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一種同時提取油茶蒲多糖和多酚的方法

文檔序號:998500閱讀:272來源:國知局
專利名稱:一種同時提取油茶蒲多糖和多酚的方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種油茶蒲多糖和多酚的提取方法,尤其是采用雙水相萃取的方法對 含油茶蒲多糖和多酚的水提液進行純化。
背景技術(shù)
油茶(Camellia oleifera Abel.)是山茶科山茶屬植物,與油棕、椰子和橄欖被譽 為世界四大木本食用油源樹種。我國的油茶資源豐富,主要分布在江西、湖南、廣西、浙江、 福建、安徽、貴州等地區(qū)。油茶蒲為油茶果的外殼,約占茶油果總量的2/3,是山茶油生產(chǎn)的 副產(chǎn)物。我國雖然油茶資源豐富,但對油茶蒲的開發(fā)利用卻非常薄弱,在實際生產(chǎn)中通常作 為燃料使用或被廢棄,造成了環(huán)境的污染和資源的浪費。油茶蒲多糖和多酚是油茶蒲中重要組分。近年來,一些研究表明油茶蒲提取物具 有許多特殊的生理功能。中國專利CN101560266A公開了一種油茶蒲多糖及其用途,結(jié)果表 明,油茶浦多糖是一種極具研究價值和開發(fā)潛力的抗氧化和抗腫瘤活性多糖。油茶蒲多酚 特征成分為沒食子酸、鞣花酸及其衍生物,具有較好的抗氧化活性、抗癌活性和安全性。目前,有關(guān)從茶葉中提取多糖和多酚的方法甚多,但關(guān)于油茶蒲加工的文獻和專 利報道很少,僅中國專利CNlO 1560265A和CNlO 1560266A公開了油茶蒲多糖的制備方法 及提純方法,但存在不足(1)工藝方法所得只有油茶蒲多糖一種活性成分,造成資源的浪 費;(2)對油茶蒲多糖的提取采用醇沉法,該方法需消耗大量的有機溶劑,耗時長,提取物 雜質(zhì)含量多、后處理工序繁雜;同時易降低多糖的生物活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種工藝簡單、成本低、得率高、有利于規(guī)?;a(chǎn)的同時 提取油茶蒲多糖和多酚方法。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)—種從油茶蒲同時提取多糖和多酚的方法,以油茶蒲為原料,包括下列步驟(1)將干燥粉碎的油茶蒲放入提取裝置中,用水作為浸取劑,調(diào)節(jié)液固比進行攪拌 提取,離心分離后得到油茶蒲多糖和多酚的粗提液;(2)向粗提液中加入乙醇和無機鹽形成雙水相系統(tǒng),進行充分萃取,靜置后分成兩 相,油茶蒲多酚進入乙醇上相,油茶蒲多糖進入無機鹽下相;(3)取步驟(2)分相后得到的乙醇上相,采用真空濃縮、無水乙醇洗滌去鹽和冷凍 干燥得到油茶蒲多酚產(chǎn)品;(4)取步驟(2)分相后得到的無機鹽下相,采用超濾膜濃縮和冷凍干燥得到油茶
蒲多糖產(chǎn)品。優(yōu)選地,步驟(1)所述的提取條件為油茶蒲細度為60 120目,液固比10 1 40 l(v/w),攪拌轉(zhuǎn)速300 500rpm,溫度60 100°C,提取時間1 2h,提取次數(shù)2 4次。
