專利名稱：一種中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
板藍(lán)根顆粒為《中華人民共和國(guó)藥典》所守載的中藥成方制劑，具有清熱解毒，涼 血利咽之功效，用于治療肺胃熱盛所致的咽喉腫痛、口咽干燥、腮部腫脹、急性扁桃體炎、腮 腺炎等[1]，現(xiàn)代藥效學(xué)研究表明，板藍(lán)根顆粒具有較強(qiáng)的抗病毒作用[2]，目前，對(duì)板藍(lán)根顆 粒的質(zhì)量控制方法主要是基于靛玉紅、腺苷等成分的定量分析[3_5]，不足以從整體上控制 板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量，作為臨床常用制劑，其真?zhèn)蝺?yōu)劣藥材來源、生產(chǎn)工藝等諸多因素的影 響，因此有必要建立一種科學(xué)的質(zhì)量檢測(cè)方法對(duì)板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，(參考文獻(xiàn) [1]中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京化學(xué)工業(yè)出版社，2005 487-488. [2]安逸強(qiáng)，賈曉斌，陳彥，等.RP-HPLC測(cè)定不同廠家板藍(lán)根顆粒中表告依春的含 量[J].中華中醫(yī)藥雜志，2009，24 (4) 529-531. [3]顏藝周，鄒品文.HPLC法測(cè)定板藍(lán)根顆 粒中靛玉紅的含量[J].中國(guó)藥房，2008，19 (3) -.211-212. [4]侯雅明，王雨林，胡意冰.高 效液相色譜法測(cè)定板藍(lán)根顆粒中腺苷的含量[J].湖南中醫(yī)雜志，2005，21(3) 112-114. [5]陳矛，梁惠瑜，楊東升，等.板藍(lán)根顆粒中腺苷的HPLC分析[J].廣州藥學(xué)，2003，13 (6) 6-8.)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法利用中藥板藍(lán) 根顆粒的電噴霧質(zhì)譜做指紋圖譜，利用高效液相色譜法測(cè)定了中藥板藍(lán)根顆粒中核苷和嘌 呤類成分的含量，保證了中藥板藍(lán)根顆粒質(zhì)量檢測(cè)方法的科學(xué)性和質(zhì)量檢測(cè)的先進(jìn)性。本發(fā)明利用軟電離質(zhì)譜技術(shù)對(duì)中藥板藍(lán)根顆粒進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)得到的中藥板藍(lán)根 顆粒的電噴霧指紋圖譜中特征指紋峰的個(gè)數(shù)及強(qiáng)度，對(duì)中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量進(jìn)行初步評(píng) 價(jià)；考慮到中藥板藍(lán)根顆粒中含有多種核苷和嘌呤類成分，并且以胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷 和腺苷為主，因此本發(fā)明以這五種成分作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，通過高效液相色譜測(cè)定，得到各標(biāo) 準(zhǔn)對(duì)照品對(duì)應(yīng)色譜峰的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定供試樣品中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和 腺苷的含量，完成一種中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法。實(shí)施本發(fā)明的技術(shù)方案如下(1)板藍(lán)根顆粒電噴霧指紋圖譜測(cè)定①板藍(lán)根顆粒供試樣品溶液的制備以板藍(lán)根顆粒為原料，稱取板藍(lán)根顆粒2-10g，加10-50mL水溶解，干燥后置IOmL 容量瓶中，加50% (V/V)甲醇定容至10mL，過濾，即為供試品溶液；②板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜供試品的電噴霧指紋圖譜通過如下步驟得到取5-10 μ L供試品溶液，用甲醇稀 釋至100-500 μ L，做電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧電離源，正離子電離方式，噴霧電壓為4. 0-5. OkV，毛細(xì)管溫度180-250°C，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流速3_8 μ L/min, 掃描范圍質(zhì)荷比(m/z) 50-1000，在 m/zl00-400 范圍內(nèi)，存在 m/zl04、m/zll6、m/zl37、m/ zl75、m/zl85、m/z203、m/z259、m/z264、m/z365、m/z381 和 m/z397 離子；(2)板藍(lán)根顆粒中嘌呤和核苷類成分的含量測(cè)定①高效液相色譜實(shí)驗(yàn)條件C18色譜柱4· 6πιπιΧ250πιπι，5μπι ；柱溫20_35°C ；流動(dòng) 相水和甲醇；水與甲醇體積比為90 10-95 5 ；洗脫時(shí)間15-30min ；紫外檢測(cè)器檢測(cè) 波長(zhǎng):230-280nm ；樣品進(jìn)樣量:5_20 μ L ；②嘌呤和核苷類成分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液的配制分別稱取胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷 和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品各lmg，置IOmL容量瓶中，加50%甲醇(V/V)定容至10mL，配成標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照 