專利名稱：具有促進(jìn)胰島素分泌及抑制高級糖基化終產(chǎn)物生成作用的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有促進(jìn)胰島素分泌及抑制高級糖基化終產(chǎn)物生成作用的組合 物。
背景技術(shù)：
糖尿病是由于體內(nèi)胰島素缺乏或拮抗胰島素的激素增加，或胰島素在靶細(xì)胞內(nèi)不 能發(fā)揮正常生理作用而引起的葡萄糖、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)代謝紊亂的一種綜合病癥。糖尿病及 其并發(fā)癥如白內(nèi)障、腎病及心血管疾病嚴(yán)重影響著人類健康。傳統(tǒng)的口服降糖藥療效有限 并且單一，研制新的天然來源的多作用靶點(diǎn)的糖尿病及其并發(fā)癥的組合藥物已成為熱點(diǎn)， 本發(fā)明針對這種需求，研制了既具有胰島素促泌作用又具有高級糖基化終產(chǎn)物生成抑制作 用的源于肉桂、金蕎麥原花青素提取物及源于龍血竭二氫查耳酮的組合物的制備方法。近年大量研究表明，持續(xù)高血糖引起體內(nèi)多種蛋白質(zhì)非酶糖基化及由此形成的晚 期糖基化終末產(chǎn)物AGEs (Advanced Glycation Endproducts)在糖尿病慢性并發(fā)癥如糖尿 病腎病、糖尿病眼病、糖尿病心血管病的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。抑制AGEs的產(chǎn)生是減緩 與控制該類疾病發(fā)生與發(fā)展的有效手段之一，因此AGEs抑制劑的研究與開發(fā)已引起人們 極大的關(guān)注。目前最有前途的藥物是氨基胍(Amin0gUanidine，AG)。氨基胍是一種親核胼 類化合物，它主要與糖基化反應(yīng)中間產(chǎn)物3-脫氧葡萄糖醛酮(3-deoxyglucosone)反應(yīng)，從 而抑制AGEs的形成。但藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)氨基胍會降低胰島的血供，高濃度時會抑制胰腺B細(xì) 胞分泌胰島素，從而限制其在臨床應(yīng)用，在AGEs抑制劑篩選實(shí)驗(yàn)中只將氨基胍作為陽性對 照藥物。因此尋找理想的既具有胰島素促泌又能抑制非酶糖基化生成的單一藥物或組合物 是一個重要的研究方向。高級糖基化終末產(chǎn)物AGEs，是還原糖與蛋白質(zhì)發(fā)生非酶促反應(yīng)形成的一類不可逆 聚合物。糖基化反應(yīng)分為兩個階段在糖基化反應(yīng)的早期，在無酶的條件下，開鏈的葡萄糖 分子游離醛基或酮基和蛋白質(zhì)氨基酸殘基側(cè)鏈氨基或氨基末端的α-氨基通過親核結(jié) 合，迅速生成一個可逆的不穩(wěn)定的中間產(chǎn)物醛亞胺(aldimine)即schiff堿，在體內(nèi)很快達(dá) 到平衡，隨后，schiff堿基可緩慢發(fā)生分子結(jié)構(gòu)重排，形成較穩(wěn)定的但反應(yīng)可逆性大大減低 的糖-蛋白質(zhì)酮胺結(jié)合物，經(jīng)重新排列，可形成性質(zhì)更為穩(wěn)定的ι-氨基-ι-去氧-d-酮糖， 即amadori產(chǎn)物；糖基化反應(yīng)的晚期，amadori產(chǎn)物經(jīng)過多步脫水和分子重排產(chǎn)生的多種 高度反應(yīng)性羰基化合物，進(jìn)一步與其他游離氨基反應(yīng)，最后形成不可逆的糖基化最終產(chǎn)物 AGEs0 AGEs的理化生化化特性是呈棕褐色；存在廣泛性、具有熒光性，交聯(lián)性與不可逆性、 結(jié)構(gòu)的異質(zhì)性、對酶穩(wěn)定、不易被降解，卻能與許多細(xì)胞膜特異性受體結(jié)合發(fā)揮有害于健康 的生物學(xué)效應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一在于提供一種具有促進(jìn)胰島素分泌及抑制高級糖基化終產(chǎn)物生成作用的組合物。本發(fā)明的目的之二在于提供該組合物的制備方法。血竭(Dragon’ s Blood)是一種天然產(chǎn)物，也是傳統(tǒng)的中藥品種之一，有棕櫚科麒 麟血竭禾口百合科龍血豐對屬[Dracaena cochinchinensis (Lour.) S. C. Chen]龍血竭。