優(yōu)選地,步驟(2)所述的無機鹽采用硫酸銨、硫酸鈉、磷酸氫二鉀或氯化鈉。優(yōu)選地,步驟⑵所述的雙水相萃取體系中乙醇的質(zhì)量濃度為20 30%,無機鹽 的質(zhì)量濃度為15 25%。優(yōu)選地,步驟(4)所述的超濾膜工作壓力0. 1 0.6MPa,膜的截留分子量為 3000 10000,操作溫度為35°C。優(yōu)選地,所述從油茶蒲同時提取多糖和多酚的方法包括下列步驟(1)油茶蒲經(jīng)烘干和粉碎,過60 120目篩;將粉碎的油茶蒲放入提取裝置中, 用水作為浸取劑,在液固比10 1 40 l(v/w)、攪拌轉(zhuǎn)速300 500rpm和溫度60 100°C條件下,提取1 2h,提取液經(jīng)轉(zhuǎn)速4000rpm下離心lOmin,上清液即為油茶蒲多糖和 多酚的粗提液;(2)向粗提液中加入乙醇和無機鹽形成雙水相系統(tǒng),其中乙醇的質(zhì)量濃度為20 30%,無機鹽的質(zhì)量濃度為15 25%。充分萃取后靜置分成兩相,油茶蒲多酚進入乙醇上 相,油茶蒲多糖進入無機鹽下相;(3)取分相后得到的乙醇上相,采用真空濃縮、無水乙醇洗滌去鹽和冷凍干燥得到 油茶蒲多酚產(chǎn)品;(4)取分相后得到的無機鹽下相,在0. 1 0.6MPa壓力下通過截留分子量為 3000 10000的超濾膜,收集截留液,冷凍干燥即得油茶蒲多糖產(chǎn)品。本發(fā)明采用雙水相技術(shù)同時提取油茶蒲多糖和多酚,實現(xiàn)了油茶蒲活性成分的綜 合利用,克服了采用醇沉等方法只能獲取一種有效成分的缺點,同時由于整個工藝過程所 需有機溶劑量較少,降低油茶蒲活性成分生產(chǎn)成本,并有利于保留油茶蒲多糖的活性。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步地詳細說明,但本發(fā)明的保護范圍并不限于 此。實施例1取油茶蒲100g,經(jīng)烘干和粉碎,過60 80目篩;稱取粉碎的油茶蒲10g,采用 150mL水作為浸取劑,在攪拌轉(zhuǎn)速400rpm和溫度80°C下提取1. 5h,提取液經(jīng)轉(zhuǎn)速4000rpm 下離心IOmin得上清液;按照上述條件共提取3次,合并后得油茶蒲多糖和多酚的粗提液。分別加入乙醇和硫酸銨,使形成的雙水相萃取體系中乙醇的質(zhì)量濃度為25%,硫 酸銨的質(zhì)量濃度為20%,攪拌萃取30min,然后靜置分層,上層是含有油茶蒲多酚的乙醇 相,下層是含有油茶蒲多糖的硫酸銨水相。取分相后得到的乙醇上相,真空濃縮,然后用乙醇洗滌、離心以除去其中的鹽,再 冷凍干燥得到油茶蒲多酚產(chǎn)品0. 13g,多酚含量測定為26. 82%。取分相后得到的無機鹽下相,在0. 2MPa壓力下通過截留分子量為3000的超濾膜, 收集截留液,冷凍干燥即得油茶蒲多糖粉末0. 52g,多糖含量為47. 63%。在本發(fā)明中,油茶蒲多酚含量采用Folin-Ciocalteau法,油茶蒲多糖含量采用苯 酚-硫酸法(其他的實施例也采用此方法)(a)Folin-Ciocalteau法標準曲線的制作精確稱取沒食子酸標準品25mg,用蒸餾水溶解并定容至250mL 得0. lmg/mL的沒食子酸對照品標準溶液。分別于IOmL容量瓶中加入0、0. 1,0. 2,0. 3,0. 4、
40.5和0. 6mL的0. lmg/mL沒食子酸標準溶液,再加入1. OmL的Folin-Ciocalteu試劑和2mL 的15%碳酸鈉溶液,用蒸餾水定容至刻度,充分混合并放置2h后,于760nm波長下測定吸 光度值,以1. OmL蒸餾水按同樣操作作為空白對照。以沒食子酸濃度(C)為橫坐標,吸光度 (A)為縱坐標,制作標準曲線。標準曲線方程為標準曲線方程為:A= 13. 965C+0. 0312, R2 =0. 9986,其中A為吸光度值,R2為相關(guān)系數(shù),C為沒食子酸濃度(mg/mL)。多酚含量測定用蒸餾水將上述提取方法提取的油茶蒲多酚產(chǎn)品配成濃度為