品溶液；③嘌呤和核苷類成分線性關(guān)系的考察將胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液分別以2、4、6、8、10yL進(jìn)樣， 測(cè)得各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的高效液相色譜峰面積；以所得各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)各 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，分別計(jì)算得線性回歸方程；④板藍(lán)根顆粒供試品溶液的高效液相色譜測(cè)定按照步驟①高效液相色譜實(shí)驗(yàn) 條件，將板藍(lán)根顆粒供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定，分別得到板藍(lán)根顆粒供試品溶液 中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷色譜峰的峰面積，根據(jù)胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo) 準(zhǔn)對(duì)照品的線性回歸方程，計(jì)算得供試品溶液中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的質(zhì)量， 并結(jié)合供試品的質(zhì)量與中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比例，得到中藥板藍(lán)根顆粒中胞苷、腺嘌 呤、尿苷、鳥苷和腺苷的含量分別為胞苷0. 234-0. 238mg/g、腺嘌呤0. 116-0. 118mg/g、尿苷 0. 472-0. 474mg/g、鳥苷 0. 331-0. 334mg/g、腺苷 0. 447-0. 450mg/g。有益效果本發(fā)明提供一種中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，利用軟電離質(zhì)譜 技術(shù)對(duì)中藥板藍(lán)根顆粒進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)得到的中藥板藍(lán)根顆粒的電噴霧指紋圖譜中特征 指紋峰的個(gè)數(shù)及強(qiáng)度，對(duì)中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量進(jìn)行初步評(píng)價(jià)；考慮到中藥板藍(lán)根顆粒 中含有多種核苷和嘌呤類成分，并且以胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷為主，因此本發(fā)明 以這五種成分作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，通過高效液相色譜測(cè)定，得到各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品對(duì)應(yīng)色譜峰的 峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定，得到中藥板藍(lán)根顆粒中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的含 量分別為胞苷 0. 234-0. 238mg/g、腺嘌呤 0. 116-0. 118mg/g、尿苷 0. 472-0. 474mg/g、鳥苷 0. 331-0. 334mg/g、腺苷0. 447-0. 450mg/g。本發(fā)明提供一種中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方 法，對(duì)中藥板藍(lán)根顆粒質(zhì)量檢測(cè)既定性又定量，保證了中藥板藍(lán)根顆粒質(zhì)量檢測(cè)方法的科 學(xué)性和先進(jìn)性。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1(1)板藍(lán)根顆粒電噴霧指紋圖譜測(cè)定①板藍(lán)根顆粒供試樣品溶液的制備以板藍(lán)根顆粒為原料，稱取板藍(lán)根顆粒2g，加IOmL水溶解，干燥后置IOmL容量瓶 中，加50% (V/V)甲醇定容至10mL，過濾，即為供試品溶液;②板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜
供試品的電噴霧指紋圖譜通過如下步驟得到取5μ L供試品溶液，用甲醇稀釋至 100 μ L，做電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧電離源，正離子電離方式，噴 霧電壓為4. OkV,毛細(xì)管溫度180°C，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流速3 μ L/min,掃描范圍質(zhì)荷比(m/ ζ) 50-1000，在 m/zl00-400 范圍內(nèi)，存在 m/zl04、m/zll6、m/zl37、m/zl75、m/zl85、m/z203、 m/z259、m/z264、m/z365、m/z381 和 m/z397 離子。(2)板藍(lán)根顆粒中嘌呤和核苷類成分的含量測(cè)定①高效液相色譜實(shí)驗(yàn)條件C18色譜柱4. 