專利名稱：氟非尼酮在制備治療銀屑病的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療銀屑病的新藥具體地，本發(fā)明涉及氟非尼酮新的藥用途徑。更具 體地，本發(fā)明涉及氟非尼酮在制備治療銀屑病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
銀屑病(psoriasis)俗稱“牛皮癬”，其病程不定，往往是慢性緩解與惡化交替出 現(xiàn)。臨床上分為四型，即尋常型、膿皰型、關(guān)節(jié)病型與紅皮病型，其中尋常型占90%以上。臨 床表現(xiàn)為皮膚紅斑、丘疹或斑片上覆有銀白色鱗屑，可有不同程度的瘙癢。銀屑病的病理特 點(diǎn)主要是表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(KC)的過度增殖、分化異常及真皮內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤明顯。目前 的治療手段較多，但治療效果不盡人意。治療銀屑病常用藥物有環(huán)孢素，甲氨蝶呤，皮質(zhì) 類固醇激素、焦油類、維甲酸、他扎羅汀、喜樹堿、雷公藤內(nèi)酯等，但許多內(nèi)服治療銀屑病的 藥物具有較強(qiáng)的副作用，如環(huán)孢素系統(tǒng)治療銀屑病有腎毒性、高血壓、惡性腫瘤、感染等不 良反應(yīng)，雷公藤口服治療銀屑病有消化道副反應(yīng)以及對(duì)心血管系統(tǒng)和肝臟有影響。銀屑病 是皮膚免疫系統(tǒng)的病變，外用制劑可減少系統(tǒng)的不良反應(yīng)，因此，應(yīng)加強(qiáng)銀屑病患者的外治 法。對(duì)于外治法中局部經(jīng)皮給藥系統(tǒng)，藥物療效與不良反應(yīng)之比是與其強(qiáng)度和經(jīng)皮吸收相 關(guān)的，我們希望藥物很少的透過皮膚而大量藥物應(yīng)蓄積在皮膚靶部位中。銀屑病的病因及發(fā)病機(jī)制尚未明確，20世紀(jì)90年代以來，對(duì)銀屑病發(fā)病機(jī)制的研 究取得了重大突破，人們逐漸認(rèn)識(shí)到銀屑病是多基因遺傳背景和環(huán)境等多因素作用下的T 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫異常性疾病。其中，Thl細(xì)胞對(duì)銀屑病的發(fā)病與持續(xù)有促進(jìn)作用，而Th2細(xì) 胞卻有與Thl細(xì)胞相反的作用。銀屑病的特點(diǎn)是角質(zhì)形成細(xì)胞(KC)過度增值，角化不全， 伴有多種炎癥細(xì)胞和細(xì)胞因子浸潤，角質(zhì)形成細(xì)胞可分泌多種細(xì)胞因子參與局部免疫反 應(yīng)。其中，Thl和Tc細(xì)胞，在皮損處被激活，產(chǎn)生IFN-Y，TNF，IL_2，IL 一 12等細(xì)胞因子， 而IFN-Y與TNF是引起角質(zhì)細(xì)胞銀屑病改變的主要兩個(gè)細(xì)胞因子，引起角質(zhì)細(xì)胞過度增 生產(chǎn)生銀屑病典型皮損改變。近年來促表皮增殖的細(xì)胞因子研究的較多，如表皮生長因子 (EGF)、角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子(KGF)、轉(zhuǎn)化生長因子一 α (TGF-α )等，但以此為靶目標(biāo)治 療并未取得非常理想的結(jié)果。其中角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子(KGF)是具有促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞 DNA合成的生長因子，由成纖維細(xì)胞分泌產(chǎn)生，在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中有重要作用(Putmins EE, Firth JD, Lohachitranont A. et al. Ke-ratinocyte growth factor (KGF) promotes keratinocyte cell attachment and migr-ation or collagen andfibronectine[J]. Cell Adhes Common 1999,7(3) :211_221)。研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化生長因 β 1 (transforming growth factor, TGF-β 1)高表達(dá)可以協(xié)同或誘導(dǎo)其它分子促進(jìn)銀屑病的發(fā)展(Li A. G.