專利名稱：含有牛蒡苷元的藥物組合物及其醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有牛蒡苷元的藥物組合物及其在制備治療癌癥的藥物中的用途，尤其在制備治療骨髓異常綜合征的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是對(duì)人類威脅最大的疾病之一，對(duì)其治療的研究也最為廣泛深入。科學(xué)家們正從不同途徑進(jìn)行攻關(guān)。近幾年，科學(xué)家們又發(fā)現(xiàn)表遺傳(epigenetics)原因，特別是發(fā)現(xiàn)DNA甲基化異常在腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)化中起著重要作用。骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic syndrome, MDS)是一組以血細(xì)胞的質(zhì)、 量異常和高風(fēng)險(xiǎn)成為急性白血病為特征的異質(zhì)性的造血干細(xì)胞疾病。美國每年新診斷MDS 患者7000-12000例。雖然，MDS可發(fā)生在任何年齡段，但60歲以上發(fā)病率最高。臨床表現(xiàn)多變，很多病人死于骨髓衰竭并發(fā)癥。典型癥狀是乏力、感染、易碰傷、出血和發(fā)熱。臨床的處理取決于病人的年齡、MDS的亞型、國際預(yù)后積分系統(tǒng)(IPSS)積分以及病人的情況O3S)。 標(biāo)準(zhǔn)的支持療法似無助于疾病的改觀和生命的延長，唯一能治愈MDS的措施是異基因造血干細(xì)胞移植(ALL0HSCT)，但對(duì)于大多數(shù)診斷MDS的老年患者不適用，而小劑量化療對(duì)中中高?；颊邉t療效低、復(fù)發(fā)率高。由于MDS細(xì)胞的基因組DNA存在異常甲基化，許多重要功能基因的啟動(dòng)子CpG島由于高度甲基化，轉(zhuǎn)錄水平被抑制導(dǎo)致功能失活。如果腫瘤抑制基因啟動(dòng)子區(qū)和與維持基因組穩(wěn)定性有關(guān)的基因出現(xiàn)新的甲基化，這些基因?qū)⒊聊辜?xì)胞可能獲得生長優(yōu)勢而異常增生，成為促進(jìn)腫瘤形成的主要因素?，F(xiàn)認(rèn)為，可采用DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑治療。地西他濱是一種去甲基化藥物，具有獨(dú)特的甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑的治療機(jī)制。地西他濱(deCitabine，5-氮雜-2-脫氧胞苷酸)是一種天然的脫氧胞苷酸的腺苷類似物，低濃度的地西他濱摻合可替代腫瘤內(nèi)的胞嘧啶與DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶共價(jià)結(jié)合，使DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶失活，達(dá)到去甲基化的作用。2006年，美國食品及藥物管理局批準(zhǔn)了地西他濱用于治療骨髓異常綜合征(myelodysplasia syndrome，MDQ，對(duì)其他惡性血液病如急性髓系白血病(acutemyeloid leukemia, AML)禾口慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myelocyticleukemia, CML)，地西他濱均有明顯療效。同理，5-阿扎胞苷(5-azacitidine)能使骨髓中異常造血細(xì)胞的DNA發(fā)生低甲基化并產(chǎn)生直接的細(xì)胞毒性，因而具有抗腫瘤效應(yīng)。牛蒡苷與牛蒡苷元(Arctigenin，AG)均來源于牛蒡的干燥成熟果實(shí)牛蒡子，牛蒡苷活性很小，必須經(jīng)過代謝轉(zhuǎn)化為牛蒡苷元才能被人體吸收，而牛蒡苷元是可以被人體直接吸收的有效成分。目前，已有文獻(xiàn)報(bào)道牛蒡苷元具有如下藥理活性1)抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用；2)抗病毒作用，包括HIV-I與流感病毒；3)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用；4)腎病及糖尿病、糖尿病并發(fā)癥治療作用；5)熱休克反應(yīng)抑制作用；6)神經(jīng)保護(hù)作用；7)擴(kuò)張血管作用； 8)血小板活化因子拮抗作用；9)抗老年性癡呆的作用；10)抑制K+攣縮的作用等。比如， Cho J Y，et al. Immunomodulatory effect of arctigenin，a lignan compound ontumor necrosis factor-α and nitric oxide production,and lymphocyteproliferation[J].J Pharm Pharmcol. 1999 ；51 (11) :1267-1273.公開了牛蒡苷元具有抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用；Gao Y, et al. Activity of in vitro anti-influenza virus ofarctigenin[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs (中草藥)· 2002 ;33 (8) :724-726.