專利名稱：一種枸杞葉黃酮的提取制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種黃酮的提取制備方法，尤其涉及一種枸杞葉黃酮的提取制備方法。
背景技術(shù)：
枸杞葉是茄科(Solanaceae)枸杞屬(Lycium Linn.)植物寧夏枸杞(Lycium barbarum L.)的葉，俗稱天精草，呈淡綠色，無毒，是一味重要的中藥材，具有補虛益精、清 熱止渴、養(yǎng)肝明目等功效。現(xiàn)代科學(xué)研究證明枸杞葉具有抗衰老、抗炎、保護(hù)心腦血管、抗 菌及抗病毒等作用，同時也是一種滋補強(qiáng)壯劑，具有很高的藥用和食用價值，廣泛應(yīng)用于醫(yī) 藥、化工、食品及化妝品等行業(yè)。枸杞葉黃酮是一類天然黃酮類化合物，其含有豐富的黃酮類、黃酮醇類、黃酮醇苷 類、黃烷醇類等抗心腦血管疾病以及抗癌、抗氧化物質(zhì)，因此枸杞葉黃酮具有較高的保護(hù)心 腦血管、抗癌、抗氧化等多種生物活性。目前，對黃酮的提取制備通常采用浸漬法、回流提取法、超聲提取法和微波提取 法。其中浸漬法是一種傳統(tǒng)的天然產(chǎn)物提取方法，該法是指在室溫條件下將粉碎好的原料 放入盛有適當(dāng)溶劑的密閉容器中浸泡以溶出其中化學(xué)成分的方法。該方法操作過程相當(dāng)費 時，提取效率差，少則幾小時，多則需數(shù)周時間。同時要達(dá)到浸漬提取完全需要消耗大量溶 劑，也可導(dǎo)致所提取化合物和原料的潛在丟失，如某些化合物如果在室溫下溶解性很差則 不能被有效提取。另外，浸提液易霉變，需加入適量的防腐劑如甲苯、甲醛或氯仿等。回流提取法是用易揮發(fā)的有機(jī)溶劑加熱回流提取植物成分的方法。該法主要使 用低沸點的有機(jī)溶劑如乙醇、氯仿等加熱提取天然藥物中有效成分。為減少溶劑的揮發(fā)損 失，保持與藥材持久的接觸，通過加熱浸出液，使溶劑受熱蒸發(fā)，經(jīng)冷凝后變?yōu)橐后w流回浸 出器，如此反復(fù)至浸出完全的一種熱提取方法。該方法操作較麻煩、提取時間長、溶劑消耗 量較大，并且長時間的加熱回流會破壞熱不穩(wěn)定的化合物。超聲提取法是采用超聲波輔助提取溶劑進(jìn)行提取的方法。主要利用超聲波的空化 作用，破壞植物藥材細(xì)胞，使溶劑易于滲入細(xì)胞內(nèi)，同時由于超聲波的強(qiáng)烈振動能，加強(qiáng)了 胞內(nèi)物質(zhì)的釋放、擴(kuò)散和溶解，加速有效成分的浸出。該方法提取溫度難以控制，對容器壁 的厚薄及放置位置要求較高，目前尚為實驗室小規(guī)模使用，大規(guī)模生產(chǎn)還有待于解決設(shè)備 問題。微波提取法是一種主要利用微波強(qiáng)烈的熱效應(yīng)對天然藥物中有效成分進(jìn)行提取 的方法。當(dāng)被提取物和溶劑共處于快速振動的微波電磁場中時，目標(biāo)組分的分子在高頻電 磁波的作用下，高速振動產(chǎn)生熱能，使分子本身獲得巨大能量而得以掙脫周圍環(huán)境的束縛， 實現(xiàn)分子自內(nèi)向外的遷移，從而達(dá)到提取目的。該方法對儀器設(shè)備要求高，運行成本高，且 應(yīng)用范圍較窄。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種以枸杞葉為原料、成本低廉、提取率高的 枸杞葉黃酮的提取制備方法。為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種枸杞葉黃酮的提取制備方法，包括以下步 驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀除雜后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣；(2)將所述枸杞葉干樣經(jīng)粉碎后，過20 320目篩，得到枸杞粉；(3)將所述枸杞粉與質(zhì)量濃度為5 100%的乙醇按1 5 100的料液體積比 浸提0. 5 360h后，得到浸提液；(4)所述浸提液經(jīng)膠體磨研磨1 20次后，得到膠體狀的枸杞葉浸提溶液；(5)將所述膠體狀的枸杞葉浸提溶液在1 200Mpa的壓力下進(jìn)行均質(zhì)后，經(jīng)離心 分離，得到上清液和濾渣；(6)將所述上清液以0. 1 10t/h的流速經(jīng)孔徑為0. 01 10 μ m的陶瓷膜在溫度 為15 55°C、壓力為0. 005 3Mpa的條件下除雜，得到濾液；(7)所述濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附后，先用去離子水洗脫至無糖，再用2 50倍床層體積、質(zhì)量濃度為20% 100%的乙醇溶液洗脫吸附在大孔樹脂上的枸杞葉黃 酮，得到含有枸杞葉黃酮的洗脫液；(8)將所述含有枸杞葉黃酮的洗脫液經(jīng)真空減壓濃縮后，得到枸杞葉黃酮濃縮液； 該枸杞葉黃酮濃縮液經(jīng)干燥后，即得枸杞葉黃酮粉末。