專利名稱：抗雞法氏囊炎特異性轉移因子及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及抗傳染性雞法氏囊炎特異性轉移因子(STF)及其制備方法，屬生物醫(yī)藥技術領域。
背景技術：
雞傳染性法氏囊炎是由法氏囊病毒(雙RNA病毒)引起的一種急性、高度接觸性傳染病，發(fā)病率高、病程短、死亡率高，對養(yǎng)殖業(yè)的危害非常嚴重。目前，獸醫(yī)工作者還沒有研發(fā)出治療雞傳染性法氏囊炎的特效藥物。近來，研究人員對轉移因子(Transfer Factor, TF)這一細胞活性因子治療雞傳染性法氏囊炎進行了很好的嘗試，并已有相關專利文獻報道。轉移因子為分子量介于3000 6000道爾頓的小分子核苷酸-多肽類物質，它作為一種特定的細胞因子參與機體的免疫反應，能夠特異性或非特異性地提高機體細胞免疫功能， 抵抗真菌、病毒等非細菌性感染。特異性轉移因子(STF)是指采用某種特定病原感染或免疫機體后所制備的能夠專一抑制或殺滅該病原的轉移因子，針對性強，治療效果突出。2008 年，田杏芳和王連民申請了 4項中國發(fā)明專利一種抗雞傳染性法氏囊病毒轉移因子的制備方法(申請?zhí)?00810053543. 4)、抗雞法氏囊病毒特異性轉移因子與抗菌肽的制備方法 (申請?zhí)?00810151760. 7)、抗禽流感病毒、新城疫病毒、雞法氏囊病毒特異性轉移因子與抗菌肽的制備方法(申請?zhí)?00810151758. X)及一種體外制備抗雞傳染性法氏囊病毒特異性轉移因子的制備方法。上述專利公開了針對法氏囊炎具有特效治療功效的特異性轉移因子(STF)的制備方法采用法氏囊病毒抗原免疫健康豬而后由豬脾臟或其血液中制備特異性轉移因子(STF)，或用雞脾臟或其外周血為材料在體外制備特異性轉移因子(STF)。用豬作載體無形之中增加了制造成本且豬、雞之間種屬差異較大，而用雞脾臟或其外周血在體外制備特異性轉移因子(STF)，一是技術不易掌控，操作過程容易污染，最終影響產(chǎn)品質量， 二是制備的產(chǎn)量、規(guī)模明顯具有局限性。現(xiàn)有文獻報道了轉移因子通常來源于脾臟和淋巴細胞(任麗君等，轉移因子研究及其臨床應用，生物學雜志，1997年第14卷第15期)。近幾年，山東省肉食雞飼養(yǎng)業(yè)發(fā)展迅速，宰殺能力也得到很好發(fā)展，成為山東省經(jīng)濟構成中的一大亮點。如山東省莘縣817小肉食雞的年出欄量達到5 6億只，為國內第一大肉食雞生產(chǎn)縣；每只雞可產(chǎn)生0. 03公斤左右的脾臟等下腳料，因而脾臟資源相當豐富，是國內乃至于國際上難得一見的資源優(yōu)勢； 而這里人們不喜歡食用脾臟，因而脾臟往往被棄去。而由資源豐富的雞脾臟中直接提取抗傳染性雞法氏囊炎特異性轉移因子(STF)不僅能達到廢物利用、降低成本的目的，而且有利于規(guī)?；_發(fā)。經(jīng)檢索，未見現(xiàn)有技術中有關雞脾臟直接制備抗傳染性雞法氏囊炎特異性轉移因子(STF)相關的文獻報道。

發(fā)明內容
根據(jù)現(xiàn)有技術狀況，本發(fā)明目的在于提供一種無毒副作用、治療與預防雞法氏囊炎效果好的抗傳染性雞法氏囊炎特異性轉移因子(STF)；另一目的在于提供一種原料易得、成本低廉、適用于工業(yè)化生產(chǎn)的抗傳染性雞法氏囊炎特異性轉移因子(STF)制備方法。為實現(xiàn)本發(fā)明目的，技術實施方案如下1、雞只免疫用雞傳染性法氏囊炎疫苗免疫健康雞群，皮下多點注射上述疫苗，每雞1 5ml ；在首次免疫后的第7 20天進行強化免疫，肌肉注射每雞1. 5 3ml ；在強化免疫后的第7 20天進行再強化免疫，肌肉注射每雞1. 5 :3ml。2、特異性轉移因子(STF)的制備將上述經(jīng)免疫的雞養(yǎng)成(約7-10天)后送屠宰場宰殺，收集健康的脾臟，用無菌水反復清洗，將脾臟表面的油脂、血管、筋膜等處理干凈；將脾臟切塊或段放入高速組織搗碎機中搗碎，分盤后入冷庫(_25°C -30°C )速凍，凍融3 5次，加3 5倍無菌水，混勻，然后置于膠體磨中均質，離心分離固體物與提取物，每分鐘3000 16000轉；濾液進行超濾，截留分子量小于10000道爾頓得到的超濾產(chǎn)物即為特異性轉移因子(STF)。