專利名稱：用于治療缺血性腦血管疾病的制劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種可以治療缺血性腦血管疾病的制劑及其制備方法。
背景技術：
心腦血管疾病是世界上致死率和發(fā)病率最高的疾病。根據(jù)2010年美國心臟學會 的統(tǒng)計報告指出，2005年全世界大約有1750萬人死于各類心腦血管疾病，大約占死亡總人 數(shù)的30%。預計到2020年，全球因心腦血管疾病死亡人數(shù)將達2500萬人。另據(jù)WHO的報 告指出，在2006年到2015年的10年之間，中國在因心血管病及糖尿病而導致的收入損失 將高達5580億美元。在2004年歐洲有430萬人死于各類心腦血管疾病，高達總死亡人數(shù) 的48%。在各類心腦血管疾病中，動脈粥樣硬化所導致的血栓及血管堵塞是最常見和最重 要的發(fā)病機理。在疾病初期，由活性氧激發(fā)的對低密度脂蛋白的修飾會逐漸導致血管內(nèi)皮 機能障礙。機體的免疫系統(tǒng)對此產(chǎn)生慢性炎癥并持續(xù)分泌富含T細胞，巨噬細胞，肥大細胞 的白血球細胞群，并形成脂紋，纖維斑塊，粥樣斑塊，使血管腔狹窄并導致血流量減少。當最 終粥樣斑塊破碎后，脫落的碎斑會導致血小板聚集并產(chǎn)生大規(guī)模的閉合性血栓及其他繼發(fā) 性改變，包括由該動脈所供應養(yǎng)份的組織或器官的缺血或壞死。由動脈粥樣硬化所導致的 缺血性心腦血管疾病主要包括有冠心病，缺血性中風，以及外周閉塞性動脈疾病。缺血性中 風是由血栓(腦部形成阻塞血塊)，栓塞(栓塞從其他地方形成，見下)，系統(tǒng)性供血不足 (一般性系統(tǒng)性供血不足，如休克)或靜脈血栓引起的腦部供血不足，導致腦組織功能障礙 及壞死。全球每年的中風患者有1500萬人，并導致500萬人終身殘疾及570萬人死亡，其 中87%屬于缺血性中風。在美國，平均每40秒就有一人會發(fā)生中風，平均每4分鐘就有一 名患者死于中風。在世界范圍內(nèi)中風也是第2大死因。盡管有保守鍛煉，抗凝藥物，和手術 (頸動脈內(nèi)膜切除或頸動脈血管成形)的傳統(tǒng)治療手段，大部分由動脈粥樣硬化所導致的 缺血性中風病患者依然無法獲得有效的治療，究其原因，主要是因為對抗凝藥物的副作用， 以及身體或疾病條件而無法進行有效的手術等。干細胞療法是近年來在治療癌癥和心腦血管疾病等領域最受人期待的新發(fā)展方 向。從理論上講，干細胞可以用于各種疾病的治療，但其最適合的疾病主要是組織壞死性疾 病如缺血引起的心肌壞死，退行性病變?nèi)缗两鹕C合征，自體免疫性疾病如胰島素依賴型 糖尿病等。尤其是其具有的促進血管再生和器官功能恢復的特殊功效，在心腦血管疾病的 治療中有著巨大療效。在全球現(xiàn)階段開展的臨床試驗中，針對缺血性心腦血管疾病的促血管再生干細胞 移植作為一種極有希望替代傳統(tǒng)療法的再生療法已取得了很好的效果。然而，考慮到異體 移植所帶來的免疫應答及其嚴重的組織排斥甚至致死后果，(包括患者自身的免疫系統(tǒng)對 異體干細胞的排斥及異體干細胞群落中不可避免的含有的異源免疫細胞亞群對患者組織 的排斥)，此類臨床試驗都使用了患者自體同源的細胞。另外，在檢測了不同器官組織來源 的干細胞種群之后發(fā)現(xiàn)，來源于骨髓及外周血液的成體CD34+干細胞亞類具有極強的促血 管再生能力，在治療缺血性血管疾病中有較好的效果，也免除了采用胚胎干細胞所帶來的倫理問題。然而，現(xiàn)階段一系列技術和應用上的不足極大的限制了干細胞療法在臨床上的 進一步推廣和應用，這些限制包括并不局限于(1)此類干細胞在骨髓及血液中的極低含量 (大約0. 01 % )；⑵此類細胞療法所需細胞的極大數(shù)量(1 X IO5-I X IO6個/千克體重)； (3)細胞移植入體內(nèi)后的極低存活率和存活細胞的實際效率(低于10% )；以及(4)患者 自體干細胞因慢性疾病及長期大量心血管危險因子的影響所導致的功能失常。