動物血 清藥化學(xué)及藥代動力學(xué)的基礎(chǔ)研究證明龍血竭具有顯著的降血糖作用，龍血竭中4個原型 成分二氫查耳酮，具有顯著的胰島素促泌作用。將其作為先導(dǎo)化合物的母體結(jié)構(gòu)合成了數(shù) 十種二氫查耳酮衍生物，篩選出促胰島素分泌更強(qiáng)的前五種化合物，其中化合物4'-甲氧 基-2'，3，4-三羥基二氫查耳酮和化合物2，4-二甲氧基-2' ,5' - 二羥基二氫查耳酮同 時還具有高于氨基胍的AGEs抑制作用。肉桂為樟科樟屬常綠喬木肉桂的干燥樹皮，是一種藥食兩用植物資源。當(dāng)前肉桂 的實(shí)際應(yīng)用以香辛料和中藥配方為主，對于肉桂用作AGEs生成抑制劑及其制備方法的研 究尚未見報道。野生金蕎麥(Fagopyrum dibotrys)為蓼科蕎麥屬多年生草本植物，是一種營養(yǎng)豐 富并具有重要藥用價值的資源植物?，F(xiàn)代研究證實(shí)金蕎麥根莖主要含的有效成分是一類原 花青素的混合物。金蕎麥原花青素用作AGEs生成抑制劑及其制備方法的研究尚未見報道。研究發(fā)現(xiàn)在天然產(chǎn)物中，龍血竭、肉桂與金蕎麥具有胰島素促泌作用及AGEs生 成抑制作用。而在肉桂、金蕎麥的各種提取物中，經(jīng)篩選發(fā)現(xiàn)肉桂、金蕎麥的原花青素具有 比氨基胍更強(qiáng)的AGEs抑制作用，將源于血竭的二氫查耳酮衍生物化合物4'甲氧基-2'， 3，4-三羥基二氫查耳酮和化合物2，- 二甲氧基-2' ,5' -二羥基二氫查耳酮兩種化合物 及肉桂與金蕎麥兩種提取物按一定比例組合相配，即得到一系列既具有胰島素促泌作用又 具有高級糖基化終產(chǎn)物AGEs生成抑制作用的組合物。根據(jù)上述理論，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種具有促進(jìn)胰島素分泌及抑制高級糖基化終產(chǎn)物生成作用的組合物，其特征在 于該組合物的組成及質(zhì)量百分含量為原花青素提取物5 95%，二氫查耳酮5 95%;所述的原花青素提取物的主要成分為原花青素，其質(zhì)量百分含量為提取物的 50% 70%。上述的原花青素提取物是從肉桂或金蕎麥中提取出來的。上述的從肉桂中提取的原花青素的具體方法為將中藥肉桂粉碎后，過40 60目 篩，得到肉桂粗粉料；將該肉桂粗粉料用石油醚索氏抽提，揮干溶劑；將經(jīng)索氏抽提后的肉 桂粉，按肉桂粉蒸餾水=1 10 3 10質(zhì)量比混合，50 60°C攪拌浸提30 120分 鐘，過濾除渣，再加入2 5倍體積乙醇，冰水浴攪拌30 120分鐘，過濾去除沉淀，回收乙 醇，得提取液；將該提取液進(jìn)行柱層析分離提純，減壓濃縮，真空干燥，得原花青素提取物， 其中原花青素的質(zhì)量百分含量為65 75%。上述的柱層析分離提純方法為采用大孔樹脂柱層析，先用3 5倍柱體積蒸餾水 沖洗，然后用30 90%乙醇洗脫，收集洗脫液。上述的大孔樹脂柱為HP20、D101、LSA21或ADS17。從金蕎麥中提取的原花青素的制備方法，請參見中國專 《金蕎麥高聚原花青素的提取及其催化降解制備低聚原花青素的方法》，其專利申請?zhí)?0090050368.8中的方法 進(jìn)行，現(xiàn)將方法敘述如下a)將金蕎麥進(jìn)行粉碎至粒徑為1 3cm，得到金蕎麥粗品；b)上述金蕎麥粗品用體積百分比濃度為40% 90%乙醇水溶液浸提，溫度為 50 70°C，時間為1 2天，得浸提液；c)將上述浸提液揮去乙醇，加水至揮醇前的一半體積，攪拌后離心10 20min，轉(zhuǎn) 速為3000 5000rpm，棄沉淀，將上清液用有機(jī)溶劑乙酸乙酯等體積萃取，得水相萃余液；d)將水相萃余液上LSA-21大孔樹脂柱，首先用2 5倍柱體積蒸餾水洗滌，再用 2 4個柱體積的體積百分比濃度為30% 70%的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液；e)將收集的洗脫液減壓濃縮、干燥后得到金蕎麥高聚原花青素提取物。其中原花 青素的質(zhì)量百分含量為55 70% ；4'-甲氧基-2'，3，4-三羥基二氫查耳酮和2，4-二甲氧基-2' ,5' - 二羥基 二氫查耳酮的合成工藝，請參考中國專利《4'-羥基-2，4-二甲氧基二氫查耳酮的制備方 法》，(專利號:ZL200810034743. 5)。