專利名稱：一種鱉甲免疫佐劑及含有該佐劑的流感疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鱉甲免疫佐劑，還涉及含有鱉甲免疫佐劑的流感疫苗，屬于生物 技術(shù)領(lǐng)域，
背景技術(shù)：
鱉甲為鱉科動物鱉(Trionyx sinensis ffiegmann)的背甲，主產(chǎn)于湖北、湖南、安 徽等地，分布很廣，由東北至廣東的海南島，以及四川、云南、陜西、甘肅等地均有，全年均可 捕捉，以秋、冬二季為多，殺死后置沸水中燙至背甲上硬皮能剝落時(shí)取出，除去殘肉，曬干， 或以砂炒后醋淬用。鱉甲始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代本草均有記載。性咸，微寒，歸肝、腎 經(jīng)。蜀本《藥性論》載“治勞魔，除骨熱”?！侗静輩R言》載“鱉甲，除陰虛熱瘧，解勞熱骨蒸之 藥也”，能治陽虛胃弱，食飲不消，嘔惡泄瀉。《日華子本草》載“以溫瘧、血瘕、宿食、冷塊、痃 癖、冷瘕及破癥結(jié)為言也”。為2005年版《中國藥典》收載品種，具有滋陰潛陽，軟堅(jiān)散結(jié)， 退熱除蒸的功效。主要用于陰虛發(fā)熱，勞熱骨蒸，虛風(fēng)內(nèi)動，經(jīng)閉，癥瘕，久瘧瘧母等癥。近十余年人們對其化學(xué)成分和藥理學(xué)作用方面進(jìn)行了很多研究，實(shí)驗(yàn)證明，鱉甲 提取物具有能明顯提高小鼠耐缺氧能力和抗冷凍作用，延長小鼠游泳時(shí)間，具有抗疲勞作 用；能顯著提高小鼠空斑形成細(xì)胞的溶血能力，促進(jìn)溶血素抗體生成；并能增強(qiáng)小鼠遲發(fā) 型超敏反應(yīng)。能增加肌肉收縮強(qiáng)度和畫紋面積、延長持續(xù)收縮時(shí)間的作用。具有抑制結(jié)締 組織的增生、提高血漿蛋白、散結(jié)消腫的作用，可提高抗腫瘤的免疫能力，能降低實(shí)驗(yàn)性甲 亢動物血漿CAMP含量；能提高淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，延長抗體存在時(shí)間，增強(qiáng)免疫功能；能保 護(hù)腎上腺皮質(zhì)功能；能促進(jìn)造血功能，提高血紅蛋白含量；能抑制結(jié)締組織增生，故可消散 腫塊；有防止細(xì)胞突變作用；還有一定的鎮(zhèn)靜作用。這些藥理學(xué)作用與鱉甲所含的多種有效成分，如動物膠、骨膠原、角蛋白、鱉多糖、 碘質(zhì)、維生素丁和鋅、銅、錳等10多種微量元素等成分密切相關(guān)。佐劑是一類能增強(qiáng)抗原的免疫原性、提高疫苗效果的物質(zhì)，正是佐劑技術(shù)，使國產(chǎn) 疫苗在價(jià)格上具有明顯優(yōu)勢。在流感疫苗中使用佐劑不僅可以增強(qiáng)免疫原性，還可以降低 抗原用量。特別在應(yīng)對大流行流感時(shí)，使用佐劑降低抗原用量進(jìn)而擴(kuò)大接種人群數(shù)量的特 性顯得尤為重要。在大流行流感疫苗研究中應(yīng)用到的佐劑主要有鋁佐劑(氧化鋁、氫氧化 鋁、磷酸鋁)、MF59(是一種水包油的乳劑，包含鯊烯，0. 5% Tween80和0. 5%三油酸聚 山梨脂的水包油乳液)、LTK63和新型佐劑等。目前上市流感疫苗使用的佐劑主要是鋁佐劑和MF59。但事實(shí)上鋁佐劑對蛋白亞單 位疫苗誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生的能力較弱，不能有效地誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，在一些情況下還可產(chǎn)生與超 敏反應(yīng)有關(guān)的IgE ；MF59作為佐劑使用在增免疫原性的同時(shí)，也增強(qiáng)了反應(yīng)原性，如接種部 位紅、腫、熱、痛等癥狀增加。此外，由于安全性、副作用等問題，LTK63和新型佐劑等其他物 質(zhì)，包括殼聚糖、ISCOMs等作為流感疫苗佐劑也還只限于研究階段。因此，隨著各種新發(fā)流 感在世界的爆發(fā)和對人感染性的增強(qiáng)，加快新型流感疫苗的研究，尋求更高安全性和免疫 原性的佐劑仍然是流感疫苗發(fā)展的一個(gè)需要。