用下述制備方法代替上述步驟(3)制備浸提液將所述枸杞粉與質(zhì)量濃度為5 100%的乙醇按1 5 100的料液體積比在10 100°C溫度下進(jìn)行水浴加熱，經(jīng)回流提取 0. 5 72h后過濾即得。用下述制備方法代替上述步驟(3)制備浸提液將所述枸杞粉與質(zhì)量濃度為5 100%的乙醇按1 5 100的料液體積比在10 100°C溫度下進(jìn)行超聲提取，0. 1 48h 后過濾即得。所述步驟(4)中的膠體磨的轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為2000r/min 20000r/min。所述步驟(5)中的離心速度為2000 20000r/min，離心時間為1 60min。所述步驟⑶中的真空減壓濃縮的條件是真空度為0. 03 0. 07MPa，溫度為20 65 "C。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點1、由于本發(fā)明將膠體磨磨合技術(shù)、高壓均質(zhì)技術(shù)及膜分離技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用，因此，不 僅有效地縮短了提取時間，減少了工藝過程中的提取溶劑消耗量及能耗，而且所得枸杞葉 黃酮性質(zhì)穩(wěn)定，含量高，抗心腦血管疾病、抗癌、抗氧化等生物活性高。2、由于本發(fā)明采用陶瓷膜分離，因此，不但有效去除提取液中的鞣質(zhì)、粘液質(zhì)、細(xì) 菌等雜質(zhì)，而且有效地降低了設(shè)備投資，降低了能耗，同時也使工藝簡單化。3、由于本發(fā)明采用資源量豐富的枸杞葉為原料，因此，有效地降低了生產(chǎn)成本。4、由于本發(fā)明使用膠體磨和高壓均質(zhì)機(jī)，因此，不但保證了枸杞葉有效成分的均 一、性質(zhì)穩(wěn)定，且所得黃酮抗心腦血管疾病、抗癌及抗氧化的活性高，而且可以顯著地縮短 提取時間和提高提取率。
5、本發(fā)明所得產(chǎn)品經(jīng)紫外分光光度計和高效液相色譜檢測，枸杞葉總黃酮含量 ^ 60%，黃酮醇苷含量> 30%，蘆丁含量> 20%，可廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)療、醫(yī)藥保健等行 業(yè)。6、本發(fā)明儀器設(shè)備操作簡便，技術(shù)參數(shù)易于控制，適應(yīng)范圍廣，可用于工業(yè)化大規(guī) 模生產(chǎn)，形成生物產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)鏈。
具體實施例方式實施例1 一種枸杞葉黃酮的提取制備方法，包括以下步驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀，去除雜質(zhì)后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣。(2)將5kg枸杞葉干樣放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，粉碎后過20目篩，得到枸杞粉。(3)將枸杞粉與質(zhì)量濃度為80%的乙醇按1 5的料液體積比浸提10h，得到浸提液。(4)浸提液經(jīng)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為20000r/min的膠體磨研磨1次后，得到膠體狀的枸杞葉
浸提溶液。(5)將膠體狀的枸杞葉浸提溶液放入高壓均質(zhì)機(jī)中，在IOMpa的壓力下進(jìn)行均質(zhì)， IOmin后形成均一的枸杞葉浸提溶液；然后，采用離心機(jī)以2000r/min的離心速度對均一的 枸杞葉浸提溶液離心分離5min，得到上清液和濾渣。收集上清液，棄去濾渣。(6)將上清液以1. 5t/h的流速經(jīng)孔徑為0. 1 μ m的陶瓷膜在溫度為15°C、壓力為 0. 005Mpa的條件下除去懸浮物、鞣質(zhì)及粘液質(zhì)，收集滲透側(cè)的溶液，得到濾液。(7)濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附后，先用去離子水洗脫至無糖，再用2倍床層 體積、質(zhì)量濃度為30%的乙醇溶液洗脫吸附在大孔樹脂上的枸杞葉黃酮，得到含有枸杞葉 黃酮的洗脫液。(8)將含有枸杞葉黃酮的洗脫液在真空度為0. 