目前現(xiàn)有的口服降糖藥一般只有單靶點(diǎn)藥理作用，例如胰島素促泌作用的格列齊 特，抑制糖苷酶作用的拜糖平、胰島素增敏作用的二甲雙胍以及抑制高級糖基化終產(chǎn)物生 成作用的氨基胍等，療效單一，缺乏既能降血糖又能治療糖尿病并發(fā)癥的多作用靶點(diǎn)的組 合藥物。本發(fā)明針對這種需求，研制了既具有促胰島素分泌作用又具有抑制高級糖基化終 產(chǎn)物生成作用的組合物的制備方法。源于肉桂與金蕎麥的原花青素具有比氨基胍更強(qiáng)的 AGEs抑制作用，源于血竭的二氫查耳酮衍生物中的化合物4'-甲氧基-2'，3，4_三羥基 二氫查耳酮和2，4-二甲氧基-2' ,5' _ 二羥基二氫查耳酮除了具有強(qiáng)于格列齊特的胰島 素促泌作用外，還具有AGEs抑制作用。組合物可為今后復(fù)合藥的誕生奠定基礎(chǔ)，將有利于 糖尿病患者的血糖控制又有利于糖尿病并發(fā)癥的預(yù)防和治療。本發(fā)明的組合物的優(yōu)點(diǎn)在于 多功能協(xié)同效應(yīng)，明顯優(yōu)于各組分單獨(dú)使用。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 10 組合物中各種組分的比例列于表1表1組合物中各種組分的比例
權(quán)利要求
一種具有促進(jìn)胰島素分泌及抑制高級糖基化終產(chǎn)物生成作用的組合物，其特征在于該組合物的組成及質(zhì)量百分含量為原花青素提取物5～95％，二氫查耳酮5～95％；所述的原花青素提取物的主要成分為原花青素，其質(zhì)量百分含量為提取物的50％～70％；所述的二氫查耳酮為4′ 甲氧基～2′，3，4 三羥基二氫查耳酮和2，4 二甲氧基 2′，5′ 二羥基二氫查耳酮中的一種或兩種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有促進(jìn)胰島素分泌及抑制高級糖基化終產(chǎn)物生成作用的 組合物，其特征在于所述的原花青素提取物是從肉桂或金蕎麥中提取出來的。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有促進(jìn)胰島素分泌及抑制高級糖基化終產(chǎn)物生成作用的 組合物，其特征在于從肉桂中提取的原花青素的具體方法為將中藥肉桂粉碎后，過40 60目篩，得到肉桂粗粉料；將該肉桂粗粉料用石油醚索氏抽提，揮干溶劑；將經(jīng)索氏抽提后 的肉桂粉，按肉桂粉蒸餾水=1 10 3 10質(zhì)量比混合，50 60°C攪拌浸提30 120分鐘，過濾除渣，再加入2 5倍體積乙醇，冰水浴攪拌30 120分鐘，過濾去除沉淀， 回收乙醇，得提取液；將該提取液進(jìn)行柱層析分離提純，減壓濃縮，真空干燥，得原花青素提 取物，其中原花青素的質(zhì)量百分含量為65 75%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有促進(jìn)胰島素分泌及抑制高級糖基化終產(chǎn)物生成作用的 組合物，其特征在于所述的柱層析分離提純方法為采用大孔樹脂柱層析，先用3 5倍柱 體積蒸餾水沖洗，然后用30 90%乙醇洗脫，收集洗脫液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有促進(jìn)胰島素分泌及抑制高級糖基化終產(chǎn)物生成作用的 組合物，其特征在于所述的大孔樹脂柱為HP20、D101、LSA21或ADS17。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有促進(jìn)胰島素分泌及抑制高級糖基化終產(chǎn)物生成作用的組合物。該組合物的組成及質(zhì)量百分含量為原花青素提取物5～95％，二氫查耳酮5～95％；所述的原花青素提取物的主要成分為原花青素，其質(zhì)量百分含量為提取物的50％～70％。組合物可為今后復(fù)合藥的誕生奠定基礎(chǔ)，將有利于糖尿病患者的血糖控制又有利于糖尿病并發(fā)癥的預(yù)防和治療。本發(fā)明的組合物的優(yōu)點(diǎn)在于多功能協(xié)同效應(yīng)，明顯優(yōu)于各組分單獨(dú)使用。
文檔編號A61K31/353GK101972245SQ20101029508
公開日2011年2月16日 申請日期2010年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月28日
發(fā)明者呂敬慈, 湯燕金, 雍克嵐, 黎超 申請人:上海大學(xué)