專利名稱：一種治療乳腺增生的中藥組合物質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中成藥的質(zhì)量檢測(cè)方法，具體地說，本發(fā)明涉及一種治療乳腺增生的 中藥組合物質(zhì)量檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
乳腺增生病約占乳腺疾病的70 80%，是育齡婦女最常見的乳腺疾病，其發(fā)病率 約為40%，伴有明顯的乳房疼痛，常形成乳房結(jié)節(jié)或腫塊，部分患者有發(fā)展為乳腺癌的危 險(xiǎn)。因此，對(duì)乳腺增生進(jìn)行有效治療對(duì)于維護(hù)廣大婦女的健康，提高生活質(zhì)量，預(yù)防乳腺癌 具有極其重要的意義。長期以來國外多用激素類、維生素類藥物或手術(shù)治療乳腺增生。80年 代以來，采用三苯氧胺治療乳腺增生，有報(bào)道對(duì)雌激素受體陽性的患者，有效率可達(dá)86%， 但長期服用可發(fā)生陰道出血、血小板減少、惡心、嘔吐、水腫及血鈣增加等副作用。鑒于乳腺增生的發(fā)病與神經(jīng)內(nèi)分泌失衡有關(guān)，治療上需長期用藥的特點(diǎn)，傳統(tǒng)中 醫(yī)藥較之于化學(xué)藥品更具優(yōu)勢(shì)。國內(nèi)采用中醫(yī)藥治療乳腺增生取得了一定的進(jìn)展，中國藥 典2005年版收載了三個(gè)治療乳腺增生的方劑乳塊消片、乳疾靈顆粒和乳癖消片。然而，由于此類方劑的組方復(fù)雜，藥味大多在10味左右，甚至更多。這為探討治療 乳腺增生病的中藥藥理作用機(jī)制、以及藥品的質(zhì)量檢測(cè)增添了一定的難度。由本申請(qǐng)人申 請(qǐng)的“一種治療乳腺增生的中藥組合物、制劑及其制備方法”，公開號(hào)CN101219192A，其由山 楂、炒麥芽、雞血藤和通草四味中藥原料組成，該中藥組合物具有明確的療效，長期有效率 達(dá)99.6%。但目前尚無相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療乳腺增生的中藥組合物質(zhì)量檢測(cè)方法。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供一種由山楂、炒麥芽、雞血藤和通草制成的治療 乳腺增生的中藥顆粒質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法包括鑒別和含量測(cè)定兩部分，其中鑒別包括采 用薄層色譜法，分別用芒柄花素對(duì)照品、山楂對(duì)照藥材、枸櫞酸對(duì)照品進(jìn)行的鑒別；含量測(cè) 定以含表兒茶素確定，以表兒茶素計(jì)，不得少于0. 70mg/g。本發(fā)明所述治療乳腺增生的中藥顆粒，其采用如下方法制備取山楂6份、炒麥芽10份、雞血藤10份、通草3. 3份，然后加8 10倍量的水煎 煮三次，每次0. 5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 12 (700C )的稠 膏，加入3份糊精，流化床制粒，干燥，整粒，制成顆粒，即得。本發(fā)明的質(zhì)量檢測(cè)方法，其中所述鑒別包括如下鑒別中的一種或多種1)雞血藤的鑒別取所述中藥顆粒8-15g，加水50ml使溶解，加乙醚IOOml超聲 處理(功率320W，頻率40kHz) 20-40min,分取乙醚層，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml溶解，作為供試 品溶液；另取芒柄花素對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；取對(duì)照 品溶液1-3 μ 1，供試品溶液15-25 μ 1，分別點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙 酯-氯仿(20 12 3)為展開劑，展開，展距約12cm，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視；供試品色譜中在與對(duì)照品相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)時(shí)，說明所述中藥顆粒含有雞 血藤；本發(fā)明曾參考文獻(xiàn)(中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2008，2 (7) :16_17 ；時(shí)珍國醫(yī)國藥，2005， 16(11) :1125-26 ；廣東藥學(xué)，2004，14(5) :7_8 ；中國藥業(yè)，2000，9 (12) 12)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果 表明，上述文獻(xiàn)中的薄層色譜展開條件對(duì)雞血藤提取效率過低，且無法排除陰性干擾，不能 作為本發(fā)明所述顆粒劑的質(zhì)量檢測(cè)方法。經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)摸索，意外發(fā)現(xiàn)僅按本發(fā)明的上述方 法操作，可實(shí)現(xiàn)對(duì)雞血藤的鑒別，且沒有陰性干擾。由此可見，本發(fā)明的方法專屬性強(qiáng)且操 作方便。