專利名稱：一種酒石酸泰樂菌素微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種酒石酸泰樂菌素微球的制備方法，屬于獸藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
近年來，隨著規(guī)?；?、集約化養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，不同地區(qū)、國家間頻繁的引種，使得豬 呼吸道疾病增多，已經(jīng)成為養(yǎng)豬業(yè)的一大難題。其中豬氣喘病、豬繁殖與呼吸障礙綜合癥、 豬圓環(huán)病毒2型、豬流感病毒等在國內(nèi)普遍存在，造成了養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)損失。人們對于治療 豬呼吸道疾病已進(jìn)行了很多的報道，提出了很多對該病的治療方案，但由于該病病因的復(fù) 雜性及該病的多發(fā)性，給治療帶來了困難，治療效果不佳，且預(yù)后多不良。目前臨床上常用 泰樂菌素進(jìn)行防治。泰樂菌素是一種大環(huán)內(nèi)醋類抗生素，對革蘭氏陽性菌、部分革蘭氏陰性菌具有很 高的殺滅作用。敏感菌有金黃葡萄球菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、化膿棒狀桿菌等，同時， 對支原體感染的疾病治療有特效，臨床常用劑型有口服劑型及常規(guī)注射劑型。但該藥常規(guī) 劑型消除半衰期較短，用藥頻繁，且在體內(nèi)分布廣泛。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種載藥量大、包封率高、消除半衰期較長的酒石酸泰樂菌 素微球的制備方法。為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種酒石酸泰樂菌素微球的制 備方法，每Ig酒石酸泰樂菌素按照如下步驟制成酒石酸泰樂菌素微球
1)取明膠0.l-2g，加入二次水制成5mL明膠溶液，在50°C溫水浴中溶脹，然后加入Ig 酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；
2)取液體石蠟和1.0-2. 0%的司盤-80按照4-6 1的體積比混合，得到油相；
3)將步驟1)得到的水相以1:5-7的體積比加入到步驟2)得到的油相中，并在500-800 r/min的轉(zhuǎn)速下攪拌均勻，冷卻至5°C以下，加入戊二醛交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)固化；
4)用異丙醇洗去多余的交聯(lián)劑，然后再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空干燥， 得到酒石酸泰樂菌素微球。所述戊二醛的加入量為l_5mL，固化時間為20_50分鐘。本發(fā)明的酒石酸泰樂菌素微球，采用明膠作載體材料，無不良反應(yīng)，無免疫原性， 具生物可降解性，應(yīng)用廣泛，可口服亦可注射。采用液體石蠟和司盤80為油相，能夠提高微 球的載藥量和包封率，而且有助于戊二醛的交聯(lián)固化，從而延長微球藥物的消除半衰期，在 動物體內(nèi)起到藥物緩釋的作用。另外，本發(fā)明的制備方法操作簡單，所采用的試劑平常無 奇，制備的成本較底，易于推廣應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本實(shí)施例的酒石酸泰樂菌素微球的制備方法，每Ig酒石酸泰樂菌素按照如下步驟制 成酒石酸泰樂菌素微球
1)取Ig明膠，加入二次水制成5mL明膠溶液，在50°C溫水浴中完全溶脹，然后加入Ig 酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；
2)取液體石蠟24mL和1.0-2. 0%的司盤-80 6mL將其混合，得到30mL的油相；
3)將步驟1)得到的水相加入到步驟2)得到的油相中，并在500r/min的轉(zhuǎn)速下攪拌 均勻，冷卻至5°C，加入2mL戊二醛交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)固化，固化時間為20分鐘；
4)用異丙醇洗去多余的交聯(lián)劑，然后再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空干燥， 得到酒石酸泰樂菌素微球。經(jīng)測定，該GMS粉末圓整度好，在水溶液中分散性好，平均載藥量為43. 75%，包封 率為 87. 52%。實(shí)施例2
本實(shí)施例的酒石酸泰樂菌素微球的制備方法，每Ig酒石酸泰樂菌素按照如下步驟制 成酒石酸泰樂菌素微球