公開了牛蒡苷兀具有抗病毒的作用；Kim S H, et al. Hepatoprotectivedibenzylbutyrolactone lignans of Torreya nucifera against CC14-induced toxicityin primary cultured rat hepatocytes[J], Biol Pharm Bull. 2003 ；26 (8) :1202-1205.公開了牛蒡苷元具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一種藥物組合物，所述藥物組合物可以抑制腫瘤細(xì)胞生長，從而達(dá)到更好地治療癌癥的作用。更具體地說，本發(fā)明的藥物組合物可以顯著抑制 MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I的生長，從而用來治療骨髓異常綜合征。本發(fā)明的藥物組合物包含活性成分牛蒡苷元和DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑，所述 DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑包括地西他濱和5-阿扎胞苷。優(yōu)選地，按物質(zhì)的量計(jì)，本發(fā)明的藥物組合物中，牛蒡苷元和地西他濱的摩爾比為 1 0. 5 16。優(yōu)選地，按物質(zhì)的量計(jì)，本發(fā)明的藥物組合物中，牛蒡苷元和5-阿扎胞苷的摩爾比為 1 0.04-40。本發(fā)明的藥物組合物，其中活性成分牛蒡苷元與DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑聯(lián)合后具有抑制MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I生長的協(xié)同作用。當(dāng)選擇0. lmmol/L的牛蒡苷元和 1. 6mmol/L的地西他濱聯(lián)用的組合物A組，與空白組對(duì)比，從第2天開始對(duì)MDS-RAEB細(xì)胞株 SKM-I的生長具有顯著的抑制作用(P <0.05)；與兩藥單用對(duì)比，組合物A組中的牛蒡苷元與地西他濱在第3天表現(xiàn)出顯著地抑制SKM-I細(xì)胞的協(xié)同作用(P < 0. 01)(見圖1)。當(dāng)選擇10. Ommol/L的牛蒡苷元和6. 4mmol/L的地西他濱聯(lián)用的組合物B組，與空白組對(duì)比，從第2天開始對(duì)MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I的生長具有極顯著的抑制作用(P < 0. 01)；與兩藥單用對(duì)比，組合物B組中的牛蒡苷元與地西他濱在第3天表現(xiàn)出顯著地抑制SKM-I細(xì)胞的協(xié)同作用(P < 0. 01)(見圖2)。當(dāng)選擇0. lmmol/L的牛蒡苷元和4. 0mmol/L的5-阿扎胞苷聯(lián)用的組合物C組，與空白組對(duì)比，從第2天開始對(duì)MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I的生長具有顯著的抑制作用(P<0.(^)；與兩藥單用對(duì)比，組合物C組中的牛蒡苷元與地西他濱在第 3天表現(xiàn)出顯著地抑制SKM-I細(xì)胞的協(xié)同作用(P < 0. 01)(見圖3)。當(dāng)選擇lOmmol/L的牛蒡苷元和0. 4mmol/L的5-阿扎胞苷聯(lián)用的組合物D組，與空白組對(duì)比，從第2天開始對(duì) MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I的生長具有顯著的抑制作用(P < 0. 05)；與兩藥單用對(duì)比，組合物D 組中的牛蒡苷元與地西他濱在第3天表現(xiàn)出顯著地抑制SKM-I細(xì)胞的協(xié)同作用(P < 0. 05) (見圖4)。需要說明的是，通過所述體外試驗(yàn)證實(shí)了本發(fā)明的藥物組合物，牛蒡苷元和地西他濱或5-阿扎胞苷表現(xiàn)出了驚人的協(xié)同性抑制MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I生長的作用。由于本發(fā)明的藥物組合物在相當(dāng)寬的范圍內(nèi)(牛蒡苷元和地西他濱的摩爾比為1 0.5 16， 牛蒡苷元和5-阿扎胞苷的摩爾比為1 0. 04-40)具有抑制MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I生長的協(xié)同作用，因此，可認(rèn)為本發(fā)明的改進(jìn)在于組分本身。另外，本領(lǐng)域的技術(shù)人員也可以預(yù)期，本發(fā)明的藥物組合物在牛蒡苷元和地西他濱的摩爾比為1 0.5 16的范圍內(nèi)，以及牛蒡苷元和5-阿扎胞苷的摩爾比為1 0.04-40的范圍內(nèi)均可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。本發(fā)明的目的之二是提供組合物的醫(yī)藥用途，具體地說是，活性成分由牛蒡苷元和DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑組成的組合物在制備治療骨髓異常綜合征的藥物中的用途。優(yōu)選地，上述組合物的醫(yī)藥用途，所述DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑包括地西他濱和 5-阿扎胞苷。