專利名稱：白藜蘆醇在制備防治輻射誘導(dǎo)色素脫失性皮膚病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥材應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，涉及白藜蘆醇在防治輻射誘導(dǎo)色素脫失性皮膚 病藥物中的應(yīng)用，更具體的說是白藜蘆醇在防治輻射誘導(dǎo)小鼠毛發(fā)脫色的發(fā)生發(fā)展中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
白藜蘆醇(resveratrol，RES)是一種生物活性很強(qiáng)的天然多酚類物質(zhì)，是腫瘤的 化學(xué)預(yù)防劑，也是對(duì)降低血小板聚集，預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化、心腦血管疾病的化學(xué)預(yù)防 劑。白藜蘆醇廣泛存在于種子植物中，在傳統(tǒng)中藥藜蘆和虎杖中含量豐富，其化學(xué)名為3， 4, ‘ 5-三羥基-反-二苯乙烯(3，4，‘ 5-trihydroxysitlbene)，具有順式及反式兩種結(jié) 構(gòu)，反式具有生物學(xué)活性。已有藥理研究表明，它具有抗腫瘤、治療心血管疾病、抗突變、抗 氧化、抗菌抗炎、保肝、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及雌激素調(diào)節(jié)等生物藥理活性。其中的抗炎、抗氧化、 調(diào)節(jié)血脂、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞周期等作用，引起了人們廣泛的關(guān)注。近期有研究 發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇可以降低阿司匹林致小鼠損傷模型組小鼠血清中MDA含量，并使SOD含量升 高，進(jìn)一步肯定了其對(duì)自由基引起的過氧化損傷的防護(hù)作用。但關(guān)于白藜蘆醇在制備治療 輻射誘導(dǎo)色素脫失性皮膚病(特別是白癜風(fēng))藥物中的應(yīng)用未見文獻(xiàn)報(bào)道。輻射損傷有射線的直接損傷，也有通過電離產(chǎn)生大量自由基的間接作用。在6Gy 照射劑量下，IRM-2小鼠脫色發(fā)生早、病損面積廣，并且脫色部位皮膚真皮組織有不同程度 的毛細(xì)血管增生充血，是研究輻射導(dǎo)致皮膚脫色良好的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。并且輻射誘導(dǎo)IRM-2 小鼠毛發(fā)脫色改變，與白癜風(fēng)后天形成，局限性色素脫失和在進(jìn)展期色素脫失移行發(fā)展較 快的臨床表現(xiàn)極為相似。白癜風(fēng)是一種常見的色素脫失性皮膚病，臨床表現(xiàn)為局部皮膚白斑，一旦發(fā)病，治 愈率低且易遷延進(jìn)展，給患者造成很大的身心壓力。白癜風(fēng)生化異常主要表現(xiàn)在兩個(gè)方面 1)血尿中兒茶酚胺及其代謝產(chǎn)物升高；2)抗氧化系統(tǒng)失調(diào)，表皮內(nèi)高水平的過氧化氫。高 水平的過氧化氫使酪氨酸及其他單酚類發(fā)生羥化反應(yīng)生成相應(yīng)的兒茶酚類，進(jìn)一步氧化成 為苯醌。苯醌的長(zhǎng)時(shí)間堆積后可作用于酪氨酸酶使后者形成半抗原，從而激發(fā)免疫反應(yīng)。自 由基的過氧化作用及抗氧化系統(tǒng)失調(diào)，成為主要致病因素之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是利用已有的藥物白藜蘆醇，治療輻射誘導(dǎo)IRM-2小鼠的毛發(fā)色素脫 失，并用于白癜風(fēng)等色素脫失性疾病的治療及發(fā)病機(jī)制的研究；用于了解白藜蘆醇對(duì)輻射 誘導(dǎo)小鼠免疫功能紊亂和色素調(diào)節(jié)功能紊亂的作用。為此，本發(fā)明公開了白藜蘆醇在制備治療或預(yù)防輻射誘導(dǎo)毛發(fā)色素脫失性皮膚病 藥物中的應(yīng)用。特別是白藜蘆醇在制備治療或預(yù)防輻射誘導(dǎo)白癜風(fēng)皮膚病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的輻射誘導(dǎo)包括輻射引起的免疫功能紊亂及色素調(diào)節(jié)功能紊亂。
