欧美在线观看视频网站,亚洲熟妇色自偷自拍另类,啪啪伊人网,中文字幕第13亚洲另类,中文成人久久久久影院免费观看 ,精品人妻人人做人人爽,亚洲a视频

磁性納米層片狀羥基磷灰石與dna復合物及其制備方法和應用的制作方法

文檔序號:854057閱讀:350來源:國知局
專利名稱:磁性納米層片狀羥基磷灰石與dna復合物及其制備方法和應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學材料領(lǐng)域,涉及一種磁性納米層片狀羥基磷灰石與DNA復合 物及其制備方法和應用,具體涉及一種磁性層片狀羥基磷灰石與DNA納米基因藥物載體材 料的制備。
背景技術(shù)
基因治療是將人正常基因或有治療作用的基因通過一定方式導入人體靶細胞以 糾正基因的缺陷或者發(fā)揮治療作用,從而達到治療疾病目的的一種新的治療技術(shù)。適宜的 基因載體可將目的基因安全、高效、可控、簡便易行地導入目標細胞,實現(xiàn)其表達,從而達到 基因轉(zhuǎn)染或治療疾病的目的。目前基因治療臨床試驗中約2/3以上以病毒為載體。但是病 毒載體因免疫原性高,毒性大,目的基因容量小,靶向特異性差,制備較復雜,存在潛在的誘 發(fā)突變和致癌的危險等缺點限制了其在基因治療中的應用。非病毒載體具有相對低毒、無 免疫原性和致瘤性等優(yōu)點,已成為基因載體領(lǐng)域的研究熱點。目前,這一領(lǐng)域的研究多集中 于載體材料的選擇與優(yōu)化方面,所涉及的材料主要包括裸DNA、殼聚糖、聚乙烯亞胺、多聚陽 離子聚合物和脂質(zhì)體的衍生物、多肽等有機材料,磷酸鈣、二氧化硅等無機材料,以及脂質(zhì) 體與磁性粒子的復合體、脂質(zhì)體與磷酸鈣的復合體等有機/無機復合載體材料。在眾多非 病毒基因載體當中,層狀無機材料載體因其成本低、制備工藝簡單、有效保護DNA不受分解 等優(yōu)勢得到廣泛關(guān)注和研究。但是諸如蒙脫土和水滑石等層狀無機載體缺乏靶向性,不具 有生物降解性。與之相比,磁性層片狀羥基磷灰石具有優(yōu)異的生物相容性和超順磁性能,使 該材料有望應用在非病毒基因載體方面。但是目前為止,還沒有對磁性層片狀羥基磷灰石 在DNA的吸附、插層和抗酶解性能方面進行研究。基于以上技術(shù)空白,本發(fā)明在制備磁性層 片狀羥基磷灰石(公開號CN 101759170A)基礎(chǔ)上,首次采用自組裝方法制備了磁性層片狀 羥基磷灰石和DNA的復合物。該復合物制備方法簡單,成本低,可實現(xiàn)對DNA的良好保護, 在未來的基因治療中將發(fā)揮重要作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種磁性納米層片狀羥基磷灰石與DNA復合物及其制備 方法和應用。將磁性層片狀羥基磷灰石和DNA層層組裝,實現(xiàn)DNA的有效存儲和保護。本 發(fā)明復合物具有優(yōu)良的超順磁性能,可實現(xiàn)靶向基因治療。制備方法相對容易,成本低,制 備的復合物可有效保護DNA不受DNA酶的分解,在多基因藥物治療和蛋白質(zhì)/基因復合藥 物治療方面具有重要意義。本發(fā)明提供的磁性納米層片狀羥基磷灰石與DNA復合物是以鮭魚精DNA和磁性層 片狀羥基磷灰石為原料,按照DNA和羥基磷灰石的質(zhì)量比1 5 200進行配料,其制備方 法包括如下步驟將磁性層片狀羥基磷灰石的懸浮液與DNA透明溶液混合后在恒溫搖床中進行振蕩,靜置吸附后將反應產(chǎn)物清洗并離心,干燥,所得復合物具有層狀有序結(jié)構(gòu)。 