佐劑發(fā)揮作用是由于能增強(qiáng)抗原的免疫原性、提高疫苗效果，因此佐劑一般可在 多種疫苗中進(jìn)行使用，如目前的鋁佐劑。所以佐劑的研究不僅對流感，而且對其它感染性疾 病的防治也有很高的價(jià)值。鱉甲提取物作為免疫佐劑的應(yīng)用，以流行性感冒(簡稱流感)病毒疫苗為例得到 了應(yīng)用性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。流行性感冒(簡稱流感)是指由流感病毒引起，具有高度傳染性的急性呼吸道傳 染病。流感發(fā)病快，傳染性強(qiáng)，發(fā)病率高，主要通過空氣飛沫傳播。流感的流行沒有明顯的 季節(jié)性，只是冬末春初發(fā)病率稍高一點(diǎn)，而且?guī)缀趺磕甓紩l(fā)生，或者局部爆發(fā)，或者大規(guī) 模流行，甚至造成世界規(guī)模的大流行，嚴(yán)重危害了人類的健康和生命，給社會造成了沉重的 負(fù)擔(dān)。到目前為止，接種流感疫苗被認(rèn)為是預(yù)防流感發(fā)生與傳播的最佳方法。由于流感病 毒變異很快，通常每年的流行類型都有所不同，生產(chǎn)企業(yè)一般都在世界衛(wèi)生組織(WHO)指 導(dǎo)下選擇流感病毒毒株進(jìn)行疫苗生產(chǎn)，每年接種最新的流感疫苗才能達(dá)到預(yù)防的效果。一 旦流感病毒變異造成大規(guī)模流行或者是世界性流行，疫苗需求量會大量增加，但由于目前 流感疫苗生產(chǎn)工藝的限制，短時(shí)間內(nèi)不可能提供足量疫苗，所以，應(yīng)用免疫佐劑，減少疫苗 用量并提高其效果就顯得非常重要。經(jīng)系統(tǒng)查閱文獻(xiàn)和專利，目前未發(fā)現(xiàn)關(guān)于鱉甲提取物具有免疫佐劑作用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為解決目前免疫佐劑單一，副作用難以避免，疫苗生產(chǎn)供應(yīng)量有限，難以應(yīng)付感染 性疾病暴發(fā)時(shí)疫苗需求量大，疫苗起效時(shí)間慢等問題，本發(fā)明提供一種能提高疫苗免疫效 果，同時(shí)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益的鱉甲免疫佐劑。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種含有鱉甲免疫佐劑的流感疫苗。本發(fā)明提供的鱉甲免疫佐劑是由下列質(zhì)量比的組分組成的鱉甲提取物 0.001 100%載體0 99. 999%。所述載體由下列質(zhì)量比的組分組成乳化劑20 70%助乳化劑 20 70%油相1 50%水相1 30%。所述乳化劑為常規(guī)的TweenSO或聚氧乙烯蓖麻油中的一種，或者為質(zhì)量混合比為 3 2 2 3的常規(guī)TweenSO與SpanSO的混合物，或者為質(zhì)量混合比為1 1的常規(guī)聚 氧乙烯蓖麻油與SpanSO的混合物。所述助乳化劑為常規(guī)的1，2_丙二醇或聚乙二醇400中的一種。所述油相為常規(guī)的肉豆蔻酸異丙酯或油酸乙酯或注射用大豆油中的一種。所述水相為注射用水或者含有藥物或疫苗成分的注射用水溶液。本發(fā)明提供的鱉甲免疫佐劑，優(yōu)選下列質(zhì)量比鱉甲提取物 0.1 100%載體0 99.9%。