03Mpa、溫度為30°C的條件下經(jīng)真 空減壓濃縮后，得到枸杞葉黃酮濃縮液；該枸杞葉黃酮濃縮液在50°C溫度下干燥后，即得 1.05kg枸杞葉黃酮粉末。經(jīng)高效液相色譜和紫外分光光度計檢測，該枸杞葉黃酮粉末中枸杞葉總黃酮含量 為65. 6%，黃酮醇苷含量為32. 4%，蘆丁含量為24. 3%。實施例2 —種枸杞葉黃酮的提取制備方法，包括以下步驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀，去除雜質(zhì)后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣。(2)將50kg枸杞葉干樣放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，粉碎后過200目篩，得到枸杞粉。(3)將枸杞粉與質(zhì)量濃度為45%的乙醇按1 100的料液體積比浸提240h，得到 浸提液。(4)浸提液經(jīng)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為lOOOOr/min的膠體磨研磨10次后，得到膠體狀的枸杞葉
浸提溶液。(5)將膠體狀的枸杞葉浸提溶液放入高壓均質(zhì)機(jī)中，在5Mpa的壓力下進(jìn)行均質(zhì)， 300min后形成均一的枸杞葉浸提溶液；然后，采用離心機(jī)以7200r/min的離心速度對均一 的枸杞葉浸提溶液離心分離30min，得到上清液和濾渣。收集上清液，棄去濾渣。(6)將上清液以5. 5t/h的流速經(jīng)孔徑為0. 1 μ m的陶瓷膜在溫度為35°C、壓力為 3Mpa的條件下除去懸浮物、鞣質(zhì)及粘液質(zhì)，收集滲透側(cè)的溶液，得到濾液。
(7)濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附后，先用去離子水洗脫至無糖，再用20倍床 層體積、質(zhì)量濃度為95%的乙醇溶液洗脫吸附在大孔樹脂上的枸杞葉黃酮，得到含有枸杞 葉黃酮的洗脫液。(8)將含有枸杞葉黃酮的洗脫液在真空度為0. 06Mpa、溫度為45°C的條件下經(jīng)真 空減壓濃縮后，得到枸杞葉黃酮濃縮液；該枸杞葉黃酮濃縮液在30°C溫度下干燥后，即得 9. 87kg枸杞葉黃酮粉末。經(jīng)高效液相色譜和紫外分光光度計檢測，該枸杞葉黃酮粉末中枸杞葉總黃酮含量 為68. 6%，黃酮醇苷含量為35. 4%，蘆丁含量為23. 7%。實施例3 —種枸杞葉黃酮的提取制備方法，包括以下步驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀，去除雜質(zhì)后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣。(2)將20kg枸杞葉干樣放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，粉碎后過100目篩，得到枸杞粉。(3)將枸杞粉與質(zhì)量濃度為95%的乙醇按1 10的料液體積比浸提24h，得到浸 提液。(4)浸提液經(jīng)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為8000r/min的膠體磨研磨5次后，得到膠體狀的枸杞葉浸 提溶液。(5)將膠體狀的枸杞葉浸提溶液放入高壓均質(zhì)機(jī)中，在42Mpa的壓力下進(jìn)行均質(zhì)， 150min后形成均一的枸杞葉浸提溶液；然后，采用離心機(jī)以3600r/min的離心速度對均一 的枸杞葉浸提溶液離心分離20min，得到上清液和濾渣。收集上清液，棄去濾渣。(6)將上清液以0. 5t/h的流速經(jīng)孔徑為0. 2μπι的陶瓷膜在溫度為45°C、壓力為 2Mpa的條件下除去懸浮物、鞣質(zhì)及粘液質(zhì)，收集滲透側(cè)的溶液，得到濾液。(7)濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附后，先用去離子水洗脫至無糖，再用40倍床 層體積、質(zhì)量濃度為80%的乙醇溶液洗脫吸附在大孔樹脂上的枸杞葉黃酮，得到含有枸杞 葉黃酮的洗脫液。(8)將含有枸杞葉黃酮的洗脫液在真空度為0. 04Mpa、溫度為55°C的條件下經(jīng)真 空減壓濃縮后，得到枸杞葉黃酮濃縮液；該枸杞葉黃酮濃縮液在60°C溫度下干燥后，即得 4. 16kg枸杞葉黃酮粉末。經(jīng)高效液相色譜和紫外分光光度計檢測，該枸杞葉黃酮粉末中枸杞葉總黃酮含量 為68. 2%，黃酮醇苷含量為36. 4%，蘆丁含量為22. 1%。實施例4 一種枸杞葉黃酮的提取制備方法，包括以下步驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀，去除雜質(zhì)后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣。(2)將IOOkg枸杞葉干樣放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，粉碎后過320目篩，得到枸杞粉。(3)將枸杞粉與質(zhì)量濃度為5%的乙醇按1 100的料液體積比浸提0. 5h，得到浸 提液。(4)浸提液經(jīng)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為2000r/min的膠體磨研磨20次后，得到膠體狀的枸杞葉
