專利名稱：一種含有天蠶素的寵物用滴眼液及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于獸用藥物領域，尤其涉及一種含有天蠶素的寵物用滴眼液及其制備方法，用于治愈寵物眼部常見致病菌引起的細菌性疾病的滴眼液及其制備方法。
背景技術：
隨著人類生活水平的提高，寵物已經(jīng)成為家庭里的一員。寵物在給人類帶來樂趣的同時，也嚴重威脅著人類的健康。寵物的生活習慣很容易接觸大量的致病細菌，并且他們特有的生活方式很容易把致病細菌帶入眼睛，造成感染。人類與其密切接觸，很容易造成接觸傳染。目前，寵物眼部疾病一般使用人類的滴眼液，盲目性較大，并且效果不明顯，長此以往很容易產(chǎn)生耐藥性菌株，嚴重威脅人類的健康。因此急需開發(fā)一種對寵物眼睛安全，可作為預防和治療藥物使用，長期使用不會產(chǎn)生耐藥性，并可以提高寵物本身免疫力的寵專用滴眼液。天蠶素抗菌肽是第一個被發(fā)現(xiàn)的動物抗菌肽，1980年，由Boman等從天蠶蛹中分離得到。該類多肽抗生素一般含有37 39個氨基酸殘基，不含半胱氨酸，其N端區(qū)域具有強堿性，可形成近乎完美的雙親螺旋結構，而在C端區(qū)域可形成疏水螺旋，兩者之間有甘氨酸和脯氨酸形成的鉸鏈區(qū)，多數(shù)多肽的C端被酰胺化，酰胺化對其抗菌活性具有重要作用。 天蠶素抗菌肽具有下列作用特點(1)抗菌活性高，抗菌譜廣；( 不僅對細菌有很強的殺滅作用，對病毒、寄生蟲、真菌、癌細胞也有抵抗作用；(3)不產(chǎn)生抗藥性，無殘留。抑菌試驗表明抗菌肽CAD對畜禽主要致病菌沙門氏桿菌、大腸桿菌、糞腸球菌、糞鏈球菌、金黃色葡糖球菌等12種病菌具有很強的殺傷作用，但是對乳酸桿菌、雙歧桿菌等有益菌沒有傷害。水溶性殼聚糖作為天然多糖甲殼素的脫乙?；a(chǎn)物，具有良好的生物相容性、柔軟性、成膜性，無毒，還有一定的消炎、止血、抗菌、促進創(chuàng)面再生、修復和愈合等作用。為了增強天蠶素滴眼液在眼部的抗菌作用，克服其易流失、需頻繁給藥的缺陷，同時促進眼部創(chuàng)傷的愈合，根據(jù)臨床需要，以水溶性殼聚糖為增稠劑及增效劑。冰片又名龍腦，古稱龍腦香，為龍腦香科常綠喬木龍腦香樹脂的加工結晶品，為常用中藥之一。天然冰片有龍腦香和艾腦之分，后者是菊科植物艾納香葉提取的結晶，龍腦香是冰片中的正品，主要成分是龍腦。據(jù)研究記載冰片對金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、草綠色鏈球菌、肺炎鏈球菌和大腸桿菌等，在試管內(nèi)均有明顯抑菌作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種治愈寵物眼部常見致病菌引起的細菌性疾病的滴眼液及其制備方法，用于眼部滴注給藥，防治寵物眼部疾病，并且抗菌譜廣泛，不易產(chǎn)生耐藥菌株。本發(fā)明一方面涉及提供滴眼液的組方，其中主藥成分為天蠶素抗菌肽、水溶性殼聚糖和冰片；藥用輔料包括PH調(diào)節(jié)劑、等滲劑、抑菌劑、助溶劑、穩(wěn)定劑。所述的主藥天蠶素抗菌肽用量為0. 21% 0. 94% (W/V)。
3
