專利名稱：一種治療腫瘤的小牛脾提取物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種提取物，特別涉及一種治療腫瘤的小牛脾提取物。
背景技術：
癌癥發(fā)病率和死亡率逐年上升，嚴重威脅人類健康，已成為人類死亡的主要原因 之一。西醫(yī)治療多以手術、放療、化療為主，但是應用化療或放療，往往引起惡心，食欲不振， 血象變化，機體免疫功能損害等毒副作用，在癌細胞受到抑制或部分殺滅的同時，人體正常 組織細胞也相應的受到極大地摧殘和傷害，因此導致許多患者無法堅持完成放、化療療程， 失去有效治療機會。本發(fā)明提供的小牛脾提取物注射液，是由健康乳牛(出生24h以內)脾臟為原料 提取而成的無菌水溶液。其既能抑制腫瘤細胞，同時可以拮抗化療藥的副作用，提高患者體 質，使患者能堅持完成放、化療療程，延長生存期。

發(fā)明內容
本發(fā)明一個目的在于提供一種治療腫瘤的小牛脾提取物；本發(fā)明的另一個目的在 于提供小牛脾提取物在制備治療急性早幼粒細胞白血病藥物中的應用。本發(fā)明目的在于提供一種治療腫瘤的小牛脾提取物注射液，其中2 6體積份小 牛脾提取物注射液中含5-15重量份多肽、0. 4-1重量份核糖；所述小牛脾提取物注射液是 由如下方法制備領取乳牛的脾臟(出生24小時以內)，除去掉結締組織和脂肪，用0. 9% 氯化鈉溶液清洗，加入1-5倍量的生理鹽水進行勻漿1 5次，膠體磨粒度為2 8 μ m ；將 勻漿液-10°C -30°C深凍，達到完全凍結后，取出放入20°C 50°C以下水浴中解凍，完全 融化后繼續(xù)-10°C -30°C條件下深凍，如此反復進行三次；將凍融后的藥液60V 100°C 保溫30-40分鐘，速降溫至10°C 20°C ；將上述溶液離心，離心速度為3000-4000轉/分，溫 度0 10°C以下，離心15-30分鐘，收集上清液；分別用100000 50000道爾頓、10000 9000道爾頓、8000 5000道爾頓的膜超濾；0. 20 μ m濾芯無菌過濾分裝，即得注射液。所 述重量份與體積份的關系為mg/ml的關系。上述治療腫瘤的小牛脾提取物注射液，其中2. 5體積份小牛脾提取物注射液中優(yōu) 選含6. 25重量份多肽、0. 475重量份核糖。上述治療腫瘤的小牛脾提取物注射液，其中2. 5體積份小牛脾提取物注射液中優(yōu) 選含10. 5重量份多肽、0. 95重量份核糖。上述治療腫瘤的小牛脾提取物注射液，其中2. 5體積份小牛脾提取物注射液中優(yōu) 選含9重量份多肽、0. 6重量份核糖。本發(fā)明目的在于提供一種治療腫瘤的制劑，該制劑由臨床日用劑量的小牛脾提取 物制劑和臨床日用劑量的環(huán)磷酰胺制劑組成，其中小牛脾提取物制劑中多肽與核糖的重量 比為5-15 0. 4-1。上述治療腫瘤的制劑，該制劑由臨床日用劑量的小牛脾提取物制劑和臨床日用劑
3量的環(huán)磷酰胺制劑組成，其中小牛脾提取物制劑中多肽與核糖的重量比為6. 25 0.475。上述治療腫瘤的制劑，該制劑由臨床日用劑量的小牛脾提取物制劑和臨床日用劑 量的環(huán)磷酰胺制劑組成，其中小牛脾提取物制劑中多肽與核糖的重量比為9 0.6。上述治療腫瘤的制劑，該制劑由臨床日用劑量的小牛脾提取物制劑和臨床日用劑 量的環(huán)磷酰胺制劑組成，其中小牛脾提取物制劑中多肽與核糖的重量比為10. 5 0.95。所述小牛脾提取物制劑優(yōu)選注射制劑。小牛脾提取物及其注射制劑在制備治療急性早幼粒細胞白血病藥物中的應用。小牛脾提取物及其注射制劑在制備拮抗環(huán)磷酰胺副作用中的應用。本發(fā)明提取一種抗腫瘤用藥劑盒，由置于包裝單位中的許多獨立包裝且各自可取 出的7個日劑量單位組成，其中第一個日劑量單位包含4-12g環(huán)磷酰胺注射劑和4-12ml小 牛脾提取物注射液，其余六個日劑量單位包含小牛脾提取物注射液4-12ml。