本發(fā)明所述的應(yīng)用，其中的應(yīng)用包括電離或非電離輻射誘導(dǎo)，自發(fā)或化學(xué)試劑引 起的色素脫失。本發(fā)明更進(jìn)一步公開了含有白藜蘆醇與其它維生素類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組合維生素A、 維生素D、維生素E、維生素Bi、維生素B6、維生素B3、對(duì)氨基苯甲酸、葉酸、泛酸等。本發(fā)明進(jìn)一步公開了含有白藜蘆醇的藥物組合物，它是將治療有效量的白藜蘆醇 與藥學(xué)上可應(yīng)用于放射性皮炎治療的藥物混合制成組合物。中藥雷公藤具有抗炎、免疫抑 制、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗菌活血化瘀等作用，可用于日光性皮炎的治療。糖皮質(zhì)激素類藥 作用1、免疫抑制和抗過敏作用；2、抗炎作用；3、抗毒素作用；4、抗休克作用；5、抗核分裂作 用。此外還可影響糖、蛋白質(zhì)、脂肪的代謝，影響水和電解質(zhì)代謝，影響血細(xì)胞的生成，提高 中樞神經(jīng)的興奮性，增加胃酸及胃蛋白的分泌等?？捎糜谥委熂毙苑派湫云ぱ住Ｆつw病的性質(zhì)和病期是選方用藥的首要依據(jù)。進(jìn)行期、穩(wěn)定期、退行期選方用藥應(yīng) 有不同。此外藥物的治療效果，除藥理作用外，劑型的物理作用亦有重要影響。本發(fā)明進(jìn)一步公開了白藜蘆醇可與常用藥用輔料混合制成各種制劑。特別是口服 制劑。一般的，本發(fā)明提供的各種制劑包括經(jīng)口給藥，但也可以其他形式如皮下、肌肉、 靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、鞘內(nèi)和硬腦膜外給藥。適合口服的形式可為片劑或膠囊；粉劑或顆粒劑。 可接受的口服固體制劑有普通片劑、分散片、緩控釋、腸溶片、顆粒、膠囊、滴丸、散劑等等； 口服液體制劑有口服液、乳劑；注射劑有小水針、輸液、凍干粉針等等。上述輔料可以是常 用劑量，以常用的配比與白藜蘆醇混合，當(dāng)白藜蘆醇用量確定后，各藥用輔料之間的配比可 以根據(jù)需要適當(dāng)調(diào)節(jié)。本發(fā)明所述的藥用輔料包括稀釋劑、填充劑(如甘露醇、乳糖、聚乙二醇)、粘合 劑(淀粉、微晶纖維素)、崩解劑(如羧甲基纖維素、低取代的羥丙基纖維素)、潤(rùn)滑劑(如 滑石粉、硬脂酸鎂)、濕潤(rùn)劑(如丙二醇、乙醇)、穩(wěn)定劑(EDTA-2Na、硫代硫酸鈉、焦亞硫酸 鈉、亞硫酸鈉、乙醇胺、碳酸氫鈉、煙酰胺)等等。本發(fā)明提供的白藜蘆醇治療或預(yù)防輻射誘導(dǎo)毛發(fā)脫色的治療方法，包括以下步 驟1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇本單位自主培育的純系小鼠IRM-2，具有在全身照射下易于出現(xiàn) 毛發(fā)色素脫失的特性；2)給藥方法單次全身照射30天后開始口服給藥，白藜蘆醇20mg/kg/次，用吐 溫-80助溶，對(duì)照組給吐溫生理鹽水溶液，連續(xù)給藥15天；3)給藥后觀察并記錄各組脫色的發(fā)生率、發(fā)生時(shí)間、發(fā)病的嚴(yán)重程度，及脫色分 值；4)免疫學(xué)改變外周血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)、股骨有核細(xì)胞計(jì)數(shù)、臟器指數(shù)等。5)常規(guī)病理及電鏡檢測(cè)；包括形態(tài)學(xué)檢查、毛囊個(gè)數(shù)、黑色素含量等。6)數(shù)據(jù)分析。本發(fā)明所述的選擇純系IRM-2小鼠分組是指，將IRM-2小鼠分為三組，雌雄兼有， 每組9只，分為正常組、照射組、白藜蘆醇+照射組(以下稱白藜蘆醇組)，照射組及白藜蘆 醇組接受137Cs γ射線全身一次性全身照射，照射劑量為6.0Gy，劑量率為0.76Gy/min。30 天后白藜蘆醇組開始給藥，并定時(shí)觀察皮膚脫色情況，做積分記錄。
本發(fā)明所述的給藥方法及白癜風(fēng)模型構(gòu)建方法是采用前述公開的方法獲得。本發(fā)明進(jìn)一步公開了白藜蘆醇對(duì)于輻射誘導(dǎo)IRM-2小鼠白癜風(fēng)的治療作用，包 括白藜蘆醇對(duì)于輻射誘導(dǎo)IRM-2小鼠毛發(fā)色素脫失的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制的研究；用于輻射 引起的皮膚損傷機(jī)制的研究；用于因外傷引起的皮膚潰破的治療作用研究；用于不明原因 引起的脫發(fā)的治療作用研究；用于輻射引起的免疫功能紊亂及色素調(diào)節(jié)功能紊亂機(jī)制的研 允。