上述優(yōu)選的醫(yī)藥用途的技術(shù)方案中，按物質(zhì)的量計(jì)，牛蒡苷元和地西他濱的摩爾比為1 0. 5 16。上述優(yōu)選的醫(yī)藥用途的技術(shù)方案中，按物質(zhì)的量計(jì)，牛蒡苷元和5-阿扎胞苷的摩爾比為 1 0.04-40。為了清楚地闡明本發(fā)明的技術(shù)效果，發(fā)明人通過以下試驗(yàn)例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的藥物組合物在抑制MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I生長的作用。試驗(yàn)例組合物對(duì)MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I生長影響的試驗(yàn)1.試驗(yàn)分組與給藥給藥終濃度如下空白對(duì)照組等體積的賦形劑牛蒡苷元(AG)低量組0. lmmol/L牛蒡苷元牛蒡苷元(AG)高量組10mmol/L牛蒡苷元地西他濱(DCA)低量組1. 6mmol/L地西他濱地西他濱(DCA)高量組6. 4mmol/L地西他濱5-阿扎胞苷(AZA)低量組0. 4mmol/L 5_阿扎胞苷5-阿扎胞苷(AZA)高量組4. Ommol/L 5_阿扎胞苷組合物A組0. lmmol/L牛蒡苷元+1. 6mmol/L地西他濱組合物B組10. Ommol/L牛蒡苷元+6. 4mmol/L地西他濱組合物C組0. lmmol/L牛蒡苷元+4. Ommol/L 5_阿扎胞苷組合物D組10. Ommol/L牛蒡苷元+0. 4mmol/L 5-阿扎胞苷2.試驗(yàn)方案與結(jié)果統(tǒng)計(jì)如下將MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I接種于RPMI-1640培養(yǎng)液中，于飽和濕度、37°C、含5% CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)懸浮培養(yǎng)。將對(duì)數(shù)生長期各組細(xì)胞接種于25ml培養(yǎng)瓶，每瓶含1. OX IO5個(gè)細(xì)胞(終體積5ml)，細(xì)胞密度2. OX IO4個(gè)/ml，按實(shí)驗(yàn)分組加入相應(yīng)藥物，每組各設(shè)5個(gè)平行瓶。在37°C，5% CO2條件下培養(yǎng)5天，每天取樣計(jì)細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞懸液和0.4%臺(tái)盼藍(lán)按 9 1混合，光鏡下觀察200個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，每瓶細(xì)胞均獨(dú)立計(jì)數(shù)3次，取其均值。 繪制細(xì)胞生長曲線。根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析后，選擇0. lmmol/L的牛蒡苷元和1. 6mmol/L的地西他濱聯(lián)用的組合物A組，與空白組對(duì)比，從第2天開始對(duì)MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I的生長具有顯著的抑制作用(P<0.(^)；與兩藥單用對(duì)比，組合物A組中的牛蒡苷元與地西他濱在第3天表現(xiàn)出顯著地抑制SKM-I細(xì)胞的協(xié)同作用(P < 0. 01)(見圖1)。根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析后，選擇10. Ommol/L的牛蒡苷元和6. 4mmol/L的地西他濱聯(lián)用的組合物B組，與空白組對(duì)比，從第2天開始對(duì)MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I的生長具有極顯著的抑制作用(P <0.01)；與兩藥單用對(duì)比，組合物B組中的牛蒡苷元與地西他濱在第3天表現(xiàn)出顯著地抑制SKM-I細(xì)胞的協(xié)同作用(P < 0. 01)(見圖2)。根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析后，選擇0. lmmol/L的牛蒡苷元和4. Ommol/L的5_阿扎胞苷聯(lián)用的組合物C組，與空白組對(duì)比，從第2天開始對(duì)MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I的生長具有顯著的抑制作用(P<0.(^)；與兩藥單用對(duì)比，組合物C組中的牛蒡苷元與地西他濱在第3天表現(xiàn)出顯著地抑制SKM-I細(xì)胞的協(xié)同作用(P < 0. 01)(見圖3)。根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析后，選擇lOmmol/L的牛蒡苷元和0. 4mmol/L的5-阿扎胞苷聯(lián)用的組合物D組，與空白組對(duì)比，從第2天開始對(duì)MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I的生長具有顯著的抑制作用(P<0.(^)；與兩藥單用對(duì)比，組合物D組中的牛蒡苷元與地西他濱在第3天表現(xiàn)出顯著地抑制SKM-I細(xì)胞的協(xié)同作用(P < 0. 05)(見圖4)。


