專利名稱：一種結(jié)核病家兔皮膚病理藥物評價模型的構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種疾病動物模型的構(gòu)建方法，具體地說是一種結(jié)核病家兔皮膚病理藥物評價模型的構(gòu)建方法，屬于醫(yī)療領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
結(jié)核病是一種和全身免疫狀況密切相關(guān)的疾病，但主要表現(xiàn)為一種局部病理損傷。隨著結(jié)核耐藥問題越來越嚴重，傳統(tǒng)針對結(jié)核分枝桿菌的抗結(jié)核化學藥物治療對部分疾病不再有效，人們亟需開發(fā)新的藥物來治療結(jié)核病。結(jié)核病干酪樣壞死和液化以及空洞的形成是人肺結(jié)核病特征性的危險的病理改變，常常成為播散的病源。壞死組織液化是人肺結(jié)核病向惡性方向發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，液化組織可為結(jié)核桿菌細胞外生長提供豐富的培養(yǎng)基，大量生長活化的結(jié)核桿菌釋放高水平的結(jié)核菌素樣產(chǎn)物，造成組織遲發(fā)型超敏反應(yīng)，破壞性很強?？斩吹男纬捎譃榻Y(jié)核菌的肺外播散提供有利條件，大量結(jié)核桿菌通過空氣傳播， 導致人群感染。雖然對于肺結(jié)核的免疫病理已有一些研究基礎(chǔ)，然而壞死組織液化的發(fā)生機制和影響因素仍不明確。人類疾病的動物模型(animal model of human disease)是指各種醫(yī)學科學研究中建立的具有人類疾病模擬表現(xiàn)的動物。主要用于實驗生理學、實驗病理學和實驗治療學 (包括新藥篩選)研究。人類疾病的發(fā)展十分復雜，以人本身作為實驗對象來深入探討疾病發(fā)生機制，推動醫(yī)藥學的發(fā)展來之緩慢，臨床積累的經(jīng)驗不僅在時間和空間上都存在局限性，而且許多實驗在道義上和方法上也受到限制。而借助于動物模型的間接研究，可以有意識地改變那些在自然條件下不可能或不易排除的因素，以便更準確地觀察模型的實驗結(jié)果并與人類疾病進行比較研究，有助于更方便，更有效地認識人類疾病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律，研究防治措施。動物模型對于了解結(jié)核性肉芽腫轉(zhuǎn)歸的過程和免疫機制有重要價值。已有多種動物模型被用于結(jié)核的病理學研究，常用的動物模型中，小鼠不會發(fā)生液化壞死，猿猴和家兔可形成與人體結(jié)核病灶近似的壞死和液化。其中，家兔感染結(jié)核桿菌后，病理學特點與人近似，尤其是可以形成液化和空洞。家兔感染牛分枝桿菌后可形成以干酪樣壞死為中心的慢性纖維空洞型結(jié)核，與結(jié)核桿菌在人體中引起的病變相似。肺部模型雖然病理改變更接近人肺結(jié)核，但由于觀察不便，一定程度上限制了疾病的研究和藥物篩選模型的建立。所以建立結(jié)核皮膚病理模型，尤其是液化病理模型，對結(jié)核病病理和細菌致病性可以進行直觀研究，可以用于對相關(guān)病理進行干預的藥物篩選模型。研發(fā)調(diào)節(jié)機體免疫應(yīng)答的藥物，通過干預免疫病理進程來治療結(jié)核是一個有效的途徑。目前還缺乏有效的直觀的動物模型來評價針對結(jié)核免疫病理的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，針對人類結(jié)核病的治療，建立了一種家兔皮膚結(jié)核模型，利用家兔皮膚結(jié)核病理模型來評價干預結(jié)核免疫病理的藥物，為結(jié)核性肉芽腫的形成和壞死組織的液化的治療提供研究模型。阻止壞死液化空洞形成的藥物是臨床上治療結(jié)核病患者的措施之一，有效的藥物應(yīng)該可以阻止液化空洞的形成和擴大，控制液化空洞內(nèi)結(jié)核桿菌的生長繁殖和活化，防止病原播散，減輕遲發(fā)型超敏反應(yīng)破壞組織的程度，這些方面對于結(jié)核病人的治療以及防止病原傳播具有極其重要的意義。免疫相關(guān)藥物對于結(jié)核病人機體內(nèi)局部或全身的免疫狀態(tài)有一定影響，可能調(diào)動一些免疫因子的活化，啟動相關(guān)的免疫程序，調(diào)動細胞免疫或體液免疫，對結(jié)核病的轉(zhuǎn)歸產(chǎn)生影響。本發(fā)明的技術(shù)方案為一種結(jié)核病家兔皮膚病理藥物評價模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟
(1)選擇家兔；
(2)每天對家兔注射免疫藥物，選擇家兔的腹部兩側(cè)皮內(nèi)注射；
(3)對上述步驟(2)中的家兔在注射免疫藥物的第15-20天進行卡介苗免疫注射；