所述的主藥水溶性殼聚糖用量為0. 65% 0. 95% (W/V)。所述的主藥冰片用量為0.0025% 0.0300% (W/V)。所述藥用輔料中的pH調(diào)節(jié)劑選自10% 20%氫氧化鈉溶液或10% 20%鹽酸溶液。所述藥用輔料中的等滲劑包括但不限于氯化鈉、氯化鉀、硼酸、硼砂、硫酸鈉、 硫酸鉀、硝酸鈉、硝酸鉀、醋酸鈉、甘露醇、甘油、丙二醇、葡萄糖中的一種或組合，用量為 0. 01%~ 5. 00% (W/V)。所述藥用輔料中的抑菌劑包括但不限于尼泊金酯類、硝酸苯汞、氯化苯甲烴銨、苯氧乙醇、山梨酸、三氯叔丁醇中的一種或組合，用量為0. 001% 0. 500% (W/V)。所述藥用輔料中的穩(wěn)定劑包括但不限于亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硝酸鈉、硫代硫酸鈉、抗壞血酸、硫脲、抗壞血酸硬脂酸酯、二丁基甲酚、半胱氨酸、生育酚乙酸酯、二氯異氰、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)、乙二胺四乙酸鈣鈉、二硫基丙醇、甘油、甘露醇、丁基化羥基苯甲醚中的一種或組合，用量為0. 001% 0. 500% (W/V)。所述藥用輔料中的助溶劑包括但不限于乙醇、吐溫-80、丙二醇、乙二醇、異丙醇、 甲醇、松油、D-萜烯中的一種或組合，用量為0. 001 0. 003% (W/V)。本發(fā)明另一方面涉及提供該滴眼液的制備方法它包括以下步驟1)在無菌條件下，稱取處方量天蠶素抗菌肽加入10%處方量注射用水溶解；2)取處方量水溶性殼聚糖加入約30%處方量注射用水，滴加適量10% 20%鹽酸溶液，使其自然膠溶，完全溶解；3)取處方量冰片加入處方量助溶劑，使其充分溶解；4)取處方量抑菌劑和等滲劑，加入30%處方量注射用水，加熱攪拌使其溶解；5)將上述液混合攪勻，滴加適量氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值為6. 0 7. 0 ；6)加入注射用水至處方量；7)將稀釋液依次經(jīng)過0. 2 μ m的聚四氟乙烯濾棒及0. 2 μ m的濾膜進行過濾，過濾和時控制濾棒的壓力為0. 025 0. 035Mpa之間開始過濾。本發(fā)明的有益效果是1.抗菌藥物為動物專用抗菌肽，兼具廣譜抗菌活性的同時，對病毒、寄生蟲、真菌、 癌細胞也有抵抗作用，能提高免疫力、加速傷口愈合；2.水溶性殼聚糖、冰片具有消炎、止血、抗菌、促進創(chuàng)面再生、修復和愈合等作用。 而且利用了殼聚糖溶于水后使溶液粘度增加，克服普通滴眼液易流失、需頻繁給藥的缺陷；3.本發(fā)明藥物選用生物材料，對眼部刺激性小。4.原料價格低廉，易于獲取，利于擴大化生產(chǎn)。
具體實施例方式實施例1 滴眼液組方為組分用量天蠶素抗菌肽6. 4g
水溶性殼聚糖8. Ig
冰片0. 03g
氯化鈉8. Og
尼泊金甲酯0. 23g
尼泊金乙酯0. Ilg
亞硫酸氫鈉l.Og
乙醇2mL
18%氫氧化鈉轉(zhuǎn)I液適量
12%鹽酸溶液適量
注射用水至IOOOmL
該滴眼液的配制方法
(1)在無菌條件下，稱取6. 4g天蠶素抗菌肽加入IOOmL注射用水溶角軍；
(2)取8. Ig水名針生殼聚糖加入約300mL注射用水滴加適量12%鹽酸溶液，使其自