其為分子量小于10000道爾頓的多肽-核苷酸的混合物。STF主要成分為多肽、核糖、寡核苷酸等。特異性轉移因子(STF)的含量特異性轉移因子(STF)的定量采用《中國生物制品規(guī)程》中規(guī)定的轉移因子定量方法i^olin-酚試劑法來進行，蛋白質標準液為Sigma公司產(chǎn)品。結果表明，本發(fā)明制備的特異性轉移因子(STF)含量為1.7mg/ml。應用時，可以將本發(fā)明特異性轉移因子(STF)制成如下制劑1)水針劑取特異性轉移因子(STF) IOOmg加注射用水制成水溶液，用微孔濾膜 (Φ 0. 20 μ m)濾過除菌，無菌分裝，每瓶IOml或IOOml。2)凍干粉針劑取特異性轉移因子(STF)凍干粉lOOmg，無菌分裝，2ml或IOml西林瓶裝。3) 口服液取特異性轉移因子(STF) IOOmg加注射用水制成水溶液，用微孔濾膜 (Φ0. 20 μ m)濾過除菌，加入0.5%氯仿或Ippm柳硫汞作防腐劑，每瓶100ml。4)顆粒劑、片劑等固體制劑取特異性轉移因子(STF)凍干粉0. 1kg，藥用淀粉 0. 5kg,濕法制粒、整粒，成顆粒劑或壓片制成片劑。將采用本發(fā)明制得的特異性轉移因子(STF)進行臨床試驗，方法及結果如下將已被確診患法氏囊炎的817肉食雞，以死亡、體重減輕、檢出病毒或檢出抗體為判定標準，將其分為治愈、有效、無效三個等級進行統(tǒng)計，用制備的抗法氏囊炎的特異性轉移因子(STF)的水針劑進行緊急預防與治療實驗，預防用量為每雞肌注0.5ml，治療用量為每雞肌注lml。結果如表1。表1緊急預防與治療效果
權利要求
1.抗傳染性雞法氏囊炎特異性轉移因子的制備方法，其特征在于直接以健康雞脾臟通過如下步驟制得(1)首先對雞進行免疫用雞傳染性法氏囊炎疫苗免疫健康雞群，皮下多點注射上述疫苗，每雞1 5ml ；在首次免疫后的第7 20天進行強化免疫，肌肉注射每雞1. 5 3ml ；在強化免疫后的第7 20天進行再強化免疫，肌肉注射每雞1. 5 :3ml ； (2) 制備抗傳染性雞法氏囊炎特異性轉移因子將上述經(jīng)免疫的雞養(yǎng)7-10天后送屠宰場宰殺， 收集健康的脾臟，用無菌水反復清洗，將脾臟表面的油脂、血管、筋膜處理干凈；將脾臟切塊或段放入高速組織搗碎機中搗碎，分盤后入冷庫，_25°C -30°C速凍，凍融3 5次，加3 5倍無菌水，混勻，然后置于膠體磨中均質，離心分離固體物與提取物，每分鐘3000 16000 轉；濾液進行超濾，截留分子量小于10000道爾頓得到的超濾產(chǎn)物。
2.抗傳染性雞法氏囊炎特異性轉移因子，其特征在于，采用權利要求1所述的方法制備而得。
3.如權利要求2所述的抗傳染性雞法氏囊炎特異性轉移因子，其特征在于，其為分子量小于10000道爾頓的多肽-核苷酸的混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗傳染性雞法氏囊炎特異性轉移因子(STF)及其制備方法，屬生物醫(yī)藥技術領域。該方法直接用雞傳染性法氏囊炎疫苗免疫健康雞群，收集其健康的脾臟，經(jīng)過反復凍融后，置于膠體磨中均質，離心分離固體物與提取物；濾液進行超濾，截留分子量小于10000道爾頓的超濾產(chǎn)物即為抗傳染性雞法氏囊炎特異性轉移因子(STF)。該特異性轉移因子(STF)療效顯著，作用迅速，無毒副作用，容易保存，便于運輸，保質期長；其生產(chǎn)工藝簡單，使廢物資源得到循環(huán)利用，并且適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A61K38/19GK102453088SQ201010515048
公開日2012年5月16日 申請日期2010年10月22日 優(yōu)先權日2010年10月22日
發(fā)明者曹吉祥 申請人:曹吉祥