1)取0.Sg明膠，加入二次水制成5mL明膠溶液，在50°C溫水浴中完全溶脹，然后加入 Ig酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；
2)取液體石蠟25mL和1.0-2. 0%的司盤-80 5mL將其混合，得到30mL的油相；
3)將步驟1)得到的水相加入到步驟2)得到的油相中，并在600r/min的轉(zhuǎn)速下攪拌 均勻，冷卻至4°C，加入3mL戊二醛交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)固化，固化時間為30分鐘；
4)用異丙醇洗去多余的交聯(lián)劑，然后再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空干燥， 得到酒石酸泰樂菌素微球。制得圓整度好的微球粉末，平均載藥量為45. 68%，包封率為89. 52%。實(shí)施例3
本實(shí)施例的酒石酸泰樂菌素微球的制備方法，每Ig酒石酸泰樂菌素按照如下步驟制 成酒石酸泰樂菌素微球
1)取1.5g明膠，加入二次水制成5mL明膠溶液，在50°C溫水浴中完全溶脹，然后加入 Ig酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；
2)取液體石蠟30mL和1.0-2. 0%的司盤-80 5mL將其混合，得到35mL的油相；
3)將步驟1)得到的水相加入到步驟2)得到的油相中，并在800r/min的轉(zhuǎn)速下攪拌 均勻，冷卻至3°C，加入4mL戊二醛交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)固化，固化時間為40分鐘；
4)用異丙醇洗去多余的交聯(lián)劑，然后再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空干燥， 得到酒石酸泰樂菌素微球。對該GMS微球粉末進(jìn)行測試，其圓整度良好，分散性好，平均載藥量為39. 68%，包 封率為86. 52%。實(shí)施例4
本實(shí)施例的酒石酸泰樂菌素微球的制備方法，每Ig酒石酸泰樂菌素按照如下步驟制 成酒石酸泰樂菌素微球
1)取2g明膠，加入二次水制成5mL明膠溶液，在50°C溫水浴中完全溶脹，然后加入Ig 酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；
42)取液體石蠟25mL和1.0-2. 0%的司盤-80 5mL將其混合，得到30mL的油相；
3)將步驟1)得到的水相加入到步驟2)得到的油相中，并在800r/min的轉(zhuǎn)速下攪拌 均勻，冷卻至2°C，加入5mL戊二醛交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)固化，固化時間為50分鐘；
4)用異丙醇洗去多余的交聯(lián)劑，然后再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空干燥， 得到酒石酸泰樂菌素微球。經(jīng)測定，該微球粉末，在水溶液中分散性好，圓整度好，平均載藥量為41. 02%，包封 率為 79. 03%。實(shí)施例5
本實(shí)施例的酒石酸泰樂菌素微球的制備方法，每Ig酒石酸泰樂菌素按照如下步驟制 成酒石酸泰樂菌素微球
1)取Ig明膠，加入二次水制成5mL明膠溶液，在50°C溫水浴中完全溶脹，然后加入Ig 酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；
2)取液體石蠟20mL和1.0-2. 0%的司盤-80 5mL將其混合，得到25mL的油相；
3)將步驟1)得到的水相加入到步驟2)得到的油相中，并在700r/min的轉(zhuǎn)速下攪拌 均勻，冷卻至1°C，加入3mL戊二醛交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)固化，固化時間為40分鐘；
4)用異丙醇洗去多余的交聯(lián)劑，然后再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空干燥， 得到酒石酸泰樂菌素微球。制得圓整度好的微球粉末，平均載藥量為39. 71%，包封率為62. 39%。實(shí)施例6
本實(shí)施例的酒石酸泰樂菌素微球的制備方法，每Ig酒石酸泰樂菌素按照如下步驟制 成酒石酸泰樂菌素微球
1)取0.Ig明膠，加入二次水制成5mL明膠溶液，在50°C溫水浴中完全溶脹，然后加入 Ig酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；
2)取液體石蠟25mL和1.0-2. 0%的司盤-80 5mL將其混合，得到30mL的油相；
3)將步驟1)得到的水相加入到步驟2)得到的油相中，并在700r/min的轉(zhuǎn)速下攪拌 均勻，冷卻至0°C，加入ImL戊二醛交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)固化，固化時間為20分鐘；