浸提溶液。(5)將膠體狀的枸杞葉浸提溶液放入高壓均質(zhì)機(jī)中，在IMpa的壓力下進(jìn)行均質(zhì)， Imin后形成均一的枸杞葉浸提溶液；然后，采用離心機(jī)以20000r/min的離心速度對均一的 枸杞葉浸提溶液離心分離lmin，得到上清液和濾渣。收集上清液，棄去濾渣。(6)將上清液以10t/h的流速經(jīng)孔徑為0. 01 μ m的陶瓷膜在溫度為55°C、壓力為3Mpa的條件下除去懸浮物、鞣質(zhì)及粘液質(zhì)，收集滲透側(cè)的溶液，得到濾液。(7)濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附后，先用去離子水洗脫至無糖，再用50倍床 層體積、質(zhì)量濃度為20%的乙醇溶液洗脫吸附在大孔樹脂上的枸杞葉黃酮，得到含有枸杞 葉黃酮的洗脫液。(8)將含有枸杞葉黃酮的洗脫液在真空度為0. 07Mpa、溫度為20°C的條件下經(jīng)真 空減壓濃縮后，得到枸杞葉黃酮濃縮液；該枸杞葉黃酮濃縮液在20°C溫度下干燥后，即得 21. 24kg枸杞葉黃酮粉末。經(jīng)高效液相色譜和紫外分光光度計檢測，該枸杞葉黃酮粉末中枸杞葉總黃酮含量 為65. 3 %，黃酮醇苷含量為32.1%，蘆丁含量為20. 8 %。實施例5 —種枸杞葉黃酮的提取制備方法，包括以下步驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀，去除雜質(zhì)后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣。(2)將40kg枸杞葉干樣放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，粉碎后過40目篩，得到枸杞粉。(3)將枸杞粉與質(zhì)量濃度為100%的乙醇按1 6的料液體積比浸提360h，得到浸 提液。(4)浸提液經(jīng)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為lOOOOr/min的膠體磨研磨3次后，得到膠體狀的枸杞葉
浸提溶液。(5)將膠體狀的枸杞葉浸提溶液放入高壓均質(zhì)機(jī)中，在200Mpa的壓力下進(jìn)行均 質(zhì)，300min后形成均一的枸杞葉浸提溶液；然后，采用離心機(jī)以3600r/min的離心速度對均 一的枸杞葉浸提溶液離心分離60min，得到上清液和濾渣。收集上清液，棄去濾渣。(6)將上清液以0. lt/h的流速經(jīng)孔徑為ΙΟμπι的陶瓷膜在溫度為30°C、壓力為 0. IMpa的條件下除去懸浮物、鞣質(zhì)及粘液質(zhì)，收集滲透側(cè)的溶液，得到濾液。(7)濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附后，先用去離子水洗脫至無糖，再用5倍床層 體積、質(zhì)量濃度為100%的乙醇溶液洗脫吸附在大孔樹脂上的枸杞葉黃酮，得到含有枸杞葉 黃酮的洗脫液。(8)將含有枸杞葉黃酮的洗脫液在真空度為0. 06Mpa、溫度為65°C的條件下經(jīng)真 空減壓濃縮后，得到枸杞葉黃酮濃縮液；該枸杞葉黃酮濃縮液在65°C溫度下干燥后，即得 8. 03kg枸杞葉黃酮粉末。經(jīng)高效液相色譜和紫外分光光度計檢測，該枸杞葉黃酮粉末中枸杞葉總黃酮含量 為67. 4%，黃酮醇苷含量為33. 5%，蘆丁含量為21. 3%。實施例6 —種枸杞葉黃酮的提取制備方法，包括以下步驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀，去除雜質(zhì)后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣。(2)將60kg枸杞葉干樣放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，粉碎后過40目篩，得到枸杞粉。(3)將枸杞粉與質(zhì)量濃度為80%的乙醇按1 50的料液體積比在85°C溫度下進(jìn) 行水浴加熱，經(jīng)回流提取4h后過濾即得。(4)浸提液經(jīng)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為lOOOOr/min的膠體磨研磨10次后，得到膠體狀的枸杞葉