，Wang D. , Feng X. H. Latent TGF-β loverexpression inkeratinocytes results in a severe psoriasis-like skin disorder [J]. The EMBOJournal (2004)，23，1770-1781)。TGF-βΙ 是具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化的一類多功能的細(xì)胞因子，由炎癥浸潤細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn) 生，存在于人的表皮，在創(chuàng)傷愈合、胚胎發(fā)育、細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)形 成、骨的重建、免疫調(diào)節(jié)等過程中發(fā)揮重要作用。研究表明銀屑病病變皮膚部位較正常皮膚
3TGF-β 1(Kane CJ, Knapp AM, Mansbridge JN et al. Transforming growth
factor-beta 1 localization in normal andpsoriasis epidermal keratinocytes in situ [J], J Cell Physiol，1990，144，144-150)，并且銀屑病外周血 TGF-β 1 水平明顯升高， 與銀屑病面積及嚴(yán)重程度指數(shù)(PASI)正相關(guān)(Kallimanis P. G.，Xenos K.，Markantonis L.S.et al. Serum levels of transforminggrowth factor-β 1 in patients with mild psoriasis vulgaris and effect of treatmentwith biological drugs[J] (ahead of print). Clin Dermatol，DOI : 10. 1111/j. 1365-2230. 2008. 03026. x)。TGF-βΙ 在銀屑 病組織中表達(dá)可能與皮膚損傷的輕重情況影響，其在組織和血清中的濃度與年齡，性別 及疾病持續(xù)時(shí)間無關(guān)(H Zaher,OG Shaker, et al. Serum and tissue expression of transforming growth factor betal in psoriasis[J]. ORIGINAL ARTICLE. DOI 10. 1111/ j. 1468-3083. 2008. 03064. x)氟非尼酮(fluorofenidone，AKF-PD)是一種新型抗纖維化小分子化合物，化學(xué)名 為1_(取代苯基)-5_甲基-2-(IH)吡啶酮，為吡非尼酮(pirfenidone)的meto藥，具有和 吡非尼酮相似的藥理學(xué)作用。pirfenidone是由美國Marnac公司研制的新的抗纖維化藥 物，專利CN1386737A公開了吡啶酮類藥物的生產(chǎn)工藝方法。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)這種化合物具 有抑制致纖維化因子TGF-β 1、PDGF等表達(dá)、使前膠原I和III表達(dá)下降、促進(jìn)膠原降解、 抑制成纖維細(xì)胞的繁殖及其響應(yīng)細(xì)胞因子的興奮等作用(Shigeki S,Murakami Τ, Yata N， etal.Treatment of keloid and hypertrophic scars by iontophoretic transdermal deli-very of tranilast. Scand J Plast Reconstr Surg Hand Surg,1997,31 (2) 151-158.)。盡管專利CN1846699A公開了氟非尼酮(AKF-PD)對(duì)各種ECM(細(xì)胞外基質(zhì))產(chǎn)生 細(xì)胞具有抑制作用，能抑制小鼠腎小球系膜細(xì)胞、大鼠心肌成纖維細(xì)胞、人肝星狀細(xì)胞、大 鼠肺成纖維細(xì)胞、人皮膚疤痕纖維細(xì)胞、人腹膜間皮細(xì)胞增殖作用，結(jié)果表明AKF-PD可作 為制備抗器官或組織纖維化藥物的活性成分，且毒副作用小，用藥安全。專利CN101371833A 公開了 1-芳基_2(1H)吡啶酮類化合物在制備治療皮膚瘙癢藥物中的應(yīng)用。CN1775212A公 開了與氟非尼酮結(jié)構(gòu)類似的吡非尼酮用于治療牛皮癬的應(yīng)用，以口服或者局部應(yīng)用的形式 實(shí)施。PCT申請(qǐng)CN2008/072406公布了氟非尼酮作為抗腫瘤藥物的應(yīng)用，用于治療肺癌、乳 腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、肝癌和前列腺癌。然而，到目前為止，尚未將氟非尼酮(AKF-PD)用于治 療銀屑病的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療銀屑病的新藥，即已知化合物氟非尼酮的新用途。本發(fā)明提供氟非尼酮(AKF-PD)在制備治療銀屑病藥物中的應(yīng)用。將氟非尼酮(AKF-PD)用于治療銀屑病時(shí)，主要機(jī)制是抑制銀屑病病變皮膚中的 TGF-β 1的高表達(dá)。本發(fā)明還提供了將氟非尼酮(AKF-PD)在制備治療銀屑病藥物時(shí)，所采用的制劑 可以是本領(lǐng)域常規(guī)的外用制劑，可以是軟膏、凝膠、貼劑、混懸劑或乳劑等，藥物可以以固體 脂質(zhì)納米粒、納米脂質(zhì)體、微乳、固體分散體等形式存在于軟膏、凝膠、貼劑、混懸劑或乳劑 中。