6πιπιΧ250πιπι，5μπι ；柱溫20°C ；流動(dòng)相 水和甲醇；水與甲醇體積比為90 10;洗脫時(shí)間15min;紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)230nm;樣 品進(jìn)樣量20yL;②嘌呤和核苷類成分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液的配制分別精密稱取胞苷、腺嘌呤、尿苷、 鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品各lmg，置IOmL容量瓶中，加50%甲醇(V/V)定容至10mL，配成標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)照品溶液；③嘌呤和核苷類成分線性關(guān)系的考察將胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液分別以2、4、6、8、10yL進(jìn)樣， 測(cè)得各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的高效液相色譜峰面積；以所得各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)各 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，分別計(jì)算得線性回歸方程；④板藍(lán)根顆粒供試品溶液的高效液相色譜測(cè)定將板藍(lán)根顆粒供試品溶液進(jìn)行 高效液相色譜測(cè)定，分別得到板藍(lán)根顆粒供試品溶液中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷色 譜峰的峰面積，根據(jù)胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的線性回歸方程，計(jì)算得 供試品溶液中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的質(zhì)量，并結(jié)合供試品的質(zhì)量與原板藍(lán)根顆 粒的質(zhì)量的比例，得到板藍(lán)根顆粒中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的含量分別為胞苷 0. 235-0. 237mg/g、腺嘌呤 0. 117-0. 118mg/g、尿苷 0. 473-0. 474mg/g、鳥苷 0. 331-0. 333mg/ g、腺苷0. 447-0. 448mg/g，完成一種中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法。實(shí)施例2(1)板藍(lán)根顆粒電噴霧指紋圖譜測(cè)定①板藍(lán)根顆粒供試樣品溶液的制備以板藍(lán)根顆粒為原料，稱取板藍(lán)根顆粒4g，加20mL水溶解，干燥后置IOmL容量瓶 中，加50% (V/V)甲醇定容至10mL，過濾，即為供試品溶液;②板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜供試品的電噴霧指紋圖譜通過如下步驟得到取6μ L供試品溶液，用甲醇稀釋至 200 μ L，做電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧電離源，正離子電離方式，噴 霧電壓為4. 2kV，毛細(xì)管溫度250°C，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流速6 μ L/min,掃描范圍質(zhì)荷比(m/ ζ) 50-1000，在 m/zl00-400 范圍內(nèi)，存在 m/zl04、m/zll6、m/zl37、m/zl75、m/zl85、m/z203、 m/z259、m/z264、m/z365、m/z381 和 m/z397 離子。(2)板藍(lán)根顆粒中嘌呤和核苷類成分的含量測(cè)定①高效液相色譜實(shí)驗(yàn)條件C18色譜柱4. 6πιπιΧ250πιπι，5μπι ；柱溫30°C ；流動(dòng)相 水和甲醇；水與甲醇體積比為92 8 ；洗脫時(shí)間:20min ；紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng):254nm ；樣品 進(jìn)樣量:5μ L ；②嘌呤和核苷類成分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液的配制分別精密稱取胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品各lmg，置IOmL容量瓶中，加50%甲醇(V/V)定容至10mL，配成標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)照品溶液；③嘌呤和核苷類成分線性關(guān)系的考察將胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液分別以2、4、6、8、10yL進(jìn)樣， 測(cè)得各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的高效液相色譜峰面積；以所得各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)各 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，分別計(jì)算得線性回歸方程；④板藍(lán)根顆粒供試品溶液的高效液相色譜測(cè)定將板藍(lán)根顆粒供試品溶液進(jìn)行 高效液相色譜測(cè)定，分別得到板藍(lán)根顆粒供試品溶液中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷色 譜峰的峰面積，根據(jù)胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的線性回歸方程，計(jì)算得 供試品溶液中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的質(zhì)量，并結(jié)合供試品的質(zhì)量與原板藍(lán)根顆 粒的質(zhì)量的比例，得到板藍(lán)根顆粒中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的含量分別為胞苷 0. 234-0. 236mg/g、腺嘌呤 0. 116-0. 117mg/g、尿苷 0. 472-0. 473mg/g、鳥苷 0. 332-0. 334mg/ g、腺苷0. 449-0. 450mg/g，完成一種中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法。