上述小牛脾提取物可以通過現(xiàn)有技術制備，小牛脾提取物注射制劑優(yōu)選如下方法 制備領取乳牛的脾臟(出生24小時以內)，除去掉結締組織和脂肪，用0. 9%氯化鈉 溶液清洗，加入1-5倍量的生理鹽水進行勻漿1 5次，膠體磨粒度為2 8 μ m ；將勻漿 液-10°C -30°C深凍，達到完全凍結后，取出放入20°C 50°C以下水浴中解凍，完全融化 后繼續(xù)-10°C -30°C條件下深凍，如此反復進行三次；將凍融后的藥液60°C 100°C保溫 30-40分鐘，速降溫至10°C 20°C ；將上述溶液離心，離心速度為3000-4000轉/分，溫度 0 10°C以下，離心15-30分鐘，收集上清液；分別用100000 50000道爾頓、10000 9000 道爾頓、8000 5000道爾頓的膜超濾；0. 20 μ m濾芯無菌過濾分裝，即得注射液。小牛脾提取物制劑可顯著拮抗化療藥環(huán)磷酰胺(CTX)所致小鼠白細胞減少；可逆 轉環(huán)磷酰胺對骨髓細胞的抑制，刺激骨髓細胞的增殖，使骨髓細胞的數量增加；小牛脾提取 物均可以顯著抑制HL60細胞的增殖，用于治療急性早幼粒細胞白血病。下述實驗用于進一步說明本發(fā)明，但是對本發(fā)明范圍的限制。實驗例1拮抗環(huán)磷酰胺副作用研究1.小牛脾提取物注射液對化療藥環(huán)磷酰胺(CTX)所致小鼠白細胞減少的作用1. 1 摘要ICR小鼠腹腔注射小牛脾提取物注射液9天。第7天開始給予CTX，連續(xù)3天以建 立白細胞減少癥動物模型，末次給CTX后24h眼眶取血，通過血常規(guī)分析評價小牛脾提取物 注射液對白細胞數量的影響。結果表明低劑量(2.5ml/kg)和中劑量(5ml/kg)的小牛脾 提取物注射液有升高白細胞的趨勢，但與模型相比無顯著性差異，高劑量(10ml/kg)小牛 脾提取物注射液可以顯著升高白細胞數量。1. 2實驗材料(1)實驗動物18_22g的ICR小鼠60只，雌雄各半。動物生產合格證號SCxk京 2006-0008(2)實驗藥物a.小牛脾提取物注射液(實施例1方法制備)吉林敖東洮南藥業(yè)股份有限公司 提供，產品批號20090505135，為淡黃色澄明液體。有效成分含量2. 5mg多肽/ml，190 μ g 核糖/ml。臨用時用滅菌生理鹽水稀釋。
b.環(huán)磷酰胺(CTX)江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產，產品批號09081521，為白色 粉末。臨用前用滅菌生理鹽水配制，需現(xiàn)用現(xiàn)配。c.重組人粒細胞刺激因子注射液(rhG-CSF)華北制藥金坦生物技術股份有限公 司生產，產品批號200909Y22，為無色透明液體。臨用時用用滅菌生理鹽水稀釋。(3)實驗儀器血液分析儀，型號ΜΕΚ-6318Κ，日本光電工業(yè)株式會社生產。1. 3實驗方法與步驟ICR小鼠(18_22g)60只，雌雄各半，動物生產合格證號scxk京2006-0008。購自 北京大學醫(yī)學部動物科學部，隨機分成6組正常對照組、模型組、陽性藥rhG-CSF(40 μ g/ kg)組、小牛脾提取物低(2. 5ml/kg，相當于6. 25mg多肽/kg，475 μ g核糖/kg)、中(5. Oml/ kg，相當于12. 5mg多肽/kg，950 μ g核糖/kg)、高劑量組(10. 0ml/kg，相當于25mg多肽/ kg, 1900 μ g 核糖 /kg)。小鼠給連續(xù)予小牛脾提取物注射液9天，2次/天。第7天開始小牛脾提取物注射 液減為1次/天，同時給予CTX 80mg/kg,連續(xù)3天以制備模型，末次給CTX后24h眼眶取 血，測定白細胞數量。1. 4實驗結果結果顯示模型組動物的白細胞數明顯低于正常對照組，表明模型成功。小牛脾提 取物注射液高劑量組的白細胞數量明顯高于模型組，說明該劑量下小牛脾提取物注射液可 以抑制白細胞數下降，與陽性對照GM-CSF組藥效相當。中劑量有升高白細胞數量的趨勢， 但模型組相比無顯著性差異，低劑量無效(見表1)。同時分析白細胞分類計數結果后，發(fā)現(xiàn) 小牛脾提取物高劑量組和GM-CSF組的淋巴細胞數量均較模型組有顯著性升高(見表2)。 說明小牛脾提取物注射液高劑量和GM-CSF主要升高白細胞中的淋巴細胞數量。提示小牛 脾提取物注射液可以提高小鼠機體免疫力。表1小牛脾提取物對環(huán)磷酰胺誘導的白細胞減少癥的影響(I士s,n = 10)