本發(fā)明提供的一種含有鱉甲免疫佐劑的流感疫苗的組成是鱉甲免疫佐劑與流感 疫苗血凝素的質(zhì)量比為50 180050，其中，所述鱉甲免疫佐劑由下列質(zhì)量比的組分組成鱉甲提取物 0.001 100%載體0 99. 999%。所述鱉甲提取物是用乙醇或水作為溶劑，經(jīng)現(xiàn)有技術(shù)的常規(guī)方法提取得到的，具 體是乙醇提取將干燥的鱉甲粉碎成粉，置于容器內(nèi)，用乙醇冷浸或溫浸提取，或者加 熱回流提取，過濾，取濾液，回收濾液中的乙醇，濃縮濾液得浸膏；其中，每次提取時(shí)，乙醇的 質(zhì)量濃度為60 95%，乙醇加入量是鱉甲藥材質(zhì)量的2 10倍，冷浸是在室溫下浸泡1 10天，溫浸是在40 60°C溫度下浸泡1 2小時(shí)，提取次數(shù)為1 3次；加熱回流提取是 在20 40°C溫度下，回流提取1 3次，每次20分鐘 4小時(shí)；水提取將干燥的鱉甲粉碎成粉，置于容器內(nèi)，用蒸餾水冷浸或溫浸提取，或者加 熱煎煮提取，過濾，取濾液，濃縮濾液得浸膏；其中，每次提取時(shí)，蒸餾水的加入量是鱉甲藥 材質(zhì)量的2 10倍，冷浸是在室溫下浸泡1 10天，溫浸是在40 60°C溫度下浸泡1 2小時(shí)，提取次數(shù)為1 3次；加熱煎煮提取是每次加熱煮沸20分鐘 4小時(shí)，提取次數(shù) 為1 3次。另外，所述鱉甲提取物還可采用現(xiàn)有技術(shù)的除水提取、乙醇提取以外的其它常規(guī) 溶劑提取而得到的提取物，如采用甲醇、丙酮、乙酸乙酯等為溶劑進(jìn)行的提取。本發(fā)明提供的鱉甲免疫佐劑與傳統(tǒng)氫氧化鋁佐劑相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)1)鱉甲提取物制備方法簡單、經(jīng)濟(jì)、環(huán)保。2)鱉甲是一種天然中草藥，常作為保健品使用。在流感疫苗中作為佐劑使用，安全 性高、副作用小。例如用含鱉甲提取物的流感疫苗肌肉注射小鼠，4小時(shí)內(nèi)觀察小鼠活動性 無明顯減弱，未見全身不良反應(yīng)。而用含氫氧化鋁佐劑流感疫苗注射，可觀察到小鼠活動性 明顯減弱，注射局部腫脹明顯。3)用鱉甲提取物為佐劑的流感疫苗，制備方法簡便，疫苗質(zhì)量容易控制；而以氫氧 化鋁為佐劑制備流感疫苗，制備和存儲過程中，影響因素較多，對于疫苗的質(zhì)量較難控制。4)用鱉甲提取物作為流感疫苗佐劑，可更好的提高疫苗免疫原性，大大降低疫苗 抗原用量。例如通過以鱉甲提取物為佐劑的流感疫苗和以氫氧化鋁為佐劑的流感疫苗免疫 小鼠發(fā)現(xiàn)，以鱉甲提取物為佐劑使用的疫苗抗原用量即使是以氫氧化鋁為佐劑的疫苗抗原 用量的一半或者更少，同樣可以達(dá)到理想的免疫保護(hù)效果。


圖1為不同接種組在56天內(nèi)的血凝抑制抗體效價(jià)變化；圖2為不同接種組在接種后7天內(nèi)的體重增長情況；圖3為不同接種組在42天內(nèi)的血凝抑制抗體效價(jià)；圖4為不同接種組在2周、4周、6周的血凝抑制抗體效價(jià)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但并不以此來限定本發(fā)明。
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本發(fā)明實(shí)施例中未特別指明的組分均為市購產(chǎn)品，所用設(shè)備或儀器均是常規(guī)的。實(shí)施例1鱉甲乙醇提取物的制備取干燥鱉甲40g，粉碎成粉，置于容器內(nèi)，用4倍即160ml 質(zhì)量濃度為65%的乙醇，按常規(guī)進(jìn)行加熱回流提取，其中，每次加熱溫度為50°C，回流時(shí)間 為60分鐘，提取次數(shù)為2次，過濾后，對濾液進(jìn)行減壓回收乙醇后，余下濾液經(jīng)濃縮干燥，得浸膏。實(shí)施例2鱉甲水提取物的制備取干燥鱉甲40g，粉碎成粉，置于容器內(nèi)，用8倍即320ml蒸 餾水按常規(guī)進(jìn)行加熱煎煮提取，其中，每次煎煮時(shí)間為4小時(shí)，提取次數(shù)為3次，過濾，合并 濾液后，對濾液進(jìn)行濃縮干燥，得浸膏。