4)用異丙醇洗去多余的交聯(lián)劑，然后再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空干燥， 得到酒石酸泰樂菌素微球。經(jīng)測定，該GMS粉末圓整度好，在水溶液中分散性好，平均載藥量為42. 45%，包封 率為 85. 24%ο實(shí)驗(yàn)例酒石酸泰樂菌素明膠微球在兔體內(nèi)藥物動力學(xué)試驗(yàn) 1樣品的配制
1. 1藥品配制
取酒石酸泰樂菌素明膠微球，臨用前加入注射用生理鹽水，充分振搖，使微球均勻分 散，配制成濃度為0. 335mg/mL的TT-GMS (酒石酸泰樂菌素明膠微球)混懸液；另取酒石酸 泰樂菌素原料藥，臨用前加入注射用生理鹽水，充分振搖，配制成濃度為0. 335mg/mL的TT 溶液，無菌過濾，作為對照藥物。1.2泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制
精密稱取泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)品10mg，置于IOOmL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成0. lmg/mL的泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)儲備液，取ImL稀釋成0. 01mg/mL泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)儲備液，置冰箱
4°C保存。2試驗(yàn)動物的分組與給藥
兔預(yù)飼一周臨床檢查健康后引入試驗(yàn)，給藥前禁食12h，隨機(jī)分為A、B兩組，每組6只，A 組為酒石酸泰樂菌素注射劑對照組，B組為TT-GMS混懸劑試驗(yàn)組。A組分別以9mg/Kg · b. w.劑量(以TT計(jì))于耳外緣靜脈注射酒石酸泰樂菌素注射液。B組分別以9mg/Kg · b. w.劑量(以TT計(jì))于耳外緣靜脈注射TT-GMS注射混懸液。3血漿樣品采集及前處理
試驗(yàn)組和對照組的家兔分別于給藥前和給藥后的下列不同時間點(diǎn)于對側(cè)耳外緣靜脈 采血，0. 083h、0. 167h、0. 333h、0. 5h、lh、2h、4h、sh、12h、24h、36h、48h、72h，采取的血液放入 經(jīng)肝素處理過的小離心管中，3000r/min離心lOmin，取血漿0. 5mL，加入1. OmL甲醇渦旋振 動2min，充分混勻，12000r/min離心lOmin，取上清液1. OmL，50°C氮?dú)獯蹈?，殘留物用流?相100 μ L溶解后，再次12000r/min離心lOmin，取上清液用0. 45 μ m濾膜過濾，取200 μ L 進(jìn)樣，進(jìn)行HPLC分析。4反相高效液相色譜法的色譜條件
色譜柱Hypersil ODS C18 柱(250mmX 4. 6mm，5 μ m)
流動相:2mol/L高氯酸鈉(lmol/L鹽酸調(diào)PH值至2. 5 士 0. 1)乙睛(60:40，V/V) 流速1. OmL/min
檢測器紫外檢測器，檢測波長為290nm 柱溫室溫 進(jìn)樣量20yL 5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
取兔血0. 5mL,置于5mL帶塞離心管中，依次加入泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)儲備液，配制成濃度為 0. 05,0. 1,1. 0,5. 0、100μ g/mL系列樣品，然后將上述樣品按照3項(xiàng)“血漿樣品采集及前處 理”方法進(jìn)行離心、過濾等操作，取處理后樣品放入反相高效液相色譜儀中進(jìn)行血液色譜分 析。以泰樂菌素峰面積值為縱坐標(biāo)，藥物濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到線性回歸 方程y=3339. 4x+3092. 4，r=0. 9969，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線可以用于待測樣品的定量分析。6回收率和精密度測定