然膠溶，完全溶解；；(3)取0. 03g冰片加入約2mL乙醇，使其充分溶解；(4)取尼泊金甲酯0. 23g、尼泊金乙酯0. llg、亞硫酸氫鈉1. Og和氯化鈉8. 0g，加入300mL注射用水，加熱攪拌使其溶解；(5)將上述液混合攪勻，向其中滴加18%氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值為6. 0 7. 0 ；(6)加入注射用水至IOOOmL ；(7)將稀釋液依次經(jīng)過0. 2μπι的聚四氟乙烯濾棒及0. 2μπι的濾膜進行過濾，過濾和時控制濾棒的壓力為0. 025 0. 035Mpa之間開始過濾。實施例2
滴眼液組方為
組分用量
天蠶素抗菌肽9.4g
水溶性殼聚糖6.5g
冰片0.098g
氯化鈉4. 5g
氯化鉀3. 7g
硼酸1.9g
硼砂1.9g
尼泊金甲酯0. 15g
乙醇2mL
12%氫氧化鈉奔I液適量
15%鹽酸溶液適量
注射用水至IOOOmL
該滴眼液的配制方法
(1)在無菌條件下，稱取9. 4g天蠶素抗菌肽加入IOOmL注射用水溶解；
(2)取6. 5g水玄容性殼聚糖加入約300mL注射用水，滴加適量15%鹽酸溶液，使其自然膠溶，完全溶解；(3)取0. 098g冰片加入約2mL乙醇，使其充分溶解；(4)取尼泊金甲酯0. 15g、氯化鈉4. 5g和氯化鉀3. 7g，加入300mL注射用水，加熱攪拌使其溶解；(5)取硼酸1. 9g和硼砂1. 9g加入IOOmL注射用水，使其完全溶解；(6)將上述液混合攪勻，向其中滴加12%氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值為6. 0 7. 0 ；(7)加入注射用水至IOOOmL ；(8)將稀釋液依次經(jīng)過0. 2μπι的聚四氟乙烯濾棒及0. 2μπι的濾膜進行過濾，過濾和時控制濾棒的壓力為0. 0250. 035Mpa之間開始過濾。實施例3
滴眼液組方為
組分用量
天蠶素抗菌肽5. Ig
水溶性殼聚糖9. 2g
冰片0. 025g
硼酸21. Og
硝酸苯汞0. 02g
乙醇ImL14%氫氧化鈉溶液適量16%稀鹽酸適量注射用水至IOOOmL該滴眼液的配制方法(1)在無菌條件下，稱取5. Ig天蠶素抗菌肽加IOOmL注射用水溶解；(2)取9. 2g水溶性殼聚糖加入約300mL注射用水，滴加適量16%鹽酸溶液，使其自然膠溶，完全溶解；(3)取0. 025g冰片加入約ImL乙醇，使其充分溶解；(4)取硝酸苯汞0. 02g和硼酸21. 0g，加入300mL注射用水，加熱攪拌使其溶解；(5)將上述液混合攪勻，向其中滴加14%氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值為6. 0 7. 0 ；(6)加入注射用水至IOOOmL ；(7)將稀釋液依次經(jīng)過0. 2μπι的聚四氟乙烯濾棒及0. 2μπι的濾膜進行過濾，過濾和時控制濾棒的壓力為0. 025 0. 035Mpa之間開始過濾。實施例4 滴眼液組方為組分用量天蠶素抗菌肽2. Ig水溶性殼聚糖9. 5g冰片0. OMg氯化鈉4. 5g硼酸1.9g
6