實(shí)施例3納米乳劑載體的制備1)按下列質(zhì)量比備料2g聚氧乙烯蓖麻油，2g聚乙二醇400，2g肉豆蔻酸異丙酯， 1.07g注射用水；2)向混合攪拌瓶內(nèi)加入2g聚氧乙烯蓖麻油，2g聚乙二醇400，在轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/ 分鐘，室溫條件下，持續(xù)攪拌5分鐘，混勻后加入2g肉豆蔻酸異丙酯，混合均勻得混合物；3)在上述2)的混合物中滴入1. 07g注射用水，同時(shí)在轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分鐘，室溫 下，攪拌混合物至液體為透明，得到納米乳劑載體；4)對3)制得的納米乳劑載體進(jìn)行如下檢測1.經(jīng)馬爾文粒徑檢測儀檢測，粒徑范 圍為28. 706 46. 952nm,合格；2.經(jīng)3000rpm, 15min離心分離，納米乳劑體系不分層，合 格；3.經(jīng)4°C放置50天，納米乳劑體系無變化，合格。實(shí)施例41)稱取實(shí)施例2的鱉甲提取物1. 75mg，溶于535ul市購的H3N2流感病毒裂解疫 苗(血凝素含量43. 67 μ g/ml)，得含鱉甲提取物的流感疫苗；2)取Ig聚氧乙烯蓖麻油，Ig聚乙二醇400，Ig肉豆蔻酸異丙酯放于攪拌瓶中，轉(zhuǎn) 速維持在300轉(zhuǎn)/分鐘，室溫?cái)嚢?分鐘，至充分混勻，得混合液體；3)在上述2)的混合溶液中緩慢滴入1)制備的含鱉甲提取物的流感疫苗535ul， 同時(shí)維持轉(zhuǎn)速在300轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌至溶液為透明，得到以鱉甲提取物、納米乳劑載體為佐 劑的流感病毒疫苗，其中鱉甲提取物的質(zhì)量比為0. 058%，載體質(zhì)量比為99. 942% ；鱉甲 免疫佐劑與流感疫苗血凝素的質(zhì)量比為128500。4)對3)制得的含有鱉甲免疫佐劑的流感病毒疫苗進(jìn)行如下檢測1.經(jīng)馬爾文粒 徑檢測儀檢測，粒徑范圍為32. 724 46. 435nm,合格；2.經(jīng)3000rpm，15min離心分離，納米 乳劑體系不分層，合格；3.經(jīng)4°C放置50天，納米乳劑體系無變化，合格。用實(shí)施例4制備的含有鱉甲免疫佐劑的流感病毒疫苗，注射標(biāo)準(zhǔn)體重昆明種雄性 小鼠，每只小鼠200ul，此200ul注射疫苗中流感疫苗血凝素含量為1. 3ug,鱉甲0. Img,第1 天接種一針，第21天補(bǔ)種一針，于首次免疫后第一周開始，每隔7天采尾血，分離血清測定 血凝抑制效價(jià)，同時(shí)設(shè)立注射等量的生理鹽水空白對照組、等血凝素含量的Al (OH)3佐劑流 感疫苗的佐劑對照組、等血凝素含量的單獨(dú)流感疫苗對照組。得到的血凝抑制抗體效價(jià)檢 測結(jié)果見附圖1。
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實(shí)施例51)稱取實(shí)施例1的鱉甲提取物3. 5mg，溶于382ul市購的H3N2流感病毒裂解疫苗 (血凝素含量為43. 67 μ g/ml)，得含鱉甲提取物的流感疫苗；2)稱取0. 5g聚氧乙烯蓖麻油，0. 5g Span80, Ig 1，2_丙二醇，Ig肉豆蔻酸異丙酯 于攪拌瓶中，轉(zhuǎn)速維持在200轉(zhuǎn)/分鐘，室溫?cái)嚢?分鐘，至充分混勻，得混合溶液；3)在上述2)的混合溶液中緩慢滴入1)制備的含鱉甲提取物的流感疫苗400ul， 同時(shí)維持轉(zhuǎn)速在100轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌至溶液為黃棕色透明，得到以鱉甲提取物、納米乳劑載 體為佐劑的流感病毒疫苗。