專利名稱：疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及佐劑化的煙堿免疫綴合物和它們在治療或預(yù)防煙堿成癮中的用途。本發(fā)明還涉及制備該佐劑化的免疫綴合物的方法。
背景技術(shù)：
煙堿((S)-(-)-1-甲基-2-(3-吡啶基)吡咯烷)是來源于煙葉的生物堿。煙堿分子由芳香族的六元環(huán)(吡啶)和脂肪族的五元環(huán)(吡咯烷)通過單鍵連接而成。吡咯環(huán)是N-甲基化的并通過它的碳-2連接到吡啶的碳-3上。碳-2是手性的，且實(shí)際上環(huán)繞連接兩個環(huán)的單鍵自由轉(zhuǎn)動。碳-2的絕對構(gòu)型是S，因此煙堿的天然對映體是(S)-(-)-煙堿。煙堿以很多不同的方式被廣泛使用，如香煙、雪茄、煙斗絲和嚼煙，并有高度的成癮性。由于使用煙草明顯地有害健康，尤其是吸煙，使用者經(jīng)常嘗試戒掉。但是，在那些嘗試戒掉的人中很低的成功率表明對于煙堿成癮迫切需要附加的治療。煙堿綴合疫苗誘導(dǎo)抗煙堿抗體，所述抗體暴露在吸煙后與血液中的煙堿結(jié)合。煙堿本身是一個小分子，其能輕易地穿過血腦屏障，但結(jié)合抗體的煙堿不能進(jìn)入腦部。該作用機(jī)制已經(jīng)在大鼠和小鼠動物模型中得到大量地驗(yàn)證，并且這與IgG劑量依賴性活性衰減相關(guān)。因此，在血流中螯合的煙堿不能介導(dǎo)其對CNS的成癮作用。發(fā)明概述本發(fā)明提供一種免疫原性組合物，包含a)煙堿免疫綴合物；和b)水包油乳劑佐劑，其包含可代謝的油和乳化劑。免疫原性組合物可以用于在個體中誘導(dǎo)特異性抗煙堿免疫反應(yīng)，因此可以用于治療或預(yù)防煙堿成癮。本發(fā)明進(jìn)一步提供-用作藥物的本發(fā)明的免疫原性組合物；-用于預(yù)防或治療煙堿成癮的本發(fā)明的免疫原性組合物；-本發(fā)明的免疫原性組合物在制備預(yù)防或治療煙堿成癮的藥物中的用途；-一種提高在個體中抗煙堿的特異性抗體反應(yīng)的方法，該方法包括向所述個體給予有效量的本發(fā)明的免疫原性組合物；-一種預(yù)防或治療煙堿成癮的方法，該方法包括向所需個體給予有效量的本發(fā)明的免疫原性組合物；和-一種制備如前述任一項(xiàng)要求中所述的組合物的方法，該方法包括將水包油乳劑佐劑與煙堿免疫綴合物合并。附圖簡述

圖1顯示用佐劑化的綴合疫苗(用明礬、AS04或AS03佐劑化的NicA6-CRM和 NicA4-CRM)免疫的C57B1/6小鼠(n = 13每治療組)的血清中煙堿結(jié)合IgG的平均數(shù)量。圖2顯示用佐劑化的綴合疫苗(用明礬、AS04或AS03佐劑化的NicA6-CRM和NicA4-CRM)免疫的BALB/c小鼠(n = 13每治療組)的血清中煙堿結(jié)合IgG的平均數(shù)量。圖3和4顯示用Nic4_CRM+AS03免疫的小鼠中產(chǎn)生的抗體與可替寧低(cotinine) 的弱交叉反應(yīng)(結(jié)合煙堿要好得多)。煙堿的結(jié)果用■表示，可替寧的結(jié)果用Δ表示。發(fā)明詳述本發(fā)明提供一種免疫原性組合物，其可以用于預(yù)防或治療煙堿成癮。本發(fā)明中所用的術(shù)語“免疫原性組合物”是指一種組合物，其包含在個體，如人中，能夠刺激免疫反應(yīng)的免疫原性組分。相應(yīng)地，本發(fā)明的一個實(shí)施方案提供一種包含煙堿免疫綴合物和水包油乳劑佐劑的免疫原性組合物，其中水包油乳劑佐劑包含可代謝的油和乳化劑。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的免疫原性組合物是疫苗，即，免疫原性組合物可以給予個體以提高抗煙堿的免疫反應(yīng)，其能夠預(yù)防或治療個體的煙堿成癮。相應(yīng)地，本文所用的術(shù)語“疫苗” 是指治療性疫苗(用于疾病的治療)和預(yù)防性疫苗(用于疾病的預(yù)防)。煙堿免疫綴合物本發(fā)明所用的煙堿免疫綴合物由煙堿半抗原和載體部分組成，其可以通過連接分子連接。煙堿半抗原具有與載體部分附著時引發(fā)特異性抗煙堿抗體反應(yīng)的能力，因此是免疫綴合物的特異性決定部分。煙堿半抗原典型地模擬天然煙堿分子的結(jié)構(gòu)，盡管它不需要直接衍生自煙堿或者由煙堿合成。在與載體部分連接時能夠引發(fā)特異性抗煙堿抗體反應(yīng)的任何的煙堿半抗原都可以用于本發(fā)明。在本發(fā)明的上下文下，術(shù)語“煙堿半抗原”用于包括特異性決定部分(即煙堿樣結(jié)構(gòu))和，如果存在的話，用于連接它到載體上的連接分子。煙堿半抗原不是內(nèi)在地免疫原性的，必需偶聯(lián)到載體部分以引發(fā)抗體反應(yīng)。術(shù)語 “載體部分”是指，在給予個體時能夠使煙堿半抗原誘導(dǎo)特異性抗煙堿抗體反應(yīng)的綴合部分。代表性的載體部分包括蛋白質(zhì)類、肽類、病毒樣顆粒(VLPs)和人工賦形劑如微球。