基于上述事實，特別是現(xiàn)有的干細胞療法應用于臨床時的缺陷和不足，有必要提 供更為有效、普適的治療缺血性心腦血管疾病藥物，以改善現(xiàn)有的由動脈粥樣硬化所導致 的缺血性心腦血管疾病的臨床治療狀況。血管內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells, EPC)是調(diào)節(jié)和誘導新血管生 成的主要干細胞亞類。動物體內(nèi)實驗數(shù)據(jù)表明，EPC參與血管生成的過程主要有(1)少量 細胞分化為成熟的內(nèi)皮細胞，形成新的血管內(nèi)壁以及(2)大部分細胞分泌出大量促血管新 生的生長因子和細胞活素，激發(fā)缺血組織內(nèi)部的內(nèi)皮細胞，平滑肌細胞，壁細胞及其他干細 胞亞群及祖細胞亞群共同參與新血管的形成。事實上，此類EPC在缺血組織中分泌出的生 長因子和細胞活素，可借由EPC在體外特定環(huán)境中所分泌的條件培養(yǎng)基中獲得，并完全可 能將其應用于受損血管的修復和再生，從而恢復缺血性壞死的組織的相應功能。因此，EPC 在體外人工環(huán)境中分泌的促血管新成的生長因子和細胞活素在臨床上有巨大的潛力，可以 作為干細胞療法的有效替代品或輔助藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能夠有效的治療缺血性腦血管疾病的制劑，用于克服 現(xiàn)有藥物的不足，為臨床治療缺血性腦血管疾病提供一種新的治療藥物。上述缺血性腦血管疾病主要指由于動脈粥樣硬化導致的血管阻塞類的疾病，具體 包括腦動脈硬化引起的中風，腦缺血、腦梗塞，腦萎縮，梗塞型癡呆。本發(fā)明的目的還在于提供一種制備能夠有效的治療缺血性腦血管疾病的制劑的 方法，該方法步驟為1)從健康人血液中通過密度梯度離心的方法或白細胞置換(leukapheresis)獲 取外周血單核細胞，或從骨髓中通過密度梯度離心的方法獲取骨髓單核細胞；2)培養(yǎng)單核細胞以獲得EPC細胞；3)在特定條件下培養(yǎng)EPC細胞使其分泌促血管生成的生長因子和細胞活素，分離 EPC細胞和培養(yǎng)基，獲得富含促血管生成因子和細胞活素的無細胞培養(yǎng)基；4)對步驟3)中所獲得的無細胞培養(yǎng)基進行后處理，該后處理步驟包括過濾細胞 碎片、純化該無細胞培養(yǎng)基、檢測各有效生長因子的成分及含量、對該培養(yǎng)基進行凍干處理 或冷凍保存，即獲得治療缺血性腦血管疾病制劑。本發(fā)明所述制備能夠有效的治療缺血性腦血管疾病的制劑的方法中，步驟1)所 述的健康人血液的來源可以是自體來源(僅局限于無癥狀的輕度外周閉塞性動脈疾病) 或異體來源，獲得途徑可以是直接抽血，或由血庫直接購買的健康人白細胞懸液樣本，或 通過臨床白細胞置換。血液提供者的限制范圍為50歲以下，無煙酒史，無傳染性疾病， 血液疾病的健康人群。所述的梯度離心以獲取單核細胞的步驟為將所獲得的血液或白 細胞懸液在密度梯度劑中梯度離心，所用的梯度劑可為FiC0ll-Paque(GE healthcare),Histopaque-1077(Sigma)，或其他公司同類產(chǎn)品，優(yōu)選為Histopaque-1077 ；適用溫度范圍 為15到25°C，優(yōu)選為25°C ；每15mL Histopaque可分離15至30mL全血樣品。具體操作 為將含有血液及梯度劑的容器在200g-500g下離心20-40分鐘，分層后，用無菌一次性針 管吸取當中不透明層，即為富含單核細胞的懸浮液，經(jīng)鑒定，此單核細胞群體來源于骨髓髓 系干細胞，豐富表達單核細胞特異性受體CD14，其內(nèi)所含多種細胞亞群，呈多形性。