2)山楂的鑒別取所述中藥顆粒8-15g，加甲醇20ml，超聲處理10-20min，濾過， 濾液作為供試品溶液；另取山楂對(duì)照藥材0. Ig,加甲醇10ml，超聲處理(功率320W，頻 率40kHz) 15-20min,濾過，濾液作為對(duì)照藥材溶液；另取枸櫞酸對(duì)照品，加甲醇制成每Iml 含0. 5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取對(duì)照藥材溶液及對(duì)照品溶液1-3 μ 1，供試品溶液 4-10μ1，分別點(diǎn)于同一塊聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10 4 1)為展開 劑，展開，展距約6cm，取出，吹干，噴以0. 溴甲酚綠乙醇液；供試品色譜中在與對(duì)照藥材 及對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)時(shí)，說明所述中藥顆粒含有山楂；本發(fā)明曾參考文獻(xiàn)(時(shí)珍國醫(yī)國藥，2007，18(3) :641_42 ；國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)， 2007,13(14) 91-93 ；時(shí)珍國醫(yī)國藥，2006，17 (7) 1261-62 ；中國中醫(yī)藥信息雜志，2005， 12(8) :38-39;華西藥學(xué)雜志，2003，18(6) 480-81)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，上述文獻(xiàn)中薄層 色譜的展開條件均不能有效地將枸櫞酸與其它物質(zhì)有效分離，且枸櫞酸提取效率過低，不 能作為本發(fā)明所述顆粒劑的質(zhì)量檢測(cè)方法。經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)摸索，意外發(fā)現(xiàn)樣品處理僅以甲醇 直接超聲提取，過濾，即可，樣品處理步驟少，操作簡單。并且實(shí)驗(yàn)表明在以乙酸乙酯-甲 醇-甲酸(10 4 1)為展開劑的條件下，枸櫞酸可與其它物質(zhì)有效分離，且枸櫞酸斑點(diǎn) 明顯，無陰性干擾，適合本發(fā)明顆粒劑的質(zhì)量鑒別。所述含量測(cè)定方法包括如下步驟1)對(duì)照品溶液的制備精密稱取表兒茶素對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml含0. Img的溶液，即得；2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0. 5ml、Iml至50ml量瓶中，另精密量取對(duì)照品溶液0. 5ml、 Iml、2ml、3ml至IOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取5 μ 1注入液相色譜儀 測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中色譜條件與系統(tǒng)適用 性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-O.Olmol/L檸檬酸(28-35 65-72)為 流動(dòng)相；檢測(cè)波長為280nm ；柱溫25_35°C ；理論板數(shù)按表兒茶素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000 ；3)測(cè)定法取所述中藥顆粒，研細(xì)，取約0. 5-lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入50 %甲醇 40-100ml，搖勻，超聲處理(功率320W，頻率40kHz) 30-40min,濾過，濾液濃縮至約2ml，拌 入2-3g的聚酰胺(過100 200目篩)，拌勻，加到聚酰胺干柱(100 200目，4_6g，內(nèi)徑 2cm)上，依次用水100ml、20%甲醇100ml、70%甲醇適量洗脫，棄去前200ml洗脫液后，用 IOOml量瓶收集至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5μ 1注入液相色譜儀測(cè)定峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲 線上讀出供試品溶液中表兒茶素的含量，計(jì)算，即得。
4
本發(fā)明的中藥顆粒以表兒茶素計(jì)，不得少于0. 70mg/g。本發(fā)明的上述色譜條件對(duì)表兒茶素的分離度好，色譜峰形對(duì)稱，沒有陰性干擾。綜上所述，本發(fā)明的質(zhì)量檢測(cè)方法的鑒別法選擇以芒柄花素對(duì)照品、山楂對(duì)照藥 材、枸櫞酸對(duì)照品來進(jìn)行對(duì)照，直接比較斑點(diǎn)的大小和位置，操作簡便、直觀；含量測(cè)定以含 表兒茶素確定，專屬性強(qiáng)，且均未出現(xiàn)陰性干擾，可使所述中藥顆粒的質(zhì)量更加有保障，藥 效更為確切，為探討治療乳腺增生病的中藥藥理作用機(jī)制、以及藥品的質(zhì)量檢測(cè)提供可靠 的依據(jù)。