其中鱉甲提取物的質(zhì)量比為0. 117%，載體質(zhì)量比為99. 883%； 鱉甲免疫佐劑與流感疫苗血凝素的質(zhì)量比為180045。實(shí)施例61)制備下列不同的佐劑或溶液a)取實(shí)施例2的鱉甲提取物0. 2mg溶于160 μ 1生理鹽水，備用；b)取濃度為15. 98mg/ml的氫氧化鋁12. 5 μ 1，其中含AL (OH) 30. 2mg，加入生理鹽 水至體積為160 μ 1，備用；c) 160 μ 1生理鹽水，備用；d) 200 μ 1生理鹽水，備用；2)制備下列不同的疫苗取血凝素含量為43. 67 μ g/ml的市購H3N2流感病毒裂解疫苗40 μ 1，分別和上述 a、b、c不同溶液混合，分別得到含有鱉甲免疫佐劑的流感疫苗樣品A、含有AL (OH)3佐劑的 流感疫苗樣品B、單獨(dú)的流感疫苗樣品C。d組不加疫苗，為生理鹽水空白對照樣品D。所配 置的上述A、B、C、D四個(gè)樣品均制備三份，體積均為200μ1，備用；其中含有鱉甲免疫佐劑的 流感疫苗樣品A中鱉甲提取物的質(zhì)量比為100%，載體質(zhì)量比為0%;鱉甲免疫佐劑與流感 疫苗血凝素的質(zhì)量比為144。3)免疫接種及檢測用上述2)所配的Α、B、C、D四個(gè)不同的樣品分別免疫標(biāo)準(zhǔn)體重雌性昆明小鼠，每 組3只，每只肌肉注射200ul，第1天接種一針，第21天補(bǔ)種一針。于第一天接種前和接種 后第8天對各組小鼠進(jìn)行體重測量，對7天內(nèi)各組平均增長的體重進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果見附圖2 ； 并于首次免疫后14天、21天、28天、35天、42天取尾血，分離血清測定血凝抑制效價(jià)，結(jié)果 見附圖3。實(shí)施例71)制備下列不同的疫苗A、取實(shí)施例1的鱉甲提取物0. 3mg溶于178. 5μ 1生理鹽水，然后加入市購的Η3Ν2 流感裂解疫苗20μ 1至終體積為200μ 1，Η3Ν2流感裂解疫苗的血凝素含量為0. 87ug，得含 有鱉甲免疫佐劑的流感病毒疫苗，備用；其中鱉甲提取物的質(zhì)量比為100%，載體質(zhì)量比 為0% ；鱉甲免疫佐劑與流感疫苗血凝素的質(zhì)量比為345。B、取實(shí)施例2的鱉甲提取物0. Img溶于160 μ 1生理鹽水中，然后加入市購的Η3Ν2 流感裂解疫苗40μ 1至終體積200μ 1，Η3Ν2流感裂解疫苗的血凝素含量為1. 75μ g，得含 有鱉甲免疫佐劑的流感病毒疫苗，備用；其中鱉甲提取物的質(zhì)量比為100%，載體質(zhì)量比 為0% ；鱉甲免疫佐劑與流感疫苗血凝素的質(zhì)量比為57。
C、取H3N2流感裂解疫苗40 μ 1，其中含血凝素1. 75 μ g，與160 μ 1生理鹽水混合 至終體積為200 μ 1，作為單獨(dú)疫苗對照組，備用；D、取濃度為15. 98mg/ml的氫氧化鋁佐劑37. 5 μ 1，其中含0. 6mgAL (OH) 3，與含血 凝素1. 75 μ g的流感疫苗40 μ 1混合，然后加入生理鹽水至終體積200 μ 1，作為AL (OH) 3佐 劑疫苗對照組，備用Ε、生理鹽水200 μ 1，為空白對照組，備用；2)免疫接種及抗體檢測將上述配好的Α、B、C、D、E五個(gè)樣品分別免疫標(biāo)準(zhǔn)體重昆明雌性小鼠，肌肉注射， 每只200 μ 1，每組5只，第1天接種一針，第21天補(bǔ)種一針，分別于首次免疫后2周、4周、6 周進(jìn)行尾部采血，分離血清，檢測血凝抑制抗體效價(jià)，結(jié)果見附圖4。結(jié)論本發(fā)明提供的鱉甲免疫佐劑具有顯著的免疫佐劑效果，毒副作用小，可用于 人、獸多種疫苗，以防治各種感染性疾病。
權(quán)利要求