硼砂1.9g尼泊金甲酯0. 15g乙醇2mL12%氫氧化鈉溶液適量15%鹽酸溶液適量注射用水至IOOOmL該滴眼液的配制方法(1)在無菌條件下，稱取2. Ig天蠶素抗菌肽加入IOOmL注射用水溶解；(2)取9. 5g水溶性殼聚糖加入約300mL注射用水，滴加適量15%鹽酸溶液，使其自然膠溶，完全溶解；(3)取0. 054g冰片加入約2mL乙醇，使其充分溶解；(4)取尼泊金甲酯0. 15g和氯化鈉4.5g，加入300mL注射用水，加熱攪拌使其溶解；(5)取硼酸1. 9g和硼砂1. 9g加入IOOmL注射用水，使其完全溶解；(6)將上述液混合攪勻，向其中滴加12%氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值為6. 0 7. 0 ；(7)加入注射用水至IOOOmL ；(8)將稀釋液依次經(jīng)過0. 2μπι的聚四氟乙烯濾棒及0. 2μπι的濾膜進行過濾，過濾和時控制濾棒的壓力為0. 025 0. 035Mpa之間開始過濾。實施例5 本發(fā)明藥物的刺激性試驗1、試驗材料實驗動物日本大白兔10只，雌雄不限，體重1.8 2. Okg實驗前檢查兔眼，實驗前剔除患有眼疾動物。藥品本發(fā)明實施例一樣品。2、試驗方法及結果試驗方法將動物分為2組，即天蠶素滴眼液組及空白對照組，每組10只。天蠶素滴眼液組給予兔左右眼藥液，每日3 5次，每次1 2滴，連續(xù)7d，對照組給予無菌生理鹽水滴眼。觀察方法觀察并記錄動物有無煩躁不安、食欲不振、抓鼻現(xiàn)象；于末次給藥24h 后用裂隙燈檢查大白兔眼結膜、角膜、眼瞼，觀察有無充血、水腫等現(xiàn)象。結果2組試驗兔均未見眼結膜、角膜、眼瞼有充血、水腫等現(xiàn)象，表明天蠶素滴眼液多次給藥，對兔眼沒有或者幾乎沒有局部刺激性。實施例6 本發(fā)明藥物的攻毒試驗1、實驗材料試驗菌種金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌。實驗動物日本大白兔5只，雌雄不限，體重1. 8 2. Okg實驗前檢查兔眼，實驗前剔除患有眼疾動物。培養(yǎng)基LB培養(yǎng)基。藥品本發(fā)明實施例一樣品。2、試驗方法
于實驗前3d將上述細菌接種于瓊脂培養(yǎng)基上，37°C培養(yǎng)1 后，再取適量細菌接種于LB培養(yǎng)基內(nèi)，37 °C繼續(xù)培養(yǎng)Mh，實驗前用生理鹽水稀釋菌液到3X 109CFU/ml。向大白兔眼滴人金黃色葡萄球菌、肺炎球菌各3 X 109CFU/ml，細菌滴人量均為30 μ L/眼，連續(xù)滴 2滴。5d后取大白兔眼分泌物作細菌培養(yǎng)，并編號記錄，將細菌感染結果為陽性的大白兔隨機分為3組，每組感染細菌的兔眼數(shù)不少于10只眼，分別給予天蠶素滴眼液(試驗組)與鹽酸左氧氟沙星滴眼液(對照組)，每日3 5次，每次2滴，連續(xù)7d，停藥后繼續(xù)觀察5d， 空白組不給予任何藥液。試驗于給藥第5天、第7天、停藥后第3天取兔眼分泌物進行涂驗和細菌培養(yǎng)鑒定，由此計算細菌清除率，清除率=清除株/感染眼數(shù)。結果見表2。表2天蠶素滴眼液對兔角膜細菌感染的清除作用
權利要求
1.一種含有天蠶素抗菌肽的寵物用滴眼液，其特征是所述滴眼液包括天蠶素抗菌肽、水溶性殼聚糖、冰片、PH值調(diào)節(jié)劑、等滲劑、穩(wěn)定劑、注射用水。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種含有天蠶素的寵物用滴眼液，其特征是，所述滴眼液中各成分的百分含量分別為天蠶素抗菌肽0.21% 0.94% (W/V)水溶性殼聚糖0.65% 0.95% (W/V)冰片0.0025% 0. 0300% (W/V)等滲劑0.01% 5. 