取兔血0. 5mL，加入泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)儲備液，配制0. 1、1. 0,5. O μ g/mL的低、中、高三個不 同濃度樣品，按照3項(xiàng)“血漿樣品采集及前處理”方法進(jìn)行離心、過濾等操作，再將處理后樣 品放入反相高效液相色譜儀中進(jìn)行血液色譜分析，測得的泰樂菌素的面積與相應(yīng)濃度未經(jīng) 處理的泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液直接進(jìn)樣所得的面積之比，作為提取回收率。結(jié)果表明，回收率大 于 90%ο取兔血0. 5mL，加入泰樂菌素標(biāo)準(zhǔn)儲備液，配制0. 1、1. 0、5. O μ g/mL的低、中、高三 個不同濃度，按上述方法于一日內(nèi)做5次測定，連續(xù)測定5日，測定方法的日內(nèi)與日間精密 度。結(jié)果表明日內(nèi)平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5. 03%，日間平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5. 32%，表明精密 度好。7數(shù)據(jù)處理
本試驗(yàn)測得的血漿的藥物濃度一時間數(shù)據(jù)采用MCPKP藥物動力學(xué)參數(shù)計(jì)算程序在計(jì)
6算機(jī)上進(jìn)行藥動學(xué)計(jì)算和統(tǒng)計(jì)處理，通過實(shí)測值與方程預(yù)測值之間的平方差之和(F)和相 關(guān)系數(shù)(r2)來判定，并計(jì)算出藥動學(xué)參數(shù)。
8試驗(yàn)結(jié)果
血漿的藥物濃度一時間數(shù)據(jù)采用MCPKP即藥物動力學(xué)參數(shù)計(jì)算程序在計(jì)算機(jī)上進(jìn)行 藥動學(xué)計(jì)算和統(tǒng)計(jì)處理，由程序自動擬合最佳模型，泰樂菌素的血漿一藥時數(shù)據(jù)符合二室 開放式模型，理論方程C1=Q. 8456e_4_489t +0. 5670e_°_1828t。計(jì)算的藥動學(xué)參數(shù)結(jié)果表明，靜注 酒石酸泰樂菌素(9mg/kg · b. w.)后，分布半衰期為0. 1558h，消除半衰期為3. 7915h，曲線 下面積為5. 3152m mg/L · h，體內(nèi)藥物濃度維持時間為22. 0910h。實(shí)施例1的泰樂菌素明 膠微球的血菜一藥時數(shù)據(jù)符合三室開放式模型，理論方程C1=L 4572e-3'9950t +0. 4621e_°_2629 t+0. 1526e_°_°4°7t。計(jì)算的藥動學(xué)參數(shù)結(jié)果表明，靜注TT-GMS混懸注射液(9g/Kg)后，分布半 衰期為2. 4307h,消除半衰期為15. 7201h,曲線下面積為19. 8090 mg/L -h,體內(nèi)藥物濃度維 持時間為96. 9400h。 9、采用上述相同的方法對實(shí)施例2-6進(jìn)行試驗(yàn)，最終得到的結(jié)果見表1。
權(quán)利要求
一種酒石酸泰樂菌素微球的制備方法，其特征在于每1g酒石酸泰樂菌素按照如下步驟制成酒石酸泰樂菌素微球1)取明膠0.1 2g，加入二次水制成5mL明膠溶液，在50℃溫水浴中溶脹，然后加入1g酒石酸泰樂菌素，攪拌均勻，得到水相；2)取液體石蠟和1.0 2.0%的司盤 80按照4 61的體積比混合，得到油相；3)將步驟1)得到的水相以15 7的體積比加入到步驟2)得到的油相中，并在500 800 r/min的轉(zhuǎn)速下攪拌均勻，冷卻至5℃以下，加入戊二醛交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)固化；4)用異丙醇洗去多余的交聯(lián)劑，然后再用石油醚洗去微球表面的液體石蠟，真空干燥，得到酒石酸泰樂菌素微球。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酒石酸泰樂菌素微球的制備方法，其特征在于所述戊二醛 的加入量為l_5mL，固化時間為20-50分鐘。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種酒石酸泰樂菌素微球的制備方法，采用明膠為載體，以液體石蠟和司盤80為油相，采用戊二醛為交聯(lián)劑制備酒石酸泰樂菌素微球。本發(fā)明的酒石酸泰樂菌素微球，采用明膠作載體材料，無不良反應(yīng)，無免疫原性，具生物可降解性，應(yīng)用廣泛，可口服亦可注射。采用液體石蠟和司盤80為油相，能夠提高微球的載藥量和包封率，而且有助于戊二醛的交聯(lián)固化，從而延長微球藥物的消除半衰期，在動物體內(nèi)起到藥物緩釋的作用。另外，本發(fā)明的制備方法操作簡單，所采用的試劑平常無奇，制備的成本較底，易于推廣應(yīng)用。
文檔編號A61K47/22GK101947207SQ20101050925
公開日2011年1月19日 申請日期2010年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月15日
發(fā)明者吳紅云, 李建正, 班曼曼 申請人:鄭州后羿制藥有限公司