浸提溶液。(5)將膠體狀的枸杞葉浸提溶液放入高壓均質(zhì)機(jī)中，在IOOMpa的壓力下進(jìn)行均 質(zhì)，4h后形成均一的枸杞葉浸提溶液；然后，采用離心機(jī)以4500r/min的離心速度對均一的 枸杞葉浸提溶液離心分離30min，得到上清液和濾渣。收集上清液，棄去濾渣。
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(6)將上清液以5t/h的流速經(jīng)孔徑為0. 5μπι的陶瓷膜在溫度為40°C、壓力為 0. IMpa的條件下除去懸浮物、鞣質(zhì)及粘液質(zhì)，收集滲透側(cè)的溶液，得到濾液。(7)濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附后，先用去離子水洗脫至無糖，再用10倍床 層體積、質(zhì)量濃度為80%的乙醇溶液洗脫吸附在大孔樹脂上的枸杞葉黃酮，得到含有枸杞 葉黃酮的洗脫液。(8)將含有枸杞葉黃酮的洗脫液在真空度為0. 05Mpa、溫度為65°C的條件下經(jīng)真 空減壓濃縮后，得到枸杞葉黃酮濃縮液；該枸杞葉黃酮濃縮液在50°C溫度下干燥后，即得 11. 64kg枸杞葉黃酮粉末。經(jīng)高效液相色譜和紫外分光光度計檢測，該枸杞葉黃酮粉末中枸杞葉總黃酮含量 為62. 2%，黃酮醇苷含量為31. 8%，蘆丁含量為20. 7%。實施例7 —種枸杞葉黃酮的提取制備方法，包括以下步驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀，去除雜質(zhì)后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣。(2)將20kg枸杞葉干樣放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，粉碎后過20目篩，得到枸杞粉。(3)將枸杞粉與質(zhì)量濃度為5%的乙醇按1 5的料液體積比在10°C溫度下進(jìn)行 水浴加熱，經(jīng)回流提取0. 5h后過濾即得。(4)浸提液經(jīng)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為2000r/min的膠體磨研磨1次后，得到膠體狀的枸杞葉浸 提溶液。(5)將膠體狀的枸杞葉浸提溶液放入高壓均質(zhì)機(jī)中，在IMpa的壓力下進(jìn)行均質(zhì)， Ih后形成均一的枸杞葉浸提溶液；然后，采用離心機(jī)以2000r/min的離心速度對均一的枸 杞葉浸提溶液離心分離lmin，得到上清液和濾渣。收集上清液，棄去濾渣。(6)將上清液以0. lt/h的流速經(jīng)孔徑為0. 01 μ m的陶瓷膜在溫度為15°C、壓力為 0. 005Mpa的條件下除去懸浮物、鞣質(zhì)及粘液質(zhì)，收集滲透側(cè)的溶液，得到濾液。(7)濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附后，先用去離子水洗脫至無糖，再用2倍床層 體積、質(zhì)量濃度為20%的乙醇溶液洗脫吸附在大孔樹脂上的枸杞葉黃酮，得到含有枸杞葉 黃酮的洗脫液。(8)將含有枸杞葉黃酮的洗脫液在真空度為0. 03Mpa、溫度為20°C的條件下經(jīng)真 空減壓濃縮后，得到枸杞葉黃酮濃縮液；該枸杞葉黃酮濃縮液在40°C溫度下干燥后，即得 3. 86kg枸杞葉黃酮粉末。經(jīng)高效液相色譜和紫外分光光度計檢測，該枸杞葉黃酮粉末中枸杞葉總黃酮含量 為61. 2%，黃酮醇苷含量為30. 3%，蘆丁含量為19. 8%。實施例8 一種枸杞葉黃酮的提取制備方法，包括以下步驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀，去除雜質(zhì)后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣。(2)將40kg枸杞葉干樣放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，粉碎后過320目篩，得到枸杞粉。(3)將枸杞粉與質(zhì)量濃度為100%的乙醇按1 100的料液體積比在100°C溫度下 進(jìn)行水浴加熱，經(jīng)回流提取72h后過濾即得。(4)浸提液經(jīng)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為20000r/min的膠體磨研磨20次后，得到膠體狀的枸杞葉