本發(fā)明所述制備能夠有效的治療缺血性腦血管疾病的制劑的方法中，步驟2)中 的培養(yǎng)單核細胞以獲得EPC細胞時，所用的培養(yǎng)基可為Ml 19、DMEM、RPMI-1640, EBM、EBM-2 中的一種，并添加有0. 5-1 %的生長因子添加劑EGM、EGM-MV, EGM-2或EGM2-MV中的一 種(可由瑞士 Lonza公司購買，其中含血管內(nèi)皮生長因子VEGF-1、堿性成纖維細胞生長因 子FGF-2、表皮生長因子EGF，和胰島素樣生長因子IGF-1)；或添加有內(nèi)皮細胞生長因子 ECGF(10-100 μ g/ml)。培養(yǎng)基中另含有質(zhì)量比為5 %至20 %的胎牛血清或者人血清白蛋 白。在預設條件為培養(yǎng)溫度37°C，二氧化碳濃度為5%的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。本發(fā)明所述制備能夠有效的治療缺血性腦血管疾病的制劑的方法中，步驟2)中 的培養(yǎng)單核細胞以獲得EPC細胞的步驟為以下所述方法①，②，③或④中的一種方法①將單核細胞以每平方厘米5X IO5至2X IO6個細胞的密度培養(yǎng)2_4天，將 貼壁細胞用胰蛋白酶消化收集后以每平方厘米1 X IO5至2 X IO5個細胞的密度重新培養(yǎng)3-7 天。所獲I型EPC為紡錘狀細胞，具有內(nèi)吞乙縮醛化的低密度脂蛋白(acetylated-LDL)及 結合荊豆凝集素(UEA-1 lectin)的典型內(nèi)皮細胞特性，并且大量表達血管內(nèi)皮細胞生長因 子受體KDR，⑶31，單核細胞受體⑶14，造血細胞受體⑶45，少量表達干細胞特有受體⑶34， CD133。方法②將單核細胞以每平方厘米5X IO5至2X IO6個細胞的密度培養(yǎng)2天，收集 懸浮細胞，并以每平方厘米IX IO5至2X IO5個細胞密度重新培養(yǎng)3-7天。所獲II型EPC 為細胞集落，其中心分布為圓形細胞，周圍為紡錘狀細胞。此II型EPC具有典型內(nèi)皮細胞 特性并表達內(nèi)皮細胞特有受體KDR，CD31及Tie-2。方法③將單核細胞以每平方厘米5X IO5至2X IO6個細胞的密度培養(yǎng)1_6天， 將貼壁細胞用胰蛋白酶消化收集后以每平方厘米1 X IO5至2 X IO5個細胞的密度重新培養(yǎng) 10-21天。所獲III型EPC為細胞集落，并可持續(xù)培養(yǎng)及增殖12個星期以上，此III型EPC 具有典型內(nèi)皮細胞特性并表達內(nèi)皮細胞特有受體KDR，CD31，Tie-2，及Ve-cadherin。方法④將單核細胞通過⑶34特異性抗體進行磁珠分選(MACS ,由德國Miltenyi Biotec公司生產(chǎn))，篩選出富含⑶34+的單核細胞亞群，將此⑶34+單核細胞亞群在步驟2) 中所描述的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件下以每平方厘米1 X IO5至1 X IO6個細胞的密度培養(yǎng)2-6天。 所獲IV型EPC為CD34+細胞集落，此IV型EPC具有典型內(nèi)皮細胞特性并表達內(nèi)皮細胞特 有受體KDR及干細胞特有受體⑶34。本發(fā)明所述制備能夠有效的治療缺血性腦血管疾病的制劑的方法中，步驟3)中 的在特定條件下培養(yǎng)EPC細胞的方法為將步驟2)所獲得的I、II、III或IV型EPC置于不 含任何生長因子的培養(yǎng)基內(nèi)，在氧濃度為0. 5%至2%的環(huán)境中培養(yǎng)1至3天，所用的培養(yǎng) 基為 M119、DMEM、RPMI-1640、EBM、EBM-2、pH = 7.4 的磷酸鹽緩沖液(PBS)或 0.9% 的醫(yī)用 生理鹽水，并可添加的醫(yī)用人血清白蛋白。培養(yǎng)完成后收集富含細胞生長因子的條件培養(yǎng)基，棄去EPC細胞。