本發(fā)明所制備的藥物與臨床常用藥物相比所具有的積極效果在于1) 口服連續(xù)給藥15天，無明顯的毒副作用；2)白藜蘆醇組與照射組小鼠比較，毛發(fā)脫色的發(fā)生率低、發(fā)生時(shí)間晚、發(fā)生脫色的 面積小；3)病理改變白藜蘆醇組與照射組比較，病變部位毛囊分布更為密集，色素顆粒 分布顯著增加。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明本發(fā)明所建立的白藜蘆醇對(duì)輻射誘導(dǎo)的小鼠毛發(fā)色素脫失的治療 作用，對(duì)于臨床白癜風(fēng)和色素脫失性疾病的治療具有明確的指導(dǎo)意義。同時(shí)，本發(fā)明也有助 于揭示輻射誘導(dǎo)毛發(fā)色素脫失發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制。


圖1為白藜蘆醇對(duì)輻射誘導(dǎo)IRM-2小鼠毛發(fā)脫色陽性率的結(jié)果；圖2為白藜蘆醇對(duì)輻射誘導(dǎo)小鼠毛發(fā)脫色分值的結(jié)果；圖3為白藜蘆醇對(duì)輻射后脫色小鼠單側(cè)股骨細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果；圖4為各組小鼠骨髓細(xì)胞集落形成率(CFU-GM)的結(jié)果其中Ctr為健康鼠，IR為 照射組，IR+Res為照射后口服白藜蘆醇組；圖5為各組小鼠皮膚鏡下計(jì)數(shù)毛囊個(gè)數(shù)；圖6為各組小鼠皮膚HE染色結(jié)果其中1為正常組照射組，2為照射組，3為白藜
蘆醇組。
具體實(shí)施例方式下面通過最佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。以下實(shí)施例僅僅是用于說明 而不是限制本發(fā)明，其中白藜蘆醇有市售，實(shí)驗(yàn)中所用其它原料均有市售。實(shí)施例1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察應(yīng)用白藜蘆醇藥物對(duì)輻射誘導(dǎo)IRM-2小鼠毛發(fā)脫色的治療效果。實(shí)驗(yàn)材料1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物IRM-2小鼠，來自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所，合格證號(hào) SCXK(津)2005-00012、試劑白藜蘆醇由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所提供購自浙江一新制藥股份有限 公司，含量為98%，批號(hào)20060718，用前用吐溫80稀釋。3、實(shí)驗(yàn)儀器137Cs γ射線照射源加拿大原子能有限公司，USD型，Autocell 140。 顯微鏡OLYMPUS BX51、全自動(dòng)血液分析儀sysmex poch_100i。
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實(shí)驗(yàn)方法4、實(shí)驗(yàn)分組及照射本實(shí)驗(yàn)將小鼠分為正常組、照射組、照射+白藜蘆醇組；每組9只，雌雄兼有， 22-26g(6-8w)，共27只。照射處理小鼠1次性全身照射，照射劑量為6Gy，于照射后30天 開始給藥并進(jìn)行脫色觀察。5、試劑配制白藜蘆醇為白色粉末，用吐溫-80助溶，于給藥前30分鐘用生理鹽水 配制。口服給藥，對(duì)照組給等體積生理鹽水+吐溫-80溶液；給藥劑量為20mg/kg。1次/ 日，連續(xù)15天。隔日1次軟料，每周稱體重兩次。6、脫色評(píng)價(jià)小鼠毛發(fā)脫色評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)0分毛發(fā)無脫色；1分毛發(fā)有脫色；2分毛發(fā) 脫色面積> 10% ；3分毛發(fā)脫色面積> 25% ；4分毛發(fā)脫色面積> 50% ；5分毛發(fā)脫色面積 > 75%。7、觀察指標(biāo)連續(xù)給藥15天后，擬進(jìn)行以下指標(biāo)檢測(cè)。8、觀察小鼠毛發(fā)脫色變化程度，并記錄分值；9、觀察外周血白細(xì)胞和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)以及外周血白細(xì)胞分類(中性粒細(xì)胞及淋巴 細(xì)胞比例)。10、股骨有核細(xì)胞計(jì)數(shù)無菌取小鼠股骨，沖洗骨髓細(xì)胞，混勻后過濾，計(jì)數(shù)細(xì)胞， 計(jì)數(shù)結(jié)果以每根股骨有核細(xì)胞數(shù)表示。