浸提溶液。(5)將膠體狀的枸杞葉浸提溶液放入高壓均質(zhì)機(jī)中，在200Mpa的壓力下進(jìn)行均 質(zhì)，5h后形成均一的枸杞葉浸提溶液；然后，采用離心機(jī)以20000r/min的離心速度對均一的枸杞葉浸提溶液離心分離60min，得到上清液和濾渣。收集上清液，棄去濾渣。(6)將上清液以10t/h的流速經(jīng)孔徑為ΙΟμπι的陶瓷膜在溫度為55°C、壓力為 3Mpa的條件下除去懸浮物、鞣質(zhì)及粘液質(zhì)，收集滲透側(cè)的溶液，得到濾液。(7)濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附后，先用去離子水洗脫至無糖，再用50倍床 層體積、質(zhì)量濃度為100%的乙醇溶液洗脫吸附在大孔樹脂上的枸杞葉黃酮，得到含有枸杞 葉黃酮的洗脫液。(8)將含有枸杞葉黃酮的洗脫液在真空度為0. 07Mpa、溫度為65°C的條件下經(jīng)真 空減壓濃縮后，得到枸杞葉黃酮濃縮液；該枸杞葉黃酮濃縮液在50°C溫度下干燥后，即得 4. 04kg枸杞葉黃酮粉末。經(jīng)高效液相色譜和紫外分光光度計檢測，該枸杞葉黃酮粉末中枸杞葉總黃酮含量 為63. 1%，黃酮醇苷含量為32. 7%，蘆丁含量為20. 8%。實施例9 一種枸杞葉黃酮的提取制備方法，包括以下步驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀，去除雜質(zhì)后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣。(2)將50kg枸杞葉干樣放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，粉碎后過40目篩，得到枸杞粉。(3)將枸杞粉與質(zhì)量濃度為60%的乙醇按1 50的料液體積比在80°C溫度下進(jìn) 行水浴加熱，經(jīng)回流提取IOh后過濾即得。(4)浸提液經(jīng)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為lOOOOr/min的膠體磨研磨5次后，得到膠體狀的枸杞葉
浸提溶液。(5)將膠體狀的枸杞葉浸提溶液放入高壓均質(zhì)機(jī)中，在IOOMpa的壓力下進(jìn)行均 質(zhì)，3h后形成均一的枸杞葉浸提溶液；然后，采用離心機(jī)以5000r/min的離心速度對均一的 枸杞葉浸提溶液離心分離30min，得到上清液和濾渣。收集上清液，棄去濾渣。(6)將上清液以2t/h的流速經(jīng)孔徑為5μπι的陶瓷膜在溫度為45°C、壓力為 0. 5Mpa的條件下除去懸浮物、鞣質(zhì)及粘液質(zhì)，收集滲透側(cè)的溶液，得到濾液。(7)濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附后，先用去離子水洗脫至無糖，再用5倍床層 體積、質(zhì)量濃度為50%的乙醇溶液洗脫吸附在大孔樹脂上的枸杞葉黃酮，得到含有枸杞葉 黃酮的洗脫液。(8)將含有枸杞葉黃酮的洗脫液在真空度為0. 05Mpa、溫度為60°C的條件下經(jīng)真 空減壓濃縮后，得到枸杞葉黃酮濃縮液；該枸杞葉黃酮濃縮液在55°C溫度下干燥后，即得 10. 12kg枸杞葉黃酮粉末。經(jīng)高效液相色譜和紫外分光光度計檢測，該枸杞葉黃酮粉末中枸杞葉總黃酮含量 為64. 8%，黃酮醇苷含量為32. 4%，蘆丁含量為22. 6%。實施例10 —種枸杞葉黃酮的提取制備方法，包括以下步驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀，去除雜質(zhì)后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣。(2)將50kg枸杞葉干樣放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，粉碎后過30目篩，得到枸杞粉。(3)將枸杞粉與質(zhì)量濃度為60%的乙醇按1 50的料液體積比在55°C溫度下以 360W功率進(jìn)行超聲提取，Ih后過濾即得。(4)浸提液經(jīng)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為15000r/min的膠體磨研磨5次后，得到膠體狀的枸杞葉