圖1為本發(fā)明雞血藤薄層色譜圖；其中，1.雞血藤陰性對(duì)照液；2.供試品溶液；3.芒柄花素對(duì)照液；圖2為本發(fā)明山楂薄層色譜圖；其中，1.山楂陰性對(duì)照液；2.供試品溶液；3.山楂對(duì)照藥材；4.枸櫞酸對(duì)照液；圖3-A、圖3-B、圖3-C為本發(fā)明表兒茶素高效液相色譜圖；其中，A 陰性對(duì)照B 表兒茶素對(duì)照品C 樣品。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1一、處方山楂1200g，炒麥芽2000g，雞血藤2000g，通草660g。二、制備方法以上四味藥材，加水煎煮三次，每次0. 5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液 濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 12(70°C )的稠膏，加入適量糊精，流化床制粒，干燥，整粒，制 成顆粒，即得本發(fā)明的中藥顆粒。三、鑒別與含量測(cè)定方法如下1.鑒別方法包括如下步驟(1)雞血藤鑒別專屬性試驗(yàn)供試品溶液的制備取中藥顆粒樣品10g，加水50ml使溶解，加乙醚IOOml超聲處 理30min，分取乙醚層，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml溶解，作為供試品溶液。陰性溶液的制備按處方比例稱取除雞血藤以外的藥材，同法制備缺雞血藤的中 藥顆粒，照上述供試品溶液制備方法處理，即得陰性對(duì)照液。對(duì)照品溶液的制備取芒柄花素對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì) 照品溶液。照《中國藥典》2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，取對(duì)照品溶液2 μ 1，供 試品溶液與陰性對(duì)照溶液各20 μ 1，分別點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙 酯-氯仿(20 12 3)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視。供試品色 譜中，在與芒柄花素對(duì)照品相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。結(jié)果見圖1。(2)山楂鑒別專屬性試驗(yàn)供試品溶液的制備取中藥顆粒樣品10g，加甲醇20ml，超聲處理15min，濾過，濾 液作為供試品溶液。
5
陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例稱取除山楂以外的藥材，同法制備缺山楂的中 藥顆粒，照上述供試品溶液制備方法處理，即得陰性對(duì)照液。對(duì)照藥材溶液制備取山楂對(duì)照藥材0. Ig,加甲醇10ml，超聲處理15min，濾過，濾 液作為對(duì)照藥材溶液。對(duì)照品溶液制備取枸櫞酸對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對(duì)照 品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，取對(duì)照藥材溶液及對(duì) 照品溶液2 μ 1，供試品溶液和陰性對(duì)照液各8 μ 1，分別點(diǎn)于同一塊聚酰胺薄膜上，以乙酸 乙酯-甲醇-甲酸(10 4 1)為展開劑，展開，展距約6cm，取出，吹干，噴以0. 溴甲 酚綠乙醇液。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑 點(diǎn)，陰性對(duì)照無此斑點(diǎn)，無干擾，結(jié)果見圖2。2.含量測(cè)定方法專屬性試驗(yàn)照高效液相色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲 醇-O.Olmol/L檸檬酸(33 67)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為280nm ；柱溫30°C。理論板數(shù)按表 兒茶素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對(duì)照品溶液的制備精密稱取表兒茶素對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml含0. Img的 溶液，即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0. 5ml、lml至50ml量瓶中，另精密量取對(duì) 照品溶液0. 5ml、1ml、2ml、3ml至IOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取5 μ 1 注入液相色譜儀測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定法取重量差異項(xiàng)下的中藥顆粒樣品，研細(xì)，取約0. 