權利要求
一種治療腫瘤的小牛脾提取物，其特征在于小牛脾提取物中多肽與核糖的重量比為5 15∶0.4 1。
2.如權利要求1所述的小牛脾提取物，其特征在于小牛脾提取物中多肽與核糖的重量 比為6. 2 0. 475。
3.一種治療腫瘤的藥物組合物制劑，其特征在于該制劑由臨床日用劑量的小牛脾提取 物制劑和臨床日用劑量的環(huán)磷酰胺制劑組成，其中小牛脾提取物制劑中多肽與核糖的重量 比為5-15 0. 4-1。
4.如權利要求3所述的藥物組合物制劑，其特征在于該制劑由臨床日用劑量的小牛脾 提取物制劑和臨床日用劑量的環(huán)磷酰胺制劑組成，其中小牛脾提取物制劑中多肽與核糖的 重量比為6. 2 0. 475。
5.如權利要求1或2所述的小牛脾提取物，其特征在于小牛脾提取物由如下方法制備 取乳牛的脾臟，用0. 9%氯化鈉溶液清洗，加入1-5倍量的生理鹽水進行勻漿1 5次，膠體 磨粒度為2 8 μ m ；將勻漿液-10°C _30°C深凍，達到完全凍結后，取出放入20°C 50°C 以下水浴中解凍，完全融化后繼續(xù)-10°C -30°C條件下深凍，如此反復進行三次；將凍融 后的藥液60°C 100°C保溫30-40分鐘，速降溫至10°C 20°C ；將上述溶液離心，離心速度 為3000-4000轉/分，溫度0 10°C以下，離心15-30分鐘，收集上清液；分別用100000 50000道爾頓、10000 9000道爾頓、8000 5000道爾頓的膜超濾。
6.如權利要求3或4所述的藥物組合物制劑，其特征在于該制劑中小牛脾提取物由如 下方法制備取乳牛的脾臟，用0.9%氯化鈉溶液清洗，加入1-5倍量的生理鹽水進行勻漿 1 5次，膠體磨粒度為2 8μπι ；將勻漿液-10°C -30°C深凍，達到完全凍結后，取出放 入20°C 50°C以下水浴中解凍，完全融化后繼續(xù)-10°C -30°C條件下深凍，如此反復進行 三次；將凍融后的藥液60°C 100°C保溫30-40分鐘，速降溫至10°C 20°C;將上述溶液離 心，離心速度為3000-4000轉/分，溫度0 IO0C以下，離心15-30分鐘，收集上清液；分別 用100000 50000道爾頓、10000 9000道爾頓、8000 5000道爾頓的膜超濾。
7.如權利要求1或2所述的小牛脾提取物在制備治療急性早幼粒細胞白血病藥物中的 應用。
8.如權利要求1或2所述的小牛脾提取物在制備拮抗環(huán)磷酰胺副作用藥物中的應用。
9.如權利要求8所述的應用，其特征在于拮抗環(huán)磷酰胺所致白細胞減少、骨髓抑制的 副作用。
10.一種抗腫瘤用藥劑盒，其特征在于由置于包裝單位中的許多獨立包裝且各自可取 出的7個日劑量單位組成，其中第一個日劑量單位包含4-12g環(huán)磷酰胺注射劑和4-12ml小 牛脾提取物注射液，其余六個日劑量單位僅包含小牛脾提取物注射液4-12ml。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療腫瘤的小牛脾提取物，其中小牛脾提取物中含5-15重量份多肽、0.4-1重量份核糖。該提取物制劑可明顯抑制腫瘤，顯著拮抗化療藥環(huán)磷酰胺所致小鼠白細胞減少、逆轉環(huán)磷酰胺對骨髓細胞的抑制，并且該提取物能夠治療急性早幼粒細胞白血病。
文檔編號A61P35/02GK101940595SQ20101025779
公開日2011年1月12日 申請日期2010年8月19日 優(yōu)先權日2010年8月19日
發(fā)明者楊振軍, 王國棟, 王銀葉, 鄒兆鵬 申請人:吉林敖東洮南藥業(yè)股份有限公司