在BCG注射前15-20天給家兔注射或口服所要評價的免疫調(diào)節(jié)藥物有助于使得在BCG 注射時機體免疫狀況達到了藥物所擬調(diào)節(jié)的狀態(tài)，從而有效評價藥物。BCG注射后要繼續(xù)觀察30天左右，因為一定量卡介苗免疫注射家兔皮膚后，會發(fā)生明顯的皮膚病理改變(如肉芽腫、膿腫液化、破潰等)，病理特征隨時間的趨勢有所變化。(4)對上述步驟(3)中的免疫后的家兔皮膚處發(fā)生的病理變化進行直觀觀察測量及細菌性和病理學檢查，構(gòu)建病理模型。所述的步驟(1)中的家兔為健康的新西蘭白兔。所述的步驟(2)中的免疫藥物為，免疫增強劑重組人白介素-2和重組人干擾素_r ；免疫抑制劑環(huán)磷酰胺和地塞米松。所述的步驟(3)的卡介苗免疫注射時間為注射免疫藥物的第17天。所述的步驟(3)的卡介苗為5X IO7 CFU/ml的菌液。所述的步驟(3)的卡介苗注射于上述新西蘭白兔腹部兩側(cè)表皮上。本發(fā)明的優(yōu)點在于建立了藥物干預家兔皮膚結(jié)核的病理模型，癥狀明顯，對結(jié)核病病理和細菌致病性進行直觀研究，為疫苗和治療結(jié)核病壞死液化空洞的藥物篩選提供直觀的動物模型，模型穩(wěn)定、可重復；為研究藥物干預結(jié)核肉芽腫液化形成過程，建立了藥物干預的程序和觀察指標；為探討結(jié)核病液化空洞形成的免疫機制提供研究基礎(chǔ)。


圖1為不同給藥組家兔皮膚病理變化曲線圖； 圖2為IFN-r給藥組膿液培養(yǎng)后菌落抗酸染色涂片； 圖3為對照給藥組膿液培養(yǎng)后菌落抗酸染色涂片；
圖4為環(huán)磷酰胺給藥組膿液培養(yǎng)后菌落抗酸染色涂片； 圖5為地塞米松給藥組膿液培養(yǎng)后菌落抗酸染色涂片。
具體實施例方式以下對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行說明，應(yīng)當理解，此處所描述的優(yōu)選實施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
一、實驗材料及方法 1、實驗材料
(1)實驗菌株卡介苗(BCG)，使用前配成5X IO7CFU /ml (每毫升樣品中含有的細菌群落總數(shù))的菌液待用。(2)藥物重組人白介素-2 (IL-2)，重組人干擾素_r (IFN- r )，環(huán)磷酰胺，地塞米松磷酸鈉注射液。藥物按如下方法分裝，每次使用前用生理鹽水溶解。
藥物規(guī)格及分裝劑量如下
權(quán)利要求
1.一種結(jié)核病家兔皮膚病理藥物評價模型的構(gòu)建方法，其特征在于包括以下步驟(1)選擇家兔；(2)對家兔注射免疫藥物；(3)對上述步驟(2)中的家兔在15-20天進行卡介苗免疫注射；(4)對上述步驟(3)中免疫后的家兔的注射組織進行觀察測量及細菌性和病理學檢查， 構(gòu)建此病理模型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核病家兔皮膚病理藥物評價模型的構(gòu)建方法，其特征在于所述的步驟(1)中的家兔為健康的新西蘭白兔。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核病家兔皮膚病理藥物評價模型的構(gòu)建方法，其特征在于所述的步驟(2)中的免疫藥物為，免疫增強劑重組人白介素-2和重組人干擾素-r ； 免疫抑制劑環(huán)磷酰胺和地塞米松。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核病家兔皮膚病理藥物評價模型的構(gòu)建方法，其特征在于所述的步驟(3)的卡介苗免疫注射時間為注射免疫藥物的第17天。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核病家兔皮膚病理藥物評價模型的構(gòu)建方法，其特征在于所述的步驟(3)的卡介苗為5X107CFU/ml的菌液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核病家兔皮膚病理藥物評價模型的構(gòu)建方法，其特征在于所述的步驟(3)的卡介苗注射于上述新西蘭白兔腹部兩側(cè)表皮上。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種結(jié)核病家兔皮膚病理藥物評價模型的構(gòu)建方法，包括選擇家兔，家兔注射免疫藥物，在藥物干預的15-20天進行卡介苗免疫注射和進行細菌性和病理學檢查，從而構(gòu)建病理模型。本發(fā)明的優(yōu)點在于建立了藥物干預家兔皮膚結(jié)核的病理模型，癥狀明顯，對結(jié)核病病理和細菌致病性進行直觀研究，為疫苗和治療結(jié)核病壞死液化空洞的藥物篩選提供直觀的動物模型，模型穩(wěn)定、可重復；為研究藥物干預結(jié)核肉芽腫液化形成過程，建立了藥物干預的程序和觀察指標；為探討結(jié)核病液化空洞形成的免疫機制提供研究基礎(chǔ)。
文檔編號A61K45/00GK102430119SQ20101054327
公開日2012年5月2日 申請日期2010年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月12日
發(fā)明者唐克峰, 孫虹佳, 張穎, 祝秉東, 章國平, 達澤蛟, 雒艷萍, 馬興銘 申請人:蘭州大學