一種鱉甲免疫佐劑，其特征在于由下列質(zhì)量比的組分組成鱉甲提取物0.001～100％載體 0～99.999％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱉甲免疫佐劑，其特征在于所述載體由下列質(zhì)量比的組分組成乳化劑 20 70% 助乳化劑 20 70% 油相1 50%水相1 30%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鱉甲免疫佐劑，其特征在于所述乳化劑為TweenSO或聚氧乙 烯蓖麻油中的一種，或者為質(zhì)量混合比為3 2 2 3的TweenSO與SpanSO的混合物，或 者為質(zhì)量混合比為1 1的聚氧乙烯蓖麻油與SpanSO的混合物；所述助乳化劑為1，2_丙 二醇或聚乙二醇400中的一種；所述油相為肉豆蔻酸異丙酯或油酸乙酯或注射用大豆油中 的一種；所述水相為注射用水或者含有藥物或者疫苗成分的注射用水溶液。
4.一種鱉甲免疫佐劑，其特征在于由下列優(yōu)選的質(zhì)量比的組分組成 鱉甲提取物 0.1 100%載體0 99. 9%。
5.一種含有鱉甲免疫佐劑的流感疫苗，其特征在于鱉甲免疫佐劑與流感疫苗血凝素的 質(zhì)量比為50 180050，其中，所述鱉甲免疫佐劑由下列質(zhì)量比的組分組成鱉甲提取物 0.001 100% 載體0 99. 999%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱉甲免疫佐劑，其特征在于所述鱉甲提取物是用乙醇或水作 為溶劑，經(jīng)現(xiàn)有技術(shù)的常規(guī)方法提取得到的，具體是乙醇提取將干燥的鱉甲粉碎成粉，置于容器內(nèi)，用乙醇冷浸或溫浸提取，或者加熱回 流提取，過濾，取濾液，回收濾液中的乙醇，濃縮濾液得浸膏；其中，每次提取時(shí)，乙醇的質(zhì)量 濃度為60 95%，乙醇加入量是鱉甲藥材質(zhì)量的2 10倍，冷浸是在室溫下浸泡1 10 天，溫浸是在40 60°C溫度下浸泡1 2小時(shí)，提取次數(shù)為1 3次；加熱回流提取是在 20 60°C溫度下，回流提取1 3次，每次20分鐘 4小時(shí)；水提取將干燥的鱉甲粉碎成粉，置于容器內(nèi)，用蒸餾水冷浸或溫浸提取，或者加熱煎 煮提取，過濾，取濾液，濃縮濾液得浸膏；其中，每次提取時(shí)，蒸餾水的加入量是鱉甲藥材質(zhì) 量的2 10倍，冷浸是在室溫下浸泡1 10天，溫浸是在40 60°C溫度下浸泡1 2小 時(shí)，提取次數(shù)為1 3次；加熱煎煮提取是每次加熱煮沸20分鐘 4小時(shí)，提取次數(shù)為1 3次。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種鱉甲免疫佐劑及含有該佐劑的流感疫苗，其中鱉甲免疫佐劑由下列質(zhì)量比的組分組成鱉甲提取物0.001～100％，載體0～99.999％。所述含有鱉甲免疫佐劑的流感疫苗的組成是鱉甲免疫佐劑與流感疫苗血凝素的質(zhì)量比為50～180050。本發(fā)明提供的鱉甲佐劑具有顯著的免疫佐劑效果，用于各種人、獸疫苗中，能起到有效的疾病防治作用。鱉甲提取物作為流感疫苗的免疫佐劑，與傳統(tǒng)氫氧化鋁佐劑比較，其使用安全性高、副作用小，能更好地提高流感疫苗免疫原性，在制備流感疫苗過程中，其方法簡便，經(jīng)濟(jì)環(huán)保，質(zhì)量容易控制，大大降低了流感疫苗抗原用量，能夠滿足流行性流感暴發(fā)時(shí)的免疫需求。
文檔編號A61K39/145GK101926994SQ20101025694
公開日2010年12月29日 申請日期2010年8月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月19日
發(fā)明者呂青, 李慧, 李映波, 程永現(xiàn), 陳芹芹 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所;中國科學(xué)院昆明植物研究所