適合用作載體的蛋白質(zhì)類包括但不限于破傷風(fēng)類毒素(TT)、白喉類毒素(DT)、白喉毒素突變體 CRM197、假單胞菌(Pseudomonas)胞外蛋白 A(exoproteinA) (ExoA)、霍亂毒素 B (CTB)、百日咳毒素、來自腦膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)的外膜蛋白復(fù)合物(OMPC)、熱不穩(wěn)定E. coli的B亞單位、鑰孔槭血藍(lán)蛋白(keyhole limpet hemocyanin) (KLH)和牛血清白蛋白(BSA)。煙堿半抗原可以用任何合適的方法與載體部分共價或非共價連接，例如但不限于，通過酰胺、氨基甲酸酯、脲、腙、縮氨基脲、硫醚、三唑(Click化學(xué)作用)形成共價鍵，或形成二硫鍵。為了使煙堿半抗原與載體分子有一定距離以改善它的免疫原性，可以使用連接分子。連接可以在煙堿分子的任何位置發(fā)生。本領(lǐng)域已知許多煙堿半抗原和免疫綴合物，并可以用于本發(fā)明的方法中。參見，例如，在以下文獻(xiàn)公開的煙堿半抗原和免疫綴合物，本文全部引用作為參考 W098/14216.US5876727(Xenova) ；W099/61054.US6656469(Independent Pharmaceutica)； W02004/009116、US6932971(Cytos)；和 W000/32239、US6232082 和 US7247502(Nabi)。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，煙堿半抗原用式(I)表示
權(quán)利要求
1.一種免疫原性組合物，包含(a)煙堿免疫綴合物；和 (b)水包油乳劑佐劑，其中包含可代謝的油和乳化劑。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中煙堿免疫綴合物由任選包含連接分子的煙堿半抗原和載體部分組成。
3.如權(quán)利要求2所述的組合物，其中煙堿半抗原是由式(I)表示
4.如上述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的組合物，其中，煙堿免疫綴合物是式(II)
5.根據(jù)上述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的組合物，其中煙堿免疫綴合物是(CH2)n -Z
6.根據(jù)上述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的組合物，其中載體部分是破傷風(fēng)類毒素(TT)、白喉類毒素(DT)、CRM197、假單胞菌胞外蛋白A(ExoA)、鑰孔1爐血藍(lán)蛋白(KLH)或牛血清白蛋白(BSA)。
7.根據(jù)上述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的組合物，其中可代謝的油是角鯊烯。
8.根據(jù)上述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的組合物，其中乳化劑是聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯。
9.根據(jù)上述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的組合物，其中水包油乳劑佐劑進(jìn)一步包含母育酚，任選地α-生育酚。
10.根據(jù)上述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的組合物，其中水包油乳劑佐劑包含角鯊烯、聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯和α-生育酚。
11.一種制備如上述權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的組合物的方法，該方法包括將水包油乳劑佐劑與煙堿免疫綴合物合并。
12.用作藥物的如權(quán)利要求1-10的任一項(xiàng)所述的組合物。
13.用于預(yù)防或治療煙堿成癮的如權(quán)利要求1-10的任一項(xiàng)所述的組合物。
14.如權(quán)利要求1-10的任一項(xiàng)的組合物在制備用于預(yù)防或治療煙堿成癮的藥物中的應(yīng)用。
15.一種在個體中提高抗煙堿的特異性抗體反應(yīng)的方法，該方法包括向所述個體給予有效量的如權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)所述的免疫原性組合物。
16.一種預(yù)防或治療煙堿成癮的方法，該方法包括向所需個體給予有效量的如權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)所述的免疫原性組合物。
全文摘要
提供了包含煙堿免疫綴合物和水包油乳劑佐劑的免疫原性組合物，以及制備該組合物的方法。還提供該佐劑化的煙堿免疫綴合物作為藥物以及在煙堿成癮的治療或預(yù)防中的用途。
文檔編號A61K39/39GK102218137SQ201010270210
公開日2011年10月19日 申請日期2010年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月15日
發(fā)明者A·阿羅歇, J-P·普里爾斯 申請人:葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司