00% (W/V)抑菌劑0.001% 0. 500% (W/V)穩(wěn)定劑0.001% 0. 500% (W/V)助溶劑0.001 0. 003% (W/V)PH值調(diào)節(jié)劑適量注射用水補至 100% (V/V)。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的一種含有天蠶素抗菌肽的寵物用滴眼液，其特征是，pH 值調(diào)節(jié)劑選10% 20%氫氧化鈉溶液或10% 20%鹽酸溶液。
4.根據(jù)權利要求1或2所述的一種含有天蠶抗菌肽素的寵物用滴眼液，其特征是，等滲劑選自氯化鈉、氯化鉀、硫酸鈉、硫酸鉀、硝酸鈉、硝酸鉀、醋酸鈉、甘露醇、甘油、丙二醇、葡萄糖中的一種或組合。
5.根據(jù)權利要求1或2所述的一種含有天蠶素抗菌肽的寵物用滴眼液，其特征是，抑菌劑選自尼泊金酯類、硝酸苯汞、氯化苯甲烴銨、苯氧乙醇、山梨酸、三氯叔丁醇中的一種或組合。
6.根據(jù)權利要求1或2所述的一種含有天蠶素抗菌肽的寵物用滴眼液，其特征是，穩(wěn)定劑選自亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硝酸鈉、硫代硫酸鈉、抗壞血酸、硫脲、抗壞血酸硬脂酸酯、二丁基甲酚、半胱氨酸、生育酚乙酸酯、二氯異氰尿酸、乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸鈣鈉、二硫基丙醇、甘油、甘露醇、丁基化羥基苯甲醚中的一種或組合。
7.根據(jù)權利要求1或2所述的一種含有天蠶素抗菌肽的寵物用滴眼液，其特征是，助溶劑選自乙醇、吐溫-80、丙二醇、乙二醇、異丙醇、甲醇、松油、D-萜烯中的一種或組合。
8.一種含有天蠶素的寵物用滴眼液，其特征是，它包括以下步驟1)在無菌條件下，稱取處方量天蠶素抗菌肽加入10%處方量注射用水溶解；2)取處方量水溶性殼聚糖加入約30%處方量注射用水，滴加10 % 20 %鹽酸溶液，使其自然膠溶，完全溶解；3)取處方量冰片加入處方量助溶劑，使其充分溶解；4)取處方量抑菌劑和等滲劑，加入30%處方量注射用水，加熱攪拌使其溶解；5)將上述液混合攪勻，滴加10% 20%氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值為6.0 7. 0 ；6)加入注射用水至處方量；7)將稀釋液依次經(jīng)過0.2 μ m的聚四氟乙烯濾棒及0. 2 μ m的濾膜進行過濾，過濾時控制濾棒的壓力為0. 025 0. 035Mpa之間開始過濾。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新型寵物用滴眼液，所述滴眼液主要成分為天蠶素抗菌肽、水溶性殼聚糖和冰片，兼具廣譜抗菌活性的同時，對病毒、寄生蟲、真菌、癌細胞也有抵抗作用，能提高免疫力、加速傷口愈合，長期使用不產(chǎn)生抗藥性，無殘留。并且水溶性殼聚糖的粘性、成膜性、抑菌性和可吸收性均非常優(yōu)秀，可以克服普通滴眼液易流失、需頻繁給藥的缺陷。
文檔編號A61K38/17GK102441158SQ20101050741
公開日2012年5月9日 申請日期2010年10月15日 優(yōu)先權日2010年10月15日
發(fā)明者劉瑩, 昌莉麗, 程志瑛, 閆亮亮 申請人:天津瑞普生物技術股份有限公司