本發(fā)明所述制備能夠有效的治療缺血性腦血管疾病的制劑的方法中，步驟4)所 述的后處理步驟包括①對步驟3)中所收集的無細胞培養(yǎng)基進行過濾，可通過高速離心或過濾器將細 胞雜質(zhì)及碎片去除。②對過濾后的無細胞培養(yǎng)基進行成分鑒定，并對其中所含的代表性促血管生長因 子及細胞活素如MCP-I，EGF, MMP-9, IL-8，Angiogenin, VEGF的含量進行鑒定，鑒定方法可 為蛋白組學(proteomics)，細胞活素陣列(cytokine array)，酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)， 或Bio-Plex 細胞因子測試。③對過濾后的無細胞培養(yǎng)基進行凍干或分裝冷凍保存，以便長期保存其中的生長 因子及細胞活素成分的活性。


圖1 本發(fā)明所述治療缺血性腦血管疾病制劑對大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞的激活及 促進遷移及修復損傷功效。圖2 本發(fā)明所述治療缺血性腦血管疾病制劑對大鼠腦缺血性梗塞的修復。
具體實施例方式以下通過具體的實例對本發(fā)明的內(nèi)容作進一步的闡述說明，本發(fā)明包括但不限于 下述步驟和內(nèi)容。實施例1.單核細胞的制備。將 IOOmL 血液加入密度梯度劑 Histopaque-1077 (Sigma)，每 15mL Histopaque 中 加入30mL血液。將含有血液及梯度劑的試管在400G的速度下常溫離心30分鐘。分層后， 用無菌一次性針管吸取當中不透明層，即為富含單核細胞的懸浮液。視具體情況，每IOOml 血液可以獲得IxlO8 IxIOiq個單核細胞。實施例2. EPC細胞的獲取。針對I類EPC細胞的獲取方法將富含單核細胞的懸浮液在添加有10%人血清白 蛋白及1 %的生長因子添加劑EGM(可由瑞士 Lonza公司購買)的EBM-2培養(yǎng)基下以每平方 厘米1 X IO6細胞的密度培養(yǎng)4天，將貼壁細胞用胰蛋白酶消化收集后以每平方厘米2 X IO5 的密度重新培養(yǎng)2天。所獲I型EPC為紡錘狀細胞，具有內(nèi)吞乙縮醛化的低密度脂蛋白 (acetylated-LDL)及結合荊豆凝集素(UEA-1 lectin)的典型內(nèi)皮細胞特性，并且大量表 達血管內(nèi)皮細胞生長因子受體KDR、⑶31、⑶14、⑶45、少量表達⑶34、⑶133及血管內(nèi)皮鈣 粘蛋白 VE-cadherin。針對II類EPC細胞的獲取方法將富含單核細胞的懸浮液在添加有10%人血清 白蛋白及的生長因子添加劑EGM(可由瑞士 Lonza公司購買)的EBM-2培養(yǎng)基下以每 平方厘米1 X IO6細胞的密度培養(yǎng)2天，收集懸浮細胞，并以每平方厘米2 X IO5個細胞的密 度重新培養(yǎng)3天。所獲II型EPC為細胞集落，其中心分布為圓形細胞，周圍為紡錘狀細胞。 此II型EPC具有典型內(nèi)皮細胞特性并表達內(nèi)皮細胞特有受體KDR，⑶31及Tie_2。針對III類EPC細胞的獲取方法將富含單核細胞的懸浮液在添加有10%人血清 白蛋白及的生長因子添加劑EGM(可由瑞士 Lonza公司購買)的EBM-2培養(yǎng)基下以每平方厘米IX IO6個細胞的密度培養(yǎng)3天，將貼壁細胞用胰蛋白酶消化收集后以每平方厘米 2 X IO5個細胞的密度重新培養(yǎng)20天。所獲III型EPC為細胞集落，具有典型內(nèi)皮細胞特性 并表達內(nèi)皮細胞特有受體KDR，CD31，Tie-2，及Ve-cadherin。針對IV類EPC細胞的獲取方法將單核細胞通過CD34特異性抗體通過磁珠分選 (MACS ,由德國MiltenyiBiotec公司生產(chǎn))，篩選出富含⑶34+的單核細胞亞群，將此⑶34+ 單核細胞亞群在在添加有10 %人血清白蛋白及1 %的生長因子添加劑EGM (可由瑞士 Lonza 公司購買)的EBM-2培養(yǎng)基下以每平方厘米5X105個細胞的密度培養(yǎng)2天。