實(shí)施例3(1)板藍(lán)根顆粒電噴霧指紋圖譜測(cè)定①板藍(lán)根顆粒供試樣品溶液的制備以板藍(lán)根顆粒為原料，稱取板藍(lán)根顆粒6g，加30mL水溶解，干燥后置IOmL容量瓶 中，加50% (V/V)甲醇定容至10mL，過濾，即為供試品溶液;②板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜供試品的電噴霧指紋圖譜通過如下步驟得到取7μ L供試品溶液，用甲醇稀釋至 300 μ L，做電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧電離源，正離子電離方式，噴 霧電壓為4. 5kV，毛細(xì)管溫度250°C，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流速6 μ L/min,掃描范圍質(zhì)荷比(m/ ζ) 50-1000，在 m/zl00-400 范圍內(nèi)，存在 m/zl04、m/zll6、m/zl37、m/zl75、m/zl85、m/z203、 m/z259、m/z264、m/z365、m/z381 和 m/z397 離子。(2)板藍(lán)根顆粒中嘌呤和核苷類成分的含量測(cè)定①高效液相色譜實(shí)驗(yàn)條件C18色譜柱4. 6πιπιΧ250πιπι，5μπι ；柱溫35°C ；流動(dòng)相 水和甲醇；水與甲醇體積比為93 7 ；洗脫時(shí)間:22min ；紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng):265nm ；樣品 進(jìn)樣量10yL;②嘌呤和核苷類成分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液的配制分別精密稱取胞苷、腺嘌呤、尿苷、 鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品各lmg，置IOmL容量瓶中，加50%甲醇(V/V)定容至10mL，配成標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)照品溶液；③嘌呤和核苷類成分線性關(guān)系的考察將胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液分別以2、4、6、8、10yL進(jìn)樣， 測(cè)得各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的高效液相色譜峰面積；以所得各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)各 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，分別計(jì)算得線性回歸方程；④板藍(lán)根顆粒供試品溶液的高效液相色譜測(cè)定將板藍(lán)根顆粒供試品溶液進(jìn)行 高效液相色譜測(cè)定，分別得到板藍(lán)根顆粒供試品溶液中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷色 譜峰的峰面積，根據(jù)胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的線性回歸方程，計(jì)算得 供試品溶液中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的質(zhì)量，并結(jié)合供試品的質(zhì)量與原板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比例，得到板藍(lán)根顆粒中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的含量分別為胞苷 0. 237-0. 238mg/g、腺嘌呤 0. 116-0. 117mg/g、尿苷 0. 472-0. 473mg/g、鳥苷 0. 333-0. 334mg/ g、腺苷0. 448-0. 449mg/g，完成一種中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法。實(shí)施例4(1)板藍(lán)根顆粒電噴霧指紋圖譜測(cè)定①板藍(lán)根顆粒供試樣品溶液的制備以板藍(lán)根顆粒為原料，稱取板藍(lán)根顆粒8g，加40mL水溶解，干燥后置IOmL容量瓶 中，加50% (V/V)甲醇定容至10mL，過濾，即為供試品溶液;②板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜供試品的電噴霧指紋圖譜通過如下步驟得到取SyL供試品溶液，用甲醇稀釋至 400 μ L，做電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧電離源，正離子電離方式，噴 霧電壓為4. 8kV，毛細(xì)管溫度220°C，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流速7μ L/min，掃描范圍質(zhì)荷比(m/ ζ) 50-1000，在 m/zl00-400 范圍內(nèi)，存在 m/zl04、m/zll6、m/zl37、m/zl75、m/zl85、m/z203、 m/z259、m/z264、m/z365、m/z381 和 m/z397 離子。(2)板藍(lán)根顆粒中嘌呤和核苷類成分的含量測(cè)定①高效液相色譜實(shí)驗(yàn)條件C18色譜柱4. 