1.Omg/mL,取0. 2mL按上述操作測定760nm的吸光度值,根據(jù)標準曲線計算多酚含量。油茶蒲多酚含量(%)=油茶蒲多酚中所含多酚的質(zhì)量/油茶蒲多酚質(zhì) 量 X 100%(b)苯酚-硫酸法標準曲線的制作準確稱取標準葡萄糖20mg于500mL容量瓶中,加水溶解并定容 至刻度,分別吸取0. 4、0. 6、0. 8、1. O、1. 2、1. 4、1. 6及1. 8mL,各以蒸餾水補至2. OmL0然后 加入6%苯酚1. OmL及濃硫酸5. OmL,搖勻冷卻,室溫放置20min,于490nm波長下測定吸光 度值,以2. OmL蒸餾水按同樣操作作為空白對照。以葡萄糖濃度(C)為橫坐標,吸光度(A) 為縱坐標,制作標準曲線。標準曲線方程為=A = 15. 435C+0.0156,R2 = 0.9992,其中:A為 吸光度值,R2為相關(guān)系數(shù),C為葡萄糖濃度(mg/mL)。多糖含量測定用蒸餾水將上述提取方法提取的油茶蒲多糖產(chǎn)品配成1. Omg/mL, 取0. 2mL按上述操作測定490nm的吸光度值,根據(jù)標準曲線計算多糖含量。油茶蒲多糖含量(%)=油茶蒲多糖中所含多糖的質(zhì)量/油茶蒲多糖質(zhì) 量 X 100%實施例2取油茶蒲100g,經(jīng)烘干和粉碎,過80 100目篩;稱取粉碎的油茶蒲10g,采用 IOOmL水作為浸取劑,在攪拌轉(zhuǎn)速300rpm和溫度95°C下提取lh,提取液經(jīng)轉(zhuǎn)速4000rpm下 離心IOmin得上清液;按照上述條件共提取2次,合并后得油茶蒲多糖和多酚的粗提液。分別加入乙醇和磷酸氫二鉀,使形成的雙水相萃取體系中乙醇的質(zhì)量濃度為 25 %,磷酸氫二鉀的質(zhì)量濃度為18 %,攪拌萃取30min,然后靜置分層,上層是含有油茶蒲 多酚的乙醇相,下層是含有油茶蒲多糖的硫酸銨水相。取分相后得到的乙醇上相,真空濃縮,然后用乙醇洗滌、離心以除去其中的鹽,再 冷凍干燥得到油茶蒲多酚產(chǎn)品0. 15g,多酚含量測定為28. 44%。取分相后得到的無機鹽下相,在0. 2MPa壓力下通過截留分子量為3000的超濾膜, 收集截留液,冷凍干燥即得油茶蒲多糖粉末0. 56g,多糖含量為46. 85%。實施例3取油茶蒲200g,經(jīng)烘干和粉碎,過100 120目篩;稱取粉碎的油茶蒲10g,采用 IOOmL水作為浸取劑,在攪拌轉(zhuǎn)速300rpm和溫度90°C下提取lh,提取液經(jīng)轉(zhuǎn)速4000rpm下 離心IOmin得上清液;按照上述條件共提取2次,合并后得油茶蒲多糖和多酚的粗提液。分別加入乙醇和硫酸銨,使形成的雙水相萃取體系中乙醇的質(zhì)量濃度為25%,硫 酸銨的質(zhì)量濃度為20%,攪拌萃取30min,然后靜置分層,上層是含有油茶蒲多酚的乙醇 相,下層是含有油茶蒲多糖的硫酸銨水相。取分相后得到的乙醇上相,真空濃縮,然后用乙醇洗滌、離心以除去其中的鹽,再冷凍干燥得到油茶蒲多酚產(chǎn)品0. 18g,多酚含量測定為26. 98%。 取分相后得到的無機鹽下相,在0.2MPa壓力下通過截留分子量為6000的超濾膜, 收集截留液,冷凍干燥即得油茶蒲多糖粉末0. 53g,多糖含量測定為52. 42%。
權(quán)利要求