75g，精密稱定，置具塞錐 形瓶中，加入50%甲醇50ml，搖勻，超聲處理30min，濾過，濾液濃縮至約2ml，拌入2g的聚 酰胺(過100 200目篩)，拌勻，加到聚酰胺干柱(100 200目，5g，內(nèi)徑2cm)上，依次用 水IOOml、20%甲醇100ml、70%甲醇適量洗脫，棄去前200ml洗脫液后，用IOOml量瓶收集 至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5μ 1注入液相色譜儀測(cè)定峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品 溶液中表兒茶素的含量，計(jì)算，即得。本品每g含表兒茶素(C15H14O6)計(jì)為0. 9Imgo陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例稱取麥芽及通草按制備方法制備后按測(cè)定法項(xiàng) 下處理，得陰性對(duì)照溶液。按上述色譜條件分別測(cè)定陰性對(duì)照、表兒茶素對(duì)照品、中藥顆粒樣品，結(jié)果見圖3。 在此色譜條件下，表兒茶素能夠較好的分離，且峰形良好，保留時(shí)間適中。陰性對(duì)照液在表 兒茶素保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，無干擾。實(shí)施例2取實(shí)施例1的中藥顆粒，鑒別方法包括如下步驟(1)雞血藤的鑒別取樣品15g，加水50ml使溶解，加乙醚IOOml超聲處理(功率 320W，頻率40kHz)20min，分取乙醚層，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml溶解，作為供試品溶液。另取 芒柄花素對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中 國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，取對(duì)照品溶液1 μ 1，供試品溶液16μ 1，分別點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-氯仿(20 12 3)為展開劑，展開，取出，晾 干，置紫外光燈254nm下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。(2)山楂的鑒別取本品15g，加甲醇20ml，超聲處理lOmin，濾過，濾液作為供試品 溶液。另取山楂對(duì)照藥材0. lg，加甲醇10ml，超聲處理(功率320W，頻率40kHz)20min，濾 過，濾液作為對(duì)照藥材溶液。另取枸櫞酸對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對(duì) 照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，取對(duì)照藥材溶液及 對(duì)照品溶液1 μ 1，供試品溶液4μ 1，分別點(diǎn)于同一塊聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲醇-甲 酸(10 4 1)為展開劑，展開，取出，吹干，噴以0.1%溴甲酚綠乙醇液。供試品色譜中， 在與對(duì)照藥材及對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定方法包括如下步驟照高效液相色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲 醇-O.Olmol/L檸檬酸(28 72)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為280nm ；柱溫35°C。理論板數(shù)按表 兒茶素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對(duì)照品溶液的制備精密稱取表兒茶素對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml含0. Img的 溶液，即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0. 5ml、lml至50ml量瓶中，另精密量取對(duì) 照品溶液0. 5ml、1ml、2ml、3ml至IOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取5 μ 1 注入液相色譜儀測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定法取重量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入 50%甲醇100ml，搖勻，超聲處理(功率320W，頻率40kHz)40min，濾過，濾液濃縮至約2ml， 拌入3g的聚酰胺(過100 200目篩)，拌勻，加到聚酰胺干柱(100 200目，4g，內(nèi)徑2cm) 上，依次用水100ml、20%甲醇100ml、70%甲醇適量洗脫，棄去前200ml洗脫液后，用IOOml 量瓶收集至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5μ 1注入液相色譜儀測(cè)定峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀 出供試品溶液中表兒茶素的含量，計(jì)算，即得。本品每g含表兒茶素(C15H14O6)計(jì)為0. 90mg。