無論使用何種劑型，氟非尼酮(AKF-PD)的濃度應(yīng)當(dāng)在大約0. 5% -10% (wt/wt)， 每次施用量大約5-15mg，每天1-3次。
實(shí)施例 下面通過具體實(shí)施方案進(jìn)一步說明本發(fā)明。所述實(shí)施例僅用于說明或解釋本發(fā)明 的實(shí)施方案，而不能限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。③取處方量的AKF-PD，1,2-丙二醇，尼泊金乙酯乙醇液于60°C水浴中溶解至澄 清，作為B。④將B倒入A，攪勻，滴加三乙醇胺調(diào)pH至6. 0，成澄明凝膠即得。與此類似，按照本領(lǐng)域的常規(guī)方法，借助適用于局部外用制劑的載體和/或賦形 劑，可制備含有氟非尼酮(AKF-PD)的各種局部應(yīng)用的制劑，如霜?jiǎng)⑾磩①N劑、混懸劑或 乳劑等。實(shí)施例3 AKF-PD凝膠劑
成分用量
AKF-PD0. Ig
1，2_丙二醇l.Og
異丙醇l.Og
尼泊金乙酯0. Olg
Carbopol 9400. 25g
三乙醇胺適量
水3. Og清。

操作步驟
①稱取處方量的Carbopol940用水浸泡，使其充分溶脹，備用。
②取處方量的AKF-PD、1，2-丙二醇、異丙醇、尼泊金乙酯于60°C水浴中溶解至澄
③將制備好的②倒入溶脹好的Carbopol940中，攪勻。
④滴加三乙醇胺調(diào)pH至6.0，成澄明凝膠即得。 實(shí)施例4AKF-PD乳劑
成分用量AKF-PD0.5g
大豆油1.5g
磷脂0.5g
明膠0.02g
甘油0.4g
乙二醇0.4g
有機(jī)硅0.06g
水7.Og
操作步驟①取處方量的明膠用l.Og水浸泡，使其充分溶脹，備用。②取處方量的AKF-PD、大豆油、磷脂于60°C水浴中混合溶解，作為油相。③將處方量的甘油、乙二醇、明膠溶液和有機(jī)硅在攪拌下依次加入到水中，不斷攪 拌直至溶解成均勻的液體，作為水相。④在高速剪切乳化儀下，將水相緩慢加入到油相，剪切速度為IOOOOrpm，剪切6分 鐘，得到乳白色不透明的乳劑。實(shí)施例5 AKF-PD乳膠劑
6
成分用量
AKF-PD0. Ig
油酸0. 2g
吐溫-800. 04g
Carbopol 9400. 25g
尼泊金乙酯0. 02g
三乙醇胺適量
甘油0. 2g
水3. Og操作步驟①稱取處方量的Carbopol 940用水浸泡，使其充分溶脹，備用。②取處方量的AKF-PD、油酸、吐溫-80于60°C水浴中混合溶解，作為油相。③將處方量的尼泊金乙酯、甘油、水于60°C水浴中混合溶解，作為水相。④在高速剪切乳化儀下，將水相緩慢加入到油相，剪切速度為lOOOOrpm，剪切6分 鐘，得到乳白色不透明的乳劑。⑤將上述乳劑加入到溶脹好的Carbopol 940中，攪勻，滴加三乙醇胺調(diào)pH至6. 0，
即得透明凝膠。⑥將上述④中制備好的乳劑加入到凝膠中，混勻，即得。實(shí)施例6 AKF-PD治療銀屑病的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)鼠尾鱗片因表皮正常角化缺乏顆粒層，其天然的角化形成與人類銀屑病表皮相 似，故可模擬銀屑病角化不全的特點(diǎn)。利用此模型可評(píng)價(jià)藥物促進(jìn)顆粒層形成的作用，認(rèn)為 藥物如能促進(jìn)鼠尾顆粒層形成，則可能具有抗銀屑病作用。具體操作取ICR小鼠40只，雌雄各半，體重25 30g，隨機(jī)分成5組，每組10 只。給藥組為三個(gè)劑量AKF-PD軟膏組，一個(gè)劑量空白軟膏組。各組每日涂抹小鼠尾部2 次(0. 2g ·只―1 · Cf1)。連續(xù)用藥14天，末次涂抹后次日處死動(dòng)物，在距鼠尾根部2cm處取 表皮。進(jìn)行常規(guī)組織切片，HE染色。光鏡下觀察，凡兩個(gè)毛囊之間的鱗片表皮有連續(xù)成行 的顆粒細(xì)胞層者，稱為有顆粒層形成的鱗片。計(jì)數(shù)每100個(gè)鱗片中有顆粒層的鱗片數(shù)(凡 兩個(gè)毛囊口之間的鱗片表皮有排列成行的顆粒層者計(jì)為有顆粒層形成的鱗片)，比較各組 數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。表1不同劑量AKF-PD軟膏對(duì)小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的影響