一種從油茶蒲同時提取多糖和多酚的方法,其特征在于以油茶蒲為原料,包括下列步驟(1)將干燥粉碎的油茶蒲放入提取裝置中,用水作為浸取劑,調(diào)節(jié)液固比進行攪拌提取,離心分離后得到油茶蒲多糖和多酚的粗提液;(2)向粗提液中加入乙醇和無機鹽形成雙水相系統(tǒng),進行充分萃取,靜置后分成兩相,油茶蒲多酚進入乙醇上相,油茶蒲多糖進入無機鹽下相;(3)取步驟(2)分相后得到的乙醇上相,采用真空濃縮、無水乙醇洗滌去鹽和冷凍干燥得到油茶蒲多酚產(chǎn)品;(4)取步驟(2)分相后得到的無機鹽下相,采用超濾膜濃縮和冷凍干燥得到油茶蒲多糖產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(1)所述的提取條件為油茶蒲細度為 60 120目,液固比10 1 40 l(v/w),攪拌轉(zhuǎn)速300 500rpm,溫度60 100°C,提 取時間1 2h,提取次數(shù)2 4次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(2)所述的無機鹽采用硫酸銨、硫酸 鈉、磷酸氫二鉀或氯化鈉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(2)所述的雙水相萃取體系中乙醇的 質(zhì)量濃度為20 30%,無機鹽的質(zhì)量濃度為15 25%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(4)所述的超濾膜工作壓力0.1 0. 6MPa,膜的截留分子量為3000 10000,操作溫度為35°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,包括下列步驟(1)油茶蒲經(jīng)烘干和粉碎,過60 120目篩;將粉碎的油茶蒲放入提取裝置中,用水作 為浸取劑,在液固比10 1 40 l(v/w)、攪拌轉(zhuǎn)速300 500rpm和溫度60 100°C條 件下,提取1 2h,提取液經(jīng)轉(zhuǎn)速4000rpm下離心lOmin,上清液即為油茶蒲多糖和多酚的 粗提液;(2)向粗提液中加入乙醇和無機鹽形成雙水相系統(tǒng),其中乙醇的質(zhì)量濃度為20 30%,無機鹽的質(zhì)量濃度為15 25%。充分萃取后靜置分成兩相,油茶蒲多酚進入乙醇上 相,油茶蒲多糖進入無機鹽下相;(3)取分相后得到的乙醇上相,采用真空濃縮、無水乙醇洗滌去鹽和冷凍干燥得到油茶 蒲多酚產(chǎn)品;(4)取分相后得到的無機鹽下相,在0.1 0. 6MPa壓力下通過截留分子量為3000 10000的超濾膜,收集截留液,冷凍干燥即得油茶蒲多糖產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種油茶蒲多糖和多酚的提取方法,以油茶蒲為原料,包括下列步驟(1)將干燥粉碎的油茶蒲放入提取裝置中,用水作為浸取劑進行攪拌提取,離心分離后得到油茶蒲多糖和多酚的粗提液;(2)向粗提液中加入乙醇和無機鹽形成雙水相系統(tǒng),油茶蒲多酚進入乙醇上相,油茶蒲多糖進入無機鹽下相;(3)乙醇上相采用真空濃縮、無水乙醇洗滌去鹽和冷凍干燥得到油茶蒲多酚產(chǎn)品;(4)無機鹽下相采用超濾膜濃縮和冷凍干燥得到油茶蒲多糖產(chǎn)品。本發(fā)明采用雙水相技術(shù)同時提取油茶蒲多糖和多酚,實現(xiàn)了油茶蒲活性成分的綜合利用,同時降低了油茶蒲活性成分生產(chǎn)成本,并有利于保留油茶蒲多糖的活性。
文檔編號A61K36/82GK101961427SQ201010289158
公開日2011年2月2日 申請日期2010年9月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月21日
發(fā)明者龐博韜, 徐化能, 顧峰 申請人:江南大學;寧波經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)自然好綠科技發(fā)展有限公司
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