實(shí)施例3取實(shí)施例1中的藥物組合物，鑒別方法包括如下步驟(1)雞血藤的鑒別取樣品8g，加水50ml使溶解，加乙醚IOOml超聲處理(功率 320W，頻率40kHz)40min，分取乙醚層，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml溶解，作為供試品溶液。另取 芒柄花素對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中 國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，取對(duì)照品溶液3μ 1，供試品溶液25μ 1，分別點(diǎn)于同 一塊硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-氯仿(20 12 3)為展開劑，展開，取出，晾 干，置紫外光燈254nm下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。(2)山楂的鑒別取本品8g，加甲醇20ml，超聲處理20min，濾過，濾液作為供試品 溶液。另取山楂對(duì)照藥材0. lg，加甲醇10ml，超聲處理(功率320W，頻率40kHz) 15min，濾 過，濾液作為對(duì)照藥材溶液。另取枸櫞酸對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對(duì) 照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，取對(duì)照藥材溶液及對(duì) 照品溶液3 μ 1，供試品溶液10 μ 1，分別點(diǎn)于同一塊聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10 4 1)為展開劑，展開，展距約6cm，取出，吹干，噴以0.1%溴甲酚綠乙醇液。供 試品色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定方法包括如下步驟照高效液相色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲 醇-O.Olmol/L檸檬酸(35 65)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為280nm ；柱溫25°C。理論板數(shù)按表 兒茶素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對(duì)照品溶液的制備精密稱取表兒茶素對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml含0. Img的 溶液，即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0. 5ml、lml至50ml量瓶中，另精密量取對(duì) 照品溶液0. 5ml、1ml、2ml、3ml至IOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取5 μ 1 注入液相色譜儀測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定法取重量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加 入50%甲醇40ml，搖勻，超聲處理(功率320W，頻率40kHz) 30min,濾過，濾液濃縮至約2ml， 拌入1.5g的聚酰胺(過100 200目篩)，拌勻，加到聚酰胺干柱(100 200目，6g，內(nèi)徑 2cm)上，依次用水100ml、20%甲醇100ml、70%甲醇適量洗脫，棄去前200ml洗脫液后，用 IOOml量瓶收集至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5μ 1注入液相色譜儀測(cè)定峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲 線上讀出供試品溶液中表兒茶素的含量，計(jì)算，即得。本品每g含表兒茶素(C15H14O6)計(jì)為0. 92mg。實(shí)施例4本發(fā)明含量測(cè)定方法的精密度試驗(yàn)取低中高三種濃度的對(duì)照品溶液各3份，按實(shí)施例1中色譜條件測(cè)定，記錄峰面 積，結(jié)果見表1。表1精密度考察結(jié)果
權(quán)利要求
一種由山楂、炒麥芽、雞血藤和通草制成的治療乳腺增生的中藥顆粒質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括鑒別和含量測(cè)定兩部分，其中鑒別包括采用薄層色譜法，分別用芒柄花素對(duì)照品、山楂對(duì)照藥材、枸櫞酸對(duì)照品進(jìn)行的鑒別；含量測(cè)定以含表兒茶素確定，以表兒茶素計(jì)，不得少于0.70mg/g；其中，所述治療乳腺增生的中藥顆粒采用如下方法制備取山楂6份、炒麥芽10份、雞血藤10份、通草3.3份，然后加8～10倍量的水煎煮三次，每次0.5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至70℃的相對(duì)密度為1.10～1.12的稠膏，加入3份糊精，流化床制粒，干燥，整粒，制成顆粒，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述鑒別包括如下鑒別中的一種或多種1)雞血藤的鑒別取所述中藥顆粒8-15g，加水50ml使溶解，加乙醚IOOml超聲處理 