6πιπιΧ250πιπι，5μπι ；柱溫20°C ；流動(dòng)相 水和甲醇；水與甲醇體積比為94 6 ；洗脫時(shí)間:25min ；紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng):270nm ；樣品 進(jìn)樣量8yL;②嘌呤和核苷類成分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液的配制分別精密稱取胞苷、腺嘌呤、尿苷、 鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品各lmg，置IOmL容量瓶中，加50%甲醇(V/V)定容至10mL，配成標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)照品溶液；③嘌呤和核苷類成分線性關(guān)系的考察將胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液分別以2、4、6、8、10yL進(jìn)樣， 測(cè)得各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的高效液相色譜峰面積；以所得各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)各 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，分別計(jì)算得線性回歸方程；④板藍(lán)根顆粒供試品溶液的高效液相色譜測(cè)定將板藍(lán)根顆粒供試品溶液進(jìn)行 高效液相色譜測(cè)定，分別得到板藍(lán)根顆粒供試品溶液中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷色 譜峰的峰面積，根據(jù)胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的線性回歸方程，計(jì)算得 供試品溶液中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的質(zhì)量，并結(jié)合供試品的質(zhì)量與原板藍(lán)根顆 粒的質(zhì)量的比例，得到板藍(lán)根顆粒中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的含量分別為胞苷 0. 234-0. 235mg/g、腺嘌呤 0. 117-0. 118mg/g、尿苷 0. 473-0. 474mg/g、鳥苷 0. 331-0. 332mg/ g、腺苷0. 447-0. 448mg/g，完成一種中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法。實(shí)施例5(1)板藍(lán)根顆粒電噴霧指紋圖譜測(cè)定①板藍(lán)根顆粒供試樣品溶液的制備以板藍(lán)根顆粒為原料，稱取板藍(lán)根顆粒10g，加50mL水溶解，干燥后置IOmL容量瓶 中，加50% (V/V)甲醇定容至10mL，過濾，即為供試品溶液;②板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜供試品的電噴霧指紋圖譜通過如下步驟得到取IOyL供試品溶液，用甲醇稀釋至500 μ L，做電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧電離源，正離子電離方 式，噴霧電壓為5. OkV，毛細(xì)管溫度190°C，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流速8yL/min，掃描范圍質(zhì)荷比 (m/z) 50-1000，在 m/zl00-400 范圍內(nèi)，存在 m/zl04、m/zll6、m/zl37、m/zl75、m/zl85、m/ z203、m/z259、m/z264、m/z365、m/z381 和 m/z397 離子。(2)板藍(lán)根顆粒中嘌呤和核苷類成分的含量測(cè)定①高效液相色譜實(shí)驗(yàn)條件C18色譜柱4. 6πιπιΧ250πιπι，5μπι ；柱溫35°C ；流動(dòng)相 水和甲醇；水與甲醇體積比為95 5 ；洗脫時(shí)間:30min ；紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng):280nm ；樣品 進(jìn)樣量12yL;②嘌呤和核苷類成分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液的配制分別精密稱取胞苷、腺嘌呤、尿苷、 鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品各lmg，置IOmL容量瓶中，加50%甲醇(V/V)定容至10mL，配成標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)照品溶液；③嘌呤和核苷類成分線性關(guān)系的考察將胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液分別以2、4、6、8、10yL進(jìn)樣， 測(cè)得各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的高效液相色譜峰面積；以所得各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)各 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，分別計(jì)算得線性回歸方程；④板藍(lán)根顆粒供試品溶液的高效液相色譜測(cè)定將板藍(lán)根顆粒供試品溶液進(jìn)行 高效液相色譜測(cè)定，分別得到板藍(lán)根顆粒供試品溶液中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷色 譜峰的峰面積，根據(jù)胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的線性回歸方程，計(jì)算得 供試品溶液中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的質(zhì)量，并結(jié)合供試品的質(zhì)量與原板藍(lán)根顆 粒的質(zhì)量的比例，得到板藍(lán)根顆粒中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的含量分別為胞苷 0. 236-0. 238mg/g、腺嘌呤 0. 116-0. 117mg/g、尿苷 0. 472-0. 473mg/g、鳥苷 0. 331-0. 332mg/ g、腺苷0. 448-0. 449mg/g，完成一種中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法。
權(quán)利要求