圖1 0. lmmol/L的牛蒡苷元和1. 6mmol/L的地西他濱聯(lián)用的組合物對(duì)MDS-RAEB 細(xì)胞株SKM-I生長的影響圖2 10. 0mmol/L的牛蒡苷元和6. 4mmol/L的地西他濱聯(lián)用的組合物對(duì)MDS-RAEB 細(xì)胞株SKM-I生長的影響圖3 0. lmmol/L的牛蒡苷元和4. 0mmol/L的5_阿扎胞苷聯(lián)用的組合物對(duì) MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-I生長的影響圖4 IOmmol/L的牛蒡苷元和0. 4mmol/L的5_阿扎胞苷聯(lián)用的組合物對(duì)MDS-RAEB 細(xì)胞株SKM-I生長的影響具體實(shí)時(shí)方式以下通過具體實(shí)施方式
進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明不僅僅限于以下實(shí)施例。實(shí)施例1注射劑牛蒡苷元20g地西他濱IOg注射用大豆油380g甘油120g大豆卵磷脂13g注射用水加至2000ml制備工藝將大豆卵磷脂和甘油，分散于300ml注射用水中，再將牛蒡苷元、地西他濱和注射用大豆油混合均勻，配制成油相，然后將油相加入到水相中，邊加邊攪拌，均勻后超聲lh，之后用注射用水定容至2000ml，后轉(zhuǎn)入高壓乳勻機(jī)，乳化30min，灌裝，滅菌，即
得。
實(shí)施例2注射劑
牛蒡苷元30g
地西他濱IOg
注射用大豆油360g
甘油82g
大豆卵磷脂120g
注射用水加至2000ml
制備エ藝將大豆卵磷脂和甘油，分散于300ml注射用水中，再將牛蒡苷元、地西 他濱和注射用大豆油混合均勻，配制成油相，然后將油相加入到水相中，邊加邊攪拌，均勻 后超聲lh，之后用注射用水定容至2000ml，后轉(zhuǎn)入高壓乳勻機(jī)，乳化30min，灌裝，滅菌，即得。實(shí)施例3注射劑牛蒡苷元IOg地西他濱50g注射用大豆油 120g甘油42g丙ニ醇16g大豆卵磷脂5g注射用水加至800ml制備エ藝將大豆卵磷脂、甘油及丙ニ醇分散于120ml注射用水中，再將牛蒡苷 元、地西他濱和注射用大豆油混合均勻，配制成油相，然后將油相加入到水相中，邊加邊攪 拌，均勻后超聲lh，之后用注射用水定容至800ml，后轉(zhuǎn)入高壓乳勻機(jī)，乳化30min，灌裝，滅 菌，即得。實(shí)施例4注射劑牛蒡苷元 0. 5g5-阿扎胞苷 Ig丙ニ醇300g葡萄糖50g注射用水 加至IOOOml制備エ藝將丙ニ醇、葡萄糖和約600ml注射用水混合均勻，加入牛蒡苷元、5_阿 扎胞苷攪拌溶解，加水至1000ml，灌裝，滅菌，即得。實(shí)施例5注射劑牛蒡苷元3g5-阿扎胞苷 6g丙ニ醇300g氯化鈉9g注射用水加至IOOOml制備エ藝將丙ニ醇、氯化鈉和約600ml注射用水混合均勻，加入牛蒡苷元、5_阿 扎胞苷攪拌溶解，加水至1000ml，灌裝，滅菌，即得。實(shí)施例6注射劑牛蒡苷元 0. 5g5-阿扎胞苷 20g丙ニ醇150g氯化鈉5g注射用水 加至IOOOml制備ェ藝將丙ニ醇、氯化鈉和約600ml注射用水混合均勻，加入牛蒡苷元、5_阿扎胞苷攪拌溶解，加水至1000ml，灌裝，滅菌，即得。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于它含有活性成分牛蒡苷元和DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑，所述的DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑包括地西他濱和5-阿扎胞苷。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于按物質(zhì)的量計(jì)，牛蒡苷元和地西他濱的摩爾比為1 0. 5 16。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于按物質(zhì)的量計(jì)，牛蒡苷元和5-阿扎胞苷的摩爾比為1 0.04-40。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于它是注射劑。
5.活性成分由牛蒡苷元和DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑組成的組合物在制備治療骨髓異常綜合征的藥物中的用途。
6.如權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑包括地西他濱和5-阿扎胞苷。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有牛蒡苷元的藥物組合物及其在制備治療骨髓異常綜合征的藥物中的用途。該藥物組合物包括活性成分牛蒡苷元和DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑，所述DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑包括地西他濱和5-阿扎胞苷。本發(fā)明的藥物組合物具有抑制MDS-RAEB細(xì)胞株SKM-1生長的協(xié)同作用，可以被用來更好地治療骨髓異常綜合征。
文檔編號(hào)A61K31/365GK102397548SQ20101028537
公開日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2010年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月19日
發(fā)明者強(qiáng)紅剛, 趙志全 申請(qǐng)人:山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司