編號(hào)_m3\_有顆粒層的鱗片數(shù)
12%AKF-PD 軟膏組13. 05士0.25**
25%AKF-PD 軟膏組19. 72士0.35**
0097 3 10%AKF-PD 軟膏組 20.81 士0.28**
4空白軟膏組6. 02士0.25
5正常對(duì)照組5. 58 士 1.36注與空白軟膏組對(duì)比，**P < 0.01結(jié)果表明，2% -10% AKF-PD軟膏組與空白軟膏組相比，P < 0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 即不同劑量的AKF-PD軟膏劑對(duì)鼠尾鱗片表皮顆粒層形成的作用與空白軟膏基質(zhì)對(duì)鼠尾鱗 片表皮顆粒層形成的作用相比，差異有顯著性。提示AKF-PD對(duì)鼠尾鱗片表皮顆粒層形成有明顯的促進(jìn)作用，顆粒層的鱗片數(shù)顯著增多。因此，AKF-PD可以改變表皮的角化程度，從角 化不全恢復(fù)到正常角化，進(jìn)而對(duì)銀屑病有治療作用。實(shí)施例7普萘諾爾誘發(fā)銀屑病模型取50只豚鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，即正常對(duì)照組、空白軟膏組及三個(gè)劑量 AKF-PD軟膏組，除正常對(duì)照組外，其余各組用棉簽涂普萘洛爾搽劑于左側(cè)耳廓(0. 3g/cm2)， 2次/d，連續(xù)2周以造成耳部皮膚銀屑樣皮損模型。此后開始用藥，正常對(duì)照組不用藥，其 余組每日給藥2次(0. 2g/只· d “)，用藥2周后，取豚鼠左側(cè)耳廓皮膚，用10%甲醛液固 定，石臘包埋，HE染色，觀察耳廓皮膚角質(zhì)層、顆粒層、棘細(xì)胞層、基底細(xì)胞層等變化。同時(shí) 在光鏡下(X400)用測微尺測表皮厚度，然后換算成實(shí)際厚度(μπι)，進(jìn)行各組間差異性比 較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。表2不同劑量AKF-PD對(duì)普萘諾爾誘發(fā)銀屑病模型的影響
編號(hào)_m\_表皮厚度(μπι)
12%AKF-PD 軟膏組40. 31 士0. 67 *
25%AKF-PD 軟膏組42. 33 士0. 12 *
310%AKF-PD 軟膏組45. 53 士 1. 26 *
4空白軟膏組18. 06士0.56
5正常對(duì)照組19. 22 士0.13 注與空白軟膏組相比*P <0. 05
結(jié)果表明，2% -10% AKF-PD軟膏組與空白軟膏組相比，P < 0. 05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 即不同劑量AKF-PD軟膏對(duì)表皮增厚的作用與空白軟膏相比，差異有顯著性，提示AKF-PD對(duì) 表皮增厚有明顯的促進(jìn)作用，也就是說AKF-PD對(duì)普萘諾爾誘發(fā)的銀屑病模型有治療作用。實(shí)施例8 AKF-PD軟膏治療患銀屑病志愿者的效果結(jié)果表明用AKF-PD軟膏治療患銀屑病，有顯著效果。
權(quán)利要求
氟非尼酮在制備治療銀屑病的藥物中的應(yīng)用。
2.按照權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中所述的藥物是局部外用的藥物。
3.按照權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述的局部外用的藥物包括軟膏、凝膠、貼劑乳劑、混 懸劑或洗劑。
4.按照權(quán)利要求3的應(yīng)用，藥物可以固體脂質(zhì)納米粒、納米脂質(zhì)體、微乳、固體分散體 等形式存在于軟膏、凝膠、貼劑、乳劑、混懸劑或洗劑中。
5.按照權(quán)利要求3的應(yīng)用，其中所述的制劑中藥物濃度為0.5%-10%(wt/wt)。，一般 用 1. 0% -5. 0%。
6.按照權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其中每次施用量大約5-15mg，每天1_3次。
全文摘要
本發(fā)明涉及氟非尼酮新的藥用應(yīng)用。更具體地，本發(fā)明涉及氟非尼酮在制備治療銀屑病的藥物的應(yīng)用。在治療銀屑病時(shí)，以局部外用的形式實(shí)施。
文檔編號(hào)A61K31/4412GK101953836SQ201010253460
公開日2011年1月26日 申請(qǐng)日期2010年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月13日
發(fā)明者丁勁松, 胡高云, 陶立堅(jiān) 申請(qǐng)人:中南大學(xué)