浸提溶液。(5)將膠體狀的枸杞葉浸提溶液放入高壓均質(zhì)機(jī)中，在120Mpa的壓力下進(jìn)行均質(zhì)，5h后形成均一的枸杞葉浸提溶液；然后，采用離心機(jī)以5000r/min的離心速度對均一的 枸杞葉浸提溶液離心分離40min，得到上清液和濾渣。收集上清液，棄去濾渣。(6)將上清液以8T/h的流速經(jīng)孔徑為0. 2μπι的陶瓷膜在溫度為50°C、壓力為 0. 3Mpa的條件下除去懸浮物、鞣質(zhì)及粘液質(zhì)，收集滲透側(cè)的溶液，得到濾液。(7)濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附后，先用去離子水洗脫至無糖，再用20倍床 層體積、質(zhì)量濃度為30%的乙醇溶液洗脫吸附在大孔樹脂上的枸杞葉黃酮，得到含有枸杞 葉黃酮的洗脫液。(8)將含有枸杞葉黃酮的洗脫液在真空度為0. 04Mpa、溫度為60°C的條件下經(jīng)真 空減壓濃縮后，得到枸杞葉黃酮濃縮液；該枸杞葉黃酮濃縮液在55°C溫度下干燥后，即得 10. 26kg枸杞葉黃酮粉末。經(jīng)高效液相色譜和紫外分光光度計檢測，該枸杞葉黃酮粉末中枸杞葉總黃酮含量 為67. 1 %，黃酮醇苷含量為34. 4 %，蘆丁含量為21.5%。實施例11 一種枸杞葉黃酮的提取制備方法，包括以下步驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀，去除雜質(zhì)后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣。(2)將20kg枸杞葉干樣放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，粉碎后過20目篩，得到枸杞粉。(3)將枸杞粉與質(zhì)量濃度為5%的乙醇按1 5的料液體積比在10°C溫度下以 100W功率進(jìn)行超聲提取，0. Ih后過濾即得。(4)浸提液經(jīng)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為2000r/min的膠體磨研磨1次后，得到膠體狀的枸杞葉浸 提溶液。(5)將膠體狀的枸杞葉浸提溶液放入高壓均質(zhì)機(jī)中，在IMpa的壓力下進(jìn)行均質(zhì)， Ih后形成均一的枸杞葉浸提溶液；然后，采用離心機(jī)以2000r/min的離心速度對均一的枸 杞葉浸提溶液離心分離lmin，得到上清液和濾渣。收集上清液，棄去濾渣。(6)將上清液以0. lt/h的流速經(jīng)孔徑為0. 01 μ m的陶瓷膜在溫度為15°C、壓力為 0. 005Mpa的條件下除去懸浮物、鞣質(zhì)及粘液質(zhì)，收集滲透側(cè)的溶液，得到濾液。(7)濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附后，先用去離子水洗脫至無糖，再用2倍床層 體積、質(zhì)量濃度為20%的乙醇溶液洗脫吸附在大孔樹脂上的枸杞葉黃酮，得到含有枸杞葉 黃酮的洗脫液。(8)將含有枸杞葉黃酮的洗脫液在真空度為0. 03Mpa、溫度為20°C的條件下經(jīng)真 空減壓濃縮后，得到枸杞葉黃酮濃縮液；該枸杞葉黃酮濃縮液在40°C溫度下干燥后，即得 4. OOkg枸杞葉黃酮粉末。經(jīng)高效液相色譜和紫外分光光度計檢測，該枸杞葉黃酮粉末中枸杞葉總黃酮含量 為60. 5%，黃酮醇苷含量為31. 7%，蘆丁含量為19. 3%。實施例12 —種枸杞葉黃酮的提取制備方法，包括以下步驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀，去除雜質(zhì)后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣。(2)將50kg枸杞葉干樣放入粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，粉碎后過320目篩，得到枸杞粉。(3)將枸杞粉與質(zhì)量濃度為100%的乙醇按1 100的料液體積比在100°C溫度下 以360W功率進(jìn)行超聲提取，48h后過濾即得。(4)浸提液經(jīng)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為20000r/min的膠體磨研磨20次后，得到膠體狀的枸杞葉
浸提溶液。
(5)將膠體狀的枸杞葉浸提溶液放入高壓均質(zhì)機(jī)中，在200Mpa的壓力下進(jìn)行均 質(zhì)，5h后形成均一的枸杞葉浸提溶液；然后，采用離心機(jī)以20000r/min的離心速度對均一 的枸杞葉浸提溶液離心分離60min，得到上清液和濾渣。收集上清液，棄去濾渣。(6)將上清液以10t/h的流速經(jīng)孔徑為ΙΟμπι的陶瓷膜在溫度為55°C、壓力為 3Mpa的條件下除去懸浮物、鞣質(zhì)及粘液質(zhì)，收集滲透側(cè)的溶液，得到濾液。(7)濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附后，先用去離子水洗脫至無糖，再用50倍床 層體積、質(zhì)量濃度為100%的乙醇溶液洗脫吸附在大孔樹脂上的枸杞葉黃酮，得到含有枸杞 葉黃酮的洗脫液。(8)將含有枸杞葉黃酮的洗脫液在真空度為0. 07Mpa、溫度為65°C的條件下經(jīng)真 空減壓濃縮后，得到枸杞葉黃酮濃縮液；該枸杞葉黃酮濃縮液在60°C溫度下干燥后，即得 11. 4kg枸杞葉黃酮粉末。經(jīng)高效液相色譜和紫外分光光度計檢測，該枸杞葉黃酮粉末中枸杞葉總黃酮含量 為61. 9%，黃酮醇苷含量為32. 2%，蘆丁含量為20. 7%。