11、小鼠骨髓細(xì)胞集落形成率(CFU-GM)實(shí)驗(yàn)無菌沖取小鼠單側(cè)股骨，甲基纖維 素培養(yǎng)基(MethoCult GF M3534)培養(yǎng)，第5天時(shí)在倒置顯微鏡下觀察集落形成情況，細(xì) 胞數(shù)>30為陽性集落。12、病理取材小鼠處死后，盡快剪取病變部位皮膚，中性福爾馬林固定液固定，常 規(guī)病理檢測(cè)。13、小鼠毛囊數(shù)量的統(tǒng)計(jì)，計(jì)數(shù)20倍鏡下50個(gè)視野毛囊個(gè)數(shù)，求平均值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果14、白藜蘆醇組與照射組小鼠毛發(fā)脫色陽性率比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)第1天給藥(照射后30天)，白藜蘆醇組及照射組陽性率均為12. 5%， 脫色分值各1分；第5天給藥(照射后34天)，白藜蘆醇組陽性率為50%，照射組為75% ； 脫色分值白藜蘆醇組4分，照射組8分。白藜蘆醇組脫色陽性率和脫色分值均低于照射組。 第9天給藥(照射后38天)，白藜蘆醇組陽性率為50%，照射組為100% ；脫色分值白藜蘆 醇組6分，照射組13分；效果顯著。停藥后4天(照射后49天)白藜蘆醇組陽性率均為 62. 5%，照射組為100% ；脫色分值白藜蘆醇組10分，照射組25分，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1及附圖 1、附圖2。這一結(jié)果充分說明白藜蘆醇不僅能夠抑制輻照后小鼠毛發(fā)脫色的發(fā)生，而且能夠 延緩毛發(fā)脫色損傷的進(jìn)一步發(fā)展。表1白藜蘆醇對(duì)IRM-2小鼠受照30天后不同時(shí)間毛發(fā)脫色陽性率結(jié)果
權(quán)利要求
1.白藜蘆醇在制備治療或預(yù)防輻射誘導(dǎo)毛發(fā)色素脫失性皮膚病藥物中的應(yīng)用。
2.白藜蘆醇在制備治療或預(yù)防輻射誘導(dǎo)白癜風(fēng)皮膚病藥物中的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中的輻射誘導(dǎo)包括輻射引起的免疫功能紊亂及色素調(diào) 節(jié)功能紊亂。
4.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中的應(yīng)用包括電離或非電離輻射誘導(dǎo)，自發(fā)或化學(xué)試劑 引起的色素脫失。
5.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于白藜蘆醇與藥用輔料混合制成各種制劑。
6.權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于白藜蘆醇與藥用輔料混合制成口服制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了白藜蘆醇在制備治療或預(yù)防輻射誘導(dǎo)毛發(fā)色素脫失性皮膚病藥物中的應(yīng)用。它是利用白藜蘆醇對(duì)輻射誘導(dǎo)IRM-2小鼠白癜風(fēng)模型進(jìn)行治療，建立了一種治療電離輻射誘導(dǎo)白癜風(fēng)發(fā)生、發(fā)展的途徑。對(duì)6Gy照射30天后的小鼠經(jīng)口給藥15天，結(jié)果用藥組與對(duì)照組比較脫色抑制率達(dá)到了40％，效果顯著。病理檢測(cè)結(jié)果表明，白藜蘆醇用藥組小鼠病變部位毛囊分布更為密集，黑色素分布明顯多于照射組和正常組。并且白藜蘆醇用藥組小鼠的外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、股骨有核細(xì)胞計(jì)數(shù)、CFU-S和CFU-GM等免疫指標(biāo)略高于照射組，說明白藜蘆醇對(duì)受照小鼠造血及免疫功能具有一定的保護(hù)作用。各項(xiàng)結(jié)果表明白藜蘆醇對(duì)輻射誘導(dǎo)小鼠白癜風(fēng)發(fā)生發(fā)展具有積極的防治作用。
文檔編號(hào)A61P17/00GK102000045SQ20101051411
公開日2011年4月6日 申請(qǐng)日期2010年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月21日
發(fā)明者侯琦, 吳紅英, 孟愛民, 常建輝, 張恒, 李德冠, 杜利清, 王小春, 王彥, 王月英, 翟志斌, 路璐 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所