所獲IV型EPC 為CD34+細胞集落，此IV型EPC具有典型內(nèi)皮細胞特性并表達內(nèi)皮細胞特有受體KDR及干 細胞特有受體⑶34。視具體情況，所獲得的各型EPC細胞的量約為單核細胞量的 10%。實施例3.治療缺血性腦血管疾病制劑的獲取。將實施例2所獲得的I型EPC細胞置于不含任何生長因子的磷酸鹽緩沖液(PBS) 內(nèi)(每平方厘米2 X IO5個細胞)，在氧濃度為1. 5%的環(huán)境中培養(yǎng)2天，并添加1 %的醫(yī)用人 血清白蛋白。培養(yǎng)完成后收集富含細胞生長因子的無細胞培養(yǎng)基，棄去貼壁的EPC細胞。將 收集的無細胞培養(yǎng)基通過孔徑為0. 2微米的過濾器將細胞雜質(zhì)及碎片去除并分裝于-80°C 冷庫冷藏備用。視具體情況，每IxlO6個EPC細胞可以制備2-5ml所述治療缺血性腦血管 疾病制劑。實施例4.治療缺血性腦血管疾病制劑中的生長因子及細胞活素的鑒定。實施例3所制得的治療缺血性腦血管疾病制劑中含有的生長因子及細胞活素成 分通過細胞活素陣列(cytokine array)鑒定(由R&D Systems購買)，此治療缺血性腦 血管疾病制劑的有效成分包含并不局限于以下生長因子MCP-1、EGF、IL-8、MMP-9、μ PAR、 Angiogenin、SDF-I、HGF、VEGF 以及 PDGF。通過 Bio-Plex 細胞因子測試檢測(由 Bio-rad 公司生產(chǎn))，其中有效成分的含量為，IL-8 :1-4μ g/ml ；SDF-I :50_100ng/ml ；HGF :5_10ng/ ml ；Angiogenin :l_5ng/ml ；PDGF-BB :l_5ng/ml ；VEGF 0. 1-lng/ml。其他成分組成見表 1。表1.本發(fā)明所述治療缺血性腦血管疾病制劑中的成分列表(包含并不局限于以 下成分)
權利要求
一種治療缺血性腦血管疾病的制劑的制備方法，其特征在于，該制劑的制備方法包括如下步驟步驟1).從健康人血液中通過密度梯度離心的方法或白細胞置換(leukapheresis)獲取外周血單核細胞，或從骨髓中通過密度梯度離心的方法獲取骨髓單核細胞；步驟2).培養(yǎng)單核細胞以獲得EPC細胞；步驟3).在特定條件下培養(yǎng)EPC細胞使其分泌促血管生成的生長因子和細胞活素，分離EPC細胞和培養(yǎng)基，獲得富含促血管生成因子和細胞活素的無細胞培養(yǎng)基；步驟4).對步驟3)中所獲得的無細胞培養(yǎng)基進行后處理，該后處理步驟包括過濾細胞碎片、純化該無細胞培養(yǎng)基、檢測各有效生長因子成分及含量、對該培養(yǎng)基進行凍干處理或冷凍保存，即獲得治療缺血性腦血管疾病的制劑。
2.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1)所述的健康人血液的來源可 以是自體來源，或異體來源，或通過血庫購買的健康人白細胞懸液樣本，或通過臨床白細胞 置換。
3.根據(jù)權利要求1-2任一所述的制備方法，其特征在于，步驟1)所述的從血液中 或骨髓中通過密度梯度離心獲取外周血單細胞的方法為使用梯度劑為Ficoll-Paque、 Histopaque-1077或其他同類產(chǎn)品，溫度為15 25°C，離心力為200g_500g，時間20-40分 鐘，離心完成后，吸取當中不透明層，即為單核細胞懸液。