權(quán)利要求
1.一種枸杞葉黃酮的提取制備方法，包括以下步驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀除雜后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣；(2)將所述枸杞葉干樣經(jīng)粉碎后，過20 320目篩，得到枸杞粉；(3)將所述枸杞粉與質(zhì)量濃度為5 100%的乙醇按1 5 100的料液體積比浸提 0.5 360h后，得到浸提液;(4)所述浸提液經(jīng)膠體磨研磨1 20次后，得到膠體狀的枸杞葉浸提溶液；(5)將所述膠體狀的枸杞葉浸提溶液在1 200Mpa的壓力下進(jìn)行均質(zhì)后，經(jīng)離心分離， 得到上清液和濾渣；(6)將所述上清液以0.1 10t/h的流速經(jīng)孔徑為0. 01 10 μ m的陶瓷膜在溫度為 15 55°C、壓力為0. 005 3Mpa的條件下除雜，得到濾液；(7)所述濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附后，先用去離子水洗脫至無糖，再用2 50倍 床層體積、質(zhì)量濃度為20% 100%的乙醇溶液洗脫吸附在大孔樹脂上的枸杞葉黃酮，得 到含有枸杞葉黃酮的洗脫液；(8)將所述含有枸杞葉黃酮的洗脫液經(jīng)真空減壓濃縮后，得到枸杞葉黃酮濃縮液；該 枸杞葉黃酮濃縮液經(jīng)干燥后，即得枸杞葉黃酮粉末。
2.如權(quán)利要求1所述的一種枸杞葉黃酮的提取制備方法，其特征在于用下述制備方 法代替權(quán)利要求1中所述步驟(3)制備浸提液將所述枸杞粉與質(zhì)量濃度為5 100%的 乙醇按1 5 100的料液體積比在10 100°C溫度下進(jìn)行水浴加熱，經(jīng)回流提取0.5 72h后過濾即得。
3.如權(quán)利要求1所述的一種枸杞葉黃酮的提取制備方法，其特征在于用下述制備方 法代替權(quán)利要求1中所述步驟(3)制備浸提液將所述枸杞粉與質(zhì)量濃度為5 100%的 乙醇按1 5 100的料液體積比在10 100°C溫度下進(jìn)行超聲提取，0. 1 48h后過濾即得。
4.如權(quán)利要求1所述的一種枸杞葉黃酮的提取制備方法，其特征在于所述步驟(4) 中的膠體磨的轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為2000r/min 20000r/min。
5.如權(quán)利要求1所述的一種枸杞葉黃酮的提取制備方法，其特征在于所述步驟(5) 中的離心速度為2000 20000r/min，離心時間為1 60min。
6.如權(quán)利要求1所述的一種枸杞葉黃酮的提取制備方法，其特征在于所述步驟(8) 中的真空減壓濃縮的條件是真空度為0. 03 0. 07MPa，溫度為20 65°C。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種枸杞葉黃酮的提取制備方法，該方法包括以下步驟(1)將枸杞葉經(jīng)人工挑揀除雜后，室內(nèi)陰干，得到枸杞葉干樣；(2)將枸杞葉干樣經(jīng)粉碎、過篩，得到枸杞粉；(3)將枸杞粉用乙醇浸提，得到浸提液；(4)浸提液經(jīng)膠體磨研磨后，得到膠體狀的枸杞葉浸提溶液；(5)將膠體狀的枸杞葉浸提溶液經(jīng)均質(zhì)、分離，得到上清液和濾渣；(6)將上清液用陶瓷膜除雜，得到濾液；(7)濾液經(jīng)弱極性大孔吸附樹脂吸附、乙醇溶液洗脫，得到含有枸杞葉黃酮的洗脫液；(8)將含有枸杞葉黃酮的洗脫液經(jīng)真空減壓濃縮、干燥后，即得枸杞葉黃酮粉末。本發(fā)明成本低廉、提取率高，所得枸杞葉黃酮性質(zhì)穩(wěn)定，含量高，抗心腦血管疾病、抗癌、抗氧化等生物活性高。
文檔編號A61P9/00GK102000208SQ20101054261
公開日2011年4月6日 申請日期2010年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月9日
發(fā)明者于瑞濤, 劉增根, 梅麗娟, 王啟蘭, 邵赟, 陳晨, 陶燕鐸 申請人:中國科學(xué)院西北高原生物研究所