20-40min,分取乙醚層，蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml溶解，作為供試品溶液；另取芒柄花素對(duì)照 品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，取對(duì)照品溶液 1-3μ1，供試品溶液15-25μ1，分別點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，以比例為20 12 3的 環(huán)已烷-乙酸乙酯_氯仿為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視；供試品色 譜中在與對(duì)照品相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)時(shí)，說明所述中藥顆粒含有雞血藤；2)山楂的鑒別取所述中藥顆粒8-15g，加甲醇20ml，超聲處理10-20min，濾過，濾液 作為供試品溶液；另取山楂對(duì)照藥材0. lg，加甲醇10ml，超聲處理15-20min，濾過，濾液作 為對(duì)照藥材溶液；另取枸櫞酸對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液； 照薄層色譜法試驗(yàn)，取對(duì)照藥材溶液及對(duì)照品溶液1_3μ 1，供試品溶液4-10μ 1，分別點(diǎn)于 同一塊聚酰胺薄膜上，以比例為10 4 1的乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，展開，取 出，吹干，噴以0. 溴甲酚綠乙醇液；供試品色譜中在與對(duì)照藥材及對(duì)照品溶液色譜相應(yīng) 位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)時(shí)，說明所述中藥顆粒含有山楂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述含量測(cè)定方法包括如下步驟1)對(duì)照品溶液的制備精密稱取表兒茶素對(duì)照品適量，加甲醇制成每Iml含0. Img的溶液，即得；2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0. 5ml、Iml至50ml量瓶中，另精密量取對(duì)照品溶液0. 5ml、lml、 2ml、3ml至IOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取5 μ 1注入液相色譜儀 測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中色譜條件與系統(tǒng)適用 性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0. 01mol/L檸檬酸為流動(dòng)相，比例為 28-35 65-72;檢測(cè)波長為280nm;柱溫25-35°C ；理論板數(shù)按表兒茶素峰計(jì)算應(yīng)不低于 2000 ；3)測(cè)定法取所述中藥顆粒，研細(xì)，取約0. 5-lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入50 %甲醇 40-100ml，搖勻，超聲處理30-40min，濾過，濾液濃縮至約2ml，拌入2_3g的聚酰胺，拌勻，加 到聚酰胺干柱上，依次用水100ml、20%甲醇100ml、70%甲醇適量洗脫，棄去前200ml洗脫 液后，用IOOml量瓶收集至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5μ 1注入液相色譜儀測(cè)定峰面積，從 標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中表兒茶素的含量，計(jì)算，即得。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種由山楂、炒麥芽、雞血藤和通草制成的治療乳腺增生的中藥顆粒質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法包括鑒別和含量測(cè)定兩部分，其中鑒別包括采用薄層色譜法，分別用芒柄花素對(duì)照品、山楂對(duì)照藥材、枸櫞酸對(duì)照品進(jìn)行的鑒別；含量測(cè)定以含表兒茶素確定，以表兒茶素計(jì)，不得少于0.70mg/g。本發(fā)明選擇以芒柄花素對(duì)照品、山楂對(duì)照藥材、枸櫞酸對(duì)照品來進(jìn)行對(duì)照，直接比較斑點(diǎn)的大小和位置，操作簡便、直觀；含量測(cè)定以含表兒茶素確定，質(zhì)量更加有保障，藥效更為確切。
文檔編號(hào)A61K36/8998GK101954021SQ201010294950
公開日2011年1月26日 申請(qǐng)日期2010年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月26日
發(fā)明者劉松青, 劉耀, 夏培元, 林彩, 王章陽, 趙映蘭, 陳勇川 申請(qǐng)人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院