4.根據(jù)權利要求1-3任一所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中的培養(yǎng)單核細胞以 獲得EPC細胞時，所用的培養(yǎng)基為Ml 19、DMEM、RPMI-1640, EBM、EBM-2中的一種，并添加有 0. 5-1 %的生長因子添加劑EGM、EGM-MV, EGM-2或EGM2-MV中的一種(可由瑞士 Lonza公 司購買，其中含血管內(nèi)皮生長因子VEGF-1、堿性成纖維細胞生長因子FGF-2、表皮生長因子 EGF，和胰島素樣生長因子IGF-1)；或添加有內(nèi)皮細胞生長因子ECGF(IO-IOOygAil)；或添 加有內(nèi)皮細胞生長因子ECGF(10-100 μ g/ml)；培養(yǎng)基中另含有質(zhì)量比為5%至20%的胎牛 血清或者人血清白蛋白；培養(yǎng)條件為溫度37°C，二氧化碳濃度為5%。
5.根據(jù)權利要求1-4任一所述的制備方法，其特征在于，步驟2)所述的培養(yǎng)單核細胞 以獲得EPC細胞的方法為以下所述方法①、②、③或④中的一種方法①將單核細胞以每平方厘米5 X IO5至2 X IO6個細胞的密度培養(yǎng)2-4天，將貼壁 細胞用胰蛋白酶消化收集后以每平方厘米1 X IO5至2 X IO5個細胞的密度重新培養(yǎng)3-7天， 獲I型EPC細胞；方法②將單核細胞以每平方厘米5 X IO5至2 X IO6個細胞的密度培養(yǎng)2天，收集懸浮 細胞，并以每平方厘米1 X IO5至2X IO5個細胞的密度重新培養(yǎng)3-7天，獲II型EPC細胞；方法③將單核細胞以每平方厘米5X IO5至2X IO6個細胞的密度培養(yǎng)1-6天，將貼壁 細胞用胰蛋白酶消化收集后以每平方厘米IX IO5至2X IO5個細胞的密度重新培養(yǎng)10-21 天，獲III型EPC細胞；方法④將單核細胞通過CD34特異性抗體進行磁珠分選，篩選出富含CD34+的單核細 胞亞群，將此CD34+單核細胞亞群在步驟2)中所描述的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件下以每平方厘米 1 X IO5至1 X IO6個細胞的密度培養(yǎng)2-6天，獲IV型EPC細胞。
6.根據(jù)權利要求1-5任一所述的制備方法，其特征在于，步驟3)所述的在特定條件下 培養(yǎng)EPC細胞的方法為將步驟2)所獲得的EPC細胞置于不含任何生長因子的培養(yǎng)基內(nèi)，在氧濃度為0. 5%至2%的環(huán)境中培養(yǎng)1至3天，所用的培養(yǎng)基為M119、DMEM、RPMI-1640, EBM、EBM-2、pH值為7. 4的磷酸鹽緩沖液(PBS)或0. 9%的醫(yī)用生理鹽水，并添加的醫(yī) 用人血清白蛋白。
7.根據(jù)權利要求1-6任一所述的制備方法，其特征在于，不添加的醫(yī)用人血清白蛋白。
8.根據(jù)權利要求1-7任一所述的制備方法，其特征在于，所述EPC細胞為I型EPC細胞。
9.一種由權利要求1-8任一所述的方法制備獲得的制劑。
10.權利要求9所述的制劑在制備治療缺血性腦血管疾病的藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療缺血性腦血管疾病的制劑及其制備方法，該制劑的制備方法是通過誘導單核細胞獲得血管內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells，EPC)，進而在低血清及低氧條件培養(yǎng)上述EPC細胞，最后分離EPC細胞獲得無細胞培養(yǎng)基，并對該無細胞培養(yǎng)基進行相應后處理，即可獲得所述制劑。體外和體內(nèi)實驗表明，本發(fā)明所述的治療缺血性腦血管疾病的制劑能夠顯著的促進由腦缺血導致壞死的腦組織的修復。
文檔編號A61K35/28GK101940592SQ20101026567
公開日2011年1月12日 申請日期2010年8月27日 優(yōu)先權日2010年8月27日
發(fā)明者楊子江, 楊肖泱, 顧麗婭 申請人:上海士騰生物技術有限公司;楊子江