一種中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，步驟和條件如下(1)板藍(lán)根顆粒電噴霧指紋圖譜測(cè)定①板藍(lán)根顆粒供試樣品溶液的制備以板藍(lán)根顆粒為原料，稱取板藍(lán)根顆粒2 10g，加10 50mL水溶解，干燥后置10mL容量瓶中，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，過濾，即為供試品溶液；②板藍(lán)根顆粒供試樣品的電噴霧指紋圖譜供試品的電噴霧指紋圖譜通過如下步驟得到取5 10μL供試品溶液，用甲醇稀釋至100 500μL，做電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧電離源，正離子電離方式，噴霧電壓為4.0 5.0kV，毛細(xì)管溫度180 250℃，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流速3 8μL/min，掃描范圍質(zhì)荷比(m/z)50 1000，在m/z100 400范圍內(nèi)，存在m/z104、m/z116、m/z137、m/z175、m/z185、m/z203、m/z259、m/z264、m/z365、m/z381和m/z397離子；(2)板藍(lán)根顆粒中嘌呤和核苷類成分的含量測(cè)定①高效液相色譜實(shí)驗(yàn)條件C18色譜柱4.6mm×250mm，5μm；柱溫20 35℃；流動(dòng)相水和甲醇；水與甲醇體積比為90∶10 95∶5；洗脫時(shí)間15 30min；紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)230 280nm；樣品進(jìn)樣量5 20μL；②嘌呤和核苷類成分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液的配制分別稱取胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品各1mg，置10mL容量瓶中，加50％甲醇(V/V)定容至10mL，配成標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液；③嘌呤和核苷類成分線性關(guān)系的考察將胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液分別以2、4、6、8、10μL進(jìn)樣，測(cè)得各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的高效液相色譜峰面積；以所得各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)，分別計(jì)算得線性回歸方程；④板藍(lán)根顆粒供試品溶液的高效液相色譜測(cè)定按照步驟①高效液相色譜實(shí)驗(yàn)條件，將板藍(lán)根顆粒供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定，分別得到板藍(lán)根顆粒供試品溶液中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷色譜峰的峰面積，根據(jù)胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的線性回歸方程，計(jì)算得供試品溶液中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的質(zhì)量，并結(jié)合供試品的質(zhì)量與中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量的比例，得到中藥板藍(lán)根顆粒中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的含量分別為胞苷0.234 0.238mg/g、腺嘌呤0.116 0.118mg/g、尿苷0.472 0.474mg/g、鳥苷0.331 0.334mg/g、腺苷0.447 0.450mg/g。
全文摘要
本發(fā)明提供一種中藥板藍(lán)根顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，利用軟電離質(zhì)譜技術(shù)對(duì)中藥板藍(lán)根顆粒進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)電噴霧指紋圖譜中特征指紋峰的個(gè)數(shù)及強(qiáng)度進(jìn)行初步評(píng)價(jià)；以胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷五種成分作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，通過高效液相色譜測(cè)定，得到各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品對(duì)應(yīng)色譜峰的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定，得到中藥板藍(lán)根顆粒中胞苷、腺嘌呤、尿苷、鳥苷和腺苷的含量分別為胞苷0.234-0.238mg/g、腺嘌呤0.116-0.118mg/g、尿苷0.472-0.474mg/g、鳥苷0.331-0.334mg/g、腺苷0.447-0.450mg/g。本發(fā)明既定性又定量，保證了中藥板藍(lán)根顆粒質(zhì)量檢測(cè)方法的科學(xué)性和先進(jìn)性。
文檔編號(hào)A61K36/315GK101912428SQ201010251538
公開日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2010年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月12日
發(fā)明者劉志強(qiáng), 劉忠英, 劉舒, 宋鳳瑞, 皮子鳳, 閆峻 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所