12日
發(fā)明者劉志強(qiáng), 劉忠英, 劉舒, 宋鳳瑞, 皮子鳳, 閆峻 申請人:中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所