本發(fā)明提供的磁性層片狀羥基磷灰石/DNA復合物的制備方法包括如下步驟1)將5 200份的磁性層狀羥基磷灰石粉體加滅菌的高純水分散,超聲得到分散 均勻的懸浮液。間歇超聲2 4次,每次lmin,超聲功率100W,超聲頻率40kHz。2)用滅菌的高純水配置質(zhì)量濃度為lmg/ml的鮭魚精DNA溶液,將1份DNA溶液加 入到步驟1)的懸濁液中,震蕩,超聲分散,然后加入滅菌高純水定容,得到混合液。3)將混合液放入37°C恒溫搖床,轉(zhuǎn)速150rpm,平衡吸附0. 5 3. 5h。4)反應產(chǎn)物水洗,然后超速離心(IOOOOrpm),去除未結(jié)合的游離DNA,產(chǎn)物室溫干
ο本發(fā)明提供的磁性層片狀羥基磷灰石/DNA復合物用于基因藥物治療。本發(fā)明提供的磁性層片狀羥基磷灰石/DNA復合物具有插層和剝離結(jié)構(gòu)。實現(xiàn)了 超螺旋結(jié)構(gòu)DNA的大量存儲和有效保護。本發(fā)明提供的復合物制備方法相對容易,成本低。 制備的復合物可有效保護DNA不受DNA酶的分解。同時制備的復合物具有優(yōu)良的超順磁性 能,可實現(xiàn)靶向基因治療。對于磁性層片狀羥基磷灰石在基因藥物載體中的應用,尤其是在 多基因藥物治療和蛋白質(zhì)/基因復合藥物治療方面具有重要意義。


圖1是X射線衍射圖譜。圖2是不同酶濃度下材料的電泳照片。圖3是不同材料質(zhì)量比下DNA的吸附插層率柱狀圖。
具體實施例方式實施例1將5mg的磁性層片狀羥基磷灰石粉體加入錐形瓶中(制備方法見CN 101759170A),加少量滅菌的高純水。間歇超聲3次,每次lmin,超聲功率100W,超聲頻率 40kHz,最終得到分散均勻的磁性層片狀羥基磷灰石懸浮液。用滅菌的高純水配制成濃度為 lmg/mL的溶液。將Img DNA溶液逐滴加入錐形瓶中,振蕩。最后定容至20mL。將錐形瓶放 入恒溫搖床振蕩,溫度37°C,轉(zhuǎn)速150rpm,平衡吸附0. 5h。將得到的產(chǎn)物清洗并超速離 心,離心速率lOOOOrpm,室溫干燥。進行XRD測試、電泳測試和紫外分光測試,圖1是X射 線小角度衍射圖譜,圖2是電泳測試照片,圖3是不同材料質(zhì)量比下DNA的吸附插層率柱狀 圖。實施例2將200mg的磁性層片狀羥基磷灰石粉體加入錐形瓶中(制備方法見 CN101759170),加少量滅菌的高純水。間歇超聲3次,每次lmin,超聲功率100W,超聲頻率 40kHz,最終得到分散均勻的磁性層片狀羥基磷灰石懸浮液。用滅菌的高純水配制成濃度為 lmg/mL的溶液。將Img DNA溶液逐滴加入錐形瓶中,振蕩。最后定容至20mL。將錐形瓶放 入恒溫搖床振蕩,溫度37°C,轉(zhuǎn)速150rpm,平衡吸附3. 5h。將得到的產(chǎn)物清洗并超速離 心,離心速率lOOOOrpm,室溫干燥。進行XRD測試、電泳測試和紫外分光測試,圖1是X射線 小角度衍射圖譜,圖2是電泳測試照片,圖3是材料質(zhì)量比下DNA的吸附插層率柱狀圖。
測試結(jié)果與純的磁性層片狀羥基磷灰石相比,復合物的XRD衍射峰左移,對應的 層間距隨著DNA含量的增加而增大。表明DNA分子已經(jīng)進入磁性層片狀羥基磷灰石的層間, 同時由小角度X射線衍射峰還可以看出隨著DNA含量的變化,復合物具有插層和剝離型兩 種結(jié)構(gòu)。凝膠電泳結(jié)果表明,磁性層片狀羥基磷灰石對DNA有良好的抗酶 解作用。紫外分 光測試結(jié)果表明磁性層片狀羥基磷灰石可實現(xiàn)大量DNA的吸附插層,吸附插層率隨著羥基 磷灰石的含量增加而增大。
權(quán)利要求
一種磁性納米層片狀羥基磷灰石與DNA復合物,其特征在于它是以磁性層片狀羥基磷灰石和鮭魚精DNA為原料,按照DNA和羥基磷灰石的質(zhì)量比1∶5~200進行配料,其制備方法包括如下步驟將磁性層片狀羥基磷灰石的懸浮液與DNA溶液在搖動下反應,反應產(chǎn)物水洗,常溫干燥。
2.按權(quán)利要求1所述的磁性層片狀羥基磷灰石與DNA復合物,其特征在于所述的磁性 層片狀羥基磷灰石與DNA復合物具有插層和剝離狀結(jié)構(gòu)。
3.按權(quán)利要求1所述的DNA/層狀羥基磷灰石復合物的制備方法,其特征在于它是包括 如下步驟1)將層狀羥基磷灰石粉體加水溶解,超聲得到分散均勻的懸浮液;2)用滅菌的高純水配置質(zhì)量濃度為lmg/ml的鮭魚精DNA溶液,將DNA溶液加入到步驟 1)的懸濁液中,震蕩,超聲分散,然后加入滅菌高純水定容,得到混合液;3)將混合液放入37°C恒溫搖床,轉(zhuǎn)速150rpm,平衡吸附0.5-3. 5h ;4)反應產(chǎn)物水洗,然后超速離心,去除未插層的游離DNA,產(chǎn)物室溫干燥。
4.按照權(quán)利要求3所述的DNA/納米層狀羥基磷灰石復合物的制備方法,其特征在于步 驟1)所述的超聲條件間歇超聲2 4次,每次lmin,超聲功率100W,超聲頻率40kHz。
5.按照權(quán)利要求3所述的DNA/納米層狀羥基磷灰石復合物的制備方法,其特征在于所 述的超速離心速率為lOOOOrpm。
6.權(quán)利要求1所述的磁性納米層片狀羥基磷灰石與DNA復合物的應用,其特征在于該 材料用于基因藥物載體。全文摘要
本發(fā)明涉及一種磁性納米層片狀羥基磷灰石與DNA復合物及其制備方法,它是以磁性納米層片狀羥基磷灰石和鮭魚精DNA為原料,按照DNA與磁性層片狀羥基磷灰石的質(zhì)量比1∶5~200進行配料,其制備方法是將磁性層片狀羥基磷灰石的懸浮液與DNA溶液于37℃下?lián)u動反應0.5-3.5h,高速離心后常溫下干燥;本發(fā)明提供的復合物具有插層和剝離型結(jié)構(gòu),實現(xiàn)了超螺旋結(jié)構(gòu)DNA的大量存儲和有效保護。本發(fā)明提供的復合物制備方法相對容易、成本低、具有超順磁性。對于磁性層片狀羥基磷灰石在多基因藥物治療和蛋白質(zhì)/基因復合藥物治療方面具有重要意義。
文檔編號A61K48/00GK101934081SQ20101026349
公開日2011年1月5日 申請日期2010年8月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月26日
發(fā)明者萬怡灶, 左桂福, 張宇 申請人:天津大學
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
1
临澧县| 高青县| 女性| 郎溪县| 松阳县| 永寿县| 汾西县| 金华市| 丰城市| 宿州市| 澎湖县| 汉川市| 镶黄旗| 顺平县| 福建省| 田阳县| 陕西省| 彰化市| 昌邑市| 苍南县| 柘荣县| 孟津县| 梁山县| 临江市| 巴林左旗| 临潭县| 德安县| 阳山县| 砀山县| 金乡县| 云龙县| 高碑店市| 桂平市| 双柏县| 盖州市| 瑞昌市| 